衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1对豚鼠结膜炎衣原体及E型沙眼衣原体的抑制作用

目的 探讨豚鼠结膜炎衣原体（GPIC）噬菌体衣壳蛋白Vp1对GPIC及E型沙眼衣原体的抑制作用,为沙眼衣原体感染的治疗提供新的思路。 方法 用Vp1-pET30a（+）重组质粒菌表达Vp1蛋白,Western印迹法鉴定蛋白,透析袋纯化蛋白,BCA法测定蛋白浓度,将GPIC、E型沙眼衣原体分别与Vp1蛋白、Tris甘氨酸溶液、S蛋白及培养液室温孵育3 h,衣原体培养过程中分别 加入相同浓度的上述液体,72 h或48 h后,免疫荧光计数包涵体数。 结果 GPIC在Vp1蛋白组、Tris甘氨酸溶液组、S蛋白组及培养液组培养72 h,包涵体计数分别为5.0 ± 1.5、24 ± 1.2、25 ± 1.7及25 ± 1.5,各组包涵体数比较,差异有统计学意义（F = 476.632,P < 0.05）。Vp1蛋白组GPIC包涵体数显著低于Tris甘氨酸溶液组、S蛋白组及培养液组（P < 0.05）,而后3组之间差异无统计学意义（P > 0.05）。与阴性对照组（培养液组）相比,Vp1蛋白对GPIC的抑制率为（80.2 ± 3.99）%。此外,Vp1蛋白对E型沙眼衣原体的抑制率为（77.2 ± 1.79）%,t检验示Vp1对GPIC的作用与对E型沙眼衣原体的作用差异无统计学意义（t = 2.057,P > 0.05）。 结论 Vp1蛋白可明显抑制GPIC的感染,同时对E型沙眼衣原体有相似的抑制作用。     

衣原体GPIC噬菌体衣壳蛋白Vp1的克隆、表达和鉴定

目的获得衣原体GPIC噬菌体衣壳蛋白Vp1基因及其蛋白。方法提取噬菌体φCPG1及其核酸，并对Vp1克隆、表达，鉴定。结果所获得的Vp1基因片段经测序，长度为1661bp，检索确认其序列与Genebank一致。对重组质粒进行诱导表达，SDS-PAGE和蛋白质印迹均显示获得相对分子质量约62000的衣原体GPIC噬菌体衣壳蛋白Vp1。结论成功获得了噬菌体衣壳蛋白Vp1。为进一步研究打下基础。     

沙眼衣原体持续感染的血清抗体检测

生殖道沙眼衣原体持续感染是沙眼衣原体一种特殊的生存状态,是引起输卵管堵塞及输卵管性不孕的主要原因.血清沙眼衣原体IgG特异性较差,不能鉴别沙眼衣原体持续感染与既往感染,联合高度敏感性C反应蛋白可判断沙眼衣原体持续感染并反映了输卵管阻塞高风险;血清沙眼衣原体热休克蛋白60-IgG的特异性较好,被认为是沙眼衣原体持续性感染及输卵管病变的良好指标,联合抗酪蛋白酶P抗体检测可明显增加其敏感性.尽管血清学检测目前尚未用于沙眼衣原体持续感染的直接诊断,但在特定人群如输卵管性不孕及异位妊娠的女性具有重要的应用价值.若能进一步提高血清沙眼衣原体-IgG及沙眼衣原体热休克蛋白60-IgG检测的特异性、敏感性,能极大地提高其在沙眼衣原体持续感染诊断中的应用价值.     

连接酶链反应检测尿标本中沙眼衣原体

采用连接酶链反应（LCR）检测尿标本中沙眼衣原体（CT），并对阳性标本以聚合酶链反应（PCR）、Clearview法对照，结果发现LCR检出的44例均为真阳性，表明LCR是检测CT的一种非侵入性、敏感性及特异性很高的方法。     

沙眼衣原体噬菌体衣壳蛋白Vp1血清抗体的检测

衣原体噬菌体作为一种侵袭衣原体的病毒可使衣原体解体,具有抗感染的作用.目前已经发现6种衣原体噬菌体,其上的Vp1蛋白为衣原体噬菌体的衣壳蛋白.是主要的结构蛋白.该蛋白高度保守并可诱导机体产生抗体反应,适用于作为噬菌体的诊断抗原[1].沙眼衣原体是引起非淋球菌性尿道炎的主要病原体,其诊断困难、并发症严重.目前尚未在沙眼衣原体中发现噬菌体的存在.我们以豚鼠结膜炎衣原体(GPIC)噬菌体(PhiCPGI)的莺组Vp1纯化蛋白为抗原,通过ELISA法初步了解Ct感染者血清中针对Vp1蛋白的抗体,并用Western印迹法验证该抗体的特异性,推测Ct感染者血清中Vp1蛋白的存在,为沙眼衣原体与噬菌体的研究提供参考.     

泌尿生殖道沙眼衣原体感染者血清抗衣原体免疫优势蛋白抗体检出率研究

目的:对泌尿生殖道沙眼衣原体感染者血清抗衣原体免疫优势蛋白抗体的检测展开研究分析。方法:随机选取接受治疗的50名泌尿生殖道沙眼衣原体感染患者、50名泌尿生殖无沙眼衣原体感染患者,对临床数据进行统计学分析,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对两组病例血清中抗外膜蛋白复合物B蛋白c端肽(Omc Bc)、抗衣原体质粒编码蛋白3(Pgp3)、抗热休克蛋白60(HSP60)以及抗ct841编码蛋白(CT841)等抗体蛋白进行检测。结果:经GST Magbeads纯化处理后的GST-Omc Bc、GST-Pgp3、GSTHSP60、GST-CT841以及空质粒表达的GST蛋白于SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色,均呈现清晰目的条带。感染组血清中检出Pgp3抗体36例(72.0%),检出Omc Bc抗体23例(46.0%),检出CT841抗体19(38.0%),检出HSP60抗体12例(24.0%);未感染组血清中仅检出HSP60抗体3例(6.0%);两组检测结果对比,数据差异具有统计学意义(P0.05)。结论:泌尿生殖道沙眼衣原体感染者血清抗衣原体免疫优势蛋白抗体检测,抗衣原体质粒编码蛋白3是抗原性较强、检出率较高的衣原体蛋白之一,抗热休克蛋白60是抗原性较弱、检出率较低的衣原体蛋白之一。     

沙眼衣原体临床株体外药物敏感性检测

近年来,有关沙眼衣原体临床株耐药的报道日益增多^[1~5],涉及的抗菌药物包括大环内酯类、四环素类和喹诺酮类.部分耐药株被证实与临床沙眼衣原体感染治疗失败有关.     

连接酶链反应检测男性尿标本中沙眼衣原体

目的 评价连接酶链反应（LCR）检测男性尿标本中沙眼衣原体（CT）的敏感性和特异性。方法 取性病专科门诊162例男性就诊者尿道拭子作CT培养;同时取患者晨起或较长时间（2h以上）不排尿后的首次尿（FVU）标本,用质粒LCR检测CT。对培养和质粒LCR结果相异的标本,用另一针对CT主要外膜蛋白基因的LCR进行确证,参照“扩大的金标准”来确定检测结果。结果 质粒LCR检测的敏感性和特异性分别为100％和99．2％,而培养法分别为82．8％和100％。讨论 LCR是一种既敏感又特异的CT诊断方法。用尿标本作检测对象,可避免取尿道标本给患者带来的痛苦,可作为筛检男性CT感染的一种非损伤性方法。     

生物信息学分析辅助合成、表达噬菌体Chp3 Vp1全基因的研究

目的取得在衣原体感染中具有重要意义且高度保守的衣原体噬菌体Chp3衣壳蛋白Vp1蛋白。方法以生物信息学技术分析设计、合成Chp3Vp1基因,并对Vp1基因进行克隆、表达、提纯。结果获得了经过测序鉴定的Vp1基因,其蛋白序列与Genebank相一致。诱导表达后,SDS-page和Western Blot均显示获得约55kDa处的衣原体噬菌体Chp3衣壳蛋白Vp1。结论顺利获得高度保守而特异的衣原体噬菌体Chp3衣壳蛋白Vp1。     

泌尿生殖道沙眼衣原体感染者血清抗衣原体免疫优势蛋白抗体的检测

【摘要】 目的 检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染者血清中的抗衣原体质粒编码蛋白3（Pgp3）、抗外膜蛋白复合物B蛋白C端肽（OmcBc）、抗ct841编码蛋白（CT841）和抗热休克蛋白60（HSP60）抗体。 方法 将编码上述4种蛋白基因的重组质粒和空质粒转化入大肠杆菌,IPTG诱导表达,并用谷胱甘肽磁珠进行纯化后包被ELISA孔板。收集天津医科大学总医院性病门诊泌尿生殖道沙眼衣原体感染者和未感染者血清各20份。ELISA法检测血清中上述蛋白抗体。 结果 20份沙眼衣原体感染者血清中Pgp3、OmcBc、CT841和HSP60抗体的检出率分别是14例（70%）、9例（45%）、8例（40%）、5例（25%）;20份无沙眼衣原体感染者血清中,仅1例检测到HSP60抗体。 结论 上述4种衣原体蛋白中,Pgp3的抗原性最强,抗体检出率最高;HSP60的抗原性最弱,抗体检出率最低。 【关键词】 衣原体,沙眼; 监控蛋白60; Pgp3; OmcB; CT841     

反向斑点杂交技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体及基因分型

目的 建立反向斑点杂交技术,对泌尿生殖道沙眼衣原体感染进行检测和基因分型。方法 用Oligo软件设计寡核苷酸探针,采用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增omp1基因的VS1-VS2序列,反向斑点杂交技术对沙眼衣原体进行检测和基因分型。结果 巢式PCR扩增omp1基因的VS1-VS2序列的敏感性与质粒PCR符合率为98.2%(56/57)。优选出11条型特异性(A、B+Ba、C、D、E、F、G、H、I、J和K)和3条群特异性寡核苷酸探针:B群(B、Ba、D和E型),C群(A、C、H、I、J和K型)和中间群(F和G型)。特异性经过基因库中的BLAST程序比较和试验优化,结果显示各探针均与标准株呈特异性杂交。56例VS1-VS2 PER阳性的临床标本杂交法检测均阳性,共检出59株沙眼衣原体,包括8个基因型,其中以E、F、D和H型为主,占77.9%,分别为25.4%,22.0%,16.9%和13.6%。发现3例混合感染占5.4%,分别为D/E、D/F和F/K。结论 反向斑点杂交技术简便且快速,可直接对临床标本沙眼衣原体进行检测和基因分型。     

微量细胞培养法检测疑似非淋菌性尿道炎患者的沙眼衣原体

采用微量细胞培养法分离１０７例疑似非淋菌性尿道炎或宫颈炎患者泌尿生殖道标本中的沙眼衣原体。总衣原体感染率为２４．３％，男、女衣原体感染率分别为２５．７％和２１．２％。对衣原体培养阳性的患者做了临床分析。并对向量细胞培养与传统的玻璃瓶增减法进行了比较。结果表明：在本组人群中沙眼衣原体感染有较高的流行率。     

质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测沙眼衣原体

目的：建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap—LCR—ELISA)检测沙眼衣原体(Chlamydia trac dtrachomatis，CT)。方法：根据CT共有隐蔽性质粒设计并标记4条寡核苷酸探针，对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病原菌行Gap-LCR-ELISA。结果：质粒Gap-LCR-ELISA可枪测出6型CT，并与其他病原体无交叉反应，其最低检测限为2．5个原体(elementary bodies，EB)，比PCR敏感10倍。结论：质粒Gap-LCR-ELISA对检测CT感染具有极高的灵敏度和特异度，适宜于我国进行大规模CT流行病学调查。     

连接酶链反应检测性病患者沙眼衣原体感染

目的 评价连接酶链反应(LCR)诊断性病患者尿道/宫颈中沙眼衣原体(Ct)的意义。方法 STD门诊尿道(宫颈)炎患者276例,取尿道/宫颈拭子,以LCR分析法检测Ct。采用每4份标本相混合的方法分别以LCR分析法检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,其中56例患者同时进行尿道/宫颈拭子Ct细胞培养。差异性结果由PCR法扩增Ct的主要外膜蛋白基因来进行确认,确定LCR分析法检测Ct的敏感性、特异性。结果 LCR分析法检测尿道/宫颈拭子Ct的敏感性、特异性分别为96.7%和100%。采用每4份标本相混合的方法分别以LCR分析法检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,与单独用每份标本逐一进行LCR检测比较,结果完全一致,符合率为100%。结论 以尿道/宫颈拭子为标本,LCR分析法检测Ct的敏感性、特异性高。适用于诊断泌尿生殖道Ct感染。用标本相混合的方法LCR分析检测尿道/宫颈拭子标本中的Ct,适用于Ct感染的普查。     

利用男性非淋菌性尿道炎患者尿沉渣检测沙眼衣原体

１０２例男性非淋菌性尿道炎患者，以尿道拭式沙眼衣原体培养为金标准，用ＷｅｌｌｃｏｚｙｍｅＣｈｌａｍｙｄｉａ检测清晨首次尿沉渣中沙眼衣原体的敏感性和特异性分别为８９．７％及９２．１％，用ＰＣＲ检测清晨首次尿沉渣中沙 眼衣原体敏感性和特异性分别为９７．４％及９２．１％。     

4089例性病门诊患者沙眼衣原体检测结果分析

目的：了解性病门诊患者沙眼衣原体感染情况。方法：用Microtrak Ⅱ EIA酶免法对自2004年4月～2005年12月收集的4089份男性尿道拭子和女性宫颈标本进行了沙眼衣原体抗原检测和革兰氏染色镜检炎症细胞。结果：共检出576份阳性标本，总检出率14.09％，其中男475份、女101份，男女性分别为15．66％和9．57％。炎症细胞检测发现男性无炎症感染率为50．74％（241／475），女性无炎症感染率48．51％（49／101）。不同年龄组沙眼衣原体感染率分别为20～29岁14．83％、30～39岁15．86％、40岁以上8．19％，以青壮年为主。20～29岁组与30～39岁组感染率差异无统计学意义（x^2=0．68，P〉0．05），而两组与40岁以上组感染率差异均有统计学意义（x^2=19．88，P〈0．01；x^2=25．27，P〈0.01）。结论：加强对高危人群尤其是无症状感染者筛查和检测，可有效控制泌尿生殖道沙眼衣原体的传播。     

沙眼衣原体持续感染的进展

沙眼衣原体持续感染是指衣原体在不利生长的条件下，为逃逸宿主的免疫防御产生的一种可逆状态。体外研究发现细胞因子、非容纳细胞、营养缺陷、抗生素效应诱发持续感染。对未加工的，RNA检测和基因分型等方法证实持续感染存在于体内。宿主免疫缺陷、炎症反应的降低以及衣原体对细胞凋亡的调节、特殊的组织定位有利于衣原体维持持续感染。     

汕头性病门诊患者泌尿生殖道沙眼衣原体检测

目的：了解2011-2017年本院11584例性病门诊患者泌尿生殖道沙眼衣原体感染特征。方法：对就诊患者的临床资料进行回顾性分析。结果：（1）11584例患者中沙眼衣原体阳性1480例,阳性率12.78%。6886例男性患者中泌尿生殖道沙眼衣原体感染1023例,阳性率14.86%,4698例女性患者中沙眼衣原体阳性457例,阳性率9.73%,男女患者阳性率比较有显著统计学差异;（2）感染率最高和最低的年龄段为≤19岁和≥60岁的患者,感染率分别为 28.29%（71/251）和9.16%（34/371）;（3）1480例泌尿生殖道沙眼衣原体阳性患者中有991例无症状的体检者（66.96 %）。结论：2011-2017年本院性病门诊患者泌尿生殖道沙眼衣原体感染率较高,泌尿生殖道沙眼衣原体阳性感染者中无症状感染者占比较高。