配对肝癌组织与非癌肝组织基因组差异的随机扩增多态性…

研究同一肝癌患者配对肝癌组织与非癌肝组织基因组之差异。     

鼠麴草基因组DNA的提取方法及随机扩增多态性DNA分析

目的以鼠麴草的叶为材料,研究鼠麴草DNA的提取方法及对其进行随机扩增多态性DNA（RAPD）的分析。方法采用略改进的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、高盐低pH法、木本法和十二烷基硫酸钠（SDS）法分别提取鼠麴草叶的基因组DNA。通过RAPD分析所提取的DNA,比较所用的提取方法。结果CTAB法得到DNA的A260/A280为1.937,浓度为992.25μg/ml,优于其他3种方法。结论CTAB法是4种方法中最佳的方法。     

随机扩增多态性DNA检测技术分析

目的:探讨随机扩增多态性DNA(RAPD)检测技术的特点.方法:分析影响RAPD标记的各种因素,总结该技术的优点和不足.结果:RAPD标记方法已经广泛用于遗传育种、基因诊断、生物系统学的研究,并显出独特的优点.DNA模板质量与浓度、Taq DNA 聚合酶、引物设计及浓度、缓冲体系、MgCl2、dNTP浓度、PCR反应体积等均为该技术的影响因素.结论:对于每一种物种都应先进行体系优化,确保RAPD实验结果稳定准确.     

金铁锁三个居群的随机扩增多态性DNA分析

目的：为金铁锁种质资源保护、种源质量标准研究奠定基础。方法：采用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析方法对来自昆明、鹤庆、中甸的三个不同金铁锁Psammosilene tunicoides W.C.Wu er C.Y.Wu居群进行了居群遗传研究。结果：金铁锁居群内遗传多样性较为丰富，同时居群间有较大的分化。结论：在进行种质资源保护时，应该对其居群内和居群间的遗传多样性给予同等的重视。     

肠球菌随机扩增多态性DNA分型及应用研究

目的建立随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA，RAPD)分型技术，对肠球菌进行基因分型，探讨RAPD在分子流行病学中的应用，并探讨肠球菌的基因分型及其与耐药性的关系。方法对医院临床标本中分离的64株肠球菌进行RAPD基因分型，并分析基因型与耐药性的关系。结果RAPD分型结果显示，经优化的RAPD分型技术能有效地对肠球菌进行基因分型，分型率为100％。64株肠球菌根据扩增片段的差异分为8种基因型。以Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ型为主，共占81．4％。Ⅰ、Ⅷ型具有对β内酰胺类抗生素和高水平氨基糖苷类抗生素耐药。Ⅳ型具有对β-内酰胺类抗生素耐药。Ⅲ、Ⅶ具有对高水平氨基糖苷类抗生素耐药。Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ型具有对β-内酰胺类抗生素、高水平氨基糖苷类抗生素、糖肽类抗生素敏感。结论RAPD分型技术是一种特异、敏感、简便快速、分辨力强、分型率高、重复性好的分型方法。可有效地对肠球菌进行基因分型，并且肠球菌的RAPD分型与其耐药性有一定关系。     

随机扩增多态性DNA分型法用于酵母菌基因分型

目的研究酵母菌随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)的最佳实验条件.方法在改变引物、Mg2+、模板浓度、Taq多聚酶用量等不同条件下,采用RAPD法对酵母菌进行基因分型.结果经优化后的RAPD方法能清晰地对酵母菌进行基因分型.结论RAPD是从分子水平对酵母菌感染进行病原学、流行病学研究的一种快速、可靠的分子生物学分型方法.     

随机扩增多态性DNA分析技术及其在蚊虫分类研究中的应用

<正> 经典的蚊虫分类主要依靠形态特征,但对于形态特征相似的亲缘种的分类鉴定则需要其它方法。DNA探针、限制性片段长度多态性、碱基序列测定及PCR等分子生物学技     

川木通的随机扩增多态性DNA与序列特征性扩增区域标记研究

目的采用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）法建立川木通的分子鉴定方法,为川木通的快速鉴定奠定基础。方法从100对随机引物中筛选出5对多态性丰富的RAPD引物进行川木通10个种的扩增分析,最终得到C13为阳性序列特征性扩增区域（sequence characterized amplified regions,SCAR）标记。结果阳性SCAR标记均可以进行川木通原植物与药材的分子鉴定引物,C13可以鉴定上述2种药典品种和商品主流品种（粗齿铁线莲、钝萼铁线莲）。结论RAPD法简便易行,为亲缘关系较近的多基原药材的鉴定提供了一种新方法。     

红花种质的随机扩增多态性DNA分子鉴定

目的:从分子水平探讨红花(Carthamus tinctorius L.)的种内变异,为红花种质的分子鉴定提供依据.方法:用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA, RAPD)技术和统计学分析方法,对从我国新疆、甘肃、宁夏、河南、山东、山西、河北、安徽、浙江等9省采集的红花22个品种的遗传多样性进行分析.结果:根据RAPD特征图谱,通过在DNA分子水平上的聚类分析,将红花22个品种分为7个类型.RAPD聚类分析表明了品种间的亲缘关系:北方,特别是新疆地区的品种亲缘关系较近,PCR结果极为相似,而南方品种间遗传差异性较大.结论:红花种内存在一定的遗传变异,本研究结果为红花品种鉴定及亲缘关系的探讨提供一定依据.     

葡萄糖激酶基因多态性与中国人非胰岛素依赖型糖尿病相关性研究

目的：探讨葡萄糖激酶基因与中国北方汉族人非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）的关系。方法：以葡萄糖激酶基因３’端微卫星多态性为遗传标志，用多聚酶链反应（ＰＣＲ），检测各等位基因在１４５例非糖尿病对照组和１０５例ＮＩＤＤＭ病人组中的分布频率的差异。结果：共发现３个等位基因（大小为１９５ｂｐ、１９７ｂｐ、１９９ｂｐ，分别命名为Ａ，Ｂ，Ｃ）和６种基因型（ＡＡ，ＢＢ，ＣＣ，ＡＢ，ＡＣ，ＢＣ）。等位基因Ａ、Ｂ、Ｃ在非糖尿病组的频率分别为５３．４％、２５．２％和２１．４％；在ＮＩＤＤＭ组中分别为６０．０％、１７．１％、２２．９％。基因型ＡＡ、ＢＢ、ＣＣ、ＡＢ、ＡＣ、ＢＣ在非糖尿病对照组为２８．３％、６．２％、２．１％、２４．８％、２５．５％、１３．１％；在ＮＩＤＤＭ组为３６．２％、１．９％、３．８％、２０．０％、２７．６％、１０．５％。糖尿病组中Ｂ等位基因频率明显低于非糖尿病对照组（１７．１％ｖｓ２５．２％，Ｐ＝０．０３），两组的各基因型频率差异无显著性。带有Ｂ等位基因（Ｂ＋）的ＮＩＤＤＭ患者与不带有此等位基因患者（Ｂ－）的体重指数（ＢＭＩ）差异无显著性，而Ｂ－的ＮＩＤＤＭ患者诊断年龄比Ｂ＋者小（５１岁ｖｓ５６岁，Ｐ＝０     

血清和肝组织内HBV复制状态与肝脏病变活动性关系的研究

经病理确诊的47例乙型肝炎患者血清中HBV DNA、HBeAg的检出率在各型肝炎之间无显著性差异(P>0.05)。肝组织HBsAg检出率为76.6％,其形态呈包涵体型、弥漫型和膜型为主分布者分别是36.1％、55.6％和8.3％。HBsAg呈弥漫型分布者各类型肝炎之间无显著性差异(P>0.05),提示肝细胞内HBsAg的表达仅反映HBV复制,而与肝组织病变无关。肝组织HBcAg检出率为27.7％,其形态呈核型和浆型分布者分别占38.5％和61.5％,浆型主要见于炎症明显的肝细胞内,而核型刚见于病变较轻的肝细胞中,反映了HBcAg的表达与肝组织活动性病变有关。     

原发性肝癌患者血清及癌组织GPDA糖链异质体的研究

目的：研究原发性肝癌（PHC）患者血清，肝癌组织甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（GPDA）糖链异质体的变化和对PHC的诊断价值。方法：测定265例HPHC，良性肝病患者及正常对照血清GPDA总活性（TGPDA），利用刀豆素A（ConA)与等量血清孵育法将GPDA分为刀豆素A结合型与非结合型两种异质体。测定非结合型活性，计算结合型活性（总活性减去非结合型活性）；同方法PHC患者肝组织中GPDA总活性和非结合型活性，根据测定的蛋白浓度分别计算两者的比活性。结果：PHC患者血清非结合型活性显著高于慢性肝炎，肝硬化和正常对照组（P均＜0．01）及急性肝炎组（P＜0．05）；各受检组血清结合型活性均显著高于与该组非结合型的活性（P均＜0．01）；PHC患者血清结合型活性与正常人比无 显著差异（P＞0．01）。结论：分别以TGPDA及非结合型作为PHC诊断的指标，两者特异性相近，而敏感性，准确率均高于TGPDA。推测非结合型异常增高可能源于肿瘤组织的膜结合部分的过量合成，并从膜结合部分释放入可溶性部分而致。     

青海地区汉、藏族PLCE1rs2274223基因多态性与胃癌相关性

目的 通过检测PLCE1 rs2274223基因在青海汉、藏族胃癌患者与健康对照者中的分布,初步探讨其多态性与汉、藏族胃癌的相关性.方法 提取青海汉、藏族胃癌患者与健康人群的外周血DNA,采用dHPLC法行PLCE1 rs2274223基因位点分型.并行相关分析.结果 汉族胃癌组PLCE1基因单核苷酸多态性位点rs2274223的基因型（AA,AG,GG）频率分别为53.33%、42.50%、4.17%,对照组为56.67%、38.33%、5.00%,两组间各基因型分布差异无统计学意义（P＞0.05）.藏族胃癌组PLCE1 rs2274223基因的基因型（AA,AG,GG）频率分别为50.00%、40.83%、9.17%,对照组为60.83%、36.67%、2.50%,两组间AA、AG基因型分布差异无统计学意义（P＞0.05）,两组间GG基因型分布差异有统计学意义（P＜0.05）,与AA、AG型比较,携带GG基因型者胃癌发生的危险性增加（OR=3.936,95%CI=1.069-14.485）.两民族间PLCE1 rs2274223的3种基因型（AA,AG,GG）频率差异无显著性（P＞0.05）.结论 本研究显示,两民族间PLCE1基因rs2274223的基因型（AA,AG,GG）分布频率不存在差异.PLCE1基因 rs2274223位点单核苷酸多态性与青海地区汉族人群胃癌易感性不存在相关性.携带GG基因型的青海地区藏族人群胃癌发病风险较高.     

p21和c-myc蛋白在肝细胞癌与癌旁肝组织中表达的对比研究

本文用连续切片免疫组化法检测了肝细胞癌及癌旁组织ｐ２１和ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。ｐ２１和ｃ－ｍｙｃ蛋白在肝癌及癌旁组织的阳性率分别为５３．３％和９６．７％；４０％和８６．７％；两者表达率均以癌旁组织为高（Ｐ＜０．０１）。ｐ２１和ｃ－ｍｙｃ蛋白阳性信号形态呈浆膜和／或核型；其表达均以近癌组织的癌旁肝细胞为强，肝硬变结节尤甚。本文结果进一步支持ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ癌基因异常激活和表达与肝细胞癌发生具相关性的观点。     

乳腺癌DNA含量与血管浸润转移机制的研究

通过流式细胞仪（FCM）测细胞DNA含量及维多利亚兰和HE复合染色法染血管，对乳腺癌病人进行浸润转移机制的研究。乳腺癌细胞中异倍体肿瘤其血管浸润的阳性率和术后复发都较二倍体肿瘤高。乳腺癌病人血管浸润的阳性率为48％，术后复发病人血管浸润阳性率为67％。直径在2．0cm以下的肿瘤，肿瘤直径与血管浸润呈正相关，超过2．0cm的肿瘤血管浸润的阳性率不再增加。淋巴结转称程度加重，血管浸润阳性年增加，n1β期以上的肿瘤可作为血管浸润的重要指标。     

钩端螺旋体DNA限制性内切酶分析和硷性蛋白膜展层电镜观察

作者首次用限制性内切酶分析,结合硷性蛋白膜展层电镜技术对几株不同属、群、型、株的钩端螺旋体DNA 进行了研究。结果发现:不同钩体的DNA内切酶谱在高分子区域存在区别,在电镜下呈现不同形态。作者认为,这种差别有利于钩体的分类、鉴定。     

中国人胃癌组织和正常组织基因组DNA中癌基因Ha—ras的RFLP研究

本文报道以 pHS-49为探针,分析中国人群中36例胃癌患者癌组织和25例正常人体组织基因组 DNA 中 Ha-ras 基因的 BamHI 限制性片段长度多态性。发现了10种不同长度的等位片段和17种基因型,其中4种小于6kb 的 BamHI 片段是迄今国外未见报道的,这可能是中国人群遗传多态性的一个特征。此外,在胃癌组织中发现 Ha-ras 的一些等位基因和基因型的频率明显高于正常人群。对两名胃癌患者家系中的11名成员作了RFLP 分析,发现有些成员出现3条和4条限制性片段的杂合个体,表明这些个体的染色体上含有的 Ha-ras 基因不止一份拷贝。对上述现象的可能原因作了分析和讨论。     

c－Ha－ras反义DNA及其衍生物对转化细胞恶性表型的逆转

应用突变ｃ－Ｈａ－ｒａｓ质粒ＤＮＡ转化小鼠Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２纤维细胞，发现细胞获得恶性表型。本文合成了反义ＤＮＡ（ｏｌｉｇｏ），它与ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因前４个密码子及其上游正链序列互补；并发现ｏｌｉｇｏ可有效地抑制恶性转化细胞内ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因表达、细胞在软琼脂中集落形成以及细胞在裸鼠体内的致瘤作用。补骨脂素修饰ｏｌｉｇｏ后，其生物学活性增强。     

大肠肿瘤组织印片和切片DNA及AgNOR蛋白定量的对比观察

用Ｆｅｕｌｇｅｎ－ＡｇＮＯＲ结合染色方法对大肠肿瘤组织印片和切片细胞的ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ蛋白进行染色，用图像分析进行同一细胞二者含量同步检测。结果表明，在ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ含量的检测中，印片样品比组织切片样品更能精确、真实地反映ＡｇＮＯＲ与ＤＮＡ含量在大肠癌发生过程中相关性变化。印片样品方法简单、出结果快，并能推广到脱落细胞和穿刺取材细胞的ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ含量的同步测定。