分化抑制因子Id4对K562细胞株凋亡的影响

目的探讨Id4基因的反义核酸对人红白血病K562细胞凋亡的影响。方法采用脂质体介导的反义寡核苷酸转染DNA重组技术,将人反义Id4基因插入到真核表达载体pXJ41-neo上,重组质粒和空载体分别转染K562细胞,加入凋亡诱导剂三尖杉酯碱(HT)后采用流式细胞术、TUNEL和免疫印迹(Western blot)技术检测细胞的凋亡率以及相关蛋白Bcl-xl、c-Myc、p27的表达变化。结果获得了pAId4(反义基因重组质粒)和pK562(对照)克隆细胞株;加入诱导剂HT后,反义寡核苷酸组的凋亡率明显增高到43.5%;检测K562细胞凋亡过程中,Bcl-xl蛋白在pAId4细胞株中表达减低。结论反义Id4基因的转入对K562细胞起到诱导凋亡作用,并推测Id4在K562细胞中可能通过影响Bcl-xl的表达量,进一步诱导细胞凋亡。     

Genistein 对K562细胞生长及CyclinD1基因和bcr-abl融合基因表达的影响

目的 研究Genistein抑制K562细胞生长的机制及对CyclinD1基因和bcr-abl融合基因表达的影响。方法 用RT－PCR方法检测Genistein作用于K562细胞前后CyclinD1基因和bcr-abl融合基因的mRNA表达变化,用免疫荧光、流式细胞仪和电镜检测CDK4蛋白的表达、细胞周期及凋亡。结果 K562细胞中CyclinD1基因、bcr-abl融合基因的mRNA和CDK4蛋白表达阳性,用Genistein与K562细胞共同孵育后,bcr-abl融合基因的mRNA表达阴性,CyclinD1的mRNA和CDK4蛋白表达下降,细胞阻滞于G2／M期,K562细胞出现凋亡。结果 bcr-abl融合基因、CyclinD1基因和CDK4蛋白在K562细胞中高表达,Genistein能使K562细胞生长受抑,诱导其调亡,抑制bcr-abl基因的mRNA表达,并使CyclinD1基因的mRNA和CDK4蛋白表达下降,表明bcr-abl融合基因、CyclinD1基因和CDK4对慢粒发展存在内在关系。     

骨髓增生异常综合征患者Id4基因甲基化研究

目的探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者中Id4基因甲基化状态。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）对56例不同类型MDS患者骨髓进行Id4基因启动子区甲基化状况检测,并以非恶性血液肿瘤骨髓作为对照。结果Id4基因在非恶性血液肿瘤骨髓中呈完全性非甲基化状态,在MDS各种类型中,骨髓中原始细胞比例分别低于和高于5%的两组患者中,Id4甲基化差异有显著性意义。结论骨髓原始细胞比例高的MDS患者骨髓Id4基因甲基化发生率高。     

人参多糖对K562细胞凋亡与细胞周期的影响及其机制

目的探讨人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)诱导白血病细胞K562凋亡和周期阻滞的机制。方法取对数生长期的K562细胞,调整密度为7×108/L,空白对照组予以常规培养;GPS组加入400 mg/L GPS。流式细胞仪测定细胞的凋亡率及细胞周期分布变化;RT-PCR检测细胞ERK表达的变化。免疫组化的方法检测细胞中p-ERK、NF-κB、Cyclin D1蛋白定位及表达量的变化。Western blot检测细胞中ERK、p-ERK、NF-κB、Cyclin D1蛋白的变化。结果与对照组比较,K562细胞在400 mg/L GPS的作用下,体外培养24、48、72 h后,GPS组细胞凋亡率显著增高(P<0.05),周期分布检测结果显示,与对照组相比,GPS组K562细胞G0/G1期细胞数量呈时间依赖性增多(P<0.05),G2+M、S期细胞数量则明显减少(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,400 mg/L GPS处理48 h组ERK mRNA的表达水平明显低于对照组(0.20vs 0.50,P<0.05)。免疫组化显示p-ERK、NF-κB、Cyclin D1主要分布在细胞核和细胞质,与对照组相比,GPS组K562细胞内p-ERK、NF-κB、Cyclin D1的表达明显减弱。Western blot检测结果显示,ERK总蛋白无明显变化(P>0.05),而p-ERK、NF-κB、Cyclin D1随时间变化有减少趋势,且在48 h减少明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论人参多糖GPS可促使K562细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导K562细胞凋亡,且均呈时间依赖性。GPS促进K562细胞凋亡、导致其细胞周期阻滞的机制可能是通过抑制ERK/NF-κB信号通路的激活,进而下调Cyclin D1来实现的。     

慢性白血病Id4甲基化研究

目的探讨Id4基因在慢性白血病患者中的甲基化情况。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）,对初发9例慢淋白血病（CLL）和18例慢粒白血病（CML）患者的骨髓进行Id4基因甲基化检测,以正常骨髓作为对照。结果Id4基因在正常骨髓中呈完全性非甲基化状态,在9例CLL患者中全部检测到Id4基因甲基化,而在18例CML患者中,检测到12例Id4基因甲基化。结论慢性白血病患者骨髓Id4基因发生了不同程度的甲基化改变,CLL和CML患者的甲基化发生比例不同。     

外源性p16基因对人原发性肝癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的:探讨导入外源性p16cDNA真核表达载体对人原发性肝癌细胞系SMMC- 772 1生物学行为的影响及其分子机制。方法:构建外源性p16基因真核表达载体并转染SMMC- 772 1细胞,经G4 18抗性筛选和扩增,得到稳定的表达株,并经RT -PCR及免疫细胞化学鉴定。通过生长曲线,流式细胞术,免疫细胞化学及Western -Blot等实验方法,对转基因后肿瘤细胞生物学行为及细胞周期调控因子CDK4 ,CyclinD1及pRb进行观察。结果:转染外源性p16基因的SMMC- 772 1细胞有外源性p16基因的整合及表达,细胞生长速度明显减慢,倍增时间明显延长,G1期细胞明显多于转基因前(P <0 .0 5 ) ;免疫细胞化学显示外源性p16表达可下调CDK4及cylinD1的表达(P <0 .0 5 ) ,Western -Blot提示转染外源性p16基因后细胞中磷酸化pRb表达明显降低。结论:外源性p16基因导入人肝癌细胞株SMMC -772 1中可稳定表达并使细胞停滞在G1期,抑制细胞生长,其机制可能为下调CDK4、cyclinD1的表达和抑制pRb磷酸化有关。     

Velcade影响K562细胞基因表达谱的分子机制

目的 应用生物信息学方法探索Velcade影响K562细胞基因表达谱的分子机制.方法 提取并扩增Velcade处理组和溶剂对照组的K562细胞RNA,与22KAgilent Human 1A基因芯片杂交,用Agilent Feature Extraction软件采集扫描数据,再以GeneSifter,GATHER等基因芯片数据分析工具,对差异表达基因进行基因本体分类、KEGG通路分析、蛋白互作网络分析和文献挖掘.结果 获得228个差异表达基因,其中上调84个,下调144个.下调糜酶1基因幅度最大.对数比值达10.80倍,干扰素α-21基因也下调2.31倍.本体分类显示,衰老过程、白细胞活动等过程显著增强:KEGG通路分析显示,JAK-STAT信号通路,自然杀伤细胞介导的细胞毒作用和抗原处理与提呈等通路受显著影响;蛋白互作网络揭示泛素依赖的蛋白质降解通路、抗原提呈和免疫反应、JAK-STAT信号通路等处于网络中重要位置;文献挖掘显示差异表达基因与白血病、细胞凋亡、细胞周期、蛋白酶体、抑制剂、衰老和IκB等关键词高度关联.结论 Velcade可能通过抑制NF-κB和JAK-STAT等促进细胞存活的信号通路,增强细胞毒作用,诱导肿瘤细胞凋亡;Velcade还可能参与抗原加工与提呈、免疫反应、炎症反应等过程;糜酶1基因可能是Velcade发挥抗肿瘤作用的关键靶标.     

姜黄素对PC3和H446细胞中Id1mRNA表达的影响

目的 观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC3和小细胞肺癌H446细胞Id1mRNA表达的影响.方法 分别采用MTT法检测细胞生长活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Hoechst染色检测细胞凋亡;实时荧光RT-PCR法检测PC3和H446中Id1mRNA的表达.结果 姜黄素明显抑制PC3和H446细胞中Id1mRNA的表达,其相对定量随姜黄素浓度增大而减少;同时PC3和H446细胞的生长抑制率和凋亡率增加,细胞迁移距离减少.结论 在PC3和H446细胞中,姜黄素可能通过抑制Id1基因表达发挥其抑制细胞生长、迁移和诱导细胞凋亡的作用.     

Id4基因与机体发育及肿瘤相关性的研究进展

DNA结合抑制因子4（inhibitor of DNA binding 4,Id4）是碱性螺旋环螺旋（basic helix-loop-helix,bHLH）转录因子的抑制因子。研究发现Id4基因在多种生物进程及肿瘤形成中发挥重要作用,其参与正常组织细胞的生长分化,调控细胞周期及增殖,并在肿瘤形成中起到癌基因或抑癌基因的作用。关于Id4基因的研究尚存在许多分歧,本文就Id4基因在机体发育及肿瘤形成中的作用进行综述。     

黄芩素对人白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察黄芩素对人白血病细胞K562生长的抑制作用及对细胞凋亡率的影响。方法:体外培养K562细胞,将对数生长期K562细胞数调整到1×105/m l,将黄芩素加入各实验孔,将黄芩素的终浓度调整为25.0,50.0,100.0,200.0,400.0μg/m l,每个浓度设4个复孔,分别培养细胞48 h和72 h,采用MTT比色法观察黄芩素对K562细胞的生长抑制作用。将对数生长期K562细胞数调整为1×107/m l,加入黄芩素50.0,100.0,200.0μg/m l作用48 h后,收集细胞用流式细胞仪进行检测,并计算凋亡细胞百分数。结果:黄芩素对人白血病K562细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性。黄芩素50.0,100.0,200.0μg/m l诱导K562细胞凋亡,有明显的凋亡峰(AP峰)出现。结论:黄芩素对人白血病细胞K562的增殖有抑制作用,其机制可能与促进K562细胞的凋亡有关。     

PTK787对K562细胞增殖及细胞周期作用的影响*

目的:观察酪氨酸激酶抑制剂PTK787对K562细胞增殖、细胞周期的作用,探讨PTK787抗急性髓系白血病的作用机制.方法:应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察不同浓度PTK787在不同时间对K562细胞增殖作用的影响;用流式细胞仪检测浓度PTK787对K562细胞周期的抑制作用.结果:随着PTK787浓度增加与作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高.同一时间不同浓度组之间比较,或者同一浓度不同时间组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中PTK787作用48 h,以浓度320μmol/L对细胞抑制率最强.随着PTK787浓度增加,G1期细胞比例逐渐升高,S期细胞比例逐渐下降,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:PTK787可以抑制K562增殖,阻止K562细胞由G1期向S期转化,从而达到抗白血病的作用.     

高浓度胰岛素抑制人白血病细胞株K562增殖的实验研究

目的 探讨高浓度胰岛素(insulin,INS)对K562细胞株增殖的抑制作用及其机理。方法 用不同浓度胰岛素处理K562细胞,分别用CCK-8法、细胞计数法和台盼蓝拒染法检测K562细胞的增殖活性,同时检测培养基中葡萄糖浓度变化;流式细胞术检测K562细胞的凋亡效应;并分别采用不同浓度的胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和IGF-1受体非特异性阻滞剂苏拉明（Suramin）对高浓度胰岛素影响K562细胞增殖作用进行干预。结果 胰岛素在0.1～1 mU/mL浓度下具有明显促进K562细胞增殖的作用,而高浓度胰岛素（1.6～100 mU/mL）则相反;无论培养基中葡萄糖浓度高低,高浓度胰岛素都有对K562细胞增殖的抑制作用;高浓度胰岛素抑制K562细胞增殖呈时效和量效关系;0.1、1、10、100 mU/mL胰岛素处理K562细胞48 h,与对照组比较,0.1、1 mU/mL浓度下抑制细胞凋亡,而10、100 mU/mL浓度下促进细胞凋亡（P均<0.05）;IGF-1能逆转高浓度胰岛素对K562细胞增殖的抑制作用,并且具有量效和时效关系;Suramin能增强高浓度胰岛素对K562细胞增殖的抑制作用,并且具有量效和时效关系。结论 胰岛素对K562细胞有双重作用,即在0.1～1 U/mL浓度下促进细胞增殖、抑制凋亡,高浓度（1.6～100 mU/mL）下抑制细胞增殖、促进凋亡,且其抑制作用与培养基中葡萄糖代谢无关与抑制IGF-1途径有关。     

60Coγ射线诱导的K562细胞增殖抑制和凋亡的研究

目的：观察不同剂量的γ射线和照后不同时间的K562细胞的增殖抑制及凋亡情况。方法：细胞动态计数；^3H-TdR掺入分析；利用ApoAlert Mitochondrial Membrane Sensor Kit在荧光显微镜下观察荧光情况和在流式细胞仪上测定凋亡细胞的比例。结果：在不同剂量照射和照后的不同时间处，^60Coγ射线诱导的细胞增殖抑制和凋亡情况明显不同：细胞增殖抑制情况与受照剂量的大小呈正相关，细胞凋亡比例与受照剂量的大小未见明显相关性，而表现为在照后6h处凋亡细胞较多。结论：^60Coγ射线照射引起的肿瘤细胞增殖抑制有一定的发生时机，并且表现出剂量相关性，而其引起的凋亡效应则更多地表现为时间相关性。     

非霍奇金淋巴瘤中分化抑制因子4的表达及意义

目的:观察分化抑制因子4(Id4)在非霍奇金淋巴瘤组织(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)和反应性增生(RH)组织中的表达差异,及其与肿瘤增殖活性的关系,探讨Id4在淋巴瘤发生、发展中的可能作用。方法:选取2006~2008年郑州大学第一附属医院病理科存档石蜡标本80例,其中NHL 70例,RH 10例。应用免疫组织化学S-P法检测Id4和Ki-67分别在NHL和RH中的表达水平。结果:Id4在NHL中的表达率为35.7%(25/70),而在RH中的表达率为70.0%(7/10),两者之间存在统计学差异(P<0.05)。Ki-67在NHL中的表达率为75.7%(53/70),明显高于RH中的表达率10.0% (1/10,P<0.05),而且Ki-67阳性强度随着NHL恶性程度的增加而增高。Id4和Ki-67的表达与患者性别、年龄、免疫分型及肿瘤原发部位等因素无明显相关(P>0.05)。结论:Id4在NHL中的表达明显降低,可作为NHL与RH鉴别诊断的一个参考指标。     

Wortmannin抑制PI3K途径对K562细胞增殖和Ara-C诱导的细胞凋亡的影响

目的 :探讨磷酰肌醇 - 3激酶 (PI3K)途径在K5 6 2、NB4和HL6 0细胞增殖和凋亡抗性中的不同作用 .方法 :用磷酰肌醇 - 3激酶 (PI3K)特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K活性 ,经细胞生长曲线测定、半固体集落形成实验、流式细胞膜联蛋白V (Annexin -V -Flous)标记技术检测细胞凋亡百分比和凋亡指数 .观察K5 6 2、NB4和HL6 0细胞增殖能力及凋亡抗性的变化 .结果 :K5 6 2、NB4和HL6 0细胞在 2 4、 4 8、 72h的增殖抑制率分别为 4 1 33%、 5 7 4 6 %、 6 5 85 %和 2 6 2 9%、 5 5 1%、 2 10 %及 32 14 %、 17 14 %、13 14 % .生长曲线显示Wortmannin抑制PI3K途径可显著抑制K5 6 2细胞的增殖 (P <0 0 5 ) ,而对NB4和HL6 0细胞增殖无明显影响 (P >0 0 5 ) .K5 6 2、NB4和HL6 0细胞加和不加Wortmannin ,培养 14d后的集落形成率分别为 :16 15 %和 7 6 0 % ,5 90 %和 6 10 % ,6 6 0 %和 6 4 0 % .集落形成抑制率为 5 2 94 %、3 39%和 3 0 3% .Wortmannin抑制PI3K途径可显著抑制K5 6 2细胞的集落形成 (P <0 0 5 ) ,而对NB4和HL6 0细胞集落形成无明显影响 (P >0 0 5 ) .K5 6 2、NB4和HL6 0细胞加WT、AraC、WT +AraC作用 2 4h后的凋亡细胞百分比分别为 (17 2 7± 1 94 ) %、 (2 3 2 5± 14 12 ) %、 (17 6     

SPGL对白血病细胞系K562细胞增殖的影响

目的:研究SPGL对K562细胞增殖的影响。方法:采用K562细胞液体培养、集落形成实验、MTT检测法,观察了SPGL对K562细胞增殖的影响。结果:SPGL能显著地抑制K562细胞的增殖,且此种抑制作用呈剂量依赖关系。结论:SPGL能有效的抑制K562细胞的增殖。