羔羊外周血单个核细胞转化MTT比色法最佳检测条件的筛选

为了建立羔羊外周血单个核细胞转化检测的MTT比色法,对影响MTT比色法的3个主要因素(包括刺激原、细胞浓度、培养时间)进行了探索性的研究.结果表明,MTT法检测的最佳条件为:植物血凝素(PHA)浓度为10 pg/mL,细胞密度为1×107个/mL;或者刀豆蛋白A(ConA)浓度为40μg/mL,细胞密度为2×107个/...     

MTT方法检测肉鸡淋巴细胞增殖条件的优化

细胞的增殖水平是衡量宿主适应性细胞免疫应答的重要指标之一。免疫系统中淋巴细胞增殖是机体对非己抗原刺激产生免疫应答的重要过程,通过淋巴细胞与抗原或丝裂原在体外培养下,其代谢和形态发生变化,来反映机体细胞的免疫状态[1]。检测淋巴细胞反应的方法主要有MTT比色法、3H-TdR掺入法和BrdU标记法等,这些方法在小鼠和灵长类上得到很好的应用[2,3]。淋巴细胞转化试验中最常使用的T细胞丝裂原是植物血凝素     

牛外周血T淋巴细胞增殖试验条件的优化

淋巴细胞增殖试验是体外检测T淋巴细胞功能的一种方法.淋巴细胞在体外培养条件下,与特异性抗原或非特异性有丝分裂原共同培养,使淋巴细胞的代谢和形态发生一系列的变化,可以使较小的淋巴细胞转化为体积较大、代谢旺盛,且能进行有丝分裂的淋巴母细胞.转化的淋巴细胞不仅能呈现出成熟的母细胞形态及蛋白质和核酸的增加,还能合成和释放细胞因子.因此可以使用淋巴细胞增殖试验反映机体的免疫状态[1].     

奶牛外周血单个核细胞增殖反应最优条件的筛选

为了建立奶牛外周血单个核细胞增殖反应的MTT检测方法,对影响增殖反应的刺激原及浓度、细胞浓度、培养时间等条件进行了探索性研究。结果表明,MTT法检测的最佳条件是:ConA浓度为2.5μg/mL,细胞浓度为1×10⁶ cells/mL,培养时间为48 h;或者浓度为30μg/mL,细胞浓度为1×106 cells/mL,培养时间为48 h;或者浓度为30μg/mL,细胞浓度为1×10⁶ cells/mL,培养时间为48 h。     

猪外周血T淋巴细胞增殖反应MTT检测方法的建立

T细胞增殖反应是宿主T细胞识别病原的结果,也是宿主细胞免疫应答的重要指标之一。为了便于检测猪群在病原感染或者疫苗免疫过程中产生的细胞免疫应答,本研究应用MTT法建立了体外检测猪外周血T细胞增殖反应的研究方法。通过密度梯度离心法从外周血分离得到外周血单个核细胞（PBMC）,然后利用单核细胞和淋巴细胞不同的生长特性（贴壁与否）,弃掉贴壁的单核细胞,获得外周血淋巴细胞(PBL)。外周血淋巴细胞的流式分析结果显示,分离获得的PBL中T细胞所占比例达到了80%以上。应用MTT法分析了非特异性刺激物刀豆蛋白A（ConA）的浓度和细胞培养密度对T细胞增殖的影响。结果显示,ConA的工作浓度为5 μg/mL、细胞培养密度为2×106/mL时T细胞的增殖反应最强烈。本研究所建立的猪外周血T细胞增殖反应检测法可以为研究猪针对病原或疫苗的细胞免疫反应提供参考。     

猪外周血单个核细胞增殖反应影响条件的探讨

应用 Ｌ１６ （４５） 正交试验, 对影响猪 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖反应的几个因素, 包括培养时间、 Ｐ Ｈ Ａ 浓度、细胞浓度等三个因素四个水平进行了比较和探索。试验表明几个因素对 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 的增殖反应均有显著的影响（ Ｐ＜ ００５） , Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖反应的 Ｍ Ｔ Ｔ 比色法的最佳反应条件组合为 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 浓度为１ ×１０６／ｍｌ, 植物血凝素 Ｐ Ｈ Ａ 的浓度为１２５μｇ／ ｍｌ, 细胞培养时间为２４ 小时; 影响增殖反应的先后顺序为 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 浓度、 Ｐ Ｈ Ａｐ 浓度及细胞培养时间。同时确定了最有利于 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖的犊牛血清浓度为１０ ％ 。     

奶牛体外受精效果几种影响因素的研究

文章研究了卵巢的保存温度、保存时间、不同的培养液成分、培养方法等对奶牛体外受精后的卵裂率、囊胚发育率的影响.结果表明①采集的卵巢在37℃保存2h时,卵巢卵母细胞体外受精后的卵裂率(71.3%)和囊胚率(31.4%),与25℃保存组的卵裂率(75%)和囊胚率(30.7%)相比,差异不显著(P＞0.05);但与40℃保存组(55%和15%)和4℃保存组(47.8%和12%)有显著差异(P＜0.05);当卵巢保存6h时,25℃保存组的卵裂率(70.2%)和囊胚率(29.2%)均显著高于37℃保存组(50.9%和13%)(P＜0.05);与40℃保存组(30%和7%)和4℃组(30.1%和8.2%)差异极显著(P＜0.01);但与保存2 h组差异不显著.在25℃温度下,屠宰牛卵巢保存时间达到8h时,卵母细胞的卵裂率和囊胚率显著下降,分别为55%和14%.②作为早期胚胎的培养液,CRlaa的效果好于TCM-199.③50μl微滴组的卵裂率(71%)与微滴100μl组(75%)和500μl组(72%)无显著差异(P＞0.05),但囊胚率(15.8%)显著低于100μl组(32%)(P＜0.05);大体积培养组(2 ml)的卵裂率和囊胚率(55%和14.8%)显著低于100μl组和500μl组(P＜0.05).     

奶牛耳成纤维细胞的分离培养及培养条件的研究

本试验研究了奶牛耳成纤维细胞的体外培养,培养液、消化液、胰岛素和血清饥饿对细胞的影响。采用组织块贴壁法培养。了奶牛耳成纤维细胞,采用0．25％胰酶差别消化获得了纯化的奶牛耳成纤维细胞。用三种不同的培养液即DMEM（低糖）、DMEM（高糖）、DMEM／F12,对细胞进行培养,结果细胞群体倍增时间均在2．3-2．5d,DMEM（高糖）的培养效果稍好。用三种不同的消化液（0．25％胰蛋白酶,0.02％EDTA,0．25％胰蛋白酶＋0．02％EDTA）对传代钿跑进行消化．结果表明0．25％胰蛋白酶＋0D2％EDTA所用时间短,消化后培养细胞贴壁率高。在培养液中添加姨岛素能促进细胞的生长。对指数生长期的细胞进行血清饥饿后,细胞仍保持着较高的活力。     

羔羊血清促细胞生长效果的研究

为研究羔羊血清促细胞生长的效果,用羔羊血清以及羔羊与新生牛混合血清来培养VERO、BHK-21细胞,同时培养SP2/0-Ag14细胞并进行计数。结果表明：羔羊血清促细胞生长效应明显低于新生牛血清,但是与牛血清以不同比例混合后,促细胞生长效应有明显的提高,比例在4∶6和5∶5时,促细胞生长能力与牛血清接近。因此,在细胞培养过程中,把羔羊血清和新生牛血清按1∶1混合使用,既可降低成本,又具有良好的促细胞生长效果,使羔羊血清得到了充分利用,并产生一定的经济效益和社会效益。     

新生牛血清促细胞生长活性检测方法的建立与应用

牛血清是医药生物技术产品中重要的原辅材料之一,做好牛血清的质量控制是提高生物制品质量的重要环节。本研究通过应用PK15、BHK21和ST三种兽用生物制品研制中常用的细胞作为载体,选用国内同等价位5个不同厂家生产的新生牛血清作为比较对象,采用细胞倍增时间测定法、细胞克隆形成率测定法、细胞三次连续传代培养法、MTT比色法和微量终点稀释法五种血清质量鉴定的方法进行比较,检测新生牛血清的促细胞生长活性,最终确定了MTT比色法作为便捷高效快速筛选新生牛血清的检测方法。     

鸭外周血液淋巴细胞转化MTT比色法检测的研究

为了建立鸭淋巴细胞转化检测的ＭＴＴ 比色法,对试验条件进行了研究。其检测的最佳条件为７．２ μｇ／ｍＬ的ＰＨＡ、７．５ ×１０６ 细胞／ｍＬ的细胞数、细胞培养液加入１ ％ 的ＳＰＦ鸡血清、细胞培养的时间为７２ ｈ。在此条件下,对北京鸭的外周血液淋巴细胞转化进行了检测,其结果为：２～６ 周龄鸭淋巴细胞转化率从５０．２ ％ 上升到２１２．３％ ,８ ～１６ 周龄正常鸭在１９３．０％ ～２８１．０％ 之间变动。实验结果表明,此方法可用于鸭体外细胞免疫功能的检测。     

关于发展奶牛饲料的几点建议

本文介绍了我国奶牛饲料业基本情况,提出了主要存在的饲料生产与奶牛饲养模式不相适应的问题,着重提出了“饲料配合”建设的意义,内容及可操作性,提出了当前发展我国奶牛业的策略。     

包头地区荷斯坦奶牛产奶量和乳成分的季节性变化规律

为了了解包头地区奶牛产奶量和乳成分的季节性变化,对某规模化牛场2007~2012年6年的产奶量和乳成分数据进行整理分析,得出了该地区产奶量和乳成分的季节性变化规律。结果表明,5~8月份产奶量较高、乳蛋白和乳脂率较低(各月间P≥0.05)。10~次年2月份产奶量较低、乳蛋白和乳脂率较高(各月间P≥0.05)。3月和9月份,产奶量、乳蛋白质和乳脂率均居中(P≥0.05)。3月份开始产奶量上升、乳蛋白质和乳脂率下降(2~5月相邻月间P≥0.05,相隔月间P0.05),9月份开始产奶量开始快速下降、乳蛋白质和乳脂率快速上升(8月与9月间P0.05)。各月份乳糖含量之间无明显差异(P≥0.05),有与产奶量一致的变化趋势,而与乳蛋白质和乳脂率的变化相反。包头地区奶牛产奶量有春季开始上升、夏季最高、秋季开始下降和冬季最低的季节性变化规律,乳蛋白和乳脂率变化趋势与产奶量变化正相反。产奶量、乳蛋白质和乳脂率秋季变化速度和幅度大于春季。     

日粮营养调控对奶牛乳组成的影响

近年来,通过营养调控改变牛乳组成已经越来越受到研究人员的重视。作者综述了通过营养调控对奶牛牛乳乳脂肪、乳蛋白及乳糖的影响。     

围产前期饲喂DCAD对奶牛营养代谢疾病的影响

试验通过在奶牛围产前期日粮中以?瘙
厫560 g/kg的标准添加阴离子盐,以观察DCAD的饲喂效果.结果表明:在奶牛围产前期饲喂阴离子盐有利于牛体健康,能显著降低产后瘫痪及乳房炎的发病率(P＜0.05),极显著降低胎衣不下和子宫内膜炎的发病率(P＜0.01),同时有利于奶牛产后体况的恢复,缩短奶牛产后第一次发情时间26.5天(P＜0.05),显著提高奶牛产奶量,产后30天奶牛日产奶量可提高11.7%(P＜0.05).     

上海地区季节变化对奶牛产奶性能影响的研究

为探讨上海地区季节性变化对奶牛产奶量的影响,笔者采集2006年1月~2007年10月基础产奶量数据共17284牛次,分析季节变化对奶牛生产性能的影响。结果表明,12、1和2月份分娩的母牛产奶量较高,7、8、9和10月份分娩的母牛产奶量较低,其他月份居中;10、8、7和9月份4个自然月产奶量极显著低于其他月份,其中9月份最低,而其他各月份差异不明显;奶牛分娩后不同泌乳月份产奶量由高到低的顺序是2、3、4、1、5、6、7、8、9、10和大于10个月龄。季节对奶牛的产奶性能有明显影响,应根据季节制定不同的饲养管理任务和采取相应的饲养措施,同时建议对奶牛的DHI记录也应考虑季节的影响。     

规模化奶牛场乳腺炎发病规律的调查分析

[目的]为分析昆明地区规模化奶牛场临床乳腺炎的发病情况及流行规律,从2003年6月至2006年5月,对昆明某奶牛场饲养的342～426头奶牛乳腺炎的发病情况进行为期3年的跟踪调查.[方法]应用奶牛临床乳腺炎诊断方法进行判定.[结果]表明:牛场奶牛临床乳腺炎平均发病率为8.35%,各年之间平均发病率(8.17%～8.63%)差异不显著(P＞0.05);月份之间最高和最低发病率相差5.22个百分点(6.57%～11.79%),差异显著(P＜0.05),不同胎次奶牛发病率差异较大(6.32%～16.67%),1～3胎次与4～7胎次奶牛发病率差异极显著(P＜0.01);日均产奶量分别为0～10 kg、10～20 kg、20～30 kg和30 kg以上的奶牛临床乳腺炎发病率(3.33%～11.88%)差异极显著(P＜0.01).乳区的平均发病率为9.35%(8.99%～9.80%),各乳区之间差异不显著(P＞0.05),乳区平均瞎奶头率为3.21%(1.60%～4.45%),后乳区的瞎奶头率极显著(P＜0.01)高于前乳区.[结论]昆明地区的奶牛乳房炎发病率无明显季节性差异.     

Comparison of Milk Fat Globule Membrane Proteins in Milk Samples of Dairy Cow and Goat

In order to compare the difference of milk fat globule membrane（MFGM）proteins between dairy cow and goat milk,30 milk samples were collected in a dairy farm and a goat farm from Anhui area,respectively.Extracted proteins from the MFGM-enriched fractions were identified and quantified by LC/MS approach.The results showed that 284 and 334 proteins of MFGM from dairy cow and goat were identified,the biological processes of MFGM proteins were similar between dairy cow and goat which were mainly related to biological regulation,localization,transport,signal transduction and response to stimulus.Meanwhile,there were some differences in molecular functions,and protein binding and nucleotide binding were the most prevalent molecular functions in dairy cow MFGM proteins,while protein binding and structural molecule activity were the most prevalent molecular functions in goat MFGM proteins.And structural molecule activity was the main molecular functions among the difference proteins.Pathway analysis revealed that tight junction,axon guidance,antigen processing and presentation,complement and coagulation cascades were enrichment in dairy cow MFGM proteins,and regulation of actin cytoskeleton was enrichment in goat MFGM proteins.Those results revealed the protein expression pattern difference between MFGM protein of dairy cow and goat milk,and provide reference data for further exploring the molecular mechanism of synthetic milk fat globule.     

应用BA-ELISA检测奶牛结核病乳汁抗体的研究

本试验建立了BA－ELISA检测牛乳中结核抗体的方法。以皮试阳性奶牛的乳样12头份，做BA－ELISA检测，结果符合率达83．33％（10／12）。结果表明该法检测牛乳结核抗体重复性好、简洁快速、敏感性高，不失为一种适用于临床的实用检测方法。     

Thepax（宝利肥）对泌乳奶牛瘤胃发酵和产乳性能的影响

选用60头中国荷斯坦奶牛,按照胎次、体况及产乳量随机分成A、B两组（n=30）。A组牛为对照组,饲喂含有奶牛原有青贮饲料的全混合日粮（TMR）;B组为试验组,在A组饲喂全混合日粮的基础上,每吨另添加0．5kgThepax（宝利肥）。结果表明,Thepax（宝利肥）对纤毛虫种类、数量和挥发性脂肪酸浓度及其组成无显著影响（P〉0．05）。两组乳牛干物质采食量无明显差异,但Thepax（宝利肥）组可以显著提高产乳量（P〈0．05）;添加Thepax（宝利肥）后,B组乳脂肪率、乳蛋白率、乳糖率、干物质率、脂肪蛋白比的值分别比A组提高2．56％、1．26％、1．30％、0．26％、1．50％。