5-氮杂-2'-脱氧胞苷对HepG2细胞RUNX3基因表达及细胞增殖的影响

目的探讨人肝癌细胞系HepG2经5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2-’deoxycytid ine,5-Aza-CdR)处理后诱导高甲基化失活的RUNX3基因重新表达的可能性及对细胞生长的影响,寻找抗癌治疗的新靶点。方法RT-PCR检测抑癌基因RUNX3 mRNA的表达;MTT、集落形成实验观察细胞的生长活性;流式细胞术和透射电镜分析细胞周期及细胞凋亡的变化。结果肝癌细胞经不同浓度之5-Aza-CdR处理后,原无RUNX3 mRNA表达的细胞均检出基因重新表达,细胞生长速度出现不同程度减慢及细胞克隆形成率显著降低(P<0.01)。用药后肝癌细胞发生明显的S期阻滞,电镜显示肝癌细胞形态学改变。结论去甲基化制剂5-Aza-CdR能有效地激活肝癌细胞系HepG2因高甲基化所致RUNX3基因沉默的再转录,诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞生长。     

MicroRNA-122通过调节多重耐药基因表达和诱导细胞周期阻滞增强肝癌细胞对阿霉素与长春新碱的敏感性

肝细胞癌具有血管增生过多,快速增长且对传统化疗敏感性低的特点。MicroRNA-122,又称miR-122,是具有肝脏特异性的微小RNA,在肝癌细胞中的表达往往处于低水平。研究发现,用腺病毒载体转染肝癌细胞致miR-122高表达,可使肝癌     

5-杂氮-2'脱氧胞苷对肝癌细胞SMMC-7721 miR-1247-5p基因表达及其启动子区甲基化的影响

目的观察正常人肝细胞系LO_2和肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p的表达,研究去甲基化药物5-杂氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p表达及其基因启动子区Cp G岛甲基化水平的影响。方法用不同浓度(0、5和10μmol/L)去甲基化药物5-杂氮-2'脱氧胞苷处理SMMC-7721细胞,用甲基化特异性PCR法检测miR-1247-5p基因启动子区甲基化水平;用SYBR Green qReal Time PCR法检测miR-1247-5p的表达。结果与正常人肝细胞系LO_2相比,肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p表达降低(P0.05)且其基因启动子区Cp G岛甲基化水平高;经去甲基化药物干预后miR-1247-5p的表达较对照组有明显上调(P0.01),且其基因启动子区Cp G岛甲基化水平降低。结论 miR-1247-5p基因甲基化调控可能参与了肝癌的发生。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肝癌DNA甲基转移酶1及上皮钙黏附素表达的影响

目的:研究5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌细胞中DNA甲基转移酶1(DNMT1)及上皮钙黏附素(E-cadherin)表达的影响.方法:免疫组织化学检测上皮钙黏附素在肝癌(26例)及癌旁组织(20例)中的表达.用终浓度10μmol/L的5-Aza-CdR处理培养的肝癌细胞株GQY-7703作为实验组,未处理细胞为对照组;DNMT1基因和上皮钙黏附素基因(CDH1)的转录产物及表达蛋白分别使用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测;CDH1的甲基化状态使用甲基化特异性PCR(MSP)检测.结果:相比较癌旁组织,肝癌组织中上皮钙黏附素表达显著下调.5-Aza-CdR降低了GQY-7703细胞中DNMT1在转录水平和翻译水平的表达CDH1 CpG岛的甲基化水平降低;上皮钙黏附素mRNA和蛋白表达量明显增高,对电泳条带的半定量分析显示实验组和对照组之间的差异具有统计学意义.结论:5-Aza-CdR通过抑制DNMT1的表达,改变了CDH1基因的异常甲基化状态,进而恢复上皮钙黏附素的表达.     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胶质瘤细胞系U251凋亡的调节

目的甲基化与胶质瘤的发生和发展关系密切,本研究的目的是探讨去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine)对胶质瘤细胞系凋亡的调节。方法将浓度分别为10μM、25μM和50μM的5-氮杂-2'-脱氧胞苷加入胶质瘤细胞系U251细胞中,应用RT-PCR法检测U251细胞系经不同浓度的5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后细胞内胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,应用流式细胞术(AnnexinV-FITC染色)检测不同药物浓度处理组中U251细胞的凋亡率。结果 5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后,U251细胞内caspase-3的转录水平明显上调(P<0.01),具有较为明显的剂量依赖性。流式细胞术结果显示U251细胞经5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后细胞的凋亡率显著上调,且具有剂量依赖性。结论 5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理具有剂量依赖性上调胶质瘤细胞系U251caspase-3表达,促进细胞凋亡。     

5-氮-2'-脱氧胞苷对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的 检测去甲基化药物5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-aza-dC)对结肠癌细胞株SW620、COL0205和HT29生物学行为的影响,并研究该药物对多个基因表达的影响.方法 5-aza-dC处理对各结肠癌细胞生长周期、凋亡、细胞迁移和侵袭能力的影响分别采用流式细胞术、Annexin V/Propidium Iodide法、细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测.采用RT-PCR法检测抑癌基因THBS1、TIMP3、RASSF1A和癌基因c-myc、c-fos、bax在5-aza-dC处理前后各结肠癌细胞株中的表达改变情况.结果 5-aza-dC处理后,3株结肠癌细胞的生长周期均明显阻滞于G2/M期,细胞凋亡率显著增加(P<0.05).划痕实验后72 h,对照组结肠癌细胞明显向划痕的中央迁移,而药物处理组结肠癌细胞迁移不明显.5-aza-dC处理后,结肠癌细胞的侵袭能力较未处理组降低(P<0.05).5-aza-dC可恢复结肠癌细胞中多个抑癌基冈的表达,但是对癌基因的表达没有影响.结论 5-aza-dC对结肠癌细胞有阻滞细胞生长周期、促进凋亡及抑制细胞迁移和侵袭能力等作用,该作用可能足通过恢复多个抑癌基因的表达来实现的.     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肺癌细胞系BE1和LTEP-α-2中Axin基因表达及细胞增殖的影响

目的本研究的目的是探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza)对人肺癌细胞系BE1及LTEP-α-2的增殖和侵袭的调节及其可能的机制。方法两个细胞系均应用5-Aza进行处理,并应用MTT法检测两细胞系经5-Aza处理后细胞增殖能力的变化,Transwell法检测了两细胞系处理后侵袭能力的变化,Westernblot检测Axin、β-catenin、cyclin D1和MMP-7的表达。结果 5-Aza抑制BE1和LTEP-α-2细胞的增殖和侵袭能力(<0.05),与LTEP-α-2细胞系相比,BE1细胞系受抑制程度更为明显(<0.05)。5-Aza上调BE1细胞中Axin的表达,抑制β-catenin、cyclin D1和MMP-7的表达,但对LTEP-α-2细胞中Axin等的表达没有明显的影响。结论 5-Aza可以抑制肺癌细胞的增殖和侵袭,BE1细胞中的Axin基因可能存在异常高甲基化,高甲基化的Axin基因可能成为未来治疗肺癌的靶点。     

5-氮-2’-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞SKOV3凋亡及HMLH1和HMSH2表达的影响

目的探讨5-氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人卵巢癌细胞系SKOV3增殖、凋亡及错配修复基因HMLH1和HMSH2表达的影响。方法用0.5、5和50μmol/L特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理SKOV3细胞3d,继续常规培养7d后,采用四唑盐(MTT)比色法检测生长活性,流式细胞术分析细胞的凋亡,半定量RT-PCR检测细胞HMLH1和HMSH2 mRNA的表达水平。结果人卵巢癌细胞系SKOV3经0.5、5和50μmol/L5-Aza-CdR处理后,均能明显抑制肿瘤细胞生长。各组细胞的凋亡率分别为10.59%±1.57%、17.52%±1.72%、34.10%±1.45%,显著高于对照组的5.35%±0.86%(P<0.01);且凋亡率与5-Aza-CdR剂量成正相关(F=227.6,P<0.01)。在SKOV3中HMLH1和HMSH2呈弱表达,经5-Aza-CdR处理后mRNA表达量有不同程度的增加,且与药物存在剂量依赖性。结论5-Aza-CdR可逆转卵巢癌细胞系中存在的HMLH1和HMSH2甲基化,DNA错配修复基因甲基化与卵巢癌的发生、发展有关。     

DNMT在胃癌中的表达及DNMT抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷对胃癌的影响

目的: 研究DNA甲基化转移酶(DNMT)各亚型DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L在胃癌与胃黏膜中的表达特点,并分析DNMT抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷对胃癌和胃黏膜细胞的影响。方法: 免疫组化法对60例胃癌与癌旁组织行5种DNMT表达研究。免疫荧光法和Western免疫印迹法对SGC-7901、MKN-45(胃癌细胞)和GES-1(胃黏膜细胞)行5种DNMT表达研究。噻唑蓝比色法和流式细胞术分析5-氮杂-2’-脱氧胞苷对SGC-7901、MKN-45和GES-1增殖、细胞周期和凋亡的影响。结果: 胃癌与癌旁组织均有5种DNMT不同程度表达,但胃癌组织DNMT1和DNMT3A表达显著低于癌旁组织(P<0.01),DNMT2和DNMT3L表达也低于癌旁组织(P<0.05),只有DNMT3B在胃癌与癌旁组织中无显著差异(P>0.05)。胃癌细胞(SGC-7901和MKN-45)与胃黏膜细胞(GES-1)亦有部分DNMT表达,除DNMT3B在胃黏膜细胞表达较强外,余DNMT在胃癌与胃黏膜细胞中无显著差异。5-氮杂-2’-脱氧胞苷对胃癌与胃黏膜细胞的增殖率、周期分布和凋亡率并无显著影响。结论: DNMT在胃癌中表达呈降低趋势,抑制DNMT对胃癌细胞的增殖和凋亡无显著影响。     

5-氮-2''-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞SKOV3增殖凋亡及hMLH1和hMSH2表达的影响

目的 探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人卵巢癌细胞系SKOV3增殖、凋亡及错配修复基因HMLH1和HMSH2表达的影响.方法 用0.5、5和50μmol/L特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理SKOV3细胞3 d,继续常规培养7 d后,采用四唑盐(MTT)比色法检测生长活性,流式细胞术分析细胞的凋亡,半定量RT-PCR检测细胞HMLH1和HMSH2 mRNA的表达水平.结果 人卵巢癌细胞系SKOV3经0.5、5和50 μmol/L5-Aza-CdR处理后,均能明显抑制肿瘤细胞生长.各组细胞的凋亡率分别为10.59%±1.57%、17.52%±1.72%、34.10%±1.45%,显著高于对照组的5.35%±0.86%(P＜0.01);且凋亡率与5-Aza-CdR剂量成正相关(F=227.6,P＜0.01).在SKOV3中HMLH1和HMSH2呈弱表达,经5-Aza-CdR处理后mRNA表达量有不同程度的增加,且与药物存在剂量依赖性.结论 5-Aza-CdR可逆转卵巢癌细胞系中存在的HMLH1和HMSH2甲基化,DNA错配修复基因甲基化与卵巢癌的发生、发展有关.     

5-氮杂胞苷对结肠癌细胞CHD5基因表达及细胞增殖活性的影响

目的研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-氮杂胞苷,AZA)对人肿瘤相关基因CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)在结肠癌细胞中的基因转录的诱导作用以及其对细胞增殖的影响。方法 5μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用于Lovo和SW480细胞,连续作用72 h后,用荧光定量PCR(qPCR)检测两种结肠癌细胞系中CHD5mRNA的表达,重亚硫酸盐测序(BSP)法分析启动子区的甲基化状况,MTT法分析5-氮杂胞苷对Lovo和SW480细胞增殖的影响。结果 5μmol/L 5-氮杂胞苷处理Lovo和SW480细胞72 h后,Lovo和SW480细胞中CHD5基因的发生了去甲基化,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制。结论 5-氮杂胞苷能够反转CHD5基因的甲基化状态,调控CHD5 mRNA表达,并能有效地抑制结肠癌细胞的增殖。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古霉素A联合应用对胶质瘤细胞增殖和侵袭的作用

目的胶质瘤的化疗一直都是研究热点,近来有研究表明甲基化与胶质瘤的发生和发展关系密切,本研究的目的是探讨去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine)和曲古霉素A(TSA)联合应用对胶质瘤细胞系侵袭和转移的调节。方法分别将浓度为50μM的5-氮杂-2'-脱氧胞苷和300ng/ml的曲古霉素A加入胶质瘤细胞系U251细胞中,并将两者联合应用加入U251细胞系中,应用MTT法检测不同处理组细胞的增殖能力,Transwell细胞侵袭实验检测不同处理组和对照组中细胞的侵袭能力的变化。结果 5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古霉素A单独处理后,U251细胞的增殖能力明显减弱(<0.05),两者联合应用时对U251细胞的增殖抑制更明显(<0.01)。Transwell细胞侵袭实验显示5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古霉素A单独处理后,U251细胞的侵袭细胞数明显减少(<0.05),而两者联合应用时对U251细胞的侵袭能力抑制更为明显(P<0.01)。结论 5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古霉素A都可以抑制胶质瘤细胞系的增殖和侵袭,两者具有协同作用。     

Nodosin通过Apaf-1和caspase-3诱导HepG2细胞凋亡

目的:研究传统中药提取物nodosin对人肝细胞癌Hep G2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:将nodosin设置为1. 25μmol/L、2. 5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L不同浓度组,作用于Hep G2细胞24 h后,用Hoechst 33258染色和电镜观察不同浓度的药物对细胞形态学的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用RT-qPCR检测凋亡蛋白酶激活因子1 (Apaf-1) mRNA的表达,用Western blot检测caspase-3及其前体和活化体的蛋白水平。结果:形态学结果显示,随着用药剂量的增加,细胞皱缩和细胞核偏移越明显,凋亡小体在5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L剂量组明显增多。Apaf-1 mRNA的表达增加,caspase-3及其前体的表达和cleaved caspase-3的蛋白水平随着用药剂量的增加逐渐增加(P 0. 01)。结论:Nodosin能够诱导Hep G2细胞凋亡。该作用可能是通过增加Apaf-1 mRNA的表达继之激活caspase-3实现的。     

Hepatitis C virus protein expression induces apoptosis in HepG2 cells

The mechanisms of hepatocyte death and the events that lead to a high rate of chronic liver disease in patients infected with hepatitis C virus are not known. We established a HCV replication system in HepG2 cell culture and utilized this model to address the effect of HCV proteins on HepG2 cell growth and viability. After transfection of HepG2 cells with full-length RNA, a truncated RNA, or an antisense RNA, cell proliferation and cell viability were analyzed by thymidine uptake and the trypan blue exclusion method, respectively. Full-length RNA transfected HepG2 cells showed a decrease in cell proliferation and viability compared to cells transfected with HCV truncated RNA and antisense RNA control. A subset of cells expressing HCV proteins underwent apoptosis as documented by morphological studies, ultrastructural analysis, cell cycle analysis by flow cytometry, terminal transferase enzyme mediated end labeling of DNA, and DNA laddering. This study suggests that expression of HCV proteins can lead to cell death by apoptosis, which may be an important event in the pathogenesis of chronic hepatitis C virus infection in humans.     

Acrylamide induces HepG2 cell proliferation through upregulation of miR-21 expression

Acrylamide, a potential carcinogen, exists in carbohydrate-rich foods cooked at a high temperature. It has been reported that acrylamide can cause DNA damage and cytotoxicity. The present study aimed to investigate the potential mechanism of human hepatocarcinoma HepG2 cell proliferation induced by acrylamide and to explore the antagonistic effects of a natural polyphenol curcumin against acrylamide via miR-21. The results indicated that acrylamide (≤100 μmol/L) significantly increased HepG2 cell proliferation and miR-21 expression. In addition, acrylamide reduced the PTEN expression in protein level, while induced the expressions of p-AKT, EGFR and cyclin D1. The PI3K/AKT inhibitor decreased p-AKT protein expression and inhibited the proliferation of HepG2 cells. In addition, curcumin effectively reduced acrylamide-induced HepG2 cell proliferation and induced apoptosis through the expression of miR-21. In conclusion, the results showed that acrylamide increased HepG2 cell proliferation via upregulating miR-21 expression, which may be a new target for the treatment and prevention of cancer.     

miR-363下调HepG2细胞Mcl-1蛋白的表达并诱导其凋亡

目的:探讨微小RNA-363(microRNA-363,miR-363)的作用靶点及其对Hep G2细胞的抑制作用。方法:通过生物信息学分析预测Mcl-1基因是否受microRNA调控。实时荧光定量PCR检测正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系Hep G2、Huh7、PLC的miR-363和Mcl-1的表达水平。将miR-363转染人Hep G2细胞,检测miR-363对Mcl-1表达水平的影响。MTT法检测Hep G2细胞在转染miR-363后的相对细胞活力,Annexin V/PI染色法检测miR-363转染对Hep G2细胞凋亡的影响。结果:Mcl-1 mRNA 3’-非翻译区(3’-UTR)存在miR-363的假定结合位点,在肝癌细胞中转染miR-363后Mcl-1的表达下降。转染miR-363可抑制Hep G2细胞的活力并诱导其发生凋亡。结论:miR-363过表达可显著抑制Hep G2细胞的活力并诱导其发生凋亡,其机制可能与miR-363能下调Hep G2细胞Mcl-1蛋白的表达有关。     

Quercetin调节肝癌HepG2细胞Fas表达诱导细胞凋亡

目的： 探讨三磷酸肌醇( IP3) 和Fas基因表达变化在quercetin诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法: 以肝癌HepG2 细胞培养72 h为对照, 20、40、60、80 μmol/ L quercetin作用于 HepG2 细胞72 h和60 μmol/L quercetin 作用于HepG2 细胞6 h、12 h、24 h、48 h、72 h,应用同位素试剂盒IP3 - ［3H］ Birtrak检测细胞IP3 含量，RT-PCR分析Fas mRNA表达，Western blotting 分析细胞Fas蛋白表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果: 各浓度的quercetin作用于肝癌HepG2 细胞72 h，IP3 含量显著低于对照组［（17.9±1.5 ）pmol/106cells、（15.5±1.1）pmol/106cells、（5.7±0.9）pmol/106cells、（5.5±0.8）pmol/106cells vs （29.4±0.5）pmol/106cells］，Fas mRNA表达显著高于对照组［RI 0.26±0.01、0.30±0.01、0.30±0.02、0.37±0.02 vs 0.19±0.02］，Fas蛋白表达显著高于对照组［RI（灰度与面积之积的相对强度）1.10±0.08、 0.91±0.02、0.78±0.07、0.73±0.05 vs 0.15±0.01］，细胞凋亡率显著高于对照组［（11.2±1.1）%、（15.5±1.1）%、（26.8±2.5）%、（27.1±1.5）% vs （2.6±0.1）%］； 60 μmol/L quercetin 作用于肝癌HepG2 细胞6 h、12 h、24 h、48 h、72 h ，各时相IP3 含量显著低于对照组［（23.3±1.4）pmol/ 106cells、 (12.0±1.4) pmol/ 106cells、(7.5 ±0.8) pmol/ 106cells、(5.6 ±0.5) pmol/ 106cells、(4.3 ±0.6) pmol/ 106cells vs (29.2 ±0.6) pmol/106cells,P<0.01］；12 h后Fas mRNA表达显著高于对照组［RI 0.26±0.02、0.28±0.02、0.26±0.01、0.24±0.01 vs 0.20±0.01］，Fas蛋白表达显著高于对照组［RI 0.65±0.17、 1.20±0.07、1.51±0.06、1.50±0.06、0.97±0.17 vs 0.18±0.01］，24 h后各时相细胞凋亡率显著高于对照组［(7.4 ±0.5)%、(20.5 ±2.0)%、(30.7 ±1.6)% vs (2.6 ±0.1)%，P< 0.01］。结论: Quercetin能减少IP3 生成，上调Fas基因表达，诱导肝癌细胞凋亡。