黄芩苷对小鼠脑片和大鼠皮质神经元缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用

 目的在离体水平,探讨黄芩苷对缺氧缺糖/再灌注(OGD/RP)诱导的脑片及神经元损伤的保护作用及机制。方法小鼠离体脑片OGD/RP模型中,以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物白评价脑片活性;原代培养大鼠皮层神经元OGD/RP模型中,以噻唑蓝(MTT)还原和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定神经元活性变化,用2,7-二氯荧光素二乙酸盐(DCF-DA)测定细胞内自由基水平。观察不同时间给予黄芩苷对损伤的保护作用。结果在脑片,全程给药和OGD时给予黄芩苷0.01～1μmol·L^-1,再灌注时给予黄芩苷0.1～1μmol·L^-1,可显著减轻损伤。在神经元,全程给予黄芩苷0.1～1μmol·L^-1可减轻神经元损伤,并降低神经元内自由基水平升高。结论黄芩苷对OGD/RP损伤有浓度依赖性保护作用,再灌注时给药亦有效,其作用至少部分与抗自由基有关。     

丹皮酚对原代培养的大鼠皮质和海马神经元缺糖缺氧再灌损伤的保护作用

 目的研究丹皮酚对大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法建立原代培养的新生大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤模型,随机分组为:对照组;模型组;丹皮酚组:建立模型,每个再灌时间点均经0.2×10^-6,1×10^-6,5×10^-6mol·L^-1 3个浓度药物处理;MK-801阳性对照药组。倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,用MTT法测定神经元存活率。通过放射配基结合实验测定N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDA受体)结合力,采用荧光法测定细胞内游离钙离子([Ca²⁺]i)浓度及应用试剂盒测定一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性。结果丹皮酚可显著降低大鼠皮质和海马神经元缺糖缺氧再灌损伤时细胞死亡率,减弱NMDA受体结合力,降低神经细胞内游离钙离子浓度([Ca²⁺]i)及NO含量、NOS活性的升高。结论丹皮酚对离体培养的大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与抗氧化及减弱NMDA受体结合力有关。     

左旋四氢巴马汀对大鼠海马脑片缺氧损伤电生理的影响

 目的在海马脑片水平观察左旋四氢巴马汀(L-tetrahydropalmatine,L-THP)对脑组织缺氧后及恢复给氧早期突触功能的影响。方法大鼠离体海马脑片以人工脑脊液孵育,观察缺氧后海马CA1区诱发群峰电位(population spike,PS)开始减小的时间和消失时间,缺氧损伤电位(hypoxic injury potential,HIP)出现时间、出现率和保持时间,复氧后PS的恢复率和恢复程度等指标并观察L-THP对这些指标的影响。结果L-THP(0.028,0.14,0.28 mmol·L^-1)组脑片PS减小时间、消失时间与缺氧组相比后延,并有显著差异(P<0.05),但其作用强度随剂量递减。缺氧组脑片平均在658.8 s出现HIP,L-THP 0.028 mmol·L^-1组,0.14 mmol·L^-1组和0.28 mmol·L^-1组脑片出现时间分别推迟为1 152.4和851.1,723.5 s,与缺氧组相比均有显著差异(P<0.05)。各组的HIP出现率分别为100%,33.3%,67.0%,83.3%。复氧30 min后,氧-葡萄糖剥夺(oxygen-glucose dep-rivation,OGD)组的恢复率为8.33%,恢复程度为19.8%。在L-THP组(0.028,0.14,0.28 mmol·L^-1),PS的恢复率分别为92%、75%和33.3%,恢复程度分别为82.5%,70.4%和58.6%,与对照组比有非常显著的差异(P<0.01)。结论L-THP能减缓缺氧时PS幅度的降低速度,减轻和防止脑片突触功能的不可逆损伤,提高脑片的耐缺氧能力,但随着剂量增加而作用减弱。     

金丝桃苷对离体缺氧/缺糖再灌注脑损伤的保护作用

 目的研究金丝桃苷对离体缺氧缺糖/再灌注脑损伤的保护作用。方法小鼠离体脑片缺氧缺糖/再灌注(OGD/RP)诱导的模型上,以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物formazan定量测定脑片活性,同时计数单位面积脑片皮层和纹状体区的存活神经元。新生大鼠原代培养神经元OGD/RP损伤后测定乳酸脱氢酶(LDH)释放和噻唑蓝(MTT)液比色吸光度,评价神经元活性。观察不同浓度的金丝桃苷对于离体脑损伤的保护作用。结果金丝桃苷可有效减轻OGD/RP对脑片的缺血性损伤,并对于OGD/RP原代神经元具有显著的保护作用。结论金丝桃苷对离体缺氧缺糖/再灌注脑损伤具有明显的保护作用,此作用可能与其抗自由基生成、抑制Ca²⁺内流及脂质过氧化物形成有关。     

葛根素对氧糖剥夺大鼠海马神经细胞Ca2+和NO的影响

 目的研究葛根素(puerarin,Pur)对缺氧缺糖状态下海马神经细胞内Ca²⁺和NO水平的影响。方法选用新生大鼠体外培养8 d的海马神经细胞,进行3 h的氧糖剥夺(oxygen/glucose deprivation,OGD)或30 min的L-谷氨酸(0.5mmol·L^-1)处理后再正常培养24 h,Pur处理组在OGD或谷氨酸处理的同时和以后24 h给予不同剂量(40,100μmol·L^-1)Pur,Annexin V联合流式细胞仪检测细胞的凋亡率和坏死率;以Fluo-3或DAF-2为荧光标记,用激光共聚焦显微镜观测30 min的OGD过程中海马神经细胞Ca²⁺和NO的动态变化以及Pur的影响。结果OGD诱导海马神经细胞Ca²⁺和NO水平快速升高,其最高值分别达正常对照组的2.9和1.9倍;Pur明显减缓OGD期间神经细胞Ca²⁺内流和NO合成,与OGD组相比,40和100μmol·L^-1的Pur分别使细胞Ca²⁺峰值降低29.2%和37.1%(P<0.05和P<0.01),NO峰值降低23%和33%(P<0.05和P<0.01),显著抑制细胞内Ca²⁺和NO水平的升高;同时Pur可有效抑制OGD和谷氨酸引起的神经细胞死亡。结论Pur可通过抑制神经细胞谷氨酸/Ca²⁺/NO通路的活动而有效保护缺氧缺糖对神经细胞的损伤作用。     

红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH-SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P<0.01)和 4 .94 % (P<0.01)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.46nmol·L^-1(PP<0.01)和 16 .5 9% (P<0.01) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L^-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH-SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度有关。     

神经保护药和抗炎药对小鼠脑片缺氧缺糖/再灌损伤的作用

 目的 在离体脑片缺血性损伤模型上，建立筛选与评价神经保护药和抗炎药的方法。方法 小鼠离体脑片缺氧缺糖／再灌诱导（OGD/RP）的模型上，以2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）产物formazan定量测定评价脑片活性，观察不同药物离体给药或整体预给药7 d对脑片损伤的保护作用。结果 抗氧化剂依达拉奉、钙拮抗剂尼莫地平及神经生长因子可显著减轻脑片的缺血性损伤；半胱氨酰白三烯受体拮抗剂ONO-1078和孟鲁司特、糖皮质激素地塞米松及中枢抗炎药米诺环素无明显作用。整体给予地塞米松（0.2，2,5 mg·kg^-1）能减轻脑片对缺血损伤的程度；孟鲁司特仅大剂量给药（15 mg·kg^-1）有增强作用。结论 离体小鼠脑片TTC产物formazan定量分析评价药物抗缺血性损伤作用的方法，可用于初筛具有直接神经保护作用药物。     

三七总皂苷对原代培养大鼠皮层神经细胞的保护作用

 目的：研究三七总皂苷(PNS)对神经细胞的保护作用。方法：采用原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞,观察谷氨酸(500μmol·L^-1,8min),缺氧5h再给氧不同时间(0,3,24h)对细胞的影响以及PNS的作用。结果：PNS25,50mg·L^-1明显减少缺氧/再给氧损伤时细胞内酶的释放,减轻细胞形态学的改变,提高细胞的存活率。对谷氨酸介导的兴奋性毒性,PNS也有一定的拮抗作用。结论：PNS的脑保护作用机制可能与其抗兴奋性毒性和缺氧性损伤的作用有关。     

电刺激诱发兔隐动脉双相血管收缩反应的药理学分析

 目的建立兔离体隐动脉环双相血管收缩反应模型,利用哌唑嗪和α,β-亚甲基ATP(α,β-meATP)对双相收缩成分的特性进行药理学分析。方法兔离体隐动脉血管环张力记录法及电场刺激诱发血管收缩法。结果本实验条件下的电场刺激(电压15V、波宽1 ms、刺激频率2～16 Hz、连续刺激时程32 s)可诱发兔离体隐动脉产生双相收缩反应,且具有频率(2～16 Hz)依赖性。电刺激隐动脉收缩反应的第1相不被α₁受体阻断剂哌唑嗪(0.1～10μmol·L^-1)所阻断,P2X₁受体激动剂α,β-meATP脱敏P2X₁受体后完全抑制该相反应。0.1～10μmol·L^-1哌唑嗪显著抑制8,16 Hz的第2相反应,P2X₁受体脱敏剂α,β-meATP不影响8,16 Hz的第2相反应。联合应用α,β-meATP(3μmol·L^-1)和哌唑嗪(1μmol·L^-1)则完全阻断电刺激诱发的血管收缩反应。哌唑嗪10μmol·L^-1显著抑制去甲肾上腺素(NA,0.01～30μmol·L^-1)诱发的血管收缩反应,而哌唑嗪1μmol·L^-1对α,β- meATP诱发的血管收缩反应无显著性作用。α,β-meATP3μmol·L^-1对NA(0.01～30μmol·L^-1)诱发的血管收缩反应无显著性影响。结论建立电场刺激诱发兔离体隐动脉环双相收缩反应模型,该双相反应的第一相仅与交感神经嘌呤能递质ATP的突触后效应有关,第2相反应由肾上腺素能成分和少量嘌呤能成分组成。     

氟哌啶醇季铵盐衍生物对冠状动脉作用的研究

 目的：研究氟哌啶醇季铵盐衍生物(F₂)对动物冠状动脉的作用。方法：小鼠ip氟哌啶醇(10mg·kg^-1和20mg·kg^-1)造成锥体外系不良反应模型。Ip F₂(10mg·kg^-1,20mg·kg^-1和40mg·kg^-1)，观察行为变化?采用猪冠脉条生物检定，观察10^-6mol·L^-1，10^-5mol·L^-1和10^-4mol·L^-1F₂对KCl(10mmol·L^-1～40mmol·L^-1)致猪冠脉条收缩量效曲线的影响，并观察10^-4mol·L^-1F₂对KCl(20mmol·L^-1)致冠脉条收缩后的阻断作用?采用Langendorf灌流法，观察10^-6mol·L^-1，5×10^-6mol·L^-1和10^-5mol·L^-1F₂对脑垂体后叶素所致离体豚鼠心脏冠脉流量减少的作用。结果：氟哌啶醇可致小鼠肌张力增高，肌震颤、头颈部扭曲和尾过伸等，有量效依赖性。F₂3个浓度组无一出现上述表现。F₂可使KCI致猪冠脉条收缩曲线压低，呈量效依赖性。F₂量效依赖地拮抗脑垂体后叶素致冠脉流量的减少。结论：ipF₂不引起锥体外系不良反应，但有扩冠作用。     

黄芩素对大鼠离体胸主动脉的舒张作用及其机制

目的:研究黄芩素(BAI)对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol· L-1)和氯化钾(KCl,6×10-2 mol·L-1)预收缩健康成年雄性大鼠胸主动脉环的舒张作用,并探讨其作用机制.方法:应用离体血管环技术观察BAI对大鼠胸主动脉环张力的作用,记录NE预收缩的离体大鼠胸主动脉环张力变化.采用一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol·L-1)、环氧合酶抑制剂吲哚美辛(INDO,1×10-5mol· L-1)和鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(MB,1×10-5mol· L-1)和不同的钾通道阻滞剂预孵后观察BAI对血管环张力改变的影响,并观察对NE诱发的内钙释放和CaCl2引起的外钙内流的影响.结果:BAI对NE或KCl预收缩的内皮完整和去内皮大鼠离体胸主动脉环均产生明显的舒张作用,与溶剂组相比差异有统计学意义.预先用L-NAME,MB,KV通道阻断剂四氨基吡啶(4-AP,1×10-4mol· L-1),KC.通道阻断剂四乙胺(TEA,1×10-3mol· L-1),Kir通道阻断剂氯化钡(BaCl2,1×10-4mol·L-1)孵育后,BAI对预收缩的血管张力的改变与无阻断药时比较,差异均无统计学意义;预先用KATP通道阻断剂格列苯脲(Gli,1×10-5mol·L-1)和INDO孵育后,BAI的舒张血管作用减弱,与无阻断药比较差异有统计学意义(P＜0.05);且BAI对NE外钙内流引起的收缩有明显的抑制作用.结论:黄芩素可明显降低由NE诱发的血管环张力的升高,且其作用具有浓度依赖性,此作用有内皮依赖性和非内皮依赖性的特点.内皮依赖性收缩可能与前列环素(PGI2)途径有关,非内皮依赖机制与KATP通道和钙离子通道有关.     

丁基苯酞对缺血脑组织中及低糖低氧刺激后培养的神经细胞中胆碱乙酰化酶活性的影响

 目的:观察丁基苯酞(dl-NBP),d-NBP和l-NBP对脑缺血后皮层和纹状体中以及低糖低氧和NMDA刺激后培养的胎鼠皮层神经元中胆碱乙酰化酶活性变化的影响?方法:大脑中动脉堵塞起始处造成大鼠局灶性脑缺血;胎鼠皮层神经元以低糖低氧培养基培养造成低糖低氧模型;胆碱乙酰化酶活性以分光度法进行测定?结果:脑缺血后缺血区皮层和纹状体中胆碱乙酰化酶活性分别下降了61.3%和58.4%?dl-NBP,d-NBP和l-NBP(10和20mg·kg^-1,ip)于脑缺血后5和60min给药2次皆可显著提高脑组织中胆碱乙酰化酶活性?dl-NBP,d-NBP和l-NBP(0.1～10μmol·L^-1)对低糖低氧及NMDA刺激后神经细胞中胆碱乙酰化酶活性也有明显的提高作用?结论:dl-NMP改善局灶性脑缺血后动物的学习记忆功能可能与其对胆碱能神经功能的改善有关?     

神经节苷脂对染砷人脑皮层神经元的保护作用

 目的研究神经节苷脂对As2O3体外干预的皮质神经元的保护作用及可能机制。方法将人原代脑皮质神经细胞分为 5组,空白对照组、5 μmol·L^-1 As₂O₃干预组和5μmol·L^-1 As₂O₃加神经节苷脂50,100,200 μg·L^-1组,Fluo-3/AM荧光探针标记皮质神经元胞浆钙([Ca²⁺]i),激光共聚焦显微镜实时测定[Ca²⁺]_i的变化。磷基转移法测定细胞膜和胞浆的蛋白激酶C(PKC) 的活性。流式细胞仪检测细胞凋亡百分比。结果 5 μol·L^-1的As₂O₃,作用3 min,[Ca²⁺]_i开始升高,并随时间延长逐渐明显,As₂O₃加神经节苷脂200 μg·L^-1,作用9 min,[Ca²⁺]i才开始升高,且程度远没有As2O3组明显。5 μmol·L^-1的As₂O₃组的 PKC活化程度明显高于As₂O₃加神经节苷脂组,以细胞膜相明显。24 h凋亡率分别为:As₂O₃组78.5%,As₂O₃加神经节苷脂 200μg·L^-1组13.5%。结论神经节苷脂抑制As₂O₃引起的皮质神经元的[Ca²⁺]i升高和PKC活化,抑制细胞凋亡。并通过对细胞膜靶点的保护来实现对神经细胞的保护作用,这进一步证明砷剂最初的作用靶点是细胞膜。     

丁基苯酞对大鼠皮层神经元损伤后谷氨酸和5-羟色胺释放的影响

 目的:观察丁基苯酞 (3-n-butylphthalide,NBP)对低糖低氧刺激后培养的胎鼠皮层神经细胞谷氨酸和5-HT释放的影响?方法:胎鼠皮层神经元以低糖低氧培养基培养造成低糖低氧模型;谷氨酸和5-HT以荧光分光光度法进行测定?结果:低糖低氧10h可使神经细胞谷氨酸的释放量增加,dl NBP(1和10μmol·L^-1)和l-NBP(10μmol·L^-1)可降低细胞培养基中谷氨酸的浓度,而同剂量的d-NBP对谷氨酸的释放无明显影响?dl-NBP和l-NBP亦可抑制由花生四烯酸 (100μmol·L^-1)引起的神经细胞谷氨酸的释放?本实验结果还显示,dl-NBP(1和10μmol·L^-1)及l-NBP(10μmol0·L^-1)可降低低糖低氧后神经细胞培养基中5-HT的浓度?结论:dl-NBP和l-NBP可抑制谷氨酸和5-HT的释放,这可能是其抗脑缺血作用的机理之一?     

三七总皂苷对脑细胞内游离钙浓度的影响

 目的：研究三七总皂苷(saponins of Panax notoginseng,PNS)对不同状态下脑细胞内游离钙离子浓度(［Ca2+］i)的影响。方法：采用Fura-2作为荧光指示剂,测定新生大鼠脑细胞中荧光强度的变化。结果：PNS 100,400 mg·L^-1对高钾(50 mmol·L^-1)、谷氨酸(100 μmol·L^-1)诱导的以及缺氧引起的［Ca2+］i增高均有明显的抑制作用。结论：PNS是钙离子拮抗剂。     

3-异丁基-1-甲基黄嘌呤对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的Ca2+/cAMP不依赖性保护作用

 目的观察3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-Isobutyl-1-methylxanthine, IBMX）对5 mmol·L^-1KCl诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用并探讨其与[cAMP]i 和Ca²⁺的关系。方法建立KCl 5 mmol·L^-1诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡模型,用荧光二酯素法分析神经元存活,Hoechest 33258核染色和DNA琼脂糖凝胶电泳分析凋亡,放射免疫法测定cAMP浓度。结果IBMX呈浓度依赖性拮抗5mmol·L^-1KCl诱导的神经元死亡,并明显减少核形态异常的神经元,使DNA电泳梯带变浅或完全消失;IBMX（1.0 mmol·L^-1）可持续升高神经元[cAMP]i,福司可林2.0μmol·L^-1升高[cAMP]i作用 与IBMX类似,但不能模拟IBMX的作用;此外,IBMX的拮抗作用不被cAMP 竞争性抑制剂Rp-cAMP和PKA的特异阻断药H-89阻断;单用或联用钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ的特异抑制剂KN-93和磷酯酰肌醇3位羟基激酶的特异性抑制剂LY294002也不能阻断。结论IBMX抗低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡作用不依赖cAMP和Ca²⁺。