大肠杆菌分泌型载体表达重组人碱性成纤维细胞生长因子

设计构建了带有大肠杆菌外膜蛋白信号肽序列的重组分泌型表达载体ｐＳＥ－ｈｂＦＧＦ，在大肠杆菌ＤＨ５α中分泌表达了重组人碱性成纤维细胞生长因子。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹及生物活性测定均表明表达产物分泌到细胞细菌周质和培养式中。分泌到周质中的ｒｈｂＦＧＦ可占周质总蛋白的１５％。     

卵清蛋白肽的制备及生物活性研究进展

鸡蛋作为人体补充蛋白质的主要来源之一,在市场中占有较大份额,但蛋类深加工产品的研发及市场拓展尚不十分充分。采用蛋白酶水解食物蛋白制备的小分子肽易吸收,并对人体健康发挥积极作用。近年来,卵清蛋白酶解制备的卵清肽被广泛研究,其生物功能得到逐步揭示,包括抗氧化、降压、抗菌、免疫调节、抗炎、降糖等。卵清肽的深入研究有利于充分利用禽蛋资源,提高其附加值,且卵清肽有望应用于食品、化妆品及医药用品等领域,具有较好的经济效益和社会效益。本文对卵清蛋白肽的制备工艺与生物活性进行概述,旨在为其进一步开发与应用提供有益参考。     

鸡卵清蛋白对蛋白酶抑制作用的研究

以新鲜鸡蛋清为材料,采用三氯醋酸-丙酮提取,冷丙酮沉淀,碳酸盐透析和DEAE-Cel-lulose离子交换层析分离出鸡卵清蛋白。研究了该蛋白质对蛋白酶活性的影响,结果表明鸡卵清蛋白对胰蛋白酶有强烈抑制作用并且抑制程度与温度、pH值等密切相关,能部分仰制枯草杆菌蛋白酶活性,不抑制胰凝乳蛋白酶。     

TAT-BDNF载体构建及融合蛋白表达

目的构建重组表达载体TAT-BDNF,在E.coli BL21中高效表达并纯化融合蛋白,为研究TAT携带BDNF穿透血脑屏障治疗中枢神经系统疾病奠定了基础。方法经RT-PCR获得编码人BDNF的全基因序列,连接到原核表达载体pTAT上,得到重组表达载体pTAT-BDNF,转化大肠杆菌,IPTG诱导TAT-BDNF融合蛋白的表达。表达产物用SDS-PAGE鉴定,组氨酸亲和层析柱纯化融合蛋白。结果成功构建了TAT-BDNF融合蛋白的原核表达载体,在诱导下获得了高效表达并纯化了融合蛋白。结论为进一步研究TAT蛋白转导作用奠定了基础。     

IL-13融合蛋白表达载体与非融合蛋白表达载体的构建与比较

采用RT－PCR技术直接从激活的健康人外周血单个核细胞中扩增得到hIL－13的基因片段，通过DNA重组技术分别将其插入到含有PRPL启动子的高效表达载体pBV220及含tac启动子、lac1阻遏蛋白基因及凝血酶识别位点的融合蛋白表达载体pGEX－4T－2中，成功地构建了hIL－13的原核非融含蛋白表达菌株hIL－13－PBV220／DHS5a及融合蛋白表达菌株hIL－13－PGEX－4T－2／TG1，分别经42℃热诱导及异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）化学诱导后，SDS－PAGE结果表明IL－13仅以GST融合蛋白的形式在E.coli中获得了表达，表达量约占菌体蛋白总量的10％～30％。IL-13的蛋白单体在原核细胞中表达量很低。     

重组蛋白在大肠杆菌分泌表达的研究进展

长期以来,大肠杆菌是表达外源蛋白的首选表达系统,重组蛋白分泌表达与胞内表达相比有很大优越性,在细胞周质腔不仅能促进重组蛋白二硫键的形成及正确折叠,还能促进分泌蛋白的N-端加工。本文综述了近年来在大肠杆菌中表达可溶性外源蛋白的进展,目的是为了提高外源蛋白的生物活性。     

抗癫痫肽/GST融合表达载体的构建及蛋白表达

目的构建抗癫痫肽(anti-epilepsy peptide,AEP)/GST融合表达载体,原核表达GST-AEP融合蛋白。方法从克隆载体质粒pGEM-T/AEP中双酶切,得到AEP片段;通过中间载体puc18,转换酶位点;最后将AEP基因克隆入表达载体pGEX-4T-1质粒中,构建融合表达载体pGEX-4T-1/AEP;转化感受态大肠杆菌DH5α,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-AEP融合蛋白;SDS-PAGE分析表达产物,确定蛋白质高表达条件;超声裂解法鉴定蛋白质可容性;凝胶薄层扫描确定蛋白质相对表达量。结果经酶切鉴定、测序证明,AEP基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量约为36 000的融合蛋白,该融合蛋白以包涵体形式存在,约占总蛋白质的70%左右。结论pGEX-4T-1/AEP载体构建成功,融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达。     

乳酸菌作为载体的异源蛋白表达及应用研究进展

乳酸菌是公认的食品级安全微生物,利用乳酸菌作为表达载体进行抗原表达,能诱导机体产生有效的免疫应答。经口服和滴鼻免疫还可诱导机体的黏膜免疫应答,且接种方便,免疫效果和依从性均优于传统的注射途径。此文就乳酸菌作为表达载体的优势、表达系统的组成、目前成功表达的异源蛋白以及新型传送系统革兰阳性菌增强基质颗粒的研究进展做一综述。     

大肠杆菌分泌型载体表达重组人碱性成纤维细胞生长因子

设计构建了带有大肠杆菌外膜蛋白(OmpA)信号肽序列的重组分泌型表达载体pSE-hbFGF,在大肠杆菌DH5α中分泌表达了重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF).SDS-PAGE、免疫印迹及生物活性测定均表明表达产物分泌到细菌细胞周质和培养基中.分泌到周质中的rhbFGF可占周质总蛋白的15%.     

三甲基化壳聚糖卵清蛋白纳米粒的制备

目的：以N-三甲基壳聚糖盐酸盐（N—trimethyl chitosan chloride，TMC）为材料制备新型纳米粒（nanoparticles，NPs），包裹卵清蛋白（ovalbumin，OVA），以提高卵清蛋白的包封率。方法：利用TMC与三聚磷酸钠（tripolyphosphatesodium，TPP）之间的离子胶凝作用制备纳米粒；用纳米粒度及表面电位分析仪测定纳米粒的粒径及zeta电位；探讨OVA溶液的pH值及浓度，TMC溶液的浓度，TPP溶液的浓度等因素对OVA包封率的影响；用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺明胶电泳（Soldium Dodeoyl Sulfate—Polyacrylamide，SDS-PAGE）检验OVA在纳米粒制备及体外释放过程中有无降解。结果：本研究制备的TMC／OVA纳米粒为紧密球形，分布均匀，粒径约为135．4nm，zeta电位约为＋20mV；OVA的pH值及制备工艺是影响包封率的主要因素；SDS-PAGE电泳证实在纳米粒的制备及释放过程中OVA没有降解。结论：用离子胶凝法制备载蛋白多肽类疫苗的纳米粒，操作简便，采用合适的制备方法，调整处方可将包封率提高到90％以。     

碱性成纤维细胞生长因子在胃癌中的表达及意义(附170例分析)

目的研究胃癌(gastric carcinoma,GC)组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达规律。方法用免疫组织化学染色(SP法)检测慢性浅表性胃炎(chronic superficial gastritis,CSG)、胃黏膜肠上皮化生(intestinal metaplasia,IM)、异型增生(dysplasia,Dys)和胃癌组织标本中bFGF阳性表达情况。结果在CSG→IM→Dys→GC的过程中,bFGF的表达呈逐步递增趋势,bFGF的阳性表达率GC组与Dys、IM组,差异均具有统计学意义(P<0.05),胃癌组bFGF阳性表达率均高于相应癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌形成过程中,bFGF表达逐渐上调。     

舒脉汤对血管内皮细胞VEGF、bFGF表达的影响及其信号通路

目的研究舒脉汤对血管内皮细胞生成因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生成因子（bFGF）的影响及其可能参与的信号通路。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,以舒脉汤刺激内皮细胞,部分给予PI3K抑制剂,LY294002预处理,收集细胞测定VEGF、bFGF基因表达,收集上清液测定VEGF、bFGF蛋白表达。结果舒脉汤可以明显增加人脐静脉内皮细胞VEGF、bFGF基因及蛋白表达,且这一过程可被LY294002所阻断。结论舒脉汤通过上调内皮细胞VEGF、bFGF表达来发挥促血管新生作用,PI3K信号通路参与此过程。     

联合应用bFGF和IGF-1对大鼠正畸牙移动过程中牙周组织改建的影响

目的：通过局部单独及联合应用bFGF和IGF-1．探讨两种生长因子对大鼠正畸牙移动过程中牙周组织改建的影响。方法：将大鼠随机分成二组,对照组岫FGF＋IGF-1组．每组20只。于大鼠上颌左侧第一磨牙与上切牙之间安装一闭隙镍钛拉簧,力值50g。二组分别隔日在正畸牙颊侧牙龈黏膜下注射生理盐水0．1mL;bFGF＋IGF—1,200ng／m＋1mg／mL备0．1mL。并在正畸加力后的第1、3、7、14、21d每组各处死四只。制备牙体-牙周组织标本,HE染色和免疫组化染色,统计学分析。结果．bFGF＋IGF-1组与对照组比较（压力侧和张力侧）在7d、14d、21d有差异（P〈0．05）。结论出FGF和IGF-1的联合应用对大鼠正畸牙移动中牙周组织的改建有促进作用。     

载碱性成纤维细胞生长因子质粒纳米粒的制备及体外转染活性研究

目的:制备壳聚糖载bFGF基因纳米粒,并对其体外性质及转染成纤维细胞效率进行考察。方法:以复凝集法制备载绿色荧光蛋白(EGFP)与人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)融合蛋白EGFP-bFGF质粒(pEGFP/bFGF)的壳聚糖纳米粒CS-pEGFP/bFGF,透射电镜、纳米粒度电位仪测定纳米粒形态、粒径和表面电位,凝胶阻滞实验分析质粒与壳聚糖结合情况,细胞增殖实验考察载bFGF质粒转染后对细胞增殖的影响,荧光分光光度计及荧光显微镜观测纳米粒转染成纤维细胞后细胞对EGFP的表达情况。结果:壳聚糖纳米粒可将质粒pEGFP/bFGF成功转入成纤维细胞中并能有效降低转染产生的细胞毒性,细胞自分泌的bFGF能促进成纤维细胞的增殖。结论:载bFGF纳米粒具有提高转染效率、降低毒性及促进成纤维细胞增殖的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对难治性突发性聋的疗效评价

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对难治性突发性聋的疗效。方法:将208例(266耳)接受正规疗程治疗后,疗效不显著或不满意而有意继续接受治疗,病程在4个月内的突发性聋患者,按照就诊先后顺序分成治疗组104例(135耳)和对照组104例(131耳)。治疗组肌注bFGF4000u,qd,连用15～30d;对照组用维生素B_1100mg加维生素B_(12)500μg混合肌注,或B族维生素口服,qd,连用15d。治疗前后均行纯音电测听及脑干听觉诱发电位。结果:治疗前听阈治疗组为(58.36±27.58)dB pe SPL,对照组为(59.82±28.45)dB pe SPL(P>0.05);治疗后治疗组听阈为(41.89±23.45)dB pe SPL,对照组为(56.73±33.15)dB pe SPL(P<0.01)。有效率治疗组为97%,对照组为38.9%,差异有显著性(P<0.01)。结论:bFGF治疗突发性聋有较大的治疗时间窗,疗效可靠、显著。     

Syndecan-1与bFGF在子宫内膜癌中的表达及其与临床病理的相关性

目的探讨Syndecan-1、bFGF在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法对50例子宫内膜癌、26例子宫内膜不典型增生及20例正常子宫内膜组织中的Syndecan-1、bFGF进行检测。结果 Syndecan-1、bFGF在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生及正常子宫内膜组织中的强阳性表达率分别为88.89%、88.00%、56.00%和27.78%、32.00%、66.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。Syndecan-1的低表达与组织分化、有无肌层浸润、临床分期和有无淋巴结转移有关。bFGF的高表达与组织分化、有无肌层浸润和临床分期有关,与有无淋巴结转移无关。结论 Syndecan-1及bFGF是判断子宫内膜癌预后的重要指标。     

不同浓度bFGF对体外培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外人视网膜色素上皮细胞（hRPE）增殖调控的剂量-效应关系、时间-效应关系,明确bFGF体外培养hRPE增殖的最佳浓度和时间,为hRPE替代疗法治疗视网膜变性疾病提供新思路。方法采用经细胞化学染色法鉴定确认的hRPE细胞株,用CCK-8法检测不同浓度bFGF（0、2、4、8、16、32ng/ml）在不同作用时间（0、24、48、72、96 h）对hRPE增殖的影响。结果在相同浓度bFGF作用下,hRPE吸光度值（A值）随作用时间延长而增加,与对照组比较的差异有统计学意义（P〈0.05）。在相同培养时间条件下,hRPE A值随bFGF浓度增加而增加,与对照组比较的差异有统计学意义（P〈0.05）;bFGF浓度〈16 ng/ml的各组相邻浓度实验组组间A值比较的差异有统计学意义（P〈0.05）;bFGF浓度≥16 ng/ml的相邻浓度实验组组间A值比较的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 bFGF对体外培养hRPE增殖的调控有剂量-效应关系和时间-效应关系。bFGF的促增殖作用在16 ng/ml浓度以上逐渐达到饱和,故促体外培养hRPE细胞增殖的bFGF浓度应以16 ng/ml为佳。     

aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长及蛋白酶活化受体1的影响

目的比较酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)对小鼠皮肤成纤维细胞增殖的作用以及对蛋白酶活化受体1(PAR1)的影响,探讨PAR1与促进成纤维细胞增殖的关系。方法取出生3周体质量为15~20 g的NIH小鼠皮肤进行成纤维细胞培养,采用MTT法测定细胞数和活度,免疫细胞学XTT法检测aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长的影响,RT-PCR法检测小鼠皮肤成纤维细胞中PAR1 mRNA的表达。结果小鼠皮肤成纤维细胞健康生长,aFGF、bFGF和EGF对小鼠皮肤成纤维细胞生长的促进作用在实验组与对照组间有显著性差异(P<0.05),其对成纤维细胞作用浓度梯度较为明显;小鼠皮肤成纤维细胞存在PAR1 mRNA的表达,且三种生长因子对其表达的影响有差异,以aFGF组表达最显著。结论aFGF、bFGF和EGF均能促进成纤维细胞增殖,以aFGF的促进作用最强,PAR1可能参与成纤维细胞的增殖。     

慢性乙型肝炎肝活检组织bFGF基因的检测及其意义

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在慢性乙型肝炎肝组织中的表达及其意义.方法 用GAPDH作为参照,以RT-PCR对处于乙肝病毒(HBV)不同感染状态的体外培养肝细胞系以及人肝脏活检组织bFGF mRNA的表达水平进行半定量分析.结果 在细胞水平和肝脏组织学两个层面上,HBV感染可影响bFGF的表达水平.正常肝细胞L02和持续性感染肝细胞HepG2.2.15细胞的bFGF/GAPDH分别为0.77±0.20、1.01±0.09;而在感染HBV患者肝组织和对照组其bFGF/GAPDH分别为0.78±0.14、0.50±0.14.持续性感染者bFGF表达量>未感染bFGF表达量 (P＜0.05).结合临床病理显示:bFGF/GAPDH与纤维化组织学评分(HAI-F)呈正相关(r=0.3645,P＜0.01).结论 bFGF在乙型肝炎持续性感染中表达上调,与疾病转归相关.     

对eIF4E与bFGF在喉鳞癌中表达的研究

目的 :通过检测eIF4E与bFGF在喉鳞癌 (LSCC)中的表达 ,探讨二者与喉鳞癌的关系及其相互之间的内在关系。方法 :采用免疫组织化学法检测 5 2例喉鳞癌组织 ,2 0例喉黏膜不典型增生组织 ,30例喉良性增生组织及 10例正常喉黏膜组织中eIF4E与bFGF基因蛋白的表达情况。结果 :免疫组织化学法结果示 :eIF4E与bFGF在喉鳞癌中表达的阳性率分别为 10 0 .0 %、82 .7% ,均显著高于对照组。bFGF的高表达与颈淋巴结转移相关。结论 :过度表达的eIF4E是喉鳞癌恶性改变及判断其恶性程度的一个分子标志 ;bFGF的过度表达与喉癌的生长、转移及恶性程度相关 ;二者在喉癌中的表达具有相关性 ,可为喉鳞癌的基因治疗提供一定的理论基础