重型再生障碍性贫血和骨髓增生异常综合征骨髓中T辅助细胞亚群的变化

为研究SAA和MDS骨髓Th细胞亚群的数量及比例改变情况。用FACS同期对照研究 16例正常对照组、 2 4例发病期SAA、 15例MDS骨髓Th细胞的改变。结果显示 ,正常对照组Th1、Th2细胞及Th1/Th2为 :0 33%、 0 34%、 1 0 0 ,发病期SAA为 :4 4 2 %、 0 4 0 %、 10 5 7,恢复期SAA为 :0 39%、 0 2 0 %、 0 92 % ,MDS为 :0 4 1%、 0 5 7%、 0 75。发病期SAA的Th1、Th2细胞均显著增高 (P <0 0 1、 0 0 5 ) ,Th1/Th2显著向Th1偏移 (P <0 0 1) ;恢复期SAA与正常对照基本相当 (P>0 0 5 )。与正常对照组比较 ,MDS组的Th1细胞未升高 (P >0 0 5 ) ,亦显著低于发病期SAA组 (P <0 0 1) ,虽然Th2细胞升高 ,但无统计学意义 (P >0 0 5 ) ,但Th1/Th2比值降低 (P <0 0 5 ) ,向Th2偏移。SAA的发病可能由于Th1细胞增多 ,Th2细胞代偿不足 ,Th1/Th2向Th1偏移 ;MDS骨髓Th1细胞改变不显著 ,Th2有增多的趋势 ,Th1/Th2向Th2偏移     

小巨核ABC法染色鉴别不典型再障与骨髓增生异常综合征的价值

小巨核ＡＢＣ法染色鉴别不典型再障与骨髓增生异常综合征的价值李玲，毛燕莉陕西省人民医院血液病研究室关键词小巨核，再生障碍性贫血，骨髓增生异常综合征再生障碍性贫血（ＡＡ）和骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）属干细胞疾病。ＡＡ的主要特点是骨髓增生低下，ＭＤＳ是一...     

骨髓增生异常综合征中的T细胞免疫

骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)是一组肿瘤性疾病,以骨髓无效造血并向急性髓系白血病转化的风险为特点.流行病学显示自身免疫性疾病的患者发生MDS风险增加,为二者存在共同病因的假设提供了依据.MDS骨髓微环境中存在T细胞过度活化的现象.部分低危组MDS治疗药物具有抑制T细胞免疫机制,而高危组MDS的去甲基化药物则增强T细胞的抗肿瘤免疫反应,特别是免疫检查点抑制剂正在MDS中进行临床实验.因此,MDS中T细胞免疫失调的双重作用值得深思,充分认识T细胞免疫异常在M D S发病机制中的作用是形成新治疗方法的理论基础.     

骨髓增生异常综合征细胞及亚群的变化

应用单克隆抗体及绵羊红细胞E玫瑰花环形成实验对22例骨髓增生异常综合征(MDS)病人的外周血T细胞总数及亚群变化进行了测定,结果表明MDS病人总T细胞减低,辅助T细胞亦减低,OKT_4/OKT_8比例失调,提示MDS发病病因中存在由T细胞数量之间平衡失调而导致的造血异常。同时,我们测定了病人的免疫球蛋白定量,结果表明MDS病人组IgG和IgA均较正常人组低,可能与T细胞亚群变化有关。本文将对22例MDS病人用表面受体和单克隆抗体来确定的T淋巴细胞亚群及所测得的免疫球蛋白的结果分析讨论。     

流式细胞术对骨髓增生异常综合征和再生障碍性贫血患者骨髓细胞免疫表型的分析

检测骨髓增生异常综合征(MDS)和再生障碍性贫血(AA)患者骨髓细胞免疫表型特征,探讨其对二者发病机制、分型诊断及鉴别诊断的临床意义。选用多种单克隆抗体,应用直接免疫荧光法采用流式细胞术CD45/SSC设门,对23例MDS、14例AA、9例正常对照的骨髓细胞各免疫标志的表达率进行检测。结果:MDS组与正常对照组相比其造血干/祖细胞抗原CD34、HLA-DR、髓系早期抗原CD13、CD33、单核系抗原CD14、T淋巴细胞抗原CD7的表达率增高,髓系成熟抗原CD15、B淋巴系抗原CD19、CD20的表达率降低,DI值增高;由RA进展至RAEB,CD34、HLA-DR、CD13、CD33、CD14、CD7的表达率逐渐增高,CD15、CD3、CD19、CD20的表达率逐渐减低,DI值逐渐增高。AA组与正常对照组相比其CD34、CD13、CD33、CD15的表达率降低,CD3、CD7、CD25、CD22的表达率增高。MDS组与AA组相比其CD34、HLA-DR、CD13、CD33、CD14的表达率增高,CD3、CD5、CD7、CD15、CD19、CD20、CD22、CD25的表达率显著降低。MDS和AA患者骨髓细胞免疫表型分析,有助于揭示二者的发病机制,为临床提供新的诊断、分型及鉴别诊断方法。     

环孢素A联合沙利度胺治疗骨髓增生异常综合征对T细胞亚群影响的初步研究

为探讨环孢素A联合沙利度胺治疗骨髓增生异常综合征对T细胞亚群的影响,我们对2007年6月至2012年6月我院血液内科门诊和住院低中危MDS患者22例,在给予环孢素A联合沙利度胺治疗前后,应用流式细胞仪对于患者和健康志愿者外周血标本进行T淋巴细胞亚群检测。我们发现:CD4+T细胞在MDS患者外周血的百分比低于正常对照组(P<0.05),CD4/CD8比值与正常对照组相比有显著性差异(P<0.05)。治疗显效组患者治疗后的CD4+T细胞百分率增高(P<0.05),CD8+T细胞百分率减低(P<0.01),CD4/CD8比值在治疗前后有显著性差异(P<0.05)。在治疗前,无效组和显效组在T细胞总数百分率,CD4+T、CD8+T细胞百分率以及CD4/CD8的比值均有统计学意义(P<0.05)。由此我们认为,MDS患者存在T淋巴细胞亚群免疫失调,细胞免疫功能紊乱。CsA以及沙利度胺治疗MDS的机制可能与Th,Ts细胞比率改变有关。     

地西他滨对骨髓增生异常综合征患者分层治疗的疗效分析

目的:对不同危险度分级的骨髓增生异常综合征患者(myelodysplastic syndrome,MDS)分别给予不同剂量的地西他滨治疗,观察治疗前后CD3 +、CD4 +、CD8 +T淋巴细胞比例的变化。 方法:选取2015年8月至2018年8月于皖北煤电集团总医院接受治...     

骨髓增生异常综合征免疫异常的表型

本文探讨免疫异常表型对骨髓增生异常综合征 (MDS )分型诊断及鉴别诊断价值。选用多种单克隆抗体 ,用流式细胞测定分析仪 ,对 4 9例MDS、 5 0例良性血液病患者 (贫血、粒细胞减少症、血小板减少性紫癜、感染等 )的骨髓细胞免疫表型进行测定分析研究。结果MDS 89 3%以上有二系或三系免疫表型异常 ,其中CD7、CD19、CD13、CD14、CD33、CD34、HLA DR免疫标志变化最大 ,明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;髓系抗原表达明显增高 ,而且随MDS进展恶化 ,FAB亚型抗原表达出现规律性变化 ,RA→RAS→RAEB→向RAEB T转化 ,较早期髓系抗原表达 (如CD13、CD33)逐渐增加 ,而较晚期髓系抗原表达 (如CD15、CD14 )逐渐减少 ;同时伴淋系抗原表达逐渐减少 ;骨髓干细胞 /祖细胞表面抗原 (如CD34、HLA DR ) ,随着MDS恶化发展 ,有逐渐明显增加异常表现 ,而且CD34、HLA DR早期抗原表达增高者 ,常常预后较差 ,易于转化成白血病。结论MDS患者骨髓细胞免疫异常表型 ,有利于MDS诊断、分型诊断及鉴别诊断 ,并对治疗、预后判断有重要指导价值[1,2 ,5] 。     

骨髓增生异常综合征患者血小板内环核苷酸的变化

我们用放射免疫分析测定了２５例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）、１８例急性非淋巴细胞性白血病（ＡＮＬＬ）、２９例正常人血小板内环一磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）和环一磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）的含量，ＭＤＳ和ＡＮＬＬ病人血小板内ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ含量均明显高于正常对照（Ｐ均＜０．０１），而ＡＮＬＬ病人血小板内ｃＡＭＰ又高于ＭＤＳ病人（Ｐ＜０．０１），血小板内ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ（ｃＡ／ｃＧ）比值则缺乏规律性变化。ＭＤＳ病人的血小板聚集明显低于正常对照（Ｐ＜０．０１）．两组病人外周血小板数明显低于正常（Ｐ＜０．０１），且在正常组中，血小板内ｃＡＭＰ含量与血小板数成负相关（ｒ＝－０．７０６９，Ｐ＜０．０１）。结果提示，ＭＤＳ病人血小板聚集功能减退可能与血小板内ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ含量升高有关，且血小板内ｃＡＭＰ含量随病情的恶性程度增加而升高。     

人类白细胞抗原 DRB1基因多态性与骨髓增生异常综合征和再生障碍性贫血的相关性

目的 探讨人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)DRB1等位基因多态性与骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)和再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)的关联性.方法 采用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)DNA分型技术对242例MDS和115例AA患者及2264名正常对照进行了HLA- DRB1基因分型.结果 MDS患者和AA患者的HLA-DRB1*15等位基因频率都明显高于正常对照组(22.93% vs.17.25%,χ2=9.662,OR=1.428,P=0.003;26.52% vs.17.25%,χ2=12.924,OR=1.732,P=0.001).另外MDS和AA的男性患者的DRB1*15都明显高于正常组(24.68% vs.17.25%,χ2=11.194,OR=1.572,P=0.001;29.29% vs.17.25%,χ2=13.563,OR=1.987,P=0.001),而女性患者差异并没有统计学意义.结论 MDS和AA的男性患者DRB1*15等位基因频率都明显高于正常人群,HLA-DRB1*15可能是男性MDS和AA患者的易感基因.

Abstract：

Objective To investigate the association of the HLA-DRB1 polymorphism with susceptibility to myelodysplastic syndrome (MDS) and aplastic anemia (AA) in Chinese Han population.Methods The polymorphism of HLA-DRB1 alleles in 242 patients with MDS, 115 patients with AA and 2264 umbilical cord blood control samples were tested by polymerase chain reaction- sequence specific primer (PCR-SSP).Results Compared with normal controls, the frequency of HLA-DRB1*15 was significantly increased in the MDS group and AA group (22.93% vs. 17.25%, χ2=9.662, OR=1.428, P=0.003; 26.52% vs. 17.25%, χ2=12.924, OR=1.732, P=0.001). And this is mainly due to the increase in the male patients in both patient groups: in the MDS males, 24.68% vs. 17.25%, χ2=11.194, OR=1.572, P=0.001, and in the AA males, 29.29% vs. 17.25%, χ2=13.563, OR=1.987, P=0.001. No significant difference between the controls and the female patients in both groups was observed. Conclusion The HLA-DRB1*15 could be a susceptibility allele for MDS and AA male patients.     

再生障碍性贫血患者骨髓及外周血T、NK细胞膜分子和可溶性分子动态变化

目的研究T淋巴细胞及免疫分子在再生障碍性贫血（AA）致病中的作用及其与临床疗效的相关性。方法应用免疫荧光染色技术和流式细胞仪分析AA骨髓及外周血T淋巴细胞表型,ELISA测定骨髓和外周血白介素-2及其可溶性受体（IL-2,sIL-2R）、可溶性Fas配体（sFas-L）和Flt3配体（FL）的水平。结果（1）AA病人骨髓和外周血CD8+细胞百分率增加,CD4/CD8比例下降;骨髓血CD25+和HLA-DR+细胞百分率增多,急性AA增加尤为显著（P<0.01）;骨髓血中CD16+或CD56+细胞百分率也明显增多（P<0.05）。（2）所有AA患者骨髓及外周血IL-2含量均显著升高,绝大部分患者的sFas-L含量增加,FL水平升高尤为显著,高达正常水平的20倍。IL-2、sFas-L和FL的含量与临床疗效密切相关,经治疗有效的患者骨髓和外周血的IL-2、sFas-L和FL水平明显下降,但FL仍不能降至正常水平。结论T细胞的异常活化,多种免疫分子表达的异常升高,以及产生针对自身造血干/祖细胞的细胞毒效应,是AA造血功能衰竭的主要原因。     

再生障碍性贫血患者淋巴细胞表型变化

目的：研究再生障碍性贫血（AA）患者骨髓（BM）及外周血（PB）淋巴细胞及其活化相关分子的表达及临床意义。方法：采用单色和双色免疫荧光标记法，流式细胞仪分析AA患者的BM和PB中淋巴细胞膜分子的表达。结果：AA患者BM和BP中CD8^ 细胞增加，CD4／CD8比例下降，BM在CD25^ 细胞和HLA－DR^ 细胞增多，急性AA增加尤为显著（P＜0．01），BM中CD16^ 或CD56^ 细胞也明显增多（P＜0．05），双标记分析提示T细胞主要为CD8^ 细胞：急性AA患者CD8^ -CD25^ 细胞显著增多（P＜0．01），AA患者BM中淋巴细胞活化相关分子表达增多，尤其4－1BB^ ,CD95L^ 和CD40L＋细胞显著增多（P＜0．01），结论：AA患者BM中淋巴细胞活化相关膜分子增多，是AA免疫功能异常及最终导致造血功能衰竭的原因之一。     

ConA激活的小鼠T细胞CD69表达动力学的体内外研究

目的 为明确ＣＤ６９体内外表达动力学并进一步探讨其作用。方法 ＣｏｎＡ体内外刺激小鼠Ｔ细胞后,选取不同时间点,流式细胞仪观察Ｔ细胞ＣＥ６９表达率。结果ＣｏｎＡ刺激后２ｈＣＤ６９即有明显表达,６～８ｈ达到峰值,ＣＤ８＾＝与ＣＤ８＾＋Ｔ细胞相比无明显差异。体外条件对ＣＤ６９的表达有显著的影响。结论 结果提示ＣＤ８＾－和ＣＤ８＾＋Ｔ细胞的活化均需要ＣＤ６９的参与,Ｔ细胞可能在活化早期一过性高表达ＣＤ６９     

Abnormal immunomodulatory ability on memory T cells in humans with severe aplastic anemia

Severe aplastic anemia (SAA) is a bone marrow failure disease induced by hyperfunctional autoimmunic Th1 lymphocytes. Memory T cells (TM) are a component of the adaptive immune system. They ensure the host of more aggressive and faster immune response to efficiently eliminate the specific antigens after re-exposure and thus play a key role in T-cell functions. In this study we investigate the quantities and functions of memory T cells in SAA patients before and after immunosuppressive therapy (IST) to further clarify the mechanism of SAA apoptosis of bone marrow hematopoietic cells. Results showed that the percentage of CD4+ effector T cells in peripheral blood and bone marrow lymphocytes was decreased in SAA patients. The ratio of CD4+ memory T lymphocytes to CD8+ memory T subsets (CD4+/CD8+TM) in SAA patients was also lower. The percentage of CD8+ effector T cells in peripheral blood and CD8+ central memory T cells in the bone marrow lymphocytes was significantly higher in newly diagnosed patients. Furthermore, the median expressions of perforin and granzyme B on memory T cells were higher in SAA patients compared to those in normal controls. After IST, the quantities and functions of memory T cells return to normal level. Therefore, we concluded that the abnormal immunomodulatory ability on memory T cells may contribute to the imbalance of Th1/Th2 subsets and thus lead to over-function of T lymphocytes and hematopoiesis failure in SAA.     

再生障碍性贫血患者外周血T细胞FasL的表达分析

目的 比较分析再生障碍性贫血(AA)患者T细胞上Fas配体(FasL)的表达及其在胞内外的分布情况，观察AAT细胞胞浆FasL的释放特性及细胞毒作用。方法 以正常人“静息”T细胞和人为诱导活化的T淋巴母细胞为参照，采用免疫荧光标记和流式细胞技术，检测FasL在AAT细胞表面及胞浆中的分布；用体外大剂量PHA-过性刺激的方式诱导T细胞胞浆FasL的释放；以Jurkat细胞为靶向，同时辅以单抗阻断及超速离心的方法，观察AAT细胞FasL的释放特性和杀伤效应。结果 AA T细胞表面及胞浆中均有FasL的异常表达，其中胞浆FasL的异常表达尤为显著；高浓度胞浆FasL可在大剂量PHA-过性刺激时迅速向胞外释放；PHA刺激后的AAT细胞培养上清有明显的Jutkat细胞杀伤活性，该效应可被FasL McAb阻断，或经超速离心加以去除。结论 AAT细胞是一种处于预活化状态的细胞，具有与T淋巴母细胞相似的活化特征，含有高浓度、能以细胞外体形式诱导释放、具备完整活性的胞浆FasL是其异常活化的一大特点。     

Characterization of myelodysplastic syndrome and aplastic anemia by immunostaining of p53 and hemoglobin F and karyotype analysis: differential diagnosis between refractory anemia and aplastic anemia

P53 mutation has been reported in various solid tumors, acute leukemia and myelodysplastic syndrome (MDS), but the diagnostic significance of p53 in MDS remains to be determined. The purpose of the present paper was to examine p53 mutation and immunostaining of the same patients, because there have been few reports of simultaneous analysis of these markers. Seven p53 mutations were observed among 37 MDS and 11 cases of overt leukemia transformed from MDS (MDS-OL). Mutated p53 mainly observed in high-risk MDS had more intense p53 staining than in MDS with wild-type p53 overexpression. Aplastic anemia (AA) produced no p53 staining. The percentage of p53 staining in MDS (71%) was higher than that of mutated p53 (11%) but did not reach 100% of MDS cases studied, therefore the authors attempted to differentiate MDS, especially refractory anemia (RA) and AA, using a combination of p53 immunostaining, hemoglobin F (HbF) immunostaining and chromosome abnormality, because HbF of erythroblasts was reportedly observed in MDS RA but not in AA. Most MDS/MDS-OL (47/48) had at least one positive marker. Among 11 AA cases, only two were positive for HbF. The present results suggest that the combination of these three markers is useful to discriminate MDS from AA.     

米诺环素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

研究米诺环素(MNC)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。以ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度的MNC与T细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModFit软件分析T细胞增殖相关指数。结果:终浓度为10、25和50μmol/L的MNC显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的71.20%±1.08%,分别降低为64.43%±1.39%、53.34%±1.26%和33.65%±1.91%;CFDA-SE染色结果显示,培养48 h和72 h的ConA组T细胞的增殖指数(PI)分别为1.57±0.03和2.06±0.02,各浓度的MNC对ConA刺激的T细胞增殖具有明显的抑制作用,以50μmol/L的MNC抑制作用最明显,48 h和72 h的PI分别为1.01±0.02和1.03±0.01,与相应时间的对照组比较,均有统计学意义(P<0.01)。MNC能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖。具有独立于其抗菌活性的抗炎作用。