丙氨瑞林降低人卵巢癌CoC1/cDDP细胞线粒体膜电位并诱导其凋亡的研究

目的:研究丙氨瑞林降低人卵巢癌CoC1/cDDP细胞线粒体膜电位(ΔΨm)与诱导其凋亡的关系。方法:用不同浓度的丙氨瑞林与CoC1/cDDP细胞一起培养48h,并设对照组。经瑞士-姬姆萨染色进行细胞凋亡形态学观察;流式细胞仪检测亚G1期细胞、AnnexinV+/PI-细胞的百分率及线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;半定量RT-PCR法检测作用前后CoC1/cDDP细胞Caspase-3mRNA的表达。结果:CoC1/cDDP细胞经丙氨瑞林作用后亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞的百分率较对照组明显升高(P<0.01),并且出现明显的凋亡细胞形态的改变,而线粒体膜电位(ΔΨm)降低的细胞数百分率显著增加(P<0.01),两者间呈正相关关系(r=0.950,r=0.924,P<0.05);Caspase-3mRNA的表达较对照组明显增强(P<0.01),并且与亚G1期细胞、AnnexinV+/PI-细胞及ΔΨm降低的细胞数均呈正相关关系(r=0.909,r=0.897,r=0.909,P<0.05);并且上述变化均与丙氨瑞林的剂量有关(P<0.01)。结论:丙氨瑞林可通过降低人卵巢癌CoC1/cDDP细胞线粒体膜电位(ΔΨm),从而诱导其凋亡。     

线粒体跨膜电位和细胞凋亡相关性的研究

线粒体跨膜电位的降低是细胞凋亡早期的不可逆事件。线粒体膜内外的电势差降低,可引起线粒体膜内外一系列的生化改变,如诱导细胞色素C释放,活化caspase蛋白酶家族,呼吸链与氧化磷酸化失耦联,三磷酸腺苷合成停止;线粒体膜通透性改变;凋亡诱导因子(AIF)的释放等,引起细胞凋亡的级联反应,最终导致细胞凋亡。本文就线粒体跨膜电位的形成,其在细胞凋亡时的变化及其机制进行综述。     

白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodaminel23和TMRE标记细胞线粒体膜电位（△ψ）,并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇（≤25μmoFL）对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇（〉25μmol／L）显著地抑制HepG2细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性（F=18．532,P〈0．05）;流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性（P〈0．05）;白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。     

氧化砷诱导食管癌细胞凋亡线粒体超微结构和膜电位的改变

目的 :研究氧化砷 (As2 O3)诱导食管癌细胞凋亡的过程中线粒体超微结构和功能的变化。方法 :培养的食管癌细胞系SHEE85加入 3 μmol LAs2 O3,作用 2 ,4 ,6,12 ,2 4h ,在光镜和电镜下观察细胞形态。以罗丹明 (Rhodamine 12 3 )荧光探针标记线粒体 ,细胞荧光光度计检查线粒体荧光强度 ,计算线粒体跨膜电位 (MTP ,△Ψm)的改变。结果 :线粒体荧光强度的改变反映MTP的状态。荧光强度早期增加 ,中期下降 ,后期最低 ,2 4h后细胞核呈典型凋亡改变伴有线粒体肿胀。结论 :在As2 O3诱导下 ,SHEE85细胞线粒体有明显的形态和功能改变伴随线粒体跨膜电位的降低 ,线粒体改变是As2 O3诱导食管癌细胞凋亡过程重要的一环     

补骨脂素加长波紫外线光化学疗法诱导人白血病细胞凋亡时对线粒体膜电位的影响

目的 研究补骨脂素 (PSO) 加长波紫外线 (UVA) 光化学疗法 (PUVA) 诱导人白血病细胞 K562、NB4 凋亡时对线粒体膜电位的影响。方法 细胞与不同质量浓度 PSO,接受或不接受 UVA 照射后共同培养,电镜下观察细胞超微结构改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果 PUVA 处理后的 K562、NB4 细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变;PSO、UVA 照射及 PUVA 均可使细胞凋亡率增加,线粒体膜电位下降,PUVA 的作用显著强于前两者 (P＜0.01)。结论 PUVA 可诱导人白血病细胞发生凋亡,诱导凋亡的途径之一为下调线粒体膜电位水平。     

线粒体在蓝舌病毒HbC3株诱导人肝癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨BTV-HbC3对人肝癌Hep-3B细胞线粒体功能和膜电位的影响及其与细胞凋亡关系。方法:利用透射电镜和荧光显微镜观察Hep-3B细胞感染BTV-HbC3在24,36,48 h的凋亡情况与其线粒体形态变化;噻唑蓝(MTT)法检测其线粒体功能;流式细胞仪检测经Rh123/PI染色的BTV-HbC3诱导该细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)和Annexin V/PI染色的细胞凋亡率。结果:Hep-3B细胞感染病毒在24,36,48 h时可导致线粒体功能下降,同时使线粒体膜电位显著降低,细胞凋亡率显著增加。结论:BTV-HbC3通过诱导凋亡来抑制人肝癌细胞的生长,其机制与线粒体跨膜电位下降有关。     

丙氨瑞林联合顺铂对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探讨丙氨瑞林(alarelin)联合顺铂(cisplatin)对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的影响及作用机制.方法 建立裸鼠移植瘤模型,将32只荷瘤裸鼠随机分为4组:对照组、丙氨瑞林组、顺铂组、丙氨瑞林+顺铂组.每日观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线、计算肿瘤体积、抑瘤率,并用免疫组化法检测移植瘤中Caspase-3的表达.结果 各药物干预组抑瘤率分别为丙氨瑞林组22.14%,顺铂组32.12%,联合用药组63.32%,联合用药组的抑瘤率明显高于顺铂组和丙氨瑞林组(P<0.05).②各药物干预组Caspase-3的表达高于对照组,且各干预组间差异有统计学意义(P<0.001).结论 丙氨瑞林、顺铂均可抑制裸鼠移植瘤的生长,二者联合应用有协同作用,其作用机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关.     

丙氨瑞林联合5-Fu对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及其作用机制

目的 探讨促性腺激素释放激素(GnRH)类似物醋酸丙氨瑞林(alarelin)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的生长和survivin mRNA表达的影响. 方法 建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型,模型建立后20只实验裸鼠随机分为四组:对照组、丙氨瑞林组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)组、丙氨瑞林和5-Fu联合组.测量肿瘤体积,计算抑瘤率,4周后处死裸鼠,切取移植瘤组织称取瘤重,RT-PCR法检测各组肿瘤组织中survivin mRNA的表达. 结果 丙氨瑞林与5-Fu联合用药组抑瘤效果最好,丙氨瑞林组、5-Fu组和联合组抑瘤率依次为16.9%、32.0%、58.3%.RT-PCR法显示丙氨瑞林组、5-Fu组及联合用药组survivin mRNA的表达明显低于对照组,且丙氨瑞林组、5-Fu组及联合用药组两两之间比较表达差异也有统计学意义(P<0.05). 结论 丙氨瑞林可抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长、survivin mRNA的表达.丙氨瑞林与5-Fu联合应用提高了5-Fu的抗肿瘤效果,抑瘤作用可能是通过抑制survivin mRNA的表达来实现的.     

丙氨瑞林对子宫内膜癌ras、myc及P53基因表达调控的研究

目的：研究丙氨瑞林作用于子宫内膜癌后ｒａｓ、ｍｙｃ及Ｐ５３基因蛋白的变化,探讨其治疗子宫内膜癌的机理。方法：对１９例经诊断性刮宫后病理确诊的子宫内膜癌病人,予丙氨瑞林２００μｇ肌注,每日１次,共７天,用药结束３天后手术。对病人用药前诊刮标本及用药后子宫标本癌组织作免疫组化（ＡＢＣ法）染色,观察ｒａｓ、ｍｙｃ及Ｐ５３基因的表达。结果：用药后ｒａｓ、ｍｙｃ阳性级别较用药前下降（Ｐ＜０．０５）,而这种变化与病人年龄、月经状况、临床期别、组织病理亚型及癌周内膜无关（Ｐ＞０．０５）;用药前后Ｐ５３基因表达变化不明显。结论：丙氨瑞林可能通过影响子宫内膜癌相关癌基因来抑制子宫内膜癌的生长。     

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoC1／cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的:探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoC1/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoC1/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析。结果:MPA明显抑制CoC1/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P<0.01);MPA与DDP合用对CoC1/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P<0.01)。结论:MPA能明显抑制CoC1/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性。     

PIK3IP1与其新剪切体PIK3IP1-v1均定位于细胞膜并诱导细胞凋亡

目的:发现和克隆人类基因PIK3IP1的新变异体并鉴定其功能,研究其对细胞活力的影响和亚细胞定位,分析PIK3IP1在细胞系中的表达情况.方法:利用GenBank中的数据,从人的混合组织cDNA中通过PCR克隆PIK3IP1和它的新剪切体PIK3IP1-v1,运用生物信息学分析其结构特性.经萤光素酶活性检测、细胞形态观察和流式细胞检测研究PIK3IP1和PIK31P1-v1对细胞存活力的影响,使用荧光显微镜观察其亚细胞定位.最后通过RT-PCR分析PIK3IP1在细胞系中的表达情况.结果:获得PIK3IP1和新剪切体PIK3IP1-v1的真核表达质粒和融合绿色荧光蛋白表达质粒.生物信息学分析显示,PIK3IP1和PIK3IP1-v1均有信号肽并包含跨膜结构域,但后者胞外缺失一个Kringle结构域.功能分析发现,PIK3IP1和PIK3IP1-v1均可诱导细胞凋亡.荧光显微观察证实,PIK3IP1的两种剪切体均定位于细胞膜.RT-PCR证明PIK3IP1在多种细胞中转录水平较低.结论:新剪切体PIK3IP1-v1和PIK3IP1均定位于细胞膜并诱导细胞凋亡,而且在多种细胞中低水平转录.     

纳络酮注射液对一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠模型细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的:探讨纳络酮注射液对一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠模型细胞凋亡及Caspase-3表达的影响。方法:将30只大鼠随机分为正常对照组、一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠模型对照组和纳络酮注射液治疗组,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫组化法检测Caspase-3的表达。结果:治疗组大鼠脑细胞凋亡率及Caspase-3表达较迟发性脑病对照组显著降低(P<0.05)。结论:纳络酮注射液对一氧化碳中毒迟发性脑病的脑保护作用机制可能与干预脑细胞凋亡相关基因表达并减少神经细胞凋亡有关。     

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoCl/cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoCl/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理.方法采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoCl/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析.结果MPA明显抑制CoCl/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P＜0.01);MPA与DDP合用对CoCl/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P＜0.01).结论MPA能明显抑制CoCl/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性.     

姜黄素促卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡机制探索

目的研究姜黄素对耐药卵巢癌细胞的促凋亡作用及其可能的机理。方法用MTT法检测不同浓度姜黄素、化疗药物〔顺铂(DDP),紫杉醇〕及姜黄素联合化疗药物(姜黄素+顺铂,姜黄素+紫杉醇)作用于卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞48h后各组的细胞抑制率,并用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡率。RT-PCR技术检测姜黄素、顺铂、姜黄素+顺铂作用于COC1/DDP细胞48h后各组的磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基(PI3KCA)mRNA的表达。结果不同浓度姜黄素作用COC1/DDP 48h后,细胞的抑制率和凋亡率随着姜黄素浓度的升高相应增高,姜黄素联合化疗药物作用组比单用化疗药物组的细胞抑制率及细胞凋亡率高(P<0.05)。顺铂与姜黄素联合用药与顺铂单独作用相比PI3 KCA mRNA的表达降低(P<0.05)。结论姜黄素能够促进卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的凋亡,这一作用可能与姜黄素和化疗药物协同诱导该细胞系的凋亡有关,其机制可能为降低PI3 KCA基因的表达。     

塞来昔布通过ERK1/2信号通路对肝癌细胞株SMMC-7721增殖、凋亡的影响

目的:观察COX-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨该作用与ERK1/2信号通路之间的关系。方法:用不同浓度的塞来昔布溶液(0、25、50、75和100μmol/L)处理对数生长期的肝癌SMMC-7721细胞,MTT比色法检测不同时间点各药物浓度组细胞增殖情况;流式细胞术分析不同浓度的塞来昔布溶液对SMMC-7721细胞凋亡的影响;RT-PCR检测COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA表达的变化;Western blot检测COX-2、VEGF和ERK1/2蛋白表达的变化。结果:塞来昔布对SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,该作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强;流式细胞术检测结果显示出明显的细胞凋亡,且凋亡率随着塞来昔布浓度的增高而升高;随着塞来昔布剂量的增加,COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA及蛋白的表达水平逐渐降低。结论:塞来昔布可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促使瘤细胞凋亡,且作用呈时间和剂量依赖性,其机制可能与下调ERK1/2信号通路及抑制新生血管生成有关。     

纳洛酮对缺氧-复氧心肌细胞线粒体能量代谢的保护作用

目的:观察纳洛酮对培养家兔心室肌细胞缺氧-复氧后线粒体膜电位变化的影响,探讨其对缺氧心肌细胞能量代谢的保护意义。方法:培养心室肌细胞分成三组:对照组(A组)、缺氧组(B组)、纳络酮组(C组),后两组又分3个亚组:缺氧2 h组(B1、C1);缺氧2 h-复氧2 h组(B2、C2);缺氧2 h-复氧4 h组(B3、C3)。检测缺氧-复氧后不同时间细胞线粒体膜电位变化情况。结果:缺氧后,线粒体膜电位均下降;C组各时间点线粒体膜电位均高于B组(P≤0.01)。结论:早期应用纳洛酮可明显减轻心室肌细胞缺氧-复氧后线粒体膜电位的下降,改善缺氧心肌细胞的能量代谢。     

Bcl-2抑制剂对黄芪注射液减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨黄芪注射液(AI)对Bcl-2抑制剂(TW-37)作用下的缺氧缺糖/复氧复糖(H/R)大鼠海马神经元凋亡的影响。方法取原代培养8 d的胎鼠海马神经元,随机分为6组:正常对照组、H/R组、AI组、AI溶剂对照组、Bcl-2抑制剂(TW-37)+H/R组、TW-37+AI+H/R组。除正常对照组外,各组均进行缺氧缺糖0.5 h,再于复氧复糖后七个时间点(0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h、120 h)分别进行指标检测。采用MTT法检测细胞活性,western blot法和RT-PCR法检测海马神经元Caspase-3蛋白和mRNA的表达。结果与正常对照组比,除0 h外,H/R组海马神经元活性明显降低(P0.05),Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA表达均明显增强(P0.05);与H/R组相比,除0h外,AI组海马神经元活性明显增高(P0.05),Caspase-3蛋白及mRNA表达均明显降低(P0.05);而AI溶剂对照组、TW-37+H/R组及TW-37+AI+H/R组则无显著差异(P0.05)。结论黄芪注射液可通过激活Bcl-2抗凋亡机制增强H/R大鼠海马神经细胞活性、降低Caspase-3表达,Bcl-2是黄芪注射液抑制H/R大鼠海马神经元凋亡的重要靶点之一。     

高迁移率族蛋白B1通过调节Bcl-2和Bax蛋白表达促进氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞的凋亡

目的：研究高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）在氧糖剥夺/复氧后对星形胶质细胞凋亡的影响,同时通过检测凋亡相关蛋白Bcl 2和Bax表达变化探讨其可能的作用机制。方法：将体外培养新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞分为正常组、模型组、干扰组、对照组,用携带大鼠HMGB1的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）慢病毒载体干扰星形胶质细胞抑制HMGB1表达后进行氧糖剥夺/复氧处理,氧糖剥夺6 h、复氧24 h后检测。通过Western blotting法检测RNA干扰效果,通过MTT细胞存活实验检测细胞损伤,通过TUNEL法检测细胞凋亡,最后通过Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达。结果：与正常组比较,模型组经过氧糖剥夺/复氧处理后星形胶质细胞内HMGB1表达明显升高（P<0.001）, MTT实验检测细胞存活率下降（P<0.001）,TUNEL法检测凋亡细胞数增多（P<0.001）, 凋亡相关蛋白Bcl 2/Bax蛋白比值下降（P<0.001）;与模型组比较,RNA干扰有效抑制HMGB1蛋白表达（P<0.001）, MTT实验检测细胞存活率升高（P<0.001）,TUNEL法标记凋亡细胞数减少（P<0.001）, 凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax蛋白比值升高（P<0.001）。结论：氧糖剥夺/复氧后HMGB1的释放可以导致星形胶质细胞损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达有关。