miR-130a靶向磷酸酶-张力蛋白基因/磷酸酰肌醇3激酶/蛋白激酶B轴对糖尿病肾脏疾病大鼠肾组织细胞凋亡影响的研究

目的 探讨miR-130a靶向磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）/磷酸酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)通路对DKD大鼠肾组织细胞凋亡的影响。方法 通过高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射STZ构建DKD大鼠模型。将72只大鼠分为正常对照（NC）组、模型组（DKD组）、miR-130a激动剂阴性对照组（NC agomir组）、miR-130a激动剂组（miR-130a agomir组）、miR-130a激动剂+PTEN过表达物阴性对照组（miR-130a agomir+pcDNA组）、miR-130a激动剂+PTEN过表达物组（miR-130a agomir+pcDNA-PTEN组）,每组各12只。尿微量白蛋白试剂盒检测各组24 h UAlb,全自动生化分析仪检测FPG、血清肌酐（Scr）、BUN,HE染色检测各组肾组织病理变化,ELISA法检测各组IL-6、TNF-α,TUNEL染色检测各组肾组织细胞凋亡,qRT-PCR检测各组miR-130a表达,Western blot法检测各组B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)及PTEN/PI3K/AKT通路...     

长链非编码RNA牛磺酸上调基因1靶向miR-34a-5p/沉默信息调节因子2相关酶1对糖尿病肾脏疾病氧化应激损伤调控作用的研究

目的探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)靶向miR-34a-5p/沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)对DKD氧化应激损伤的调控作用。方法采用体外实验,将小鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组(Con)、高糖组(HG)、过表达空白对照组(pcDNA-NC)、过表达TUG1组(pcDNA-TUG1)、沉默空白对照组(si-NC)、沉默TUG1组(si-TUG1),沉默SIRT1组(si-SIRT1)、模拟物空白对照组(mimics NC)、miR-34a-5p模拟物组(miR-34a-5p mimics)、抑制空白对照组(inhibitor NC)、miR-34a-5p抑制组(miR-34a-5p inhibitor)、过表达TUG1联合miR-34a-5p模拟物组(pcDNA-TUG1+miR-34a-5p mimics)、过表达TUG1联合沉默SIRT1组(pcDNA-TUG1+si-SIRT1);体内实验将小鼠分为假手术组(S)、模型组(DKD)、慢病毒载体(LV)空白对照组(LV-NC)、LV-TUG1组、LV-TUG1+miR-34a-5p组和LV-TUG1+LV-si-SIRT1组。采用qRT-PCR检测TUG1、miR-34a-5p、SIRT1 mRNA水平,ELISA法检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)含量,HE染色观察肾组织病理学改变。结果与Con组比较,HG组TUG1表达水平降低(P0.01)。与S组比较,DKD组TUG1表达水平降低(P0.01)。过表达TUG1后,肾组织和肾小球系膜细胞ROS、MDA表达水平降低(P0.01),SOD表达水平升高(P0.01)。沉默SIRT1或过表达miR-34a-5p均可逆转过表达TUG1对氧化应激损伤的抑制作用。结论 TUG1靶向miR-34a-5p/SIRT1调控DKD氧化应激损伤。     

miR-33-5p对糖尿病肾脏疾病大鼠肾纤维化影响机制的研究

目的探讨miR-33-5p对DKD大鼠肾纤维化的影响机制。方法选取60只SD大鼠中未经任何处理的15只为正常对照(NC)组,其余45只建立DKD大鼠模型,造模成功后随机分为DKD模型组(DKD)、miR-33-5p拮抗剂组(miR-33-5p antagomir)及其阴性对照(antagomir-NC)组,每组各15只。antagomir-NC、miR-33-5p antagomir组尾静脉注射antagomir-NC或miR-33-5p antagomir,每周1次,持续12周。检测各组FPG、24 hUAlb、BUN和血肌酐(Scr)含量。Masson染色观察各组肾纤维化程度。qRT-PCR检测肾组织中miR-33-5p、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)mRNA表达水平。Western blot检测肾组织中TGF-β1、Smad同源物3(Smad3)、Smad2、p-Smad3、p-Smad2、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)等蛋白表达水平。结果与DKD组比较,miR-33-5p antagomir组肾脏间质胶原纤维减少,24 hUAlb、FPG、BUN、Scr含量降低[(36.22±2.41)vs(19.24±1.25)mg/24 h,(29.15±1.53)vs(14.25±1.76)mmol/L,(18.33±3.16)vs(13.73±0.68)mmol/L,(60.17±2.37)vs(39.42±1.74)μmol/L,P0.05],肾组织中miR-33-5p、CollagenⅠmRNA、CollagenⅢmRNA降低[(5.19±0.20)vs(1.88±0.27),(3.44±0.21)vs(1.28±0.08),(4.71±0.32)vs(2.06±0.12),P0.05],TGF-β1、p-Smad3/Smad3、p-Smad2/Smad2、α-SMA等蛋白表达水平降低(P0.05)。antagomir-NC、DKD组各指标比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论抑制miR-33-5p表达可改善DKD大鼠肾纤维化,其作用机制可能与阻断TGF-β/Smad信号通路有关。     

MicroRNA-21及其靶基因程序性细胞死亡因子4在动脉粥样硬化中的作用

目的探讨microRNA(miR)-21及其靶基因程序性细胞死亡因子4(PDCD4)在动脉粥样硬化(AS)发生发展中的作用。方法收集38例急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者及34例非冠心病患者的血浆,实时定量PCR检测miR-21的表达水平。在Lipo3 000的介导下,将miR-21类似物、抑制剂及沉默PDCD4(siP DCD4)分别转染鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞,并用氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)与细胞共同孵育,设立空白对照组(未转染且未加ox-LDL)及ox-LDL组(仅加oxLDL)。采用油红O染色检测细胞泡沫化程度,实时定量PCR及Western blot分别检测泡沫细胞中miR-21及PDCD4蛋白水平。此外,建立ApoE~(-/-)小鼠AS模型20只,按随机数字表法分为3组:单纯高脂喂养组6只、过表达miR-21组7只及阴性对照组(NC,7只),鼠尾静脉注射胆固醇包裹的miR-21激动剂(agomiR-21)及阴性对照agomiR-NC分别建立过表达miR-21组及NC组。选用正常饲料喂养的C57BL/6小鼠作为正常对照组。实时定量PCR检测miR-21在AS斑块及正常动脉组织中的表达;Western blot及免疫组化分别检测PDCD4蛋白水平。结果与相应的对照组比较,miR-21在STEMI患者血浆、泡沫细胞及单纯高脂喂养ApoE~(-/-)小鼠斑块组织中的表达水平均明显升高(P<0.001;P<0.01;P<0.01);泡沫细胞及单纯高脂喂养ApoE~(-/-)小鼠斑块内PDCD4蛋白水平明显增多;与ox-LDL组比较,ox-LDL+miR-21类似物组及ox-LDL+siP DCD4组巨噬细胞泡沫化程度明显下降,ox-LDL+miR-21抑制剂组细胞泡沫化程度明显增加。过表达miR-21组AS斑块内PDCD4蛋白水平较NC组明显减少,且斑块较NC组明显减小。结论 miR-21在急性STEMI患者血浆中、泡沫细胞及AS斑块内的水平明显升高。过表达miR-21及沉默PDCD4可抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化,这与动物组织实验结果一致,表明miR-21或可靶向调控PDCD4的表达,从而发挥抗AS的作用。     

慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠肾组织CTGF表达及氟伐他汀的干预作用

目的观察结缔组织生长凶子(CTGF)在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠。肾组织中的表达情况及氟伐他汀的调节作用。方法建立cGVHD狼疮样小鼠模型。按随机设计原则将模型小鼠分为3组,即模型对照组(A组)、氟伐他汀干预组(B组)及正常对照组(C组),每组均有6只小鼠。CTGF蛋白检测采用免疫组织化学方法及免疫荧光法．mRNA表达采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测：留取24 h尿,测定尿蛋白排泄量。结果模型对照组小鼠24 h尿蛋门总量明显高于氟伐他汀干预组(P＜0．05)及正常对照组小鼠(P＜0．01)；RT-PCR检测到模型对照组小鼠肾组织CTGF mRNA表达较氟伐他汀干预组小鼠明显升高(P＜0．05),而正常对照组小鼠表达量少；免疫组织化学及免疫荧光表明正常对照组小鼠仅在少数肾小管有微量CTGF表达,而模型对照组及氟伐他汀干预组小鼠肾小管及问质均有CTGF蛋白表达,且模型对照组小鼠表达量显著高于氟伐他汀干预组小鼠(P＜0．01)。结论CTGF可能参与介导狼疮肾炎的发生、发展；cGVHD狼疮样小鼠模型肾组织中CTGF蛋白及mRNA表达明显上调,提示CTGF可能在狼疮肾炎(LN)肾小球硬化及肾间质纤维化的进程中起重要作用；氟伐他汀可能通过降低CTGF表达及减少尿蛋白排泄从而缓解LN,延缓肾纤维化进程。     

狼疮性肾炎小鼠肾组织中HMGB1、TLR4、STAT3、PCNA的表达及意义

目的 观察狼疮性肾炎小鼠肾组织中细胞因子高迁移率族蛋白1 (HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及意义.方法 选用16周雄性BXSB小鼠(狼疮性肾炎模型,观察组)以及C57 BL/6小鼠(正常对照组)为研究对象,采用透射电镜技术观察两组小鼠肾组织超微结构改变,PAS染色观察肾小球基底膜变化,免疫组织化学法检测肾组织中的HMGB1、TLR4、PCNA蛋白,RT-PCR法检测肾组织中的HMGB1、p-STAT3 mRNA,Western blot法检测肾组织中的p-STAT3.结果 16周时,透射电镜下观察组肾组织出现明显的狼疮性肾炎病理表现,而正常对照组肾组织结构正常.与正常对照组相比,观察组小鼠肾小球基底膜明显增厚.观察组小鼠肾组织中HMGB1、TLR4、PCNA积分吸光度值以及HMGB1 mRNA、p-STAT3mRNA、p-STAT3的相对表达量均高于正常对照组(P均＜0.05).观察组小鼠肾组织中HMGB1与TLR4、TLR4与p-STAT3、HMGB1与p-STAT3、p-STAT3与PCNA、HMGB1与PCNA、HMGB1 mRNA与p-STAT3 mRNA的表达水平之间呈正相关(r分别为0.952、0.945、0.895、0.784、0.929、0.717,P均＜0.05).结论 HMGB1在小鼠狼疮性肾炎中的致炎作用,可能通过结合其受体TLR4进而激活STAT3传导途径实现的.     

lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平；CCK8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达；ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平；双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较，肝癌细胞HepG2、S...     

miR-125a-5p抑制剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的探讨miR-125a-5p抑制剂对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的影响。方法将30只大鼠随机分为假手术组(sham组)、I/R损伤组(I/R组)和I/R+miR-125a-5p抑制组。采用生物信息学软件及荧光素酶报告体系预测和验证信号传导与活化转录因子3(STAT3)和miR-125a-5p之间靶向性。分析定量即时聚合酶连锁反应(qRT-PCR)鉴定体系中STAT3和miR-125a-5p表达;苏木素-伊红(HE)检测心肌组织细胞损伤情况;免疫组织化学法检测组织白介素-6(IL-6)表达情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测组织细胞氧化应激产物;免疫印迹试验(Western Blot)测定体系中凋亡相关分子的表达。结果经生物信息学和荧光素酶报告系统验证STAT3和miR-125a-5p具有较强的靶向性。I/R组miR-125a-5p表达量上调,STAT3表达受到抑制,细胞内氧化应激及炎症因子增加,细胞发生凋亡(P0.01);I/R+miR-125a-5p抑制组miR-125a-5p表达量下调,STAT3表达上升,细胞内氧化应激及炎症因子下调,凋亡现象有所改善(P0.01)。结论应用miR-125a-5p抑制剂可有效降低miR-125a-5p对STAT3的抑制效果,减少细胞凋亡和氧化应激反应,进而减缓大鼠心肌I/R损伤。     

厄贝沙坦对糖尿病肾脏疾病大鼠肾脏miR-93及其相关蛋白表达的影响

目的观察厄贝沙坦对STZ诱导的DKD大鼠肾脏miR-93及其相关蛋白表达的影响,探讨ARB类药物治疗DKD的可能机制。方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照(NC)组10只和实验组30只。腹腔注射小剂量STZ(28 mg/kg)建立DKD大鼠模型。造模成功的20只大鼠分为DKD模型组(DKD)及厄贝沙坦治疗组(IRB),每组各10只。于22周检测大鼠体重、FBG、24 hUAlb等。镜下观察肾脏形态学改变。采用qRT-PCR及Western blot、免疫组织化学法检测肾脏miR-93及VEGF、纤维连接蛋白(FN)、4型胶原蛋白(CollagenⅣ)的表达情况。结果与NC组比较,DKD组FBG、24 hUAlb升高(P0. 05),IRB组低于DKD组(P0. 05)。与NC组比较,DKD组miR-93表达下调(P0. 05),VEGF、FN、CollagenⅣ表达升高(P0. 05)。与DKD组比较,IRB组miR-93表达上调(P0. 05),VEGF、FN及CollagenⅣ表达降低(P0. 05)。结论 miR-93可能参与DKD大鼠肾脏的保护作用,厄贝沙坦可能通过影响miR-93及相关蛋白表达而发挥肾脏保护作用。     

miR-19a-3p靶向上调SOCS3参与急性川崎病病理发展的机制研究

目的:探讨微小RNA-19a-3p(miR-19a-3p)/细胞因子信号抑制物3(SOCS3)信号轴在川崎病(KD)病理发展过程中的调控机制。方法:采集我院川崎病患儿、川崎病治疗后患儿血清,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白质印迹(Western Blot)法检测miR-19a-3p、SOCS3 mRNA及蛋白表达变化。小鼠腹腔注射白色念珠菌水溶物(CAWS)建立川崎病模型,分为正常对照组、模型组、si-miR-19a-3p组、ad-SOCS3组、si-NC组、ad-NC组,每组10只。取小鼠冠状动脉组织,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮素(ET)水平;苏木素-伊红(HE)染色法观察冠状动脉病理变化;免疫组化法检测SOCS3阳性表达水平;RT-qPCR及Western Blot法检测miR-19a-3p、SOCS3 mRNA及蛋白表达变化;Western Blot法检测Janus酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(...     

丁酸钠通过组蛋白丁酰化修饰改善糖尿病肾脏病炎症和纤维化

目的探讨丁酸钠(NaB)是否通过组蛋白丁酰化修饰改善糖尿病肾脏病(DKD)炎症和纤维化。方法无特定病原体(SPF)级C57BL/6雄性小鼠24只, 8周龄、16～17 g。采用随机数字表法将其分为正常对照组(NC组)、高脂饮食联合链脲佐菌素(50 mg/kg)复制的DKD模型组(DKD组)、NaB溶液(每48小时40 mg/kg)腹腔注射干预组(DKD+NaB组), 每组8只。体外培养肾系膜细胞, 分为正常葡萄糖(NG)组(5.56 mmol/L葡萄糖)、高糖(HG)组(30 mmol/L葡萄糖)、HG+NaB组(30 mmol/L葡萄糖和1 mmol/L NaB)、HG+NaB+乙酰转移酶活性转录共激活因子(P300)抑制剂(A485)组(30 mmol/L葡萄糖、1 mmol/L NaB和10 μmol/L A485)。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组小鼠血清炎症因子[单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)]水平, 及尿微量白蛋白和尿肌酐, 并计算尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR), 采用Western blotting法检测各组小鼠肾脏组织和肾...     

LncRNA GAS5通过miR-137/SIRT6轴抑制糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 通过高糖高脂饮食联合链脲佐菌素腹腔注射构建大鼠DCM模型,分为假手术(Sham)组和DCM组。苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织的病理变化;Masson染色检测大鼠心肌纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测心肌组织LncRNA GAS5的表达情况。大鼠心肌细胞(H9c2)随机分为对照组、高糖组、高糖+GAS5组、高糖+miR-137 mimics组、高糖+miR-137 mimics+GAS5组、高糖+沉默调节蛋白6(SIRT6)组、高糖+SIRT6+miR-137 mimics组并进行相应处理。qRT-PCR检测LncRNA GAS5、miR-137的表达量;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、SIRT6蛋白表达量;流式细胞术检测细胞凋亡情况;细胞计数试剂盒8检测细胞活力;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GAS5与miR-137、miR-137与SIR...     

微小RNA-101对胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其作用机制

目的探讨微小RNA-101(miR-101)对胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法取对数生长期PANC1细胞分为5组, 除对照组外, 分别为转染miRNA模拟体的阴性对照(mimic-NC)组、转染miRNA-101模拟体(miR-101 mimic)组、转染miRNA抑制剂的阴性对照(inhibitor-NC)组、转染miRNA-101抑制剂(miR-101 inhibitor)组。采用qRT-PCR检测miR-101相对表达水平, MTT法检测细胞增殖率, 流式细胞仪检测细胞凋亡率, Transwell实验检测细胞侵袭能力, qRT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测IL-6、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3 mRNA蛋白的相对表达水平, 双荧光素酶报告基因法检测miR-101与IL-6的靶向关系。结果转染48 h后, 对照组、mimic-NC组、miR-101 mimic组、inhibitor-NC组、miR-101 inhibitor组PANC1细胞miR101表达水平分别为1.98±0.12、2.01±0.18、6.73±0.23、2...     

miR-124靶向调控STAT3调节动脉粥样硬化中血管内皮细胞的生物学特性

目的研究miR-124在高脂饮食(HFD)致载脂蛋白(Apo) E~(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)模型中的表达和对AS血管内皮细胞生物学特性的影响及潜在分子机制。方法与正常饮食(ND)喂养ApoE~(-/-)小鼠相比,用HFD喂养ApoE~(-/-)小鼠12 w构建AS模型,用HE染色和油红O染色检测AS损伤。使用流式细胞术从主动脉弓分离Pecam-1阳性小鼠内皮细胞。氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理人主动脉内皮细胞(HAECs)用于构建AS体外模型。MTT检测细胞增殖能力,RT-qPCR检测miR-124表达,Western印迹检测蛋白表达。生物信息学分析预测miR-124的潜在靶基因,并通过双荧光素酶报告基因和Western印迹进行鉴定。结果与ND喂养ApoE~(-/-)小鼠相比,经HE染色和油红O染色鉴定,HFD喂养的ApoE~(-/-)小鼠12 w内发生了AS。与ND小鼠相比,在HFD小鼠主动脉弓中内皮细胞标记物Pecam-1表达明显降低,间充质细胞标记α-SMA和Vi-mentin表达显著增加,内皮细胞凋亡显著增加。类似的结果在体外研究得到验证,miR-124能够消除ox-LDL诱导的HAECs凋亡,其中机制可能是miR-124通过靶向抑制STAT3表达发挥作用。结论 AS相关的内皮细胞凋亡可部分通过下调miR-124进而诱导STAT3表达而引起。     

上调miR-124表达诱导甲状腺癌细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨上调微小RNA(miR)-124表达对甲状腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量(qRT)-PCR检测正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞和甲状腺乳头状癌SW579细胞中miR-124的表达差异;利用脂质体转染Has-miR-124mimics上调miR-124表达,并通过qRT-PCR检测其转染效果;流式细胞仪检测过表达miR-124对SW579细胞凋亡的影响;Western印迹检测过表达miR-124对SW579细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)蛋白、蛋白激酶B(AKT)蛋白、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响。结果 miR-124在甲状腺癌SW579细胞中的表达明显低于正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞(P0.05)。转染Has-miR-124 mimics后,miR-124模拟组细胞中miR-124表达明显高于空白对照组(P0.05),阴性对照组和空白对照组差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组相比,miR-124模拟组细胞凋亡率显著升高(P0.05),而阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05)。Western印迹检测结果显示,与空白对照组相比,miR-124模拟组中PIK3CA、p-AKT和Bcl-2蛋白表达量均显著降低,Bax蛋白表达量显著升高(P0.05),而AKT蛋白的表达量变化不明显(P0.05);阴性对照组和空白对照组PIK3CA、AKT、p-AKT、Bcl-2及Bax蛋白表达量差异均无统计学意义(P0.05)。结论上调miR-124表达可诱导SW579细胞凋亡,其作用机制可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT信号通路活性,上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关。     

miR-155通过靶向调控TGFBR1和TGFBR2抑制AMI诱导的心肌纤维化

目的 探讨miR-155对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌纤维化进程及心肌成纤维细胞(CFs)细胞增殖和周期的影响,分析miR-155对转化生长因子(TGF)-β信号Ⅰ型/Ⅱ型跨膜受体(TGFBR1/TGFBR2)调控作用,阐明miR-155在AMI中的作用及其工作机制。方法 qRT-PCR检测miR-155在AMI患者和AMI小鼠血清中的表达。心脏超声,Masson染色和天狼星红染色分别检测miR-155对AMI小鼠左室射血分数及心肌纤维化程度的影响。Western印迹检测CFs细胞在缺氧条件下miR-155对TGFBR1,TGFBR2,P-smad2和P-smad3表达的影响。TargetScan和双荧光素酶报告基因试验筛选并验证TGFBR1和TGFBR2是否为miR-155的靶基因。qRT-PCR和Western印迹检测miR-155对TGFBR1和TGFBR2表达的影响。CCK8法和流式细胞法分别检测miR-155对CFs细胞增殖和周期的影响。结果 miR-155在AMI患者及AMI小鼠血清中的表达均明显降低,miR-155过表达能促使AMI小鼠左室射血分数升高,下调心肌组织中N...     

基于Nanog信号通路探究miR-328对乳腺癌干细胞分化及间质转化的作用机制

目的 基于Nanog信号通路探究miR-328对乳腺癌干细胞分化及间质转化的作用机制。方法 选取秦皇岛市第四医院10例乳腺癌患者癌组织标本与10例癌旁组织标本进行研究。人乳腺癌干细胞分为乳腺癌组(乳腺癌干细胞)、NC组(乳腺癌转染miR-328-NC)、模拟物组(转染miR-328 mimics)、抑制物组(转染miR-328 siRNA)。运用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-328、E-钙黏蛋白(cadherin)、N-cadherin、波形蛋白(Vimentin),检测细胞克隆形成情况,噻唑蓝(MTT)检测增殖,Transwell检测侵袭及迁移能力,Western印迹检测信号转导与转录活化因子(STAT)3、p-STAT3、肿瘤干性相关蛋白(Nanog)蛋白表达。结果 miR-328在乳腺癌组织中表达水平显著低于在癌旁组织(P<0.05)。乳腺癌组与NC组各指标间差异无统计学意义(P<0.05);与乳腺癌组相比,miR-328模拟物组miR-328表达、E-cadherin mRNA表达明显升高,N-cadherin及Vimentin mRNA表达...     

雷帕霉素通过下调微小RNA-27a介导的雷帕霉素靶分子信号通路调控糖尿病肾脏疾病大鼠足细胞自噬的影响研究

目的 探讨微小RNA-27a(miR-27a)介导的雷帕霉素靶分子（mTOR）信号通路调控DKD大鼠足细胞自噬的作用。方法 将30只SD大鼠随机分为正常对照组（NC,n=10）、糖尿病模型组（DKD,n=10）和雷帕霉素治疗组（Rap,n=10）。检测各组肾功能相关指标和细胞凋亡率，HE染色及免疫组化评估肾组织形态学变化。Western blot法检测各组肾组织中自噬相关指标Beclin1、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)及mTOC蛋白表达，qRT-PCR检测足细胞特异性蛋白miR-27a、Podocalyxin、Nephrin、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Bax、Beclinl mRNA表达量。结果 与NC组比较，DKD组第6、12周FPG、24 hUAlb、BUN、血肌酐（Scr）、肾脏指数（KI）表达升高（P<0.05）。与NC组比较，DKD组细胞凋亡、mTOC蛋白、miR-27a、mTOR、Bax mRNA表达升高（P<0.05）,Beclinl、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、Podocalyxin、Nephrin mRNA...     

miR-374促进急性心肌梗死诱导心肌纤维化的机制

目的研究微小RNA(miR)-374通过调控白细胞介素(IL)-10对急性心肌梗死(AMI)诱导心肌纤维化的影响。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AMI患者和健康对照组血清中miR-374的表达水平。构建AMI小鼠模型,随机分为假手术组(n=6)、AMI组(n=12)、AMI+miR-374组(n=12,AMI小鼠心肌注射miR-374)。采用qRT-PCR检测假手术组和AMI组心肌组织中miR-374的表达水平及各组Ⅰ型胶原(COL1)A1和Ⅲ型胶原(COL3)A1 mRNA表达水平。检测各组心脏功能,记录左室射血分数(LVEF)、左室长轴缩短分数(FS)、左室舒张末期内径(LVDd)和左室收缩末期内径(LVDs)。比色法检测各组半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3和Caspase8活性。Massontrichrome染色检测各组心肌纤维化程度。miR靶基因数据库预测IL-10为miR-374的潜在靶基因并采用荧光素酶报告基因法验证。采用qRT-PCR检测转染miR-374 mimics对IL-10 mRNA表达的影响。采用Western印迹检测AMI组和AMI+miR-374组心肌组织中IL-10、P65和P50蛋白表达。结果AMI患者血清中miR-374的表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。AMI组心肌组织中miR-374表达水平明显高于假手术组(P<0.001)。相比AMI组,AMI+miR-374组LVEF和FS明显降低、LVDd和LVDs明显升高、Caspase3和Caspase8活性明显升高、COL1A1和COL3A1 mRNA表达水平明显升高、心肌纤维化程度增加(P<0.05、P<0.01、P<0.001)。miR-374可靶向调控IL-10并抑制其mRNA表达。相比AMI组,AMI+miR-374组心肌组织中IL-10蛋白表达明显降低,而P65和P50蛋白磷酸化明显增加(P<0.05)。结论miR-374可能通过抑制IL-10的表达显著促进心肌梗死诱导心肌纤维化的发展。