黄芩素对UVB诱导HaCaT细胞光老化及相关p38信号通路的影响

目的:研究黄芩素对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT)光老化及相关p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响。方法:选择1×10~(-11),1×10~(-10),1×10~(-9),1×10~(-8),1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5),1×10~(-4),1×10~(-3)mol·L~(-1)9种浓度黄芩素作用于HaCaT细胞,噻唑蓝(MTT)法筛选出最佳有效浓度。经预实验筛选出辐射强度为0.5 mW·cm~(-2)的UVB,辐射时间为5 min建立光老化模型,筛选出最佳有效浓度作用于光老化模型,另设空白组MTT法检测各组细胞活性。超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),过氧化氢酶(CAT)及丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD,GSH-Px,CAT活性及MDA含量。实时定量荧光定量聚合酶连式反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组细胞中mRNA及蛋白表达。结果:筛选出1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素为最佳有效浓度;与空白组比较,UVB组对HaCaT细胞无明显的增殖作用。与UVB组比较,1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素组对光老化模型无明显增殖作用。与空白组比较,UVB组SOD,GSH-Px及CAT活性明显的降低,MDA含量显著升高(P0.01);与UVB组比较,1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素组SOD,GSH,CAT活性明显升高,MDA含量明显降低(P0.05,P0.01)。与空白组比较,UVB组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA及TNF-α,磷酸化p38(p-p38)蛋白表达显著升高(P0.01);与UVB组比较,1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素组TNF-αmRNA及TNF-α,p-p38蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论:黄芩素对UVB诱导HaCaT细胞光老化保护作用主要是通过提高氧化酶活性以及阻断p38MAPK信号通路,抑制炎症因子产生。     

甘草酸抑制UVB诱导HaCaT细胞凋亡的机制研究

目的:研究甘草酸抑制中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)凋亡的机制。方法:以不同浓度的甘草酸作用于人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T细胞),噻唑蓝比色(MTT)法筛选药物的有效安全浓度;用30 mJ/cm~2的UVB照射Ha Ca T细胞,制备光老化模型,MTT法检测细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞总凋亡率;实时定量PCR(RT-PCR)法检测Bax、Bcl-2 m RNA表达水平变化;Western Blot法检测各组细胞上清中Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)mol/L甘草酸为最佳有效安全浓度。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01);细胞总凋亡率显著显著升高(P0.01);Bax m RNA表达水平显著升高,Bcl-2m RNA表达水平显著降低(P0.01);Bax蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量显著降低(P0.01)。与UVB组比较,1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)mol/L甘草酸+UVB组细胞增殖率显著升高(P0.01);细胞总凋亡率显著降低(P0.01);Bax m RNA表达水平显著降低,Bcl-2 m RNA表达水平显著升高(P0.01,P0.05);Bax蛋白表达量显著降低,Bcl-2蛋白表达量显著升高(P0.01,P0.05)。结论:甘草酸能抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡,其机制与其下调促凋亡基因Bax m RNA和蛋白的表达,上调抑凋亡基因Bcl-2 m RNA和蛋白的表达有关。     

水飞蓟素对UVB致人角质形成细胞光老化保护作用的研究

目的：对水飞蓟素中的主要成分水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭的抗细胞光老化作用进行研究。方法：采用UVB辐射HaCaT进行造模并设置空白对照组,运用酶生化法检测水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭对UVB辐射HaCaT后的细胞增殖及抗氧化酶的影响,确定水飞蓟素中抗HacaT细胞光老化的主要有效成分。结果：与模型组相比,水飞蓟素中的水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭均可增强细胞的增殖活力、提高细胞中SOD的活性、降低MDA的产生和LDH的漏出量。结论：水飞蓟素中的水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭对UVB致人角质形成细胞光老化均具有保护作用,其中水飞蓟宁和水飞蓟亭的抗光老化作用更为显著。     

补骨脂异黄酮对UVB诱导HaCaT细胞凋亡的保护作用及机制研究

目的探讨补骨脂异黄酮对中波紫外线(UVB)诱导人永生化角质细胞(HaCaT)凋亡的保护作用及相关机制。方法采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测HaCaT细胞增殖率,筛选补骨脂异黄酮的实验浓度及UVB的照射时间,建立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型。采用流式细胞术检测细胞凋亡率;试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性;qRT-PCR法检测HaCaT细胞半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)mRNA表达;Western Blot法检测HaCaT细胞p-AKT、AKT、Caspase-3蛋白表达。结果选择10-5mol·L^-1浓度用于后续实验,10 min的UVB照射时间用于建立HaCaT细胞凋亡模型。与空白组比较,模型组的细胞增殖率明显下降,细胞凋亡率明显升高,SOD、GSH-Px及CAT活性显著降低,Caspase-3mRNA及p-AKT、Caspase-3蛋白表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,补骨脂异黄酮组的细胞增殖率显著升高,细胞凋亡率明显降低,SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高,Caspase-3 mRNA及p-AKT、Caspase-3蛋白表达显著下调,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论补骨脂异黄酮对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡具有保护作用,可能与下调Caspase-3及p-AKT表达,提高抗氧化酶的活性有关。     

黄芩素对中波紫外线诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响

目的:研究黄芩素对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响。方法:体外培养人皮肤角质形成细胞(HaCaT),取对数生长期的细胞,随机分为空白组、模型组和黄芩素组,并用30 mJ·cm~(-2)的UVB照射模型组和黄芩素组,建立光老化模型。噻唑蓝(MTT)比色法筛选黄芩素的有效安全浓度,并测定黄芩素对光老化HaCaT细胞增殖率的影响;活性氧自由基(ROS)试剂盒测定各组细胞中ROS含量;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及Caspase-9蛋白表达水平。结果:筛选出1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素为最佳有效安全浓度。与空白组比较,模型组ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素组ROS含量和细胞凋亡率显著降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降(P0.05,P0.01)。结论:黄芩素可以通过降低细胞ROS含量和凋亡率,调控Bcl-2家族中抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,降低凋亡相关细胞因子Caspase-3和Caspase-9的表达水平,抑制UVB诱导的细胞凋亡。     

姜黄素对UVB辐射诱导HaCaT细胞凋亡的抑制作用

目的:建立中波紫外线(UVB)对体外培养的永生化人角质形成细胞(HaCaT细胞)辐射损伤病理模型,探讨姜黄素(Cur)对其细胞辐射损伤的保护作用。方法:以10、20、30、40和50m J/cm2的UVB辐照其细胞,分别在辐照后6、12、18、24、48和72h,用MTT和流式细胞仪检测细胞活性及其凋亡的变化,建立辐照损伤病理模型;用30m J/cm2的剂量辐照其细胞后,立即分别给予0.625、1.25、2.5和5μg/mL的Cur处理,在处理18h后检测其细胞凋亡。结果:HaCaT细胞经UVB辐照后,以剂量和时间依赖方式抑制其细胞存活,且主要由于细胞凋亡引起;Cur以浓度依赖方式抑制由UVB所致的细胞凋亡。结论:Cur能抑制UVB辐射诱导的HaCaT细胞凋亡,对UVB辐射损伤HaCaT细胞具有保护作用,其作用机制可能与Cur清除体内自由基而增强细胞的抗氧化能力有关。     

UVB诱导HaCaT分泌细胞因子对HSF的影响及桃叶珊瑚苷的保护作用

目的:探讨紫外线B波(UVB)诱导HaCaT分泌细胞因子通过旁分泌机制对HSF的影响及桃叶珊瑚苷的保护作用。方法:将桃叶珊瑚苷作用于正常及光老化HaCaT细胞,ELISA试剂盒检测IL-6、TNF-α含量,并将各组培养液分别作用于HSF细胞,RT-PCR、Western-Blot检测HSF细胞中MMP-1、MMP-3的mRNA及蛋白表达。结果:桃叶珊瑚苷对正常HaCaT细胞分泌IL-6和TNF-α没有显著影响,而对光老化HaCaT分泌IL-6和TNF-α具有显著的抑制作用(P0.01),光老化HaCaT培养液使HSF中MMP-1、MMP-3的mRNA和蛋白表达量升高,桃叶珊瑚苷处理组能够明显改善这种作用(P0.01)。结论:桃叶珊瑚苷通过减少炎症细胞因子IL-6、TNF-α分泌来拮抗UV对角质形成细胞的损伤,又可通过抑制旁分泌机制,保护成纤维细胞,抑制MMP-1、MMP-3的过表达,预防光老化。     

杜仲抗UVB致HaCaT细胞光老化活性部位的初步筛选

目的：确定杜仲抗皮肤光老化的有效部位。方法：杜仲乙醇提取物经大孔树脂制备不同浓度乙醇梯度洗脱部位,分别作用于HaCaT细胞光老化模型,以细胞形态、细胞活性及细胞培养基中LDH、MDA、SOD活力为评价指标,筛选并确定杜仲抗皮肤光老化的有效部位。结果：与模型组相比,浓度为125μg·mL-1的50％乙醇大孔树脂洗脱部位能提高细胞活性（P〈0．05）,使培养基中LDH降低（P〈0．01）、MDA活力降低（P〈0．05）、SOD活力提高（P〈0．05）;62．5μg·mL。的给药浓度能降低LDH活力（P〈0．05）。结论：50％乙醇大孔树脂洗脱部位能清除氧自由基而提高SOD活力、降低MDA活力．保护细胞膜免受损伤,降低LDH的泄露,具有一定的抗皮肤光老化作用。     

白藜芦醇对中波紫外线照射后人角质形成细胞的保护作用

目的探讨白藜芦醇对中波紫外线(UVB)照射后人角质形成细胞(HaCaT细胞)损伤的保护作用及其可能机制。方法运用MTT实验观察0.001～0.5mmol/L范围内不同浓度的白藜芦醇对HaCaT细胞增殖的影响。采用U-VB(30mJ/cm2)照射HaCaT细胞后,立即加入不同浓度(0.01,0.1mmol/L)的白藜芦醇进行干预,同时设空白组与UVB对照组,分别用MTT法检测细胞增殖能力,用羟胺法、比色法、TBA法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,电镜观察细胞超微结构的改变。结果不同浓度的白藜芦醇作用正常HaCaT细胞后,细胞增殖能力无明显差异(P>0.05)。白藜芦醇能促进UVB照射后HaCaT细胞增殖、增加细胞SOD和GSH-Px活性、降低MDA含量,且高浓度组较低浓度组作用更加显著(P<0.05)。电镜显示白藜芦醇能减轻UVB对HaCaT细胞超微结构的损伤。结论不同浓度的白藜芦醇对正常HaCaT细胞增殖无明显影响。白藜芦醇在体外对UVB照射后的HaCaT细胞有保护作用,其机制可能与提高氧化酶活性、清除自由基有关。     

绞股蓝总皂苷含药血清对皮肤光老化HaCaT细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6的影响

目的:研究绞股蓝总皂苷含药血清对皮肤光老化HaCaT细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6表达的影响.方法:选取20只大鼠,随机分为四组,每组5只,分别设为空白血清组、低剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、中剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清组,采用UVB照射人工模拟光老化HaCaT细胞模型,照射后用含不同浓度绞股蓝总皂苷的大鼠血清进行干预,12h后采用ELISA方法检测各组细胞分泌IL-1β、IL-6的表达水平.结果:与空白对照组比较,UVB模型组细胞IL-1β、IL-6表达显著上调;与UVB模型组比较,低剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、中剂量绞股蓝总皂苷含药血清组、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6表达显著下调(P＜0.01).结论:绞股蓝总皂苷含药血清可能通过抑制UVB辐射人皮肤角质细胞诱导炎症信号分子防护皮肤光老化.     

甘草酸、甘草苷、异甘草素对醋氨酚人肝细胞损伤模型的保护作用比较

目的:建立并验证醋氨酚人肝细胞损伤模型,进一步研究甘草酸、甘草苷、异甘草素的保肝作用.方法:20 mmol·L -醋氨酚作用HL-7702正常人肝细胞3h,以四氮溴盐(MTT)为考察指标,通过阳性药物双环醇验证该细胞模型并获得量效参考值,进而研究不同质量浓度的甘草酸、甘草苷、异甘草素对人肝细胞损伤的保护作用.结果:醋氨酚人肝细胞损伤模型成功、方法可靠,甘草酸、甘草苷、异甘草素3种成分对人肝细胞醋氨酚损伤均具一定的保护作用.甘草酸的最低有效浓度为0.001 6μmol· L-1,保肝的最大效能为47.0％,达到最大效能的浓度为0.2μmol·L-1.甘草苷的最低有效浓度为0.4μmol·L -1,保肝的最大效能为22.9％,达到最大效能的浓度为2μmol·L -1.异甘草素的最低有效浓度为0.4μmol·L -1,保肝的最大效能为72.6％,达到最大效能的浓度为250 μmol·L -1.结论:提供一种新的体外肝细胞损伤模型;在甘草用于保肝相关作用时,单纯以甘草酸、甘草苷作为质量评价指标是不够的.     

甘草酸的免疫调节作用研究进展

作为甘草的重要活性成分,甘草酸具有抗病毒、抗炎、抗过敏、抗变态反应、抗肿瘤及免疫调节等作用。其中免疫调节作用备受关注。甘草酸通过双重调节细胞免疫及体液免疫来发挥作用。甘草酸是一种有效的生物应答修饰剂,其免疫调节作用表现在对免疫活性细胞、细胞因子、补体等多方面。甘草酸能够增强辅助性T淋巴细胞的增殖能力和活性,促进淋巴细胞产生IL-2,IFN-γ,IL-1等细胞因子,抑制IL-4,IL-10,IL-8等的生成,同时具有抗补体活性,可选择性抑制补体系统的激活途径。甘草酸因具有免疫调节作用而在临床上得到广泛应用。在银屑病、慢性持发性荨麻疹、支气管哮喘、慢性肝病、艾滋病及肿瘤等疾病中作为主要的药物取得了良好的治疗效果。本文结合国内外研究进展对甘草酸的免疫调节作用做简要阐述。     

不同诱导子对甘草悬浮培养细胞中甘草酸积累的影响

 目的研究水杨酸、酵母提取物、水解酪蛋白、高糖、高盐、超声等诱导子对甘草悬浮培养细胞中甘草酸积累的影响。方法向细胞悬浮液中加入各种诱导子或对细胞悬浮液进行超声处理。结果加入10 mg·L^-1水杨酸可使甘草酸的含量为对照组的1.86倍。低浓度的酵母提取物对甘草酸的积累有显著的促进作用,加入1 mg·L^-1酵母提取物时,甘草酸的含量为对照组的3.71倍,达到14.20μg·g^-1。添加100 mg·L^-1水解酪蛋白时,甘草酸的含量为对照组的1.69倍。高盐胁迫对甘草酸的积累有较高的影响,其含量为对照组的1.96倍。结论甘草细胞悬浮培养中,添加水杨酸、酵母提取物、水解酪蛋白、高糖、高盐、超声等诱导子是提高细胞中甘草酸含量的有效方法之一。     

泡沫分离对甘草酸的纯化和富集

本方法采用泡沫分离对甘草酸的混合物进行纯化富集。以富集比、质量回收率以及泡沫液中甘草酸的HPLC光谱纯度为纯化富集效果的表征参数。考察了氮气流量、甘草酸的初始进料浓度、原料液的pH值以及泡沫分离柱的尺寸对纯化富集效果的影响。结果表明富集比随参数不同在3.35~12.8之间变化,随氮气流量、甘草酸的初始进料浓度的降低而增加,适度增加泡沫分离柱的高度和内径也会使富集比变大。质量回收率最高达91.7％,随氮气流量、甘草酸的初始进料浓度、泡沫分离柱的高度和内径的增加而增大。泡沫分离所得甘草酸的质量纯度和HPLC光谱纯度分别为82.4％和90.2％,而对原料甘草酸单铵盐不纯物则分别为76.0％和86.0％。结果表明,泡沫分离纯化富集甘草酸省时,省力,成本低。同时,本研究为此方法的工业化提供了一些指导。     

延寿液对大鼠吸入臭氧诱导皮肤衰老的延缓作用

目的:明确延寿液对大鼠吸入臭氧所致皮肤衰老的延缓作用,探讨其作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,维生素E组(13.5 mg·kg-1),延寿液低、中、高剂量组(45,90,180 mg·kg-1),每组8只,正常组吸入空气,造模组吸入臭氧(1.2±0.2)mg·L-110 h·d-1×45 d染毒,造模的同时给予延寿液。45 d后动脉取血获得血清与血浆,取大鼠两肩胛至两髂骨之间的背部皮肤,检测血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性,血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化脂质(LPO)含量,皮肤羟脯氨酸(Hyp)含量,皮肤组织学观察。形态计量表皮厚度、弹性纤维、胶原纤维、网状纤维、肥大细胞颗粒的体积比,比较组间变化的显著性。结果:与正常组比较,模型大鼠GSH-Px,CAT,SOD活力明显下降(P0.01),LPO含量明显升高(P0.01),Hyp含量明显降低(P0.01);表皮变薄,基底细胞减少,胶原纤维排列稀疏,弹性纤维变短,数量减少,网状纤维较少,出现肥大细胞脱颗粒。延寿液低、中、高剂量组均能明显升高GSH-Px,CAT,SOD活力(P0.05,P0.01),明显降低LPO含量(P0.01),明显升高Hyp含量(P0.05,P0.01),胶原纤维、弹性纤维和网状纤维均增多,增加表皮厚度,减少肥大细胞脱颗粒现象。结论:通过抑制炎症反应、恢复组织结构,延寿液可延缓大鼠吸入臭氧诱导的皮肤衰老。