HIV-1 CHLJBF06051 包膜序列及感染性分析

目的 分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1) 原代分离株CHLJBF06051 包膜糖蛋白的序列特征及感染性.方法 构建带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4 和CCR5 的靶细胞进行感染实验,观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征.结果 获得有功能全Env 克隆,命名为CHLJBF06051.用全Env 氨基酸序列与国内分离株进行系统发育分析结果表明,该株为B′亚型.感染性检测结果显示该病毒只能感染U87. CD4. CCR5 细胞,不能感染U87. CD4. CXCR4 细胞.结论黑龙江省一名HIV-1 阳性者HIV-1 CHLJBF06051 病毒的包膜基因,该病毒属于B'亚型,为CCR5 亲嗜性毒株.     

来自同一供者的不同HIV-1感染者体内病毒包膜序列变异性分析

目的 调查同一供体来源HIV-1病毒包膜序列变异情况,为进一步进行表型特征、病毒感染能力以及抗病毒免疫研究奠定基础.方法 从6例同一来源HIV-1感染者外周血单个核细胞中提取DNA,设计跨病毒包膜的保守引物,进行PCR扩增,将扩增产物克隆至质粒载体,筛选阳性克隆进行序列测定.采用生物信息学方法对其进行系统发育特征以及编码氨基酸的变异性进行了分析.结果 共获得6个有完整开放读码框的包膜克隆.在6个克隆中,包膜糖蛋白gp120内变异程度大的区域分别为信号肽区、可变区V1/V2区、恒定区C2区内近V3区部分、V4区和V5区.变异包括点突变、氨基酸插入或缺失等.系统树分析发现所获得病毒克隆与中国分离株BCNB03聚集成一束.结论 构建并鉴定了6个HIV-1包膜克隆.同一来源的HIV包膜糖蛋白在不同受者体内发生了较大变异.     

宁夏艾滋病抗病毒治疗患者HIV-1基因耐药性结果分析

目的 了解宁夏HIV抗病毒治疗者HIV-1基因耐药性情况.方法 以2011年6月末仍在进行HIV抗病毒治疗的AIDS患者为研究对象,采用基因型耐药检测方法,分析HIV-1耐药结果.结果 共84例AIDS患者被纳入本研究分析,总耐药率为5.9%.结论 宁夏HIV抗病毒治疗患者耐药处于较低水平,应多关注治疗时间较长的患者,增加病毒载量检测和耐药检测的频率,以尽快选择适当的治疗方案,可能有利于降低耐药毒株的发生.     

深圳市HIV-1毒株的流行状况

目的了解深圳地区人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)毒株亚型及流行情况,分析其传染来源和传播规律。方法应用巢式聚合酶链反应技术,对122例在深圳市发现的HIV-1感染者外周血单个核细胞中的env基因和gag基因进行扩增,并对各基因区核苷酸序列进行测定和分析。结果122份样本中共存在CRF01_AE、CRF08_BC、CRF07_BC3种重组毒株以及B'、B、C3种亚型,其在所有分析样本中的比例分别为45.1%(55/122)、31.1%(38/122)、6.6%(8/122)、14.8%(18/122)、1.6%(2/122)和0.8%(1/122)。CRF01_AE、CRF08_BC、CRF07_BC、B和B'亚型间的组内离散率分别为(4.455±1.478)%、(2.997±1.345)%、(4.380±2.024)%、(5.186±2.487)%和(4.869±2.638)%,与部分国内和国际参考株01AE.TH.90.CM240、97CNGX-9F、CN.97.C54A、B.US.83.JRFL、RL42核苷酸序列间的离散率分别为(5.228±0.823)%、(3.634±1.073)%、(4.233±1.119)%、(4.950±2.564)%、(5.795±2.198)%。CRF07_BC和CRF08_BC亚型以吸毒人群为主,CRF01_AE重组亚型以性途径和吸毒人群为主,B和B'亚型主要分布在静脉吸毒、性传播和献/输血人群。结论深圳地区有3种亚型和3种重组亚型HIV-1毒株流行,CRF01_AE、CRF08_BC重组亚型和B'亚型为主要流行毒株,CRF01_AE是性传播人群中的主要流行毒株,CRF08_BC和CRF01_AE是静脉吸毒人群中的主要流行毒株。     

灭活前后HIV-1包膜基因变异的研究

目的 深入了解ＨＩＶ在灭活因素作用下包膜基因变异。方法 对ＨＩＶ－１Ｂ３亚型毒株在Ｓ／Ｄ法及低ｐＨ法灭活作用前后的样品,套式ＰＣＲ扩增其民膜基因Ｃ２￣Ｃ３区５６４ｂｐ的核酸自段,进行核苷酸序列测定和分析。结果 两种方法活前后,包膜基因变异均不显著,核苷酸同源性均为９８％。结论 Ｓ／Ｄ法及低ｐＨ法灭活作用前后ＨＩＶ包膜基因变异不显著。体外传代ＨＩＶ包膜基因趋于稳定。     

2015年河南省新确证HIV-1感染者耐药传播状况研究

目的调查2015年河南省新确证人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者中HIV耐药株的流行情况。方法对河南省4个地区2015年1—6月新确证HIV-1感染者确证时的信息资料进行整理,随后进行血样采集,基因型耐药检测和数据的分析。结果共收集到117例患者的样本和信息,得到63例患者的基因型耐药检测结果。63例患者中有11例被检测到携带耐药株,耐药传播率为17.46%。男性的耐药传播率高于女性(P<0.05),20~39岁病例的耐药传播率高于其他年龄段(P<0.05),B亚型的耐药传播率高于其他亚型(P<0.05),郑州地区病例的耐药传播率高于其他地区(P<0.05)。非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)和核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)耐药突变的发生率分别为15.87%(10/63)、4.76%(3/63)。NRTI耐药突变有M184V、K65R和F227FL,NNRTI耐药突变有V106I/V/M、V179D/V/E、G190E、V108I、Y181C和H221Y。2例病例同时携带NNRTI和NRTI耐药突变。CRF07-BC亚型占比最高,为36.51%(23/63),其次为B亚型[34.92%(22/63)]和CRF01-AE[26.98%(17/63)]。结论河南省新确证HIV-1感染者中已经出现了一定程度的耐药传播,CRF07-BC和CRF01-AE已经成为主流毒株亚型。     

深圳市2010年HIV-1分子流行病学调查

目的了解2010年艾滋病病毒-1型（HIV-1）毒株亚型在深圳市的流行情况,为预防和控制HIV在本市的流行提供有价值的资料。方法收集2010年深圳市HIV-1确认为阳性的样本150例,应用巢式聚合酶链反应（nested-PCR）技术,对该样本膜蛋白基因（env基因）和核心蛋白（gag基因）进行扩增,并对各基因区核苷酸序列进行测定和分析。结果共有128份样本获得分型结果,其中CRF01_AE重组株占63.3%（81/128）,B’亚型占14.1%（18/128）,CRF07_BC重组株占13.3%（17/128）,CRF08_BC重组株占7.0%（9/128）,C亚型占0.8%（1/128）,A1亚型占1.6%（2/128）;CRF01_AE重组株以吸毒传播、异性性传播和同性性传播为主,分别占其感染人群的23.5%、45.7%和30.9%,CRF07_BC、CRF08_BC重组株以异性性传播和同性性传播为主,分别占各感染人群的41.2%、58.8%和66.7%、33.3%%,B’亚型主要分布在性传播、献/输血和母婴传播人群。本文首次在吸毒人群中发现A1亚型。结论 2010年深圳市的HIV-1是以CRF01_AE重组株、B’亚型、CRF07_BC和CRF08_BC重组株为主要流行毒株,也存在A1和C亚型;CRF01_AE重组株是各传播途径人群中的主要流行株,并且CRF01_AE重组株在各人群中所占的比例高于国内其他地区。     

抗HIV-1基因治疗新进展

虽然高效抗反转录病毒治疗（highly active anti-retroviral therapy,HAART）取得了显著的成果,但是抗人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）药物治疗仍有其局限性（如引起毒素蓄积和病毒突变）.基因治疗在理论上具有较好的抗HIV能力,可以通过持续干扰病毒复制,提供了阻止HIV进行性感染的希望.本篇综述主要探讨当前多种基因治疗策略及其最新进展.     

北京市部分男男同性恋人群中HIV-1分子流行病学研究

目的了解北京市部分男男同性恋(men who have sex with men,MSM)人群HIV-1的分子流行情况,监测该地区人群HIV毒株的最新流行情况。方法提取17例男男同性恋者HIV-1抗体阳性样本全血基因组DNA,直接进行巢式PCR扩增HIVenv基因C2-V5区及gag基因P17-P24区,对PCR产物进行核苷酸序列测定和分析,确定基因亚型。结果17例患者中,共存在CRF01-AE、B亚型和CRF07-BC3种亚型,其中CRF01-AE9例(52.94%),B亚型5例(29.41%),CRF07-BC3例(17.65%)。结论小样本量的流行病学调查显示,北京地区部分男男同性恋人群中主要存在CRF01-AE、B和CRF07-BC3种亚型;CRF01-AE已取代B亚型而成为北京市MSM人群中HIV主要流行亚型,CRF07-BC重组亚型在北京市MSM人群中增长迅速。     

河北省HIV-1 RNA基因gag区和env区亚型分析

目的分析河北省新确认艾滋病感染者HIV-1 RNA基因gag区和env区亚型分布情况。方法采用巢式PCR的方法扩增gag和env基因,测定其序列,并与国际标准亚型毒株进行对比。结果河北省内HIV-1主要流行毒株为CRF01-AE,占41.5%(56/135);其次是B亚型毒株和BC重组亚型毒株,各占40.7%(55/135)和16.3%(22/135);C亚型占1.5%(2/135)。结论河北省HIV-1流行亚型日益多样化,应加强防控,特别是性传播的防控成为当务之急。     

深圳地区120株HIV-1膜区和结构蛋白区基因变异分析

目的研究深圳地区HIV-1病毒株在膜区和结构蛋白区基因变异情况,比较不同亚型毒株之间基因离散率的差异。方法收集HIV-1感染者新鲜血浆,提取血浆中HIV-1病毒株RNA,RT-PCR套式扩增env区和gag区基因,基因测序后进行序列比对和分析,构建基因进化树,计算基因离散率。结果各亚型毒株在env区相互之间基因离散率最大的是B亚型和07-BC亚型,最小的是07-BC亚型和08-BC亚型;各亚型毒株在gag区相互之间基因离散率最大的是01_AE亚型和07-BC亚型,最小的是07-BC亚型和C亚型。结论 07-BC、08-BC及C亚型在两个基因片段上基因距离均最近,说明这三个亚型可能有共同的起源。     

HIV-1包膜单基因Nest-PCR体系优化及包膜基因准种扩增

目的确定HIV-1包膜(envelope,env)单基因扩增(single genome amplification,SGA)的最优反应体系,获得env单基因扩增产物。方法采用SGA及Nest-PCR扩增HIV-1 env全长基因,并对Nest-PCR反应体系中各成分量进行优化;在此基础上,适当稀释HIV-1感染者cDNA模板进行Nest-PCR,以获得PCR扩增产物阳性率不超过30%的模板稀释度。结果 SGA Nest-PCR扩增HIV-1 env全长基因,引物浓度为0.3μmol/L,dNTP浓度为0.25μmol/L时可获得特异性高的env全长基因;凝胶回收纯化及稀释第一轮PCR产物可有效提高特异性条带的产量。采用优化反应体系成功从一名HIV-1感染者体内扩增出18株env单基因序列。结论优化了HIV-1 env基因SGA Nest-PCR的反应体系,并从HIV-1感染者获得了病毒包膜基因准种,为后续进行准种分析奠定了基础。     

HIV-1膜蛋白gp140三聚体的真核表达、纯化、鉴定

摘要：目的构建表达中国流行株HIvl-1cRF_07B／C亚型（CN54）膜蛋白gpl40及其突变体,为HIV-1疫苗设计提供优秀的免疫原。方法构建gpl40、gpl40ST质粒,将质粒瞬时转染293F细胞,120h后收获上清液,经纯化、浓缩、PBS置换后,利用SDS-PAGE电泳、Western-blot检测蛋白的表达,ELISA检测其与HIV-1阳性病人血清的反应性。结果SDS-PAGE电泳、Western-blot试验证明成功表达了gpl40、gpl40ST蛋白,并且gpl40ST是-个稳定的三聚体蛋白质。ELISA试验检测,发现表达的gpl40ST蛋白与HIV-1阳性病人血清的亲和力高于gpl40蛋白。结论经过突变改造的gpl40ST具有稳定的三聚体构象,可作为HIV-1免疫原进行疫苗研究。     

HIV-1膜蛋白gp120V3环的神经毒性研究

目的 体外观察人类免疫缺陷病毒-1（human immunodeficiency virus-1,HIV-1）膜蛋白gp120 V3环的神经毒性.方法通过小鼠大脑皮质原代神经细胞培养条件下TUNEL检测和培养上清乳酸脱氢酶释放试验,结合抗微管蛋白-2（microtubule associated protein-2,MAP-2）免疫荧光试验,观察人重组gp120蛋白神经毒性,并通过蛋白印迹法初步探讨其与凋亡调控蛋白bax与bcl-2的关系.结果重组人gp120 V3环多肽可诱导神经元凋亡和抑制神经突起形成,并呈浓度依赖性.gp120 V3环诱导神经细胞凋亡与抑制bcl-2表达有关.结论 HIV-1膜蛋白gp120 V3环具有神经毒性.     

HIV-1功能性膜蛋白基因gp160的快速筛选和鉴定

目的 应用假病毒感染实验快速筛选可用于HIV-1中和抗体测定的功能性膜蛋白基因.方法 从HIV感染样品中扩增全长膜蛋白基因gp160,通过系统进化树分析确定其基因亚型,将HIV-1gp160阳性克隆与pSG3△Env质粒共转染293T细胞制备假病毒并对其感染能力进行分析,筛选功能性膜蛋白基因.结果 克隆和鉴定了我国HIV-1流行毒株的9个功能性膜蛋白基因,系统进化树分析表明其中包括4个CRF07_BC、2个CRF01_AE和3个B亚型毒株,这些gp160膜蛋白基因所制备的假病毒具有良好的感染性.结论 不同亚型HIV-1功能性膜蛋白gp160克隆为选择HIV-1中和抗体测定毒株提供了有价值的实验材料.     

具有广谱中和活性的HIV感染者血浆病毒膜蛋白基因及中和特征分析

目的 分析一例具有广谱中和活性的慢性HIV感染者病毒膜蛋白（Env）基因序列特征及中和特征。方法 使用单拷贝基因组扩增（SGA）方法从患者两个随访时间点血浆样本扩增env基因,测序后进行序列比对和进化树构建,分析env基因特征;将env基因克隆至pcDNA^TM3.1载体上,env质粒和骨架质粒pSG3△env共转染293T细胞制备假病毒,使用假病毒分别和两个时间点的自体血浆及6种不同的广谱中和抗体进行中和试验,分析Env蛋白的中和特征。结果 从两个时间点血浆样本中共获得50个全长env基因,进化分析显示两个时间点序列各自聚集成簇,第1个时间点膜蛋白序列有较短的V1区和较少的V1区糖基化位点数目,第2个时间点膜蛋白序列有更高的基因多样性。自体血浆不能中和同时期的假病毒,但能中和前期的假病毒;两个时间点的假病毒对PGT121、PGT135、2G12和10E8抗体均高度敏感,但对VRC01及12A21抗体呈现中和抗性。结论 该具有广谱中和活性的慢性HIV感染者病毒膜蛋白基因持续进化;感染者体内存在CD4bs类中和抗体的免疫压力。     

HIV相关神经认知紊乱患者配对组织来源的HIV-1 env基因特征分析

目的：探讨人类免疫缺陷病毒相关神经认知紊乱（HIV associated neurocognitive disorder, HAND）患者不同组织中HIV-1 env基因的变异进化特征。方法通过国际HIV痴呆量表筛选出HAND患者,获得其血浆及脑脊液来源的HIV-1 env基因核苷酸序列,回顾性分析遗传多样性、氨基酸长度、潜在糖基化位点（PNGS）、辅助受体利用以及特征性氨基酸的特点及组织间差异。结果本研究纳入4例HAND患者共57条HIV-1 env基因V3-C4序列（血浆来源29条,脑脊液来源28条）。脑脊液中的HIV-1遗传多样性高于血浆来源毒株,差异有统计学意义（遗传多样性变异度中位数分别为0.053和0.007,P=0.043）。3例患者脑脊液与血浆来源的毒株均使用CCR5辅助受体,其中2例患者脑脊液（患者D 158 bp,患者F 158 bp）中的HIV-1 V3-C4区氨基酸长度中位数明显长于血浆来源（患者D 156 bp,P=0.017;患者F 157 bp,P=0.003）。脑脊液与血浆中HIV-1 env基因序列相比共有16个氨基酸位点存在明显差异,62.5%（10/16）分布在V4区。结论 HAND患者脑脊液和血浆中的HIV-1 env基因特征存在差异,脑脊液中的HIV-1准种遗传多样性更高。     

HIV-1整合酶抑制剂的发展和基因耐药研究

整合酶（Integrase, IN）是HIV-1病毒生命周期中最重要的4个酶之一。整合酶抑制剂（integrase inhibitors, INIs）是针对艾滋病患者的新一类抗HIV-1病毒药物,主要针对整合酶发挥作用,阻断病毒基因组整合至人体基因组的过程。相比传统抗病毒治疗药物,INIs上市时间短,耐药屏障高,且人体细胞结构中没有整合酶,毒副作用较小,更有利于患者治疗。但是随着使用人数的增多,不可避免地出现整合酶基因耐药突变。我国目前INIs耐药研究较少,已有研究均参考欧美国家相关数据,但是由于我国流行株以重组亚型为主,与欧美国家B亚型相差较大,因此不能直接借鉴欧美国家的研究结果。有必要深入研究我国流行亚型毒株的整合酶基因型耐药突变情况,同时关注接受INIs治疗患者的耐药情况,弥补我国获得性整合酶耐药研究的空白,为后续大规模临床推广INIs提供数据参考依据。     

深圳市528例HIV-1感染者的分子流行病学特征

目的 研究深圳市HIV-1病毒亚型、传播途径的分布特征,为艾滋病的整体防控工作提供帮助.方法 采集528例HIV-1病毒感染阳性病例的流行病学信息及标本,运用逆转录巢式聚合酶链反应方法对病毒基因进行扩增、测序,确定基因亚型,并进行统计分析.结果 528例HIV-1感染者中86.6％为性传播途径感染.528份样本中共发现CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC、CRF02_ AG等4种毒株及B、B’、C、A1等4种亚型,其中以CRF01_AE、CRF07_BC、B为主要流行毒株或亚型,其构成情况为54.5％(288/528)、25.0％(132/528)、9.3％(49/528).CRF01_AE在男男同性恋感染者、异性性途径感染者、吸毒感染者的构成比分别为51.2％、59.3％、66.0％.结论 深圳市HIV-1感染者以性传播途径为主.病毒型别呈现多样性特征,性传播、吸毒感染人群中以CRF01_AE为主要流行毒株,血液途径感染人群以B亚型为主要流行毒株.