小鼠巨噬细胞极化与焦亡的关系研究

目的：探讨小鼠巨噬细胞极化与焦亡的关系。方法：RAW264.7小鼠巨噬细胞分为3组：M0组、M1组和M2组,M1组予以LPS和IFN-γ诱导,M2组予以IL-4和IL-13诱导,M0组予以等量PBS作为对照。流式细胞术检测细胞表型及焦亡,PI染色观察焦亡细胞定性,LDH检测细胞活性,ELISA检测炎症因子IL-1β、IL-18水平,RT-qPCR及Western blot检测caspase-1、caspase-11和GSDMD mRNA和蛋白水平。结果：倒置显微镜观察到极化后M1与M0、M2巨噬细胞形态差异显著;流式细胞术检测M1、M2巨噬细胞特异性分子结果证明诱导极化成功;与M0相比,M1、M2组炎症因子IL-1β、IL-18水平均升高（P<0.05）;M1组PI染色阳性率高于M0和M2组;与M0和M2相比,M1型巨噬细胞活化的caspase-1、caspase-11和GSDMD mRNA和蛋白表达增加。结论：LPS+IFN-γ和IL-4+IL-13可分别成功诱导M0型巨噬细胞向M1和M2型极化,且极化后的M1型巨噬细胞形态与M0、M2型差异显著;M0、M1和M2型巨噬细胞均可...     

柯里拉京抑制LPS和ATP激活的NLRP3炎症小体和巨噬细胞焦亡

目的 探讨柯里拉京对细菌脂多糖(LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的巨噬细胞内NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的调控作用和机制。方法 采用CCK8试剂检测不同浓度柯里拉京对J774A.1细胞活力的影响;碘化丙啶(PI)染色和乳酸脱氢酶(LDH)释放检测柯里拉京对LPS+ATP诱导的细胞死亡的影响。Western blot法检测细胞上清液中炎症小体活化标志物caspase-1 p20(M_r20 000)和成熟IL-1β(M_r17 000)的表达水平,以及检测细胞内NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β前体(pro-IL-1β)和焦亡执行蛋白GSDMD的表达。ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β的水平。活性氧(ROS)荧光探针H2DCFDA染色观察柯里拉京对ROS产生的影响。结果 柯里拉京浓度小于40μmol·L^-1时对细胞活性影响较小。柯里拉京减少LPS+ATP刺激的细胞内PI阳性细胞的比例和LDH的释放。柯里拉京抑制LPS+ATP刺激的巨噬细胞内GSDMD蛋白N末端(GSDMD-NT)的表达,以及...     

硫氢化钠通过抑制经典细胞焦亡信号通路减轻巨噬细胞焦亡

目的：探讨硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）供体硫氢化钠（sodium hydrosulfide,NaHS）对巨噬细胞焦亡的作用。方法：人髓系白血病单核细胞THP-1经佛波酯刺激并分化为巨噬细胞后,采用不同浓度的氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）和NaHS对其进行干预,并分为空白对照组、ox-LDL刺激组和NaHS+ox-LDL干预组。采用CCK-8法检测THP-1巨噬细胞活力;采用油红O染色和光镜分别观察THP-1巨噬细胞脂质蓄积和焦亡细胞形态;采用Hoechst 33342/碘化丙啶（propidium iodide,PI）荧光染色和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性检测评估细胞焦亡程度;采用H2S检测试剂盒测定细胞内的H2S水平;采用试剂盒测定细胞中的caspase-1活性;采用Western blot分析细胞中焦亡关键蛋白的表达水平。结果：与空白对照组相比,ox-LDL(100和150 mg/L)可显著增加THP-1巨噬细胞中的PI阳性细胞比例、LDH释放、casp...     

益母草碱对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的调控作用

目的研究益母草碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的调控机制。方法 MMT法检测巨噬细胞活性;Griess法检测NO的释放量;ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-α的释放量;qRT-pCR法检测iNOS、MCP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA的表达量。结果益母草碱极显著提高了巨噬细胞的MTT活力(P<0.01);益母草碱能显著促进巨噬细胞NO和IL-1β、TNF-α的释放(P<0.05,P<0.01)。在LPS刺激下,巨噬细胞极显著提高了NO、IL-1β、IL-6、TNF-α的释放(P<0.01),而益母草碱能显著抑制由LPS刺激造成的NO、IL-1β和IL-6、TNF-α的过度释放(P<0.05,P<0.01)。与LPS组比较,益母草碱+LPS组中TLR2的mRNA表达无显著变化(P>0.05),而TLR4、My D88、NF-κB的m RNA表达量显著下调(P<0.01)。结论益母草碱对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应具有调控作用,机制可能与其能够调节TLR4/NF-κB信号通路相关。     

葛根素通过抑制ox-LDL诱导巨噬细胞焦亡通路活化稳定AS易损斑块

目的:研究葛根素对ox-LDL诱导巨噬细胞NLRP3/Caspase-1焦亡信号通路的影响,探讨葛根素稳定动脉粥样硬化(AS)易损斑块的潜在调节机制.方法:采用佛波酯(PMA)刺激THP-1细胞48 h,诱导其分化为巨噬细胞,分别给予ox-LDL(100μg/ml)、低(100μg/ml)、中(250μg/ml)和高剂...     

雪胆乙素通过抑制小鼠巨噬细胞中AMPK活性抑制NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡

目的 本研究旨在探索雪胆乙素对ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法利用第一信号（LPS）刺激巨噬细胞,再以第二信号（ATP）激活NLRP3炎症小体;采用Western blot检测caspase-1、GSDMD等蛋白的表达水平;ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β的水平;免疫荧光染色检测雪胆乙素对LPS+ATP诱导的ASC斑点形成的影响;碘化丙锭（PI）染色法检测细胞死亡。结果 我们发现雪胆乙素处理能够抑制ATP诱导的巨噬细胞中ASC斑点的形成,并抑制LPS+ATP刺激下巨噬细胞中caspase-1的切割及活化;进一步抑制成熟IL-1β释放至培养液上清中;同时,雪胆乙素也能够明显抑制巨噬细胞中GSDMD-NT的形成以及细胞焦亡。另外,雪胆乙素能够抑制AMPK的磷酸化,而AMPK的激动剂AICAR促进成熟IL-1β的释放,以及可以明显逆转雪胆乙素对ATP诱导的细胞焦亡的抑制作用。结论 雪胆乙素可能通过抑制巨噬细胞中AMPK的活性而抑制NLRP3炎症小体活化与细胞焦亡。     

对甲苯磺酰维达列汀抑制巨噬细胞焦亡和促进其凋亡的研究

目的:探讨对甲苯磺酰维达列汀(PV)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞焦亡和凋亡的影响,及其可能的抗炎机制.方法:MTT法检测RAW264.7的细胞活力;细胞流式术检测RAW264.7细胞的凋亡;Western blot检测caspase-3和caspase-1蛋白的表达;ELISA检测细胞培养上清液中肿...     

小檗碱通过mtROS-NLRP3通路抑制H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞焦亡北大核心CSCD

目的:探究小檗碱(BBR)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的巨噬细胞焦亡的影响及mtROS-NLRP3通路在其中的调控作用。方法:以巨噬细胞J774A.1为研究对象,设置正常对照组(control组)、模型组(H_(2)O_(2)作用24 h)、BBR干预组(H_(2)O_(2)+BBR作用24 h)和ROS清除剂NAC干预组(H_(2)O_(2)+NAC作用24 h)。流式细胞术检测各组细胞活性氧簇(ROS)的生成,免疫荧光检测ROS与线粒体的共定位情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞NLRP3、IL-1β的基因转录水平,Western blot检测NLRP3蛋白表达量,流式细胞术检测caspase-1的活化及其介导的细胞焦亡率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH的释放量,ELISA检测IL-1β分泌水平。结果:与模型组相比,BBR干预后显著减少了H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞线粒体ROS(mtROS)的生成,下调了NLRP3和IL-1β的基因表达水平,减少了NLRP3蛋白的表达,降低了caspase-1活化水平及其介导的细胞焦亡率,同时减少了细胞上清液中LDH和IL-1β的释放。结论:小檗碱可能通过下调mtROS水平进而抑制NLRP3炎症体介导的细胞焦亡以减轻炎症反应。     

PTEN抑制剂BPV通过下调细胞焦亡水平改善LPS诱导的急性肺损伤

目的：探究第10号染色体丢失的张力蛋白同源磷酸酶基因(PTEN)抑制剂过氧化氢氧化矾酸钾(BPV)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)的影响及作用机制。方法：将60只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、BPV组、LPS组和BPV+LPS组,其中又将LPS组分为LPS刺激后6 h、12 h、24 h、48 h组;Western blot检测LPS各组小鼠肺组织中PTEN蛋白表达变化;检测小鼠肺组织湿/干重(W/D),分析Sham组,BPV组、LPS组及BPV+LPS组小鼠肺组织水肿情况;HE染色观察4组小鼠肺组织病理学改变;ELISA和流式细胞术分别检测4组小鼠肺组织灌洗液(BALF)中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的表达水平及巨噬细胞数量变化;组织免疫荧光染色检测各组小鼠肺泡巨噬细胞中pyrin结构域NLRP3表达;Western blot检测4组小鼠肺组织中NLRP3介导的焦亡途径中NLRP3、caspase-1 p10、ASC和GSDMD p30蛋白表达及PTEN/Akt/NF-κB信号通路中PTEN蛋白、Akt^s...     

Circ0005512促进雌性大鼠脊髓损伤后小胶质细胞/巨噬细胞焦亡

背景：神经炎症是导致继发性脊髓损伤的重要因素,小胶质细胞/巨噬细胞焦亡是介导脊髓损伤后神经炎症的重要部分,研究显示脊髓损伤后小胶质细胞/巨噬细胞发生焦亡,但circ RNA对脊髓损伤后小胶质细胞/巨噬细胞焦亡的调控机制尚不清楚。目的：探讨circ0005512在脊髓损伤后调节小胶质细胞/巨噬细胞焦亡中的作用和机制。方法：将雌性Wistar大鼠随机分为假手术组和脊髓损伤组,BBB评分评估运动功能,苏木精-伊红染色检测脊髓空洞面积,二代测序筛选脊髓组织中差异表达的circ RNA,Real-time PCR验证circ0005512的表达。免疫荧光、Western blot、ELISA、Real-time PCR检测脊髓损伤大鼠的细胞焦亡情况以及脂多糖诱导的小胶质细胞系HAPI细胞的焦亡情况,基因敲降验证circ RNA0005512对小胶质细胞焦亡的调控作用。结果与结论：(1)脊髓损伤7 d后,脊髓损伤部位出现明显空洞,脊髓损伤后即刻大鼠运动功能完全缺失,随着时间的推移,脊髓损伤组大鼠运动功能逐渐部分恢复,BBB评分与假手术组比较有显著差异;(2)二代测序筛选到circ0005512明显...     

糖尿病与细胞焦亡

细胞焦亡是不同于坏死与凋亡的另一种细胞死亡形式。对于机体而言细胞焦亡有助于维持内环境稳态,但是过度的细胞焦亡会引发机体疾病状态,糖尿病就是其中之一。糖尿病前期、糖尿病的代谢产物和肠道菌群变化会引起细胞焦亡的发生,而细胞焦亡进一步促使胰岛β细胞数量减少和胰岛素靶器官的胰岛素抵抗形成,加重糖尿病病情的发展和并发症的发生。以细胞焦亡为基础的治疗方法虽然越来越被关注,但有待进一步研究。     

HIV感染与细胞焦亡

目前艾滋病(AIDS)被认为是一种慢性疾病。炎症和免疫活化在疾病进展中起了重要作用。细胞焦亡是HIV感染过程中造成CD4^+T细胞死亡的主要程序性细胞死亡方式,并伴随着IL-1β等促炎因子和细胞内容物的释放,引起机体炎症反应。细胞焦亡联系起了HIV感染过程中的CD4^+T细胞死亡和炎症反应发生这2个最主要的病理事件。因此,抑制细胞焦亡可能对艾滋患者的治疗有重要意义。本文综述了HIV感染过程中细胞焦亡的发生及其引起的病理性事件,为探索艾滋病患者治疗新策略提供线索。     

细胞焦亡与原发性肝癌研究进展

细胞焦亡是一种不同于凋亡、自噬的程序性细胞死亡方式。其特征是在Gasdermin介导下,细胞膜发生破裂,之后释放细胞内容物和促炎因子,进而导致细胞死亡。细胞焦亡炎症通路包括由Caspase-1活化的经典通路和Caspase-4/-5/-11介导的非经典通路。细胞焦亡与原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)的发生、发展联系密切,该文就细胞焦亡的发生机制及其在PLC的早期诊断、治疗、预后及药物开发等相关领域中的研究进展作简要综述。     

HSPgp96和LPS激活小鼠腹腔巨噬细胞的比较研究

目的:比较HSPgp96与LPS对巨噬细胞免疫功能的激活作用。方法:培养小鼠腹腔巨噬细胞,分组用PBS、HSPgp96和LPS诱导后,在不同时间用酶法测定NO生成量。按效靶比10:1加入H22肝癌细胞,24h后靶细胞进行单细胞凝胶电泳,染色观察。在不同时间用激光扫描共聚焦显微镜观测巨噬细胞MHC-Ⅱ和CD86的表达。结果:LPS和HSPgp96促进巨噬细胞NO生成的作用相当,并随作用时间延长而增加。巨噬细胞攻击后的靶细胞呈现DNA损伤后的彗星现象。LPS和HSPgp96均促进巨噬细胞MHC-Ⅱ和CD86的表达,但HSPgp96诱导组表达更快更强。结论:与LPS相比,HSPgp96活化小鼠腹腔巨噬细胞细胞毒活性的作用相当,而诱导抗原提呈功能的作用更强。     

Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5抑制巨噬细胞焦亡的作用机制

背景：Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(fibronectin type Ⅲ domain-containing protein 5,FNDC5)是一种肌肉因子,具有调节糖脂代谢、抗炎、抗氧化及改善胰岛素抵抗等功能,并且具有调节多种细胞焦亡的能力。目的：探讨FNDC5对巨噬细胞焦亡的作用及潜在机制。方法：(1)构建FNDC5基因过表达和沉默慢病毒载体,将慢病毒载体转染至THP-1细胞株,通过观察细胞绿色荧光表达、qPCR和Western blot验证转染效果。(2)佛波酯诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,通过氧化性低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)构建巨噬细胞焦亡模型,分组：NC组、ox-LDL组、ox-LDL+MOCK1组、ox-LDL+Ov-FNDC5组、ox-LDL+MOCK2组和ox-LDL+shFNDC5组。(3)采用Hoechst 33342/PI荧光双染和乳酸脱氢酶释放实验评估细胞焦亡程度,采用qPCR和Western blot检测相关分子mRNA和蛋白表达水平,采用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素1β和白细胞介...     

细胞焦亡调控与炎症和肿瘤病理机制的关系

细胞焦亡是近年来的研究热点,且在多种疾病中发挥关键作用,在机体炎症反应和免疫反应中普遍存在。该文回顾性综述近年来有关细胞焦亡机制及相关疾病的最新文献,系统而全面地阐述细胞焦亡研究的最新进展。     

地塞米松诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中[Ca^2＋]i的变化

目的 研究地塞米松诱导调亡小鼠巨噬细胞[Ca^2 ]i的变化及其对调亡的影响以及信使分子对凋亡和[Ca^2 ]i变化的影响。方法 激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记术。结果 1、凋亡巨噬细胞内fluo-3荧光强度逐渐增强,胞内钙库受体抑制剂,尤其是Ca^2 内流阴断剂抑制钠fluo-3荧光强度变化,同时使细胞凋亡率降低;2、staurosporine 和DFcAMP显著降低巨噬细胞凋亡率并明显抑制fluo-3荧光强度改变。genistein和亚甲蓝落降低巨噬细胞凋亡率,并降低fluo-3荧光强度升高幅度。结论 1、胞外Ca^2 内流和内源性Ca^2 释放,主要是胞外Ca^2 内流使[Ca^2 ]i逐渐升高并促进巨噬细胞凋亡;2、PKC促进[Ca^2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cAMP抑制[Ca^2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cGMP、TPK降低[Ca^2 ]i升高幅度并稍抑制巨噬细胞凋亡。结果提示,[Ca^2 ]i是信使分子调控巨噬细胞凋亡的主要靶点。     

清开灵对小鼠腹腔巨噬细胞内游离钙及活性氧的作用

目的：动态观察清开灵（QKL）对小鼠腹腔巨噬细胞内活性氧及游离钙的作用。方法：原代培养小鼠腹腔巨噬细胞，分别以荧光探针二氯荧光素二酯（H2 DCFDA）和Fluo-3-AM标记细胞内活性氧及游离钙，通过激光共聚焦系统动态观察QKL的作用。