抗人精子表面蛋白P34H单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备并鉴定抗人精子表面蛋白P34H的单克隆抗体(M cAb)。方法:以重组P34H蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术建立分泌抗P34H M cAb的细胞株,并制备腹水型M cAb,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、W estern印迹鉴定其敏感性及特异性。结果:获得1株(2C4)IgG1 Kappa型抗P34H M cAb。ELISA结果表明腹水型M cAb效价可达1∶103~1∶105,W estern印迹显示该M cAb既能特异性地结合精子膜蛋白中相对分子质量(Mr)约为34 000的天然抗原,又能特异性地结合Mr约为27 000重组P34H蛋白。结论:用上述方法成功制备抗P34H M cAb,为进一步研究P34H与男性生殖的关系奠定了基础。     

精子蛋白SP22研究进展

精子蛋白SP22是一种与多种疾病相关并广泛表达于各种组织的多功能蛋白。SP22定位于精子表面,具有酶活性,能够辅助精子穿入卵子,在ras因子共同作用下具有致癌活性。各物种中SP22高度保守,说明它对生命的重要性。目前对SP22与男性不育、帕金森病的关系研究较多。本文综述了SP22在基因结构、蛋白结构、功能特性等方面的最新研究进展。     

抗人精浆磷脂酶A2单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的 :制备并鉴定人精浆磷脂酶A2 (PLA2 )的单克隆抗体 (McAb)。　方法 :通过PEG沉淀、SephacrylS 30 0柱层析、DEAE SephadexA 2 5柱层析及羟基磷灰石 (HA)柱层析分离纯化人精浆中的PLA2 ,并以SDS PAGE鉴定其分子量及蛋白浓度 ;免疫BALB/C小鼠制备抗PLA2McAb ,通过ELISA技术、Western Blot方法鉴定其敏感性及特异性。　结果 :从精浆中提纯的PLA2的相对分子质量 (Mr)约为 3490 0 ,纯化倍数约为 2 4 5倍。制备的McAb经鼠Ig亚类分析为IgMKappa型 ,敏感性可达 1∶5 6～ 1∶5 8,Western Blot证明其特异结合的抗原即为PLA2蛋白酶。结论 :Mr为 3490 0的PLA2可能为一种新型PLA2。该PLA2的McAb的制备将为研究人精浆中PLA2与男性生殖能力的关系提供广阔的前景     

抗人精子抗原的单克隆抗体对人精子穿卵实验的影响

利用我所建立的抗人精子抗原的单克隆抗体2A9处理人精子后,进行了3次自身对照性的人精子穿透去透明带金黄地鼠卵实验,共观察了588个卵细胞,受精率从对照组的71％下降到24.5％,P<0.01。证实2A9能使人精子体外穿透功能下降。     

抗人精浆磷脂酶A2单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的：制备并鉴定人精浆磷脂酶A2（PLA2）的单克隆抗体（McAb)，方法：通过PEG沉淀，Sephacryl S-300柱层析，DEAE－Sephadex A-25柱层析及羟基磷灰石（HA）柱层析分离纯化人精浆中的PLA2，并以SDS－PAGE鉴定其分子量及蛋白浓度，免疫BALB／C小鼠制备抗PLA2，McAb，通过ELISA技术，Western-Blot方法鉴定其敏感性及特异性。结果：从精浆中提纯的PLA2的相对分子质量（Mr)约为34900，纯化倍数约为245倍，制备的McAb 经鼠Ig亚类分析为IgM Kappa型，敏感性可达1：56-1:5^8，Western-Blot证明其特异结合的抗原即为PLA2蛋白酶，结论：Mr为34900的PLA2可能为一种新型PLA2，该PLA2的McAb 的制备将为研究人精浆中PLA2与男性生 殖能力的关系提供广阔的前景。     

抗人精子膜抗原的单克隆抗体

用与人类不育有关的人精子膜关键抗原免疫小鼠制得抗人精子单克隆抗体。这些单克隆抗体为IgG1亚类,可以在免疫印迹中与16KD分子量的精子膜蛋白反应。免疫过氧化物酶组织化学研究证明这些抗体的组织特异性较好,其中2A9C1与包括肝、肺、肾、脾、胰、胃、肠、心肌和骨骼肌在内的人体重要组织无交叉反应。这些抗体在免疫荧光染色中特异地结合列入射出精子核后帽靠近颈部的月牙形区域,这是一个在受精过程中有重要意义的部位。     

抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1的扩增和鉴定

目的 制备纯化的抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1。方法 给BALB／C小鼠腹腔注射BDI-1杂交瘤细胞，收集的腹水过Protein G-agaros亲和层析柱即得到人膀胱癌BDI-1单克隆抗体。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法、间接免疫荧光法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法和点印迹法鉴定单克隆抗体。结果 腹水可以得到1．0～1．5g／L的高效价（10^6）的纯化抗体。结论 该方法可以扩增高效价的单克隆抗体。     

AAT蛋白在人精子中的鉴定和定位

目的对α1-抗胰蛋白酶（AAT）在人精液和精子中进行鉴定以及定位。方法应用免疫印迹方法鉴定AAT蛋白，利用激光共聚焦显微镜和间接免疫荧光定位的方法研究AAT在精子上的定位。结果证实在人精浆和精子里都存在AAT蛋白，且其主要定位于精子的头部，尤其在赤道板处有强荧光。结论通过对AAT在人精子上的鉴定和定位，可以帮助进一步研究该蛋白对精子的作用。     

腺苷脱氨酶在人精子膜上的定位及单克隆抗体对人精子穿卵能力的影响

利用本实验室制备的抗人精子膜结合腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）单克隆抗体和间接荧光免疫技术，分析了该酶在正常人精子膜上的位置。同时，利用该酶单抗分析了该酶活性对人精子穿透去透明带卵的影响。上述两个实验的结果显示：（１）ＡＤＡ结合于人精子中段，尾部膜的外侧；（２）利用抗ＡＤＡＭｃＡｂ抑制ＡＤＡ活性可明显抑制正常人精子穿透去透明带卵的能力。这一研究结果提示，ＡＤＡ作为精子的膜蛋白组分，可能参与精子生理功能的调节     

人精子蛋白17放射免疫分析方法的建立

目的:建立人精子蛋白17(Sp17)的放射免疫分析方法。方法:用重组人Sp17(rhSp17)免疫动物制备高质量的抗血清,用氯胺T法制备125I-rhSp17,建立了Sp17放射免疫分析方法,并测定了正常人(n=59)及35例患者(卵巢癌20例,子宫癌14例,宫颈癌1例)血清Sp17值。结果:测定范围3.3~800μg/L;灵敏度为2.0μg/L;批内CV为7.5%~9.8%,批间CV为8.2%~13.2%。正常人血清Sp17值为(15.60±7.66)μg/L。以Sp17>31.92μg/L为阳性,35例女性肿瘤患者血清标本15例阳性。结论:Sp17的放射免疫分析是一种简便、灵敏、特异的分析方法,可满足临床和科研的需要;Sp17的测定对研究该蛋白的功能、天然分布和异常表达有重要意义。     

Analysis of Renal Cell Populations Using Monoclonal Antibodies

Monoclonal antibodies have proved invaluable in identification and characterization of hemopoietic cell surface macromolecules. We have used a number of these monoclonal antibody probes for immunohistochemical analysis of interstitial cell populations in diseased human kidney tissues and in certain prototypic cutaneous cellular immune reactions. The studies demonstrate that the relative proportions of T-cell subpopulations present in graft rejection (OKT8⁺ exceeding OKT4⁺) differ from those observed in drug nephrotoxicity and end-stage kidney disease. In this regard graft rejection resembles graft versus host disease of skin but not delay ed-type hyper sensitivity. However, analysis of cell populations in interstitial infiltrates from various forms of chronic renal disease (glomerulonephritis, end-stage renal disease of varied etiologies) failed to demonstrate any unique or characteristic profile. These studies led to the recognition that certain monoclonal antibodies directed against B- and leukemic cell surface antigens also bind to normal renal cells and that nephron development in the human fetus is characterized by differential binding of these probes.     

膀胱移行细胞癌中候选肿瘤干细胞标记物USP22 mRNA水平定量分析及其与肿瘤分级的关系

目的：研究肿瘤干细胞标记物USP22 mRNA在不同级别膀胱移行细胞癌和正常膀胱黏膜中的表达差异．并探讨其与肿瘤分级,临床分期的关系。方法：分别抽提不同级别的膀胱移行细胞癌组织标本和正常膀胱黏膜组织标本的总RNA,经RT为cDNA后,采用qRT—PCR法检测USP22 mRNA的表达情况。结果：正常膀胱黏膜组织中USP22的表达明显低于膀胱肿瘤组织,几乎不表达;不同级别膀胱肿瘤组织中,低度恶性潜能的乳头状尿路上皮癌和低级尿路上皮癌中USP22的表达要明显高于其在高级尿路上皮癌中的表达;特别是Ⅲ级膀胱移行细胞癌组,USP22的表达仅略高于其在正常膀胱黏膜中的表达。结论：USP22可能是正常干细胞向肿瘤干细胞恶变的关键凋节分子,可能成为一个新的诊断移行上皮癌侵袭性的有效指标。干扰其蛋白质合成将成为一个抗肿瘤生长的新靶点。     

辅助性T淋巴细胞22及其特征性细胞因子白细胞介素-22的研究进展

辅助性T淋巴细胞(Th)22是新近发现的Th细胞谱系,细胞表型为CCR4~+、CCR6~+和CCR10~+,主要通过白细胞介素-22(IL-22)发挥作用,在介导炎症反应、组织修复、创口愈合、感染性疾病、肿瘤、肝脏疾病以及自身免疫性疾病中发挥着重要作用,逐渐成为目前研究的热点;本文就其研究进展进行综述。     

甲状腺肿瘤患者中辅助性T细胞22及白细胞介素-22的变化及意义

目的 检测甲状腺肿瘤患者外周血及肿瘤组织中辅助性T细胞22 (Th22)及白细胞介素(IL)-22的表达水平,探讨其与患者临床病理特征的关系.方法 选择56例原发甲状腺肿瘤患者和30例健康志愿者,采用流式细胞仪检测外周血Th22细胞水平,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清中IL-22表达水平,应用免疫组织化学双染色分析正常组织及肿瘤组织中Th22阳性细胞的浸润程度,分析这些参数与临床病理特征间的关系.结果 甲状腺肿瘤患者外周血中Th22细胞及IL-22水平分别为(1.74±0.27)％和(162.7±32.2) ng/L,显著高于对照组[(0.57±0.14)％,t=15.72,P＜0.01;(64.2 ±20.7) ng/L,t=11.31,P＜0.01];甲状腺癌患者的Th22细胞比例及IL-22水平明显高于甲状腺瘤患者[(2.21±0.34)％比(1.39±0.22)％,t=9.14,P＜0.01;(199.1±34.1)ng/L比(129.8±31.3) ng/L,t=6.79,P＜0.01].甲状腺肿瘤患者组织中Th22阳性细胞浸润率为56.25％,而对应正常组织为8.33％,差异有统计学意义(x2=8.167,P＜0.01);甲状腺癌组织中Th22细胞浸润率为78.6％,甲状腺瘤组织为38.9％,差异有统计学意义(x2=5.039,P＜0.05).外周血Th22细胞比例、IL-22的表达水平和肿瘤组织中Th22阳性细胞浸润程度与临床分期、淋巴结转明显相关(P＜0.05),与年龄、性别、病理类型无明显相关(P＞0.05).结论 甲状腺肿瘤患者外周血Th22细胞比例及血浆中IL-22水平显著升高,且与临床分期等病理特征明显相关,表明Th22细胞及IL-22参与甲状腺肿瘤的发生发展.     

The Sperm Acrosome: Immunological Analysis using Specific Polyclonal and Monoclonal Antibodies Directed Against the Outer Acrosomal Membrane of Boar Spermatozoa

An antiserum to the purified porcine outer acrosomal membrane (OAM) was raised in female Balb/c mice and was characterized by means of an indirect ELISA. The hyperimmune serum reacted selectively with the acrosomal cap of the sperm head and showed an extremely good cross reactivity with bull and human spermatozoa when assayed by indirect immunofluorescence. Immunoelectron microscopy using the protein A-gold method further confirmed the specificity of the anti-OAM-antiserum for the OAM. In an effort to identify the OAM antigens recognized by the hyperimmune serum and to analyse the extent of cross reactivity on a molecular level, the SDS-extractable proteins were separated by SDS-PAGE, transblotted and immunoprinted using an 125J-conjugated anti-mouse-antibody. To facilitate functional and structural analysis of distinct OAM-proteins monoclonal antibodies were generated by hybridization of mouse myeloma cells with the splenocytes of female Balb/c mice immunized with the purified OAM. One fusion resulted in about 100 anti-OAM-antibodies secreting hybridoma cultures, of which about 30% showed cross reaction with human and bull spermatozoa. Four stable cell lines were selected for this study secreting antibodies directed against the outer acrosomal membrane of boar spermatozoa. Whereas the polyclonal immune mouse serum stained the entire acrosomal cap, the four hybridoma antibodies generated a patch-work-like immunofluorescence pattern over the acrosome. HPLC-ELISA of the solubilized OAM revealed first information on the nature of the corresponding membrane antigen.