大鼠出生前后睾丸间质细胞的形态学观察和计量分析

对大鼠睾丸间质细胞出生前后的发育进行了形态学观察和计量分析。睾丸经戊二醛固定，树脂包埋，半簿切片。用点取截距法求得间质细胞核和平均体积，用点计数法求得间质细胞在睾丸的体积密度和细胞的核质比。依据核的平均体积和核质比计算出细胞的平均体积。在计算睾丸的间质细胞总数时考虑了组织收缩的影响。文内对出生前后间质细胞的形态及数量变化的意义进行了讨论。     

大鼠发育中睾丸巨噬细胞的免疫组化观察

用显示溶菌酶的免疫组化方法，对大鼠睾丸巨噬细胞的出现时间及分布进行了观察。睾丸巨噬细胞出现于胚胎发育的第１６天。睾丸巨噬细胞散在于睾丸索之间及白膜下。随着发育，细胞密度增加，但生后细胞密度一度下降。胚胎１７天至生后１天，睾丸纵隔和附睾结合部集中了大量的巨噬细胞。     

出生前后大鼠胸腺的体视学初步分析

<正> SD大鼠第16天的胎鼠(F16)和生后1 天(N_1)和5天(N5)的乳鼠,取其胸腺称重,测比重计算色埋前体积。组织切成小块后用戊二醛和四氧化锇先后固定,树脂包埋,作1μm切片,甲苯胺蓝染色,油镜观     

大鼠出生前后心肌端粒酶逆转录酶表达的变化

目的:探讨大鼠心肌组织端粒酶逆转录酶的发育规律.方法:免疫组织化学和免疫印迹技术检测SD大鼠心肌端粒酶逆转录酶(TERT)的表达,图像分析技术对心肌组织TERT的表达进行定量分析.结果:3组大鼠心肌组织中的心肌细胞、平滑肌和内皮细胞均有TERT的表达.TERT主要位于细胞质和细胞核内.TERT的总表达规律是20 d胎鼠阳性表达强于出生后6 d大鼠,出生后12 d大鼠心肌表达最低,3组之间TERT的组间比较差异有统计学意义.结论:大鼠心肌组织的端粒酶活性随着日龄增加,其表达逐渐减少.     

Integrin β1在出生前后大鼠中脑黑质的表达

为了检测integrinβ1在出生前后大鼠中脑黑质的表达,并探索其在大鼠黑质神经细胞发育过程中的可能作用,本实验采用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学染色方法,来测定胚龄(embryonic day,E)E16d、E18d、E20d的健康SD胎鼠及出生后1d(postnatal day1,P1)、P3d、P7d、P14d、P21d的健康仔鼠中脑黑质组织中integrinβ1的表达情况。RT-PCR和Western blot结果显示,在检测的各时间点,大鼠中脑黑质integrinβ1都有明显表达,且其mRNA和蛋白质水平变化一致。在E16时,integrinβ1mRNA和蛋白质出现高表达,此高表达一直持续到P7时;而至P14时,integrinβ1mRNA和蛋白质表达水平明显降低,且此低水平表达随发育而持续;P21时与P14时相比无明显差异。而免疫组织化学染色结果显示,在各时间点,大鼠中脑黑质一直有大量integrinβ1阳性细胞存在。在E16~P14各时间点,integrinβ1阳性细胞胞体逐渐增大,P21时与P14时相比,阳性细胞胞体大小无明显变化。而单位面积内integrinβ1阳性细胞数,在E16~P7各时间点无明显差异,但至P14时,单位面积内integrinβ1阳性细胞数则明显降低,且此降低随发育而持续,P21时与P14时相比无明显变化。以上结果表明,在大鼠中脑黑质发育过程中,integrinβ1在E16~P7期间持续高表达,而至P14~P21期间,其表达量明显降低。这种表达变化与大鼠发育期间黑质多巴胺(DA)能神经元的自然凋亡时程相一致,提示integrinβ1的表达与此期间黑质DA能神经元的凋亡有关。     

出生前后胆碱乙酰转移酶在大鼠脑内定位的研究

为探讨大鼠胚胎及生后发育期间脑内胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)的变化规律,本研究采用免疫组织化学方法,观察了胚胎和生后大鼠脑内ChAT样(ChAT-like immunoreactive,ChAT-LI)神经元表达的数量和灰度值。结果显示:ChAT-LI产物主要表达在细胞体、纤维及其末梢。ChAT-LI神经元最先在胚胎第12d(embryonic day12,E12),出现于端脑;E14时可见于隔核和中缝核;E16时内嗅区出现ChAT-LI神经元;E18时出现于视前区节细胞层;E20时,海马内部可见部分ChAT-LI纤维;生后第0d(postnatal day0,P0),少量带有生长锥的ChAT-LI纤维出现于海马;P5时,海马内出现ChAT-LI神经元,且ChAT-LI纤维进一步增加;P10时,海马、内嗅区和穹隆等结构中都可见ChAT-LI神经元胞体及纤维。上述结果提示:胆碱能神经元在出生前后的大鼠脑内,尤其是在海马记忆回路的发育过程中存在一定的变化规律,它们可能是学习记忆等功能的结构基础。     

大鼠心脏心钠素的免疫组化观察

心钠素(Cardionatrin)是新近从人和大鼠心房中分离、纯化的一类新调节肽,它由21至33个氨基酸组成,具有强大的利尿、利钠、扩张血管和降低血压的作用。它们很可能是心脏分泌的一种激素。迄今国内外尚未见心钠素的组织化学的研究报告。本工作利用特异性心钠素的抗体和PAP免疫组织化学的方法,直接观察了心钠素在大鼠心脏内的分布。结果发现,在大鼠心房肌细胞内,具有丰富的心钠素免疫活性反应颗粒存     

芳香化酶基因在出生前后大鼠脑和培养细胞中的表达

芳香化酶催化雄激素转化为雌激素,该酶不仅见于性腺和脂肪组织,也见于多种动物脑组织。脑局部产生的雌激素在脑发育、学习、记忆和认知等过程中起着重要的作用,而脑部雌激素的有效浓度是依赖于脑组织中的芳香化酶基因表达及其酶活性。目前关于芳香化酶基因表达的研究结论不尽相同。我们使用地高辛3′-末端标记的寡聚核苷酸探针对出生前后大鼠脑(妊娠第19天,E19;出生之日,PO;P2,P4)和培养的PC12细胞及星形胶质细胞的芳香化酶mRNA表达进行了原位杂交研究,结果发现:1E19和PO芳香化酶基因表达最高,然后逐渐下降;视前内侧核、终纹床核和杏…     

大鼠睾丸血管构筑的观察

本文通过血管灌注透明标本和微血管腐蚀铸型扫描电镜,观察大鼠睾丸的大血管和微细血管的构筑。大鼠生精小管的周围,有两种小血管配布。1.管间血管:该血管或为1条毛细血管前微动脉,或为2条并行的较大的毛细血管连结成网状,位于生精小管间三角形的间质柱内,并与小管平行走行。2.管周毛细血管:连于管间血管之间,呈绳梯状围绕生精小管,并在生精小管上皮下固有膜内,形成管周毛细血管网。本文还观察了大鼠睾丸较大血管及睾丸固有鞘膜脏层的血管配布特点,讨论了这些血管配布的意义。     

大鼠胃内伤害性刺激后延髓内脏带中Fos蛋白及OX42的免疫组织化学观察

目的研究大鼠延髓内脏带(MVZ)内小胶质细胞和神经元对福尔马林诱发胃伤害性刺激的可塑性反应及其相互关系。方法经细塑料管向胃内注入2．5％福尔马林2ml诱发胃伤害性刺激,动物存活0．5h、1h、2h和3h处死,延髓切片进行抗Fos蛋白(标记神经元)或抗OX42(标记小胶质细胞)单一或双重标记的ABC法染色。结果1．动物清醒后,在5-10min内出现躁动不安,持续1～2h;2．胃黏膜有局灶性出血和脱落;3．MVZ内观察到Fos阳性神经元和OX42阳性小胶质细胞,两者分布相似,显示明显的定位特点;4．双标记显示MVZ内Fos阳性神经元周围有密集的OX42阳性细胞;5．OX42阳性小胶质细胞的反应先逐渐升高(0．5—2h),后(3h)又降低,Fos阳性神经元则呈逐渐升高的趋势。结论MVZ的小胶质细胞可能与神经元一起参与内脏痛的调节。     

胎儿发育中水通道蛋白的免疫组化观察

目的观察胎儿器官和组织发育过程中水通道蛋白(AQPs)的表达特征,初步探讨AQPs对胎儿发育进程的生物意义。方法14～38周胎儿共12例,取用肾脏、肺脏、唾液腺、甲状腺和胃等器官,常规固定、石蜡包埋和切片;用免疫组化S-P法,检测AQPs(AQP1、AQP2和AQP4)在胎儿不同胎龄器官组织中的表达。结果胎儿肾脏中AQPs定位于近端小管和集合管系统;胎肺中AQPs的表达随肺泡发育分化而迁移,始终定位于肺泡上皮;晚期胎肺中AQPs于肺泡及呼吸道上皮均有表达;胎16周起检出AQPs反应于唾液腺、胃腺和胰腺等消化腺,同时甲状腺中AQPs在滤泡上皮也有活跃表达。结论胎肾中AQPs的表达与肾的重吸收功能直接相关;胎肺内AQPs的表达反映肺泡上皮分化的轨迹,其调节水分的作用为肺泡发育提供空间;AQPs介导细胞内外水分的转运不但调节消化腺的分泌还参与调节甲状腺滤泡的激素合成和分泌过程。表明AQPs在胎儿发育过程,对各器官中水转运功能的成熟起重要作用。     

大鼠精子发生中核基质-核纤层-中间丝体系的研究

目的研究精子发生中的核基质-核纤层-中间丝体系(nuclear matrix-lamina-intermediate filament,NM-L-IF)的变化趋向. 方法利用整装电镜技术、SDS-PAGE和Southwestern blot等技术观察与分析经单位重力沉降法分离的大鼠精母细胞、早期精子细胞和晚期精子细胞的NM-L-IF的形态结构、蛋白组成及其与A-T重复序列的相互关系. 结果精母细胞核基质由核纤层、核仁残余物及内部纤维网络组成.精子细胞中,中间丝丰富,核基质结构被致密的染色质团簇所掩盖.精子形成Ⅷ～Ⅸ期时,核基质分化出两部分:疏松的头端(Ap)和致密的尾端(Ca),中间丝连接细胞核与细胞膜;精子形成Ⅹ～Ⅺ期时,头端和尾端间形成弯曲;ⅩⅡ～ⅩⅣ期,头端进一步弯曲,一部分中间丝连接头端的顶部和头尾端的连接部.SDS-PAGE显示分子量小于40kD的蛋白在不同细胞中组成有差异,而分子量大于40kD的蛋白没有明显差异.Southwestern blot显示精母细胞的低分子量蛋白对A-T重复序列的吸附能力强,而只有早期精子细胞的部分高分子量蛋白对该序列具有很强的亲和力. 结论精子发生中NM-L-IF的形态结构、蛋白组成及与DNA的相互作用发生显著变化,这可能与精子细胞核的浓缩变形以及形态发生密切相关.     

大鼠睾丸Cx43蛋白表达的加龄变化

目的:研究Cx43蛋白在大鼠出生后不同周龄睾丸中表达和定位,探讨Cx43蛋白与大鼠睾丸发育和精子发生的相关性。方法:应用免疫组织化学研究Cx43蛋白在1、3、5、7、9、11、13周龄SD雄性大鼠睾丸中的表达,利用血细胞计数板检测5~13周龄精子的数量。结果:Cx43蛋白于第1周开始在支持细胞、精原细胞中表达,第3周在精母细胞中表达,第5周开始在间质细胞、精母细胞、精子细胞中表达,随周龄增加而表达增加;第5周开始出现精子,随周龄增加而增加,Cx43蛋白表达与精子数量呈正相关。结论:Cx43蛋白在大鼠睾丸发育和精子发生的各个阶段均有表达,提示其参与睾丸发育和精子发生的调节。     

出生前后双酚A暴露对子鼠雄性生殖细胞凋亡的影响

目的 研究出生前后双酚A(BPA)暴露对子鼠雄性生殖细胞凋亡的影响,探讨BPA对雄性生殖系统的影响及可能机制. 方法 受孕0天(PGD0)的ICR孕鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、10nmol/LBPA组、100 nmol/L BPA组、1000 nmol/L BPA组;孕鼠饮水染毒,出生后6周(PND42)分别处死雄性仔鼠,取睾丸称湿重,计算睾丸脏器系数;取睾丸组织,电镜观察超微结构的改变,Hoechst染色观察细胞凋亡,免疫组化检测Caspase-3的表达.结果 与空白组和溶剂对照组比较,BPA暴露组睾丸脏器系数降低;电镜显示,高、中剂量组的间质细胞、精原细胞、支持细胞线粒体呈空泡样变化,粗面内质网呈不同程度的扩张.Hoechst染色显示中、高剂量组较对照组和低剂量组细胞凋亡明显.免疫组化结果显示高、中剂量组Caspase-3表达明显,多分布在精原细胞和间质细胞中,且间质细胞强阳性.结论 BPA可以通过诱导生精细胞和间质细胞的凋亡影响睾丸组织学结构.     

损伤坐骨神经后脊髓腹角运动神经元中α管蛋白的免疫组化研究

损伤坐骨神经后脊髓腹角运动神经元中α管蛋白的免疫组化研究吴燕米瑞发刘红甘思德范明（军事医学科学院基础医学研究所）在哺乳动物周围神经中应答神经再生的特点之一是细胞骨架蛋白的合成、表达及轴浆转运的变化，这种变化特点与神经元细胞骨架蛋白的结构重建密切相关，...     

垂体腺瘤中垂体激素与S-100蛋白免疫组化双重染色观察

目的：探讨滤泡星状细胞在垂体腺瘤分类中的意义及滤泡星状细胞与内分泌细胞之间的关系。方法：应用免疫组化双重染色方法,对４２ 例人重体腺瘤的垂体激素与 Ｓ１００ 蛋白表达进行对照观察。结果：垂体腺瘤组织中的滤泡星状细胞有两种情况,一种为腺瘤组织中可见散在分布的滤泡星状细胞,并可见１ 个瘤细胞既有 Ｓ１００ 蛋白表达,又含激素分泌颗粒;另一种为滤泡星状细胞构成了腺瘤的一种主要的细胞成分。结论：滤泡星状细胞与内分泌细胞的功能密切相关,可能在调整内分泌细胞的产生和激素释放方面起一定的作用;滤泡星状细胞腺瘤应作为垂体无功能腺瘤的一个单独类型。     

大鼠睾丸Sertoli细胞外质特化结构生后发育的超微结构观察

本研究采用透射电镜法,对生后1～8周和成年期大鼠睾丸Sertoli细胞外质特化结构(ES)的发育过程进行观察。结果表明,生后第1周ES处于初建阶段,质膜下见高电子密度物质聚集,并见有间断排列的内质网短池。第2周时微丝束开始出现,沿质膜下伸展,内质网池逐渐融合。第3周时微丝密度增加;相邻细胞膜间开始出现紧密连接。随生长发育ES亦逐渐完善,至生后第5周时已于Sertoli细胞基底部周缘广泛伸展。此后直至成年,其形态结构和分布未见有显著改变。本研究认为,大鼠在出生后5周内是ES的重要发育期,与血-睾屏障的形成和完善相一致。     

FOS在大鼠小脑生前,生后及成年期的表达

本文用免疫组化方法观察ＦＯＳ在大鼠小脑生前，生后及成年期的表达，结果显示：胚胎１６．５天时，菱形唇神经上皮和套层出现许多染色很浓的ＦＯＳ阳性细胞胚胎１８．５天时，神经上皮层和套层的ＦＯＳ阳性细胞减少，但此时边缘层的ＦＯＳ阳性细胞对增多，胚２０．５天时，神经上皮，套层及边缘层已见不到ＦＯＳ阳性细胞，生后１４天内，小脑外颗粒细胞层细胞显示较弱的ＦＯＳ表达，着色较淡，生后１４天，内颗粒细胞层开始出现ＦＯ     

Dahl高血压大鼠睾丸中eNOS的表达

目的：研究高血压对Dahl高血压大鼠睾丸各细胞eNOS表达及生殖功能的影响。方法：应用免疫组化ABC法及细胞培养检测睾丸细胞中eNOS的表达情况。结果：在Dahl高血压大鼠睾丸中,eNOS定位于Sertoli细胞,Leyaig细胞和部分生精细胞的胞浆,其表达始终高于正常睾丸组织,并随着高血压病程的进展呈逐渐升高趋势。在体外培养的正常及高血压大鼠的Sertoli细胞中eNOS表达量无明显差异。睾酮水平随血压升高而下降。结论：高盐饮食及高血压使大鼠Serxoli细胞和Leydig细胞中eNOS高表达并使睾酮水平下降。两者作用对睾丸的生殖功能产生了影响。     

锰对大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白及紧密连接相关蛋白表达的抑制作用

目的研究染锰诱导的大鼠睾丸超微结构改变及支持细胞(vimentin,VM)和紧密连接Occludins、Claudin-11mRNA表达,探讨锰对支持细胞骨架蛋白和紧密连接蛋白的破坏机制。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组,低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,8只/组。实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,电镜观察睾丸支持细胞及血睾屏障超微结构,免疫组织化学(SABC)法检测支持细胞VM表达,实时定量PCR反应检测血睾屏障紧密连接Occludins和Claudin-11 mRNA表达。结果 1与空白对照组比较,各染锰组支持细胞数量及VM阳性细胞率、Occludins mRNA和Claudin-11 mRNA表达均显著降低。2染锰剂量相同,6周与4周组比较,以及染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,支持细胞数量及VM阳性细胞率、Occludins mRNA和Claudin-11 mRNA表达均显著降低。3各组大鼠睾丸支持细胞数量与VM阳性细胞率及Occludins mRNA和Claudin-11 mRNA表达均成正相关。结论锰可抑制大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白及紧密连接相关蛋白表达,破坏血睾屏障,导致生精微环境改变,产生生殖毒性效应。