悬浮细胞图像的计数方法研究

悬浮细胞计数一直是细胞培养技术的重要工具.从悬浮细胞图像的灰度特点出发,探索并实现了适合悬浮细胞图像的计数方法:通过预处理,Canny边缘检测及形态学处理这三个步骤来完成分割,对分割结果采用种子点法进行区域计数,再针对所有含有种子点的区域,计算其内部灰度均值,用于区分区域是活细胞还是死细胞.经实验证明,该计数方法误差小,速度快,很大程度上减少了细胞计数的工作量.     

ACA的间接免疫荧光法显示多种动、植物细胞着丝点

用硬化性肌膜炎病人ACA血清的间接免疫荧光法显示了多种动、植物细胞的着丝点,其中包括Hep-2,文昌鱼、水螅、螽蜥、蚯蚓、草履虫、洋葱、大蒜,吊兰、蚕豆和葫芦藓等。表明在进化不同阶段的动、植物细胞均有同源的、高度保守性的着丝点蛋白。     

彩色切片细胞的识别与计数研究

采用基于彩色的图像处理方法，对边界模糊，颜色不均匀并有彩色连带组织的细胞切片实现了分割和计数，提出了一种新的细胞计数方法，其计数准确性极高，对颗粒状目标，尤其是对医学图像中的彩色切片细胞的计数具有重大意义。     

幽门螺杆菌与慢性胃炎及十二指肠炎的关系：附376例分析

应用快速尿素酶试验和胃粘膜直接印片的方法，对３７６例确诊为慢性胃炎患者（其中１２３例合并十二指肠炎）的幽门螺杆菌检测，可获得ＨＰ与慢性胃炎及十二指肠炎的关系。慢性胃炎ＨＰ的检出率４９．４％，活动性胃炎ＨＰ的检出率８１．７％（Ｐ＜０．００１），活动性十二指肠炎ＨＰ的检出率８７．５％（Ｐ＜０．００１）．结果表明，ＨＰ与慢性胃炎尤其是活动性胃炎及活动性十二指肠炎有极密切的关系；     

缩窄性十二指肠乳头炎100例临床观察

缩窄性十二指肠乳头炎病因复杂,症状、体征无特异性,合并症多,容易漏诊及误诊.我科自2002年到2007年经胆总管探查及经鼻内镜逆行胆道造影(ERCP)检查及术中胆道造影等方法确诊缩窄性十二指肠乳头炎100例,对其诊断和治疗作初步探索,兹介绍如下.     

一种基于Matlab 的血红细胞计数的工程方法

提出了一种简便的血红细胞计数的工程方法,对血液图像依次进行灰度化、二值化、中值滤波、逻辑运算、形态学处理、细胞边界识别,最后进行了细胞数目统计． 实验结果表明: 这种改进的方法能使血液图像中的红细胞被有效地分割出来,成功地解决了目标粘连现象对后续分析、测量产生的干扰问题,算法基于Matlab平台,语言简便可行.与分水岭算法及基于ImageJ 软件的人工计数的结果比较,该方法的统计结果更准确,误差在5%以内,是一种有效的工程图像处理方法．     

基于无透镜全息显微技术的微流控芯片细胞计数方法研究

目的 解决细胞计数领域即时检测发展需求与传统显微镜和流式细胞仪不便于携带的矛盾。方法 结合同轴无透镜全息显微与微流控技术,设计一种只有芯片大小的细胞计数装置。该装置利用S型微通道和脉冲进样方式,解决了全息拍摄中曝光时间与样品高速流动的矛盾。利用角谱理论得到衍射传递函数,根据图像传感器采集的原始全息图像重建物面清晰的显微图像。使用阈值分割算法得到细胞的数量和大小信息。结果 用直径为7μm和15μm微球代替细胞进行实验验证,本方法的分类及计数结果相对误差不超过5.7%。每帧图像的处理时间为5 s,可以检测大约500个细胞。结论 本系统能够为直径7μm以上的细胞进行计数检测,为即时细胞检测提供了一种新的解决方法。     

脂多糖诱导星形胶质细胞炎性反应的机制研究

目的 探讨脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞产生炎性反应及其可能机制.方法 原代培养并鉴定C57BL/6小鼠大脑皮质星形胶质细胞,GFAP免疫荧光染色进行鉴定,1μg/mL LPS刺激第2代星形胶质细胞,正常组细胞作为对照,Griess法检测NO的释放,ELISA检测细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平,免疫荧...     

鹌鹑视觉通道的组织学研究--视神经纤维、神经胶质细胞的计数和直径谱

对鹌鹑(Coturnix coturnix)视神经组织结构和数量进行的研究发现四根视神经的纤维平均为407 492根，神经纤维的形状不规则．纤维直径范围为O．103μm～1．029μm，峰直径为O.535μm．神经胶质细胞(glia cell)数为144 064个．细胞的直径范围为2．02μm～4.25μm．峰直径为3．71μm，四根视神经的神经纤维和胶质细胞的直径谱都是单峰的．经统计分析，视神经的中央区和周围区的神经纤维的密度、神经胶质细胞的密度及直径大小均无显著的差异。     

硬化性肌膜炎患者血清ACA的发现及对小鼠细胞着丝点的研究

首次在硬化性肌膜炎患者血清中发现有抗着丝点抗体(ACA),可使 Hep-2间期细胞核及 M 期细胞染色体着丝点显示分散的荧光斑点.用 ACA 血清对小鼠几种器官的冰冻切片或涂片进行免疫荧光研究,可见无论幼龄或老龄小鼠的肝、十二指肠、脑皮层细胞及老龄小鼠睾丸生精细胞均有明亮的荧光斑点.绒毛顶端细胞呈均匀性荧光.     

页岩纹层与破裂方式实验研究

页岩纹层发育,微观非均质性强,页岩破裂方式受多种因素控制。以川南地区X101井龙马溪组深层页岩为研究对象,利用岩芯、薄片、测井资料、X-射线衍射与CT扫描等手段,结合单轴压缩与常规三轴压缩实验,系统研究了页岩破裂方式与纹层产状、矿物组成的关系。结果表明,主压应力垂直纹层方向的单轴压缩岩样形成张拉劈裂破坏,产生80°左右的垂直缝;三轴压缩实验中,主压应力垂直于纹层的岩样形成剪切破坏,裂缝与纹层以45°～65°高角度斜交,主压应力与纹层45°斜交的岩样以沿纹层面的剪切滑移破坏为主,主压应力平行纹层的岩样产生共轭剪切破坏,两者形成的裂缝与纹层呈10°～45°低角度斜交。对于不同纹层倾角的岩样,杨氏模量均与石英含量呈显著正相关,与黏土矿物呈显著负相关的关系,抗压强度与石英、黏土矿物含量的相关性受不同纹层倾角的影响。硅质纹层发育单层厚度大将增强页岩力学性质。     

原发性肝癌组织中MC与MV计数关系

目的 研究原发性肝癌PHC）组织中肥大细胞（MC）和微血管（MV）计数及其临床病理意义,探讨二者之间的相互关系.方法 应用ABC免疫组化法对47例PHC手术切除标本常规石蜡包埋切片分别检测MV和MC,并在高倍镜下计数.结果 47例PHC癌组织中MV、MC计数均显著高于癌旁组织（MV：67.30±13.68 vs.37.20±10.58,p<0.01;MC：15.46±4.54 vs.8.08±2.03,p<0.01）;术前AFU（α-岩藻糖）≤10　μg/mL的病例及伴转移病例癌组织MV计数显著高于AFU>10 μg/mL病例及无转移病例（AFU：70.41±13.03 vs.59.97±12.69,p<0.05;转移：73.50±13.77个/HP vs.64.10±12.68,p<0.05）,MC和MV在PHC中的计数与PHC其他主要临床病理特征无明显关系;癌组织中MC计数与MV计数呈密切正相关（r=0.348,p<0.05）.结论 MC,MV计数与PHC的发生、进展关系密切,且MC具有显著的促血管生成作用.     

染色体标本制备在骨髓MSCs核型鉴定中的研究

选取对数生长期人骨髓间充质干细胞，用秋水仙素阻断细胞分裂中期，控制秋水仙素的终浓度和作用时间、低渗时间及胰酶消化显带时间，比较染色体标本制备效果。结果显示，秋水仙素的终浓度0．2μg／ml和作用时间6h，低渗时间35min及胰酶消化时间20s时可制备适合的染色体标本，经核型鉴定为正常二倍体细胞。从而探索出骨髓间充质干细胞染色体制备的适合条件，为骨髓间充质干细胞的进一步研究提供了理论依据和实验基础。     

人类心房肌细胞的原代培养与鉴定

探索人心房肌细胞的原代培养方法。取心外科手术患者(5/12~57岁,平均6.5岁)常规切除的右心耳,利用酶消化法原代培养心房肌细胞并进行光镜和免疫细胞化学鉴定。结果急性分离的细胞成圆形,1 d后开始贴壁。贴壁的心肌细胞部分聚集成团,成梭形或三角形。随着培养时间延长,细胞逐渐向四周伸展。免疫细胞化学分析显示90%以上的细胞呈横纹肌肌动蛋白染色阳性。说明利用酶消化法成功培养出人心房肌细胞,为深入研究人心房肌细胞基因与功能打下了基础。     

自体肝癌细胞裂解物致敏的树突状细胞诱导抗肝癌免疫的体外研究

从术后肝癌病人的外周血中诱导树突状细胞（DC），并经自体肝癌细胞裂解物致敏DC，用流式细胞仪、^3H-TdR掺入法及MTT法检测了DC表面分子的表达、DC刺激T细胞的增殖效应及DC诱导的T细胞对肝癌细胞的杀伤作用，进而比较经自体肝癌细胞裂解物致敏的DC与其它条件下的DC功能的差异．结果显示：肝癌细胞裂解物致敏DC的功能较未致敏DC显著提高，其可诱导自体混合淋巴细胞强的增殖效应，同时诱导的T细胞对自体肝癌细胞有较强的杀伤率．     

人胎儿骨髓间充质干细胞的分离及生物学鉴定

通过原代细胞培养,从引产胎儿骨髓组织中分离干细胞,然后进行生物学鉴定,旨在体外建立培养胎儿骨髓干细胞的有效方法,为进一步研究干细胞奠定基础．本研究对四个月的引产胎儿骨髓组织进行原代细胞培养,采用贴壁筛选法,在含有15％胎牛血清的L-DMEM／IMDM(1:1)混和培养液中培养,7 d后细胞可长满瓶底．显微镜下观察,细胞形态均一,呈长梭形．传代后,在8代以内的细胞贴壁能力较强,生长速度较快．将其命名为BMMS-03．在第3代时,对培养的细胞进行了于细胞标志物的生物学鉴定,采用流式细胞仪对经免疫荧光染色的细胞进行检测．结果显示:97．2％的细胞呈CD105阳性反应,66．0％的细胞呈CD106阳性反应, 9．2％的细胞呈CD34阳性反应．阴性对照组阳性反应为0．5％．生物学鉴定的初步结果提示,从胎儿骨髓组织中分离培养成功的细胞为骨髓间充质干细胞,其细胞形态学特征、CD105 、CD106 和CD34-的检测结果均符合间充质干细胞的特征．本研究成功地建立了体外培养胎儿骨髓间充质干细胞的有效方法,所获得的间充质干细胞纯度较高,增殖较快,适用于干细胞生物学和组织工程学的研究．     

抗小鼠雄性特异性抗原（H—Y抗原）单克隆抗体的研究

将经Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄鼠脾细胞免疫的同系雌鼠脾细胞与Ｂａｌｂ／ｃ小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０细胞进行融合,以雌、雄鼠脾细胞作细胞性ＥＬＩＳＡ、间接免疫荧光和精细胞间接免疫荧光技术进行筛选,共建立了５株稳定分泌抗Ｈ－Ｙ抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。该杂交瘤细胞可在Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ与Ｂａｌｂ／ｃ杂交子一代雌性小鼠腹腔生长并形成腹水性抗体。鉴定结果证明这些抗体具有较好的特异性。     

大鼠肝陷窝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％ Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离陷窝细胞（pit cell）,用分化抗原簇8（cluster of differentiation 8,CD8）和分化抗原簇56（cluster of differentiation 56,CD56）的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RD、分散的肝脏细胞及分离的肝陷窝细胞,用RT—PCR定量肝陷窝细胞的CD8和CD56mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝陷窝细胞的CD8和CD56蛋白．初步证实,分离的肝陷窝细胞中,CD8和CD56阳性细胞占95％以上;PH后各时间点分离的陷窝细胞的CD8和CD56的mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离陷窝细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用．     

固定化恶臭假单胞菌细胞生产丙烯酰胺的研究

本文以海藻酸钙包埋法制备固定化恶臭假单胞菌细胞,以分批反应、间歇反应及连续柱式反应转化0.3mol/l 丙烯晴溶液来生产丙烯酰胺.丙烯晴溶液用0.05mol/l tris—HCl 缓冲液调至pH 值8.0,控制温度为5℃.间歇反应在恒温水浴摇床上以100r/min 振荡进行,13h 后丙烯酰胺浓度积累为30%,丙烯晴的转化率在95%以上.连柱柱式反应在带夹套的串联柱式反应器中进行,以每克湿固定化细胞每小时1 ml 的流速输入底物溶液,可有95%以上的丙烯晴被转化.酶柱实测半衰期达1200 h 以上.反应产物经分离提取后得到白色针状晶体,经红外光谱等鉴定,确认它为丙烯酰胺.