蛋白酶体功能障碍对多巴胺能PC12细胞的特异性损伤

目的探讨蛋白酶体抑制剂lactacystin对多巴胺能PC12细胞的特异性损伤.方法不同浓度的lactacystin(1、5、10、15和20μmoL/L)分别处理多巴胺能PC12细胞和胶质瘤U251细胞24 h,MTT法检测细胞活力;50 μmol/L的lactacystin处理U251细胞24 h,MTT法检测细胞活力;10、20 μmol/L lactacystin处理PC12细胞,Western Blot检测细胞内多泛素化蛋白含量;单胺氧化酶B抑制剂selegiline(500μmol/L)和特异性酪氨酸羟化酶抑制剂α-MT(1 mmol/L)提前4 h预处理PC12细胞,再与10 μmol/Llactacystin共同作用24 h,MTT法检测细胞活力,Western Blot检测多泛素化蛋白含量.结果Lactacystin呈剂量依赖性损伤多巴胺能PC12细胞,其对胶质瘤U251细胞无毒性作用,而且其毒性与细胞内多泛素化蛋白生成增加相关.用以增加细胞内多巴胺含量的selegiline和用以减少细胞内多巴胺含量的α-MT都导致lactacystin毒性增强.结论蛋白酶体功能障碍特异性损伤多巴胺能细胞,而其特征性的神经递质多巴胺在其易感性中的作用复杂.     

多巴胺能细胞在大鼠消化道不同部位分布的比较

目的比较正常大鼠消化道不同部位多巴胺能细胞的分布性差异。方法用免疫荧光组织化学法观察多巴胺转运蛋白(DAT)在正常大鼠的胃、十二指肠、回肠以及结肠的分布,提取正常大鼠上述部位组织总RNA,反转录成cDNA后,用酪氨酸羟化酶(TH)与DAT基因特异性引物进行聚合酶链反应(PCR),并做半定量检测。结果确定了多巴胺能细胞在正常大鼠胃、十二指肠、回肠以及结肠的具体分布情况。发现TH与DAT基因在消化道不同部位的表达有差异。结论正常大鼠消化道存在着大量多巴胺能细胞,它们可能通过分泌多巴胺来调节消化道的分泌与吸收功能。     

α-synuclein增加细胞对蛋白酶体抑制剂毒性的易感性

帕金森病（PD）是临床上常见的神经系统变性疾病之一,主要病理特征是黑质多巴胺能神经元变性缺失和细胞内出现特征性包涵体Lewy小体。近年来发现,α-synuclein基因突变可引起家族性PD,而α-synuclein蛋白是Lewy小体的主要成分,因此α-synuclein在PD发病机制中可能起重要作用。α-synuclein的基因突变及结构改变是PD的病因之一,α-synuclein蛋白代谢障碍亦可能与PD的发病密切相关。有研究表明,野生型和突变型α-synuclein均可通过泛素-蛋白酶体途径降解,可引起家族性PD的另两个基因Parkin和UCHL-1均与泛素-蛋白酶体系统（UPS）有关,在Lewy小体中亦有泛素和一些蛋白酶体成分聚集。因此,α-synuclein与蛋白酶体功能的关系及其在Lewy小体形成和多巴胺能神经元变性过程中的作用成为关注的热点。     

外源性犬尿喹啉酸对黑质多巴胺能神经元损伤保护作用的实验研究

目的：观察评价预先应用谷氨酸（Glu)受体拮抗剂犬尿喹啉酸（KYNA）对黑质多巴胺（DA）能神经元及神经传导纤维损伤的保护性作用。方法：雌性SD大鼠40只，随机分为4组，每组10只，应用江湾I型C立体定向仪，在单侧黑质致密部（SNc)及中脑被盖腹侧部（VTA），A组注射生理盐水，B组注射KYNA，C组注射KYNA和6－OHDA，KYNA先于6－OHDA 0.5h,D组注射6－OHDA。注射药物3d后，进行症状观察，2周后处死大鼠。切片HE染色观察黑质细胞的形态特点，冰冻切片免疫组化特殊染色观察TH阳性细胞及TH阳性纤维着色情况，实验数据分别采用方差分析以及秩和检验进行统计分析。结果：正常黑质细胞体形较大，富含黑色素颗粒，可见尼氏体。数据统计分析结果提示B组与A组之间无显著影响，P＞0．05。实验组C与A、B、D组比较均有显著性差异，P＜0．01。结论：外源性谷氨酸受体拮抗剂KYNA通过阻滞Glu受体能减轻6－OHDA诱导的黑质DA能神经元毒性损害。     

中央执行功能与单胺氧化酶A、多巴胺β羟化酶基因功能多态性的关联研究

目的 探讨中央执行功能与单胺氧化酶A(MAOA)和多巴胺β羟化酶(DBH)基因的相关性.方法 采用国际上广泛采用的认知测验范式,测量西安某大学719大学新生的中央执行功能成绩,分析了MAOA基因启动子区的30-bp可变串联重复序列和和DBH基因启动子区的-C1021T多态性功能位点与中央执行功能子成分(抑制、转换、刷新)的相关性.结果 MAOA基因的30-bp可变串联重复序列在男性群体中3r基因型个体抑制测验的反应时[(671.32±9.77)ms]短于4r基因型个体抑制测验的反应时[(706.61±14.58)ms],且差异有统计学意义(x2=4.82,P=0.03),3r基因型个体刷新测验的刷新数目多于[(47.85±0.69)个]4r基因型个体的刷新数目[(45.13±1.05)个],并差异有统计学意义(x2=4.50,0.03);DBH基因的-1021C/T位点在男性和女性人群中均与央执行功能的3个子成分无显著相关性(P＞0.05).结论 MAOA基因启动子区的30-bp可变串联重复序列在男性群体中与抑制和刷新功能有显著相关性,而DBH基因的-1021C/T位点男女不同性别中均与抑制、转换和刷新3子成分无显著相关性.

Abstract：

Objective To explore the associations of the sub-components of central executive function ( inhibition, shifting and updating) with monoamine oxidase A ( MAOA ) and dopamine-β-hydroxylase ( DBH ).Methods The cognitive performance of the 719 healthy individuals,who were selected randomly from an university in Xi' an,was assessed by the world wide used paradigms of central executive function. Then, a populationbased study was performed to analysis the associations of central executive function with the 30-bp variable number tandem repeat and -C1021T in the promoters of MAOA and DBH ,respectively. Results The results indicated that the 30-bp variable number tandem repeat of MAOA was associated with the performance of inhibition and updating ( x2 = 4.82,4.50; P= 0. 03,0.03 ) in males. The reaction time of inhibition test was shorter in 3r genotype group ( (671.32 ±9.77 )ms) than that in 4r genotype group ( (706.61 ± 14.58 ) ms) ,and the indivudals with 3r genotype (47.85 ±0. 69) had more updating numbers than the indivudals with 4r (45.13 ± 1. 05). However, there was no significant association of the -C1021T and DBH with the components of excutive function (P＞0.05). Conclusion The present study suggests that the 30-bp variable number tandem repeat of MAOA contributs to the inhibition in males while -C1021T of DBH has no striking effects on the components of executive function in males and females.     

甘草黄酮对MPTP帕金森病小鼠多巴胺能神经元的影响

目的 观察甘草黄酮对MPTP帕金森病（PD）小鼠多巴胺（DA）能神经元的影响. 方法 制作MPTP小鼠PD模型,随机分为3组：模型组（每日一次腹腔注射给予25 mg/kg MPTP,连续5次）、空白组（每日一次腹腔注射给予等量生理盐水）和甘草黄酮处理组（除给予MPTP外,每日一次灌胃给予30 mg/kg甘草黄酮,连续7次）.采用行为学观察、免疫组织化学和免疫蛋白印记法观察模型小鼠的行为学表现、DA能神经元数量和腹侧中脑酪氨酸羟化酶（TH）蛋白表达水平.并观察甘草黄酮处理后对上述指标的影响. 结果 模型组小鼠出现PD典型行为学表现,黑质致密部DA能神经元数量（56.2 ±3.5vs152.4±8.6）和腹侧中脑TH含量（3.1 ±0.5 vs14.7±0.9）较对照组显著下降（P＜0.01）.甘草黄酮处理组小鼠行为表现较轻.与模型组相比,黑质致密部DA能神经元的丢失和腹侧中脑TH含量下降均明显改善（P＜0.01）. 结论 甘草黄酮对MPTP帕金森病小鼠DA能神经元具有神经保护效应.     

蛋白酶体抑制剂乳胞素对大鼠黑质多巴胺能神经元氧化损伤的作用

观察蛋白酶体抑制剂乳胞素对大鼠黑质多巴胺能神经元死亡和氧化损伤的作用,并探讨氧化损伤在蛋白酶体抑制剂诱导多巴胺能神经元死亡中的作用。     

蛋白酶体抑制剂对小鼠黑质多巴胺神经元的毒性作用

目的:观察蛋白酶体抑制剂对小鼠黑质多巴胺神经元的毒性作用.方法:8周龄C57BL/6小鼠随机分组:磷酸盐缓冲液(PBS组)和lactacystin组,二种制剂分别单侧立体定向注射于中脑前脑束(Middle forebrain bundle);12周龄时灌注取脑分离纹状体,采用HPLC法测多巴胺、5-HT及代谢产物,取中脑观察黑质区多巴胺能神经元变性及包涵体样物质形成情况.结果:Lactacystin组同侧黑质区多巴胺细胞数减少51%,并可见泛素染色阳性的类包涵体样物质形成,同侧纹状体多巴胺(DA)及其代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)浓度分别减少52%、46%和51%,而5-羟色胺(5-HT)及5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)浓度无改变.结论:蛋白酶体抑制剂可引起选择性黑质区多巴胺能神经元变性,并可能导致细胞内异常蛋白质聚集.     

氨基胍对帕金森病小鼠黑质内多巴胺能神经元的保护作用

目的：观察诱导型一氧化氮合酶（iNOS）特异性抑制剂氨基胍（AG）对帕金森病模型小鼠黑质内多巴胺（DA）能神经元的影响。方法：采用Lau法制作PD小鼠模型,通过行为学观察和免疫印迹法,观察PD小鼠模型的行为学表现,及腹侧中脑（包括VTA和SN）iNOS、酪氨酸羟化酶（TH）表达水平的变化。并观察给予iNOS抑制剂AG后对上述变化的影响。结果：与对照小鼠相比,PD小鼠出现PD典型的行为学表现,腹侧中脑TH含量下降约77%,同时i-NOS含量大幅度升高。经iNOS抑制剂AG处理的PD小鼠行为表现明显减轻,腹侧中脑TH含量仅下降约41%,腹侧中脑iNOS含量也较模型组明显为低。结论：iNOS的表达与PD模型小鼠黑质内DA能神经元的丢失有关;AG可能对PD模型小鼠黑质内DA能神经元有保护作用。     

COX-2对帕金森病小鼠黑质内多巴胺能神经元的毒性作用

目的:观察环氧合酶-2(COX-2)对帕金森病(PD)模型小鼠黑质内多巴胺(DA)能神经元的损害作用.方法:采用Lau法制作PD小鼠模型,通过行为学观察,免疫组织化学和免疫蛋白印记法,观察PD小鼠模型的行为学表现,黑质致密部COX-2免疫反应阳性细胞,DA能神经元数量和腹侧中脑(包括VTA和SN)COX-2,酪氨酸羟化酶(TH)表达水平的变化,并观察给予COX-2抑制剂后对上述变化的影响.结果:与对照组小鼠相比,PD组小鼠出现PD典型的行为学表现,黑质致密部DA能神经元和腹侧中脑TH含量分别下降约63%和77%.同时,黑质致密部COX-2阳性细胞和腹侧中脑COX-2含量有大幅升高.经COX-2抑制剂处理的PD小鼠行为表现较轻,黑质致密部DA能神经元和腹侧中脑TH含量仅下降约37%和41%.与单纯PD小鼠比较,黑质致密部COX-2阳性细胞和腹侧中脑COX-2含量明显下降.结论:COX-2对PD模型小鼠黑质内DA能神经元有毒性作用.     

Protection of PC12 Cells against Superoxide-induced Damage by Isoflavonoids from Astragalus mongholicus

Objective To further investigate the neuroprotective effects of five isoflavonoids from Astragalus mongholicus on xanthine （XA）/xanthine oxidase （XO）-induced injury to PC12 cells. Methods PC12 cells were damaged by XA/XO. The activities of antioxidant enzymes, MTT, LDH, and GSH assays were used to evaluate the protection of these five isofavonoids. Contents of Bcl-2 family proteins were determined with flow cytometry. Results Among the five isoflavonoids including formononetin, ononin, 9, 10-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-glucoside, calycosin and calycosin-7-O-glucoside, calycosin and calycosin-7-O-glucoside were found to inhibit XA/XO-induced injury to PC12 cells. Their ECs0values of formononetin and calycosin were 0.05 μg/mL. Moreover, treatment with these three isoflavonoids prevented a decrease in the activities of antioxidant enzymes, superoxide dismutase （SOD） and glutathione peroxidase （GSH-Px）, while formononetin and calycosin could prevent a significant deletion of GSH. In addition, only calycosin and calycosin-7-O-glucoside were shown to inhibit XO activity in cell-free system, with an approximate IC50 value of 10 μg/mL and 50 μg/mL. Formononetin and calycosin had no significant infuence on Bcl-2 or Bax protein contents. Conclusion Neuroprotection of formononetin, calycosin and calycosin-7-O-glucoside may be mediated by increasing endogenous antioxidants, rather by inhibiting XO activities or by scavenging free radicals.     

囊泡单胺类转运体功能抑制对PC12细胞的毒性及抗氧化剂的干预

目的：研究囊泡单胺类转运体(VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬瘤(PC12)细胞产生的内源性毒性及抗氧化剂的保护作用。方法：用流式细胞仪观察VMAT功能抑制以及不同干预方法对PC12细胞存活的影响和细胞死亡方式。结果：单独加入VMAT抑制剂利血平对PC12细胞无毒性作用；利血平协同多巴胺明显增加多巴胺的毒性，使同样浓度的多巴胺诱发PC12细胞的凋亡率明显增加。加入还原型谷胱甘肽(GSH)、二硫苏糖醇(DTF)和脉冲1号使PC12细胞的生存率明显提高。结论：VMAT功能抑制触发了多巴胺内源性毒性可诱发细胞凋亡，具有抗氧化作用的制剂有细胞保护作用。     

Effects of Senegenin against Hypoxia/Reoxygenation-Induced Injury in PC12 Cells

Objective:To investigate the effect and the potential mechanism of Senegenin(Sen) against injury induced by hypoxia/reoxygenation(H/R) in highly differentiated PC12 cells.Methods:The cultured PC12 cells were treated with H/R in the presence or absence of Sen(60 μmol/L).Four groups were included in the experiment:control group,H/R group,H/R+Sen group and Sen group.Cell viability of each group and the level of lactate dehydrogenase(LDH) in culture medium were detected for the pharmacological effect of Sen.Hoechst 33258 staining and annexin V/propidium iodide double staining were used to analyze the apoptosis rate.Moreover,mitochondrial membrane potential(△Ψm),reactive oxygen species(ROS) and intracellular free calcium([Ca~(2+)]i) were measured by fluorescent staining and flow cytometry.Cleaved caspase-3and activity of NADPH oxidase(NOX) were determined by colorimetric protease assay and enzyme linked immunosorbent assay,respectively.Results:Sen significantly elevated cell viability(P0.05),decreased the leakage of LDH(P0.05) and apoptosis rate(P0.05) in H/R-injured PC12 cells.Sen maintained the value of△Ψm(P0.05) and suppressed the activity of caspase-3(P0.05).Moreover,Sen reduced ROS accumulation(P0.05) and[Ca~(2+)]i increment(P0.05) by inhibiting the activity of NOX(P0.05).Conclusion:Sen may exert cytoprotection against H/R injury by decreasing the levels of intracellular ROS and[Ca~(2+)]_i,thereby suppressing the mitochondrial pathway of cellular apoptosis.     

氯胺酮对谷氨酸损伤PC12细胞株多巴胺释放的影响

目的 观察氯胺酮持续存在对谷氨酸损伤前、后的神经元样PC12细胞株释放多巴胺的影响。方法 制备谷氨酸损伤前、后的神经元样PC12细胞株模型，采用HPLC技术检测加氯胺酮前、后细胞释放的多巴胺的变化。结果 氯胺酮无论是单独与细胞孵育，或者与谷氨酸共同处理，均能够抑制细胞释放多巴胺，并呈剂量依赖性。结论 氯胺酮持续存在对PC12细胞多巴胺的释放产生抑制作用。     

硫化氢对H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨硫化氢对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用.方法 以H2O2损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型,甲氮甲唑蓝法检测细胞增殖状况;Hoechst荧光染色观察细胞形态和核形态;碘化丙啶染色、流式细胞术检测细胞凋亡.结果 硫化氢可明显减少H2O2诱导的PC12细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的细胞数;200和400 μmol/L硫化氢均可降低200和400 μmol/L H2 O2作用24 h后对PC12细胞生长的抑制率,明显抑制200和400 μmol/L H2O2作用24 h后对PC12细胞凋亡的诱导作用.结论 硫化氢对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用.     

丹酚酸B对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的研究丹酚酸B（Salvianolic acid B,Sal B）对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法以无糖培养的PC12细胞建立模型,采用甲基噻唑基四唑检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测碘化丙啶单染的PC12细胞凋亡;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果 Sal B可明显抑制缺糖对PC12细胞诱导的损伤,在0.1-100μmol/L浓度范围内呈一定的量效关系;流式细胞术显示Sal B显著降低缺糖诱导的PC12细胞凋亡;Western blotting结果显示Sal B显著降低缺糖诱导的活性Caspase-3蛋白的表达。结论在0.1-100μmol/L浓度范围内,Sal B对缺糖损伤的PC12细胞具有保护作用,其保护机制可能与抑制Caspase-3表达有关。     

BDNF基因修饰淋巴细胞培养上清对 PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

[目的] 研究脑源性神经营养因子基因( brain- derived neurotrophic factor, BDNF gene)修饰淋巴细胞对 PC12细胞氧化应激损伤的保护作用.[方法] MTT法检测 H2O2和多巴胺( dopamine, DA)对 PC12细胞生长的抑制率, Hoechst染色和 PI染色流式细胞仪( flow cytometry, FCM)检测 H2O2和 DA对 PC12细胞凋亡的诱导作用.[结果] BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞的培养上清可降低 H2O2和 DA对 PC12细胞生长的抑制率并能抑制 H2O2和 DA诱导 PC12细胞凋亡.[结论] BDNF基因修饰淋巴细胞的培养上清对 PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用.     

赤藓糖醇对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护机制

目的 探讨赤藓糖醇对PC12细胞氧化损伤的保护机制.方法 用H202造成PC12细胞氧化损伤模型,采用Western-blot的方法检测赤藓糖醇对Caspase-9、Caspase-12、Hsp70、TXNIP蛋白表达的影响.结果 赤藓糖醇可抑制H2O2损伤PC12细胞的Caspase-9表达(P＜0.05),对Caspase-12、Hsp70、TXNIP的表达没有明显影响.结论 赤藓糖醇可通过抑制线粒体途径的细胞凋亡发挥其抗氧化作用.