杜氏盐藻对氯酸盐的敏感性及氯酸盐抗性株的分离

目的 考察杜氏盐藻对氯酸盐的敏感性及其在分离盐藻氯酸盐抗性株中的作用.方法 测定了不同浓度的氯酸钾和氯酸钠对杜氏盐藻的抑制作用,并利用确定浓度的氯酸盐从盐藻化学诱变库中分离氯酸盐抗性株.结果 杜氏盐藻对氯酸钾的敏感浓度(细胞致死浓度,下同)为100 mmol/L,对氯酸钠的敏感浓度为200 mmol/L.利用200 mmol/L氯酸钠作为筛选剂,从化学诱变库中筛选了3株氯酸盐抗性突变株.结论 盐藻对氯酸盐中度敏感,可以利用氯酸盐抗性分离杜氏盐藻硝酸盐还原酶突变株,从而建立盐藻筛选标记体系,为利用转基因盐藻生产抗癌药物血管抑素奠定基础.     

杂种细胞基因组文库的构建及单拷贝顺序的分离和顺序分析

杂种细胞14-7-1中,含有完整的人体11号和20号染色体,同时还含有4号和8号的部分染色体。用体外包装的方法构建基因组文库。用种特异的探针分离出含有人体基因组顺序的重组子,分离得到8个单拷贝顺序。通过与已建立的杂种细胞克隆分布板杂交以及染色体的原位杂交方法。将1个单拷贝顺序FD11-1定位在11p11-q11上。这是1个767bp的核苷酸顺序,经1991年Genbank检索。没有找到任何具有同源性的基因或片段,这是1个新克隆的DNA片段;为临床诊断以及人类基因组全顺序测定提供有用的探针和座位。     

非小细胞肺癌T7噬菌体展示文库的构建

背景与目的SEREX(Serological analysis of recombinant expression libraries)是近年来发展起来的一种寻找肿瘤相关抗原的方法,通过与噬菌体展示技术结合,可以有效和快速的筛选肿瘤相关抗原。本研究拟构建人肺鳞癌和肺腺癌T7噬菌体展示cDNA文库,为进一步筛选和鉴定非小细胞肺癌相关抗原打下基础。方法诊断明确的肺鳞癌和腺癌患者手术标本各5例,Trizol试剂提取总RNA,Straight A's系统分离鳞癌和腺癌mRNA,逆转录合成双链cDNA后,与T7Select 10-3载体连接,体外包装并扩增得到人肺鳞癌和腺癌T7噬菌体展示cDNA文库。结果构建肺鳞癌和肺腺癌T7噬菌体展示cDNA文库各一个,原始文库重组克隆数分别为鳞癌1.8×106pfu,腺癌5×106pfu。扩增后滴度为3.2×1010pfu/mL和2.5×1010pfu/mL。随机从2个文库中各抽取24个克隆PCR扩增插入片断,电泳结果显示肺腺癌文库所有克隆均有插入片段,肺鳞癌文库插入率超过95%(23/24)。两个文库插入片断大小均在(300-1500)bp之间。结论成功构建了人肺鳞癌和腺癌T7噬菌体展示cDNA文库,为下一步筛选和鉴定非小细胞肺癌相关基因奠定基础。     

盐藻提取物对小鼠肿瘤免疫功能的影响

 本实验研究观察了盐藻提取物（EDS）对小鼠抗肿瘤免疫的影响。结果显示，高和中剂量的EDS能显著地（P＜0．05）提高正常和荷瘤小鼠的脾细胞对ConA反应的增殖活性及腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子活性。此外，EDS还能减少Lewis肺癌肺转移灶数。这些发现提示，口服EDS的抗肿瘤作用可能是通过增强机体抗肿瘤免疫而实现的。     

盐藻提取物对荷瘤小鼠的抑肿瘤作用

 盐藻提取物（EDS）是海洋甲藻类中提取的一种脂溶性混合物，含有大量胡萝卜素（以卜胡萝卜素为主），还有维生素E及多种不饱和脂肪酸。本实验用荷瘤小鼠（S37）灌胃EDS一个月后，观察对小鼠死亡率及肿瘤抑制率的影响。共做两批，结果相似。高剂量组肿瘤抑制率为10．97%，11．7%，低剂量组为12．53%，18．5%，均比阳性对照药β-胡萝卜素高，但不及阳性对服药环磷酰胺。灌生理盐水组小鼠死亡率为10%，灌EDS组则无死亡。     

盐藻提取物对阿霉素诱发小鼠心脏毒性的影响

本文观察β-胡萝卜素和盐藻提取物对减轻阿霉素(A D M)诱发小鼠心脏毒性的作用。结果为单用 ADM 和 ADM 注射前腹腔注射过β-胡萝卜素及溶剂小鼠的心脏湿重均比 ADM 注射前预先腹腔注射盐藻提取物小鼠的明显减轻(P<0.05)。12mg/kg 的 ADM 单次注射以及在注射 ADM前,经盐藻提取物和β-胡萝卜素预先处理小鼠的存活率,在第35天分别是40%、100%和63%。ADM 剂量改为15mg/kg,在 ADM 注射后14天,上述分组小鼠的存活率分别是0%、50%和12.5%。这些结果提示,盐藻提取物在对抗 ADM 诱发的致死性心脏毒性上,具有保护作用,而β-胡萝卜素则无。     

卤代物对盐藻生长抑制实验的联合效应的观察

背景与目的： 根据国际经济合作与发展组织(OECD)藻类生长抑制实验的国际标准方法,研究了卤代物对盐藻的毒性作用。 材料与方法： CCl4、CHCl3和CHBr3两两混合共3个浓度组、三者混合1个浓度组和1个对照组,毒物浓度设置参照国家GB5749-1985《生活饮用水卫生标准》,对盐藻进行培养,48 h后进行平板计数。 结果： 得到了各试验组对盐藻(Dunaliella salina)的48 h半数有效抑制浓度EC50值,以及得到各混合物毒性相加和S与联合效应相加指数AI,由于AI值均在－0.1～0.1,表明混合物对盐藻的毒性具有相加作用。 结论： 盐藻作为受试生物在毒物的评价方面具有广阔的前景。     

亚硫酸氢盐-基因组测序法在检测基因异常甲基化中的应用

目的：介绍一种准确、敏感的检测多个标本、多个CG二核苷酸甲基化状态的方法。即亚硫酸氢盐-基因组测序法（Bisulfite Genomie Sequencing，BGS）。方法：单链DNA的胞嘧啶可被亚硫酸氢盐修饰转变成尿嘧啶，而5′甲基胞嘧啶仍保持不变。这种修饰处理可在甲基化和非甲基化基因组DNA间产生DNA序列差异，而这种DNA序列差异可通过BGS法较为灵敏地筛查出。利用该原理检测肝癌细胞AFP基因启动子区CG二核苷酸甲基化状态。结果：在癌细胞中发现两种异常甲基化，即高度甲基化度部分甲基化。结论：BGS法在基因甲基化检测中将有很大的应用潜能．为探讨肿瘤发生机制提供了新的分子分析方向。     

肺癌组织基因组DNA异常甲基化的检测与分析

背景与目的对肺癌组织基因组DNA异常甲基化进行筛选与分析,探索肺癌发病的表遗传致癌机制。材料与方法从肺癌和癌旁组织中分别提取基因组DNA,经Mse1(甲基化非敏感性酶)单独消化或Mse1和BstU1(甲基化敏感性酶)联合消化,消化产物用甲基化敏感性内切酶指纹法(PCR-basedtechnique-Methylation-sensitiveRestrictionFingerprinting,MSRF)进行分析,肺癌组织出现异常甲基化基因片段,进一步将异常甲基化DNA片段进行亚克隆和序列测定,再与基因文库中的基因进行类比分析,同时按年龄、性别及吸烟状况分组并分析其与肺癌DNA异常甲基化的关系。结果84.5%(49/58)的肺癌样本出现异常甲基化现象,但肺鳞癌(82.1%)与肺腺癌(88.5%)的异常甲基化率差异无统计学意义(χ2=0.073,P>0.05);在异常甲基化DNA片段中,高甲基化现象占83%,低甲基化为17%,发现2条重要的高甲基化基因片段,它们分别与抑癌基因WT-1(Wilm'stumorsuppressorgene)和细胞周期调控基因CCNC(humancyclinCgene)匹配;经统计学分析,吸烟、年龄和性别与肺癌DNA异常甲基化无关。结论基因组DNA的异常甲基化,特别是高甲基化现象,可能在肺癌发生发展中起重要作用,这可能是肺癌发病的表遗传机制。     

肾癌T7噬菌体展示肽库构建的实验研究

目的:构建肾细胞癌T7噬菌体展示肽库,为下一步筛选肾癌早期诊断分子标志群打下基础.方法:用传统Trizol方法分别抽取31例涵盖各种组织类型肾癌组织标本的总RNA,确定完整性后再根据OD值等量混合总RNA,用试剂盒完成mRNA的分离并电泳检测其质量,经反转录、末端平齐、片段长短筛选、加接头、双酶切、去除多余接头和<300 bp的cDNA片段等步骤,再与T7Select10-3b载体连接、体外包装并扩增得到肾癌T7噬菌体展示cDNA文库.通过铺平板测定和PCR技术鉴定所建文库质量.结果:建成原始文库的库容量为5.0×107 pfu/mL,扩增后文库滴度为3.5×1012 pfu/mL,重组率为95%,插入片段为300～2 000 bp.结论:成功用T7噬菌体构建了高质量的肾癌cDNA文库,为筛选可用于临床早期诊断的肾癌特异标志奠定基础.     

人脑胶质瘤SHG—44cDNA文库的构建和鉴定

从人脑胶质瘤体外细胞系SHG－44中抽提总RNA，亲和纯化分离mRNA．逆转录合成cDNA，经重组连接，体外包装，感染大肠杆菌Y1090后建成的SHG－44cDNA文库，其库容量含9．25×105原代重组子，重组百分比94．9％，克隆效率为1．04×10pfu／μgcDNA．同时，以兔抗牛GFAP多抗为探针对该文库进行免疫筛选，得到了两个GFAP相关基因的cDNA克隆，在表达水平上，该cDNA文库含GFAP基因的频率为1．2×10-5，从而证实文库中有目的基因的有效表达，为与此相关的分子生物学研究提供了一个有用的工具。     

Comprehensive Genomic Profiling of Cell-Free DNA in Men With Advanced Prostate Cancer: Differences in Genomic Landscape Based on Race

Advanced prostate cancer (aPC) in Black men was reported to present with aggressive features and to be associated with poor prognosis. Herein, we compared the cell-free DNA (cfDNA) genomic landscape of aPC in Black vs White men. Patients (pts) with aPC from 6 academic institutions and available cfDNA comprehensive genomic profiling (CGP) were included. Association between mutated genes and race was evaluated using Barnard’s test and a Probabilistic Graphical Model (PGM) machine learning approach. Analysis included 743 aPC pts (217 Black, 526 White) with available cfDNA CGP. The frequency of alterations in the androgen receptor gene was significantly higher in Black vs White men (55.3% vs 35% respectively, P < .001). Additionally, alterations in EGFR, MYC, FGFR1, and CTNNB1 were present at higher frequencies in Black men. PGM analysis and Barnard’s test were concordant. Findings from the largest cohort of Black men with aPC undergoing cfDNA CGP may guide further drug development in these men.     

盐藻提取物对肿瘤病人的治疗价值

通过观察４４例肿瘤病人口服盐藻提取物（ＥＤＳ）来证明ＥＤＳ对肿瘤的治疗价值。病人每天３０ｍｇ一个月后，随着血中β－胡萝卜素（ＢＣ），维生素Ａ（ＶＡ）水平升高，肿瘤病人血肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）活性，淋巴毒素（ＬＴ）活性，淋巴细胞转化率（ＬＣＴ）显著提高；超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）活性显著升高，血脂质过氧化物（ＬＰＯ）水平显著降低。经过统计学处理，结果提示ＥＤＳ可以显著增强肿瘤病人的细胞免疫功能和抗氧化功能。