冠心合剂含药血清对人脐静脉内皮细胞细胞周期及其分泌VEGF的影响

目的:探讨冠心合剂含药血清对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)细胞周期和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌的影响.方法:离体培养人脐静脉内皮细胞,设空白组、含药血清大、中、小剂量组和bFGF组.流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期,酶联免疫吸附(ELISA)法及逆转录聚合酶链反应(RT - PCR)观察各组内皮细胞分泌VEGF及VEGF-mRNA表达量的变化.结果:冠心合剂含药血清可以增加细胞周期中S期细胞数目,以小剂量组作用明显(P＜0.01);可以促进细胞分泌VEGF,并使VEGF-mRNA表达增加,其中小剂量组作用明显(P＜0.05).结论:冠心合剂促血管新生作用可能与促进血管内皮细胞VEGF的表达与释放有关.     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞VEGF、Ang-2基因表达的影响

目的:观察芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)VEGF、 Ang-2基因表达的影响,探讨芎芍胶囊促血管新生的作用机制.方法:芎芍胶囊高、中、低不同剂量含药血清作用于HUVEC,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,MTT法观察细胞增殖情况,RT-PCR法检测VEGF、Ang-2 mRNA的表达.结果:芎芍胶囊含药血清各剂量组均有促HUVEC增殖作用(P<0.01),高剂量组具有显著促进VEGF表达作用(P<0.01);而中、低剂量组作用不明显;高、中剂量组具有明显抑制Ang-2表达作用(P<0.05～0.01),低剂量组的作用不明显.结论:芎芍胶囊可促进VEGF的表达,降低Ang-2的表达,其促血管新生作用机制与此两条通路有关.     

黄芪对晚期糖基化终末产物作用下人脐静脉内皮细胞的影响

目的:研究黄芪对晚期糖基化终末产物(AGEs)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和损伤的影响。方法:采用MTT比色法,观察黄芪对体外AGEs培养的人脐静脉内皮细胞增殖的影响;以内皮细胞膜与Alcain Blue(AB,阿利新蓝)结合量为指标,观察黄芪对AGEs导致的人脐静脉内皮细胞损伤的影响;利用AO/EB染料诱导AGEs作用下的人脐静脉内皮细胞,并利用荧光显微镜观察黄芪的抑制作用。结果:黄芪对人脐静脉内皮细胞增殖有抑制作用,可对抗AGEs导致的内皮细胞膜负电荷减少,并且对抗AGEs诱导凋亡的作用,对内皮细胞有保护作用。结论:黄芪是晚期糖基化终末产物的拮抗剂,可有效抑制人脐静脉内皮细胞增殖并有细胞保护作用。     

中药复方血清对HUVEC血管形成及STAT3、VEGF表达的影响

目的观察中药复方肠复康(CFK)动物血清对双室联合培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管形成及STAT3、VEGF表达的影响。方法采用HUVEC和人结肠癌(LoVo)细胞,观察CFK含药血清对HUVEC血管形成的影响,并观察对STAT3及VEGF表达的影响。结果 CFK含药血清作用后,HUVEC增殖活性明显降低,血管生成能力明显受到阻滞,STAT3、VEGF表达明显降低,与对照组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。结论 CFK对大肠癌血管生成具有抑制作用。其机制可能与其降低STAT3及VEGF表达有关。     

当归超滤膜提取物对ECV-304细胞增殖的影响

目的观察当归超滤膜提取物对人脐静脉内皮细胞（ECV-304）增殖的影响，并进一步研究血管内皮生长因子（VEGF）基因在此过程中的作用。方法采用超滤膜分离技术制备当归的有效成分，以离体培养的ECV-304细胞为摸型，采用四氮唑蓝比色法（MTr法）测定细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期，半定量逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）法检测VEGFmRNA表达的变化，当归超滤膜提取物对人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）增殖的影响和VEGF基因在此过程中表达的变化得到了观察和研究。结果①当归超滤膜提取物对ECV-304细胞有促增殖作用，与对照组相比有显著性差异（p〈0．005），当归的超滤膜提取物对ECV-304细胞群有下调细胞周期中G0／G1期细胞数目，上调s期细胞数目的作用；⑦在ECV-304细胞增殖过程中，当归超滤膜提取物能够诱导VEGFmRNA的表达，其作用与剂量呈一定的正相关。结论当归的超滤膜提取物对ECV-304细胞有促增殖的作用；其作用机制可能是通过诱导ECV-304细胞VEGF基因的表达，下调细胞周期中G0／G1期细胞数目，上调S期细胞数目，而发挥促ECV-304细胞增殖的作用，提示当归的超滤膜提取物可能具有一定的促血管新生作用。     

地鳖纤溶蛋白对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞VEGF和bFGF表达的影响

目的研究地鳖纤溶蛋白(EFP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肺癌(A549)、乳腺癌(MCF-7)细胞分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法采用含药血清体外培养人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞,通过MTT法和双抗夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA)观察地鳖纤溶蛋白对细胞的体外增殖和分泌VEGF和bFGF的影响。结果 EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞有显著抑制作用,ELISA法检测结果表明EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞的VEGF和bFGF表达均有抑制作用。结论 EFP可抑制肿瘤细胞VEGF和bFGF表达。     

风湿祛痛胶囊对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:观察风湿祛痛胶囊对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力的影响,以及对VEGF受体2(VEGFR2)的干预作用。方法:VEGF体外诱导HUVEC,加入风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度(0. 02,0. 1,0. 5μg·L-1)作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、转移小室(transwell)法、黏附实验、细胞侵袭及管腔形成实验检测HUVEC的增殖活性、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中VEGFR2磷酸化水平和蛋白含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测VEGFR2 mRNA表达水平。结果:与正常组比较,VEGF诱导24,48 h后均能显著升高HUVEC的增殖活性(P 0. 01),诱导24 h能明显升高HUVEC的迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力(P 0. 01),显著升高HUVEC中VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 01);与VEGF组比较,风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度组作用48 h均能明显抑制HUVEC增殖活性(P 0. 05,P 0. 01),作用24 h对VEGF诱导的HUVEC迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力有明显抑制作用(P 0. 05),也能下调VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05)。结论:风湿祛痛胶囊能降低VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,这一作用可能与其抑制VEGFR2的磷酸化、蛋白和mRNA表达水平有关。     

舒心方对缺氧环境下人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的：探讨对舒心方缺氧环境下人脐静脉内皮细胞增殖和细胞周期的影响。方法：建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,采用MTT法测定细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期。结果：舒心方能够明显促进缺氧环境下内皮细胞的增殖,增加细胞周期中S期细胞的数目。结论：舒心方对缺氧环境下内皮细胞增殖和DNA合成有促进作用,提示舒心方在缺血心肌新生血管生成过程中可能具有一定作用。     

ICAP-1对脐静脉内皮细胞P13K表达及细胞增殖的影响

目的研究整合素胞浆结构域关联蛋白-1（ICAP-1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖及P13K信号通路表达的影响,以进-步研究其生物学作用及其在血管形成中的作用机制。方法通过构建PCDNA3．1-ICAP-1质粒并转染HUVEC,采用MTT法测定HUVEC增殖化,WesternBlot检测ICAP-1及P13K表达。结果PCDNA3．1-IcAP-1转染组IcAP—1和P13K表达明显增加,PCDNA3．1-ICAP-1转染组与正常对照组、PCDNA3．1-GFP转染组比较表达差异有统计学意义（P〈0．05）。PCDNA3．1-ICAP-1转染组较PCDNA3．1-GFP转染组和正常对照组细胞增殖能力增强,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论ICAP-1具有促进内皮细胞增殖的作用,ICAP-1可能通过上调P13K表达,促进内皮细胞增殖达到促进血管新生的作用。     

灵芝孢子油对血管生成作用的研究

目的观察灵芝孢子油(GSO)对血管生成的作用。方法应用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养三维血管生成模型和鸡胚尿囊膜(CAM)模型,观察灵芝孢子油含药血清对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移的影响;及对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果灵芝孢子油含药血清,使CAM血管生成减少、变细,其中较大剂量组中、小血管生成数量明显减少。对血管内皮细胞的出芽和管腔形成有抑制作用,较大剂量组抑制作用明显。结论灵芝孢子油具有抑制血管内皮细胞的增殖,抑制新生血管的形成的作用。     

卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对人脐静脉内皮细胞增殖及VEGF蛋白表达的影响

 目的 观察卷柏总黄酮、穗花杉双黄酮对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖及血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对HUVEC细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果 不同质量浓度的卷柏总黄酮（1、5、10、15、20 μg·mL-1）和穗花杉双黄酮（0.3,1,2,4,5 μg·mL-1）可以剂量依赖地促进HUVEC细胞增殖,其中卷柏总黄酮10 μg·mL-1、穗花杉双黄酮1 μg·mL-1在36 h时显著促进细胞增殖,提高S期细胞比例,VEGF蛋白表达明显升高。结论 细胞实验结果提示卷柏中黄酮类物质可能具有促血管新生的作用。     

鳖甲煎丸对HUVEC增殖及HepG2中VEGF表达的影响

目的:通过研究鳖甲煎丸对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)增殖及肝癌细胞系HepG2中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,探讨其抗肝细胞癌血管生成的机制。方法:将24只6周龄Wistar大鼠随机分为3组(8只/组),分别以临床剂量20,10倍的鳖甲煎丸水溶液及生理盐水ig 3d,3 d后采血,离心,获取血清。用含有不同浓度HepG2培养上清的条件培养基培养HUVEC,48 h后用MTT比色法检测HUVEC的增殖情况并确定条件培养基的最适浓度。用该浓度的条件培养基培养HUVEC,分别于48,72 h后采用MTT比色法检测药物血清对HUVEC增殖的影响。用含药血清培养HepG2,48 h后采用ELISA方法检测培养液上清中VEGF的浓度,采用qRT-PCR法检测VEGF mRNA的表达情况。结果:鳖甲煎丸高、中剂量组10%药物血清能够显著抑制HUVEC的增殖,这种抑制作用具有浓度和时间依赖性。鳖甲煎丸高、中剂量10%药物血清组中VEGF浓度与VEGF mRNA表达水平均明显下降,并且下降程度与药物浓度有关。结论:鳖甲煎丸能够抑制HUVEC的快速增殖并且显著地降低HepG2中VEGF的表达水平。研究表明鳖甲煎丸在抗肝细胞癌血管生成方面具有一定作用。     

当归补血汤调控缺氧血管内皮细胞增殖及其分子机制研究

目的: 通过当归补血汤对缺氧血管内皮细胞增殖及分子表达的研究,探讨当归补血汤调控缺氧血管内皮细胞增殖的可能分子机制。 方法: 应用连二亚硫酸钠溶液建立缺氧血管内皮细胞(EA.hy926)模型(以下简称缺氧模型),不同剂量当归补血汤干预24 h后,CCK-8法观察缺氧血管内皮细胞的增殖;ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR1,VEGFR2,sVEGFR1,sVEGFR2)的表达。 结果: 与正常血管内皮细胞比较,缺氧后血管内皮细胞增殖能力显著下降(P<0.01);当归补血汤能够促进正常血管内皮细胞及缺氧血管内皮细胞的增殖,其中高、中剂量组促进缺氧血管内皮细胞增殖的幅度明显大于促正常血管内皮细胞增殖的幅度(P<0.01)。当归补血汤各剂量组均能促进缺氧血管内皮细胞VEGF,VEGFR1,VEGFR2的表达,且与剂量呈正相关,抑制缺氧血管内皮细胞sVEGFR1,sVEGFR2的表达。 结论: 当归补血汤能够促进缺氧血管内皮细胞的增殖,其机制可能与其调节VEGF与VEGFR和sVEGFR两种受体的结合有关。     

当归补血汤抑制与肿瘤共培养血管内皮细胞的增殖及其分子机制

目的:通过当归补血汤对与肿瘤共培养血管内皮细胞增殖及分子表达的研究,探讨当归补血汤抑制肿瘤血管生成的可能机制。方法:应用Transwell建立与肿瘤共培养血管内皮细胞模型(以下简称共培养模型),在不同剂量当归补血汤的干预下,通过CCK-8法观察与肿瘤共培养血管内皮细胞的增殖作用;通过ELISA法检测与肿瘤共培养血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR1,VEGFR2,sVEGFR1,sVEGFR2)的表达。结果:当归补血汤能够促进正常血管内皮细胞增殖,与正常组比较,高、中、低剂量组均有差异性(P<0.01,P<0.01,P<0.05);抑制与肿瘤共培养血管内皮细胞增殖,且与剂量呈正相关,与共培养模型组比较,各剂量组均有显著差异(P<0.01)。当归补血汤各剂量组均能促进与肿瘤共培养血管内皮细胞VEGF的表达;抑制与肿瘤共培养血管内皮细胞VEGFR1,VEGFR2的表达,且与剂量呈正相关;促进与肿瘤共培养血管内皮细胞sVEGFR1,sVEGFR2的表达。结论:当归补血汤能够抑制与肿瘤共培养血管内皮细胞的增殖,其机制可能与其调节VEGF与VEGFR和sVEGFR两种受体的结合有关。     

麝香保心丸对鸡胚绒毛尿囊膜及培养的血管内皮细胞的促血管生成作用

目的：探讨麝香保心丸在鸡胚绒毛尿囊膜模型及培养的微血管内皮细胞系统中的促血管生成作用。方法：分别以重组碱性成纤维细胞生长因子（bFGF,贝复济）和生理盐水为阳性和阴性对照,作用于绒毛尿囊膜（chrioallantoic membrane,CAM),通过一级、二级血管计数,初步评价麝香保心丸的促血管生成活性;并通过观察它对培养的牛肾上腺微血管内皮细胞增殖及管腔结构形成的影响,验证其促血管生成效应;同时检测麝香保心丸作用于培养的人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)的mRNA表达及其上清液中VEGF、bFGF含量,初步探索其作用机理。结果：麝香保心丸组CAM上血管数比生理盐水组明显增加;麝香保心丸组内皮细胞及管腔数目均较生理盐水组明显增多,前者细胞表达VEGF和bFGF mRNA明显增高,上清液中VEGF和bFGF含量明显增多。结论：麝香保心丸能促进CAM及培养的微血管内皮细胞的血管生成。     

补气活血类中药对血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察补气活血类中药含药血清对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的影响,并初步筛选出对HUVEC 增殖能力具有较明显促进、抑制作用的药物。方法：建立HUVEC 的体外培养的细胞模型,采用血清药理学方法,将10 种活血化瘀药分别与3 种补气药按照1:2、1:1、2:1 三种不同的配比两两配伍组合,组成90 对补气活血药药对,制备90 对补气活血药药对和10 种活血化瘀药的含药血清。应用MTT 比色法观察不同活血化瘀药和补气活血药药对的含药血清对HUVEC 增殖能力的影响。结果：与空白血清组相比较,大部分的活血化瘀药、补气活血药对含药血清对HUVEC 的增殖能力都有较为显著的影响（促进或者抑制）,其中丹参组、川芎组、赤芍组,丹参黄芪（1:2）组、丹参黄芪（1:1）组、川芎黄芪（1:2）组可明显促进HUVEC 增殖能力（P＜0.05 或P＜0.01）;三棱组、莪术组、丹皮组、莪术黄芪（2:1）组、三棱人参（2:1）组、莪术黄芪（1:1）组可明显抑制HUVEC 增殖（P＜0.05 或P＜0.01）。结论：不同的活血化瘀药和补气活血药配伍组成对HUVEC 的增殖能力具有不同的促进或抑制作用,这可能为这些药物在细胞层面上促进或抑制血管生成的作用机制。     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞细胞周期的影响

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelialcell,HUVEC)细胞周期的影响。方法体外培养HUVEC,采用二氯化钴(CoCl2)建立细胞化学缺氧模型,采用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测不同浓度密蒙花方水提液(10、20、40 mg/ml)对缺氧状态下HUVEC细胞周期的影响。结果①缺氧组较正常组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,差异具有统计学意义(P<0.01);②各密蒙花方组均较缺氧组G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少(P<0.01),组间具有浓度依赖关系(P<0.01);③密蒙花方组在G0/G1期前还出现了指示细胞凋亡的亚G1期凋亡峰,表明密蒙花方对缺氧状态下的HUVEC具有促凋亡作用。结论密蒙花方抑制HUVEC增殖的作用与阻滞细胞由G1期进入S期,促进细胞凋亡有关。     

川芎嗪对VEGF诱导的血管内皮细胞增殖的影响

目的:研究川芎嗪对血管内皮细胞和对VEGF诱导的血管内皮细胞生长、增殖的影响.方法:采用台盼蓝排染法测定人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞计数,MTT法测定川芎嗪对血管内皮细胞和对VEGF诱导的血管内皮细胞增殖的抑制.结果:川芎嗪直接作用于ECV304细胞,其细胞计数、吸光度(A)值均较对照组显著减少(P＜0.05);川芎嗪作用于VEGF诱导的ECV304细胞,其A值较对照组显著降低(P＜0.05).结论:川芎嗪能直接抑制血管内皮细胞的增殖,对VEGF诱导血管内皮细胞的增殖也有抑制作用.     

蝎毒多肽提取物对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及血管内皮生长因子和凝血酶敏感蛋白表达的影响

目的观察蝎毒多肽提取物(简称蝎毒多肽)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)、凝血酶敏感蛋白(TSP-1)表达的影响,进一步探讨蝎毒多肽的抗肿瘤作用机制。方法 MTT法检测蝎毒多肽对SKOV3细胞增殖的影响;免疫细胞化学法及Western blotting测定蝎毒多肽对SKOV3细胞VEGF、TSP-1蛋白表达的影响。结果蝎毒多肽12.5～200μg/mL对SKOV3细胞增殖有抑制作用,且呈明显的质量浓度相关性,质量浓度大于50μg/mL时细胞增殖抑制作用显著(P<0.01)。随着蝎毒多肽质量浓度的增加,SKOV3细胞TSP-1蛋白表达增加,VEGF蛋白表达下降(P<0.01)。结论蝎毒多肽能显著抑制VEGF的表达,促进TSP-1的表达,其抗肿瘤作用机制可能是通过抑制肿瘤细胞增殖、影响肿瘤细胞血管生成过程中关键因子的表达来实现的。