不同体外受精周期所获生殖泡期卵母细胞体外 成熟后结果比较

 【目的】 研究对比体外受精-单精子卵胞浆内注射(IVF-ICSI)周期所获生殖泡期(GV)不成熟卵母细胞以及体外成熟(IVM)周期所获GV期卵母细胞体外培养成熟后的胚胎发育情况&#65377;【方法】 163个IVF-ICSI周期中所获987个成熟卵为Ⅰ组,所获GV期卵进行体外培养后成熟的132个卵为Ⅱ组, 另有37个IVM周期中所获GV期卵体外培养后成熟的235个卵为Ⅲ组&#65377;对3组均进行ICSI,并对其受精率&#65380;卵裂率及胚胎发育进行比较&#65377;【结果】 Ⅰ组的受精率&#65380;卵裂率以及优质胚胎率均显著高于Ⅱ组及Ⅲ组(分别为84.9%,98.1%和61.6%;72.0%,90.5%和22.1%; 75.3%,94.4%和25.1%)&#65377;Ⅰ组的胚胎卵裂球数目及胚胎形态评分均显著优于Ⅱ组及Ⅲ组(P < 0.05);Ⅱ组与Ⅲ组相比差异无统计学意义&#65377; 【结论】 体内成熟卵形成的胚胎形态好于生殖泡期卵体外培养成熟者,IVF-ICSI周期的生殖泡期不成熟卵形成的胚胎形态学上与IVM周期的类似&#65377;     

17β-雌二醇对小鼠卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响

目的:探讨培养液中添加17β-雌二醇(17β-E2)对小鼠生殖泡期(GV)带卵丘细胞卵母细胞体外成熟、受精及其胚胎发育的影响.方法:小鼠生殖泡期卵母细胞随机分为2组:对照组(n=61,TCM199基础培养液加体积分数10%胎牛血清加75 U/L 卵泡刺激素加0.5 kU/L 人绒毛膜促性腺激素加0.05 g/L青霉素加0.075 g/L链霉素)和17β-E2组(n=66,对照组液加1 mg/L 17β-E2),培养后对成熟的卵母细胞行胞浆内单精子显微注射,观察受精及胚胎发育情况.结果:17β-E2组卵母细胞的桑葚胚、囊胚形成率均高于对照组(P均<0.05).结论:成熟培养液中加入17β-E2有助于小鼠未成熟有卵丘细胞卵母细胞的体外成熟及受精后胚胎发育.     

氯化锌对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的探讨氧化锌对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法采用细胞体外培养的方法,观察卵母细胞在分别含有低、中、高浓度(0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)氯化锌的M199培养液中体外成熟率和减数分裂的变化情况。结果1μg/mlZnCl2组GVBD发生率在4、8h明显高于对照组(P<0.01),16、24h高于对照组(P<0.05);而10μg/mlZnCl2组GVBD发生率在各时间点均明显低于对照组(P<0.01)。8h后,1μg/mlZnCl2组PB1排出率明显高于对照组(P<0.05),而10μg/mlZnCl2组PB1排出率明显低于对照组(P<0.05)。结论锌对体外小鼠卵母细胞成熟和减数分裂有重要的影响。     

人卵母细胞形态学指标预测受精和胚胎发育潜能

目的:探讨卵母细胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)周期中人卵母细胞形态学测量的指标与受精和胚胎发育潜能之间的关系。方法:利用OCTAX Eye-ware software系统在对卵母细胞行ICSI前,逐一采集卵母细胞图像,测量透明带厚度、卵母细胞大小、极体位置的卵间隙大小和极体形态(完整或破碎),将ICSI后的卵母细胞和受精后的胚胎进行单孔培养,记录每个卵母细胞的受精情况、胚胎发育情况。对卵母细胞的形态数据与受精情况、胚胎发育情况进行逐步多元因素Logistic回归分析。结果:共测量卵母细胞436枚,受精率84.9%(370/436),胚胎可用率60.8%(225/370),卵母细胞形态学指标中,透明带厚度、极体位置的卵间隙大小和卵母细胞受精与否有关,受精卵较未受精卵有较厚的透明带[(18.0±2.3)μm vs.(16.9±2.7)μm]和较大的卵间隙[(14.4±3.3)μm vs.(13.2±3.9)μm];而卵母细胞的大小和极体形态均与取卵后72 h的胚胎发育质量有关,发育为可用胚胎的卵母细胞较发育为废用胚胎者有较大的直径[(116.6±3.7)μm vs.(114.7±3.6)μm]和较高的极体完整率(86.2%vs.66.7%)。结论:人卵母细胞形态学测量的指标可预示卵子受精和胚胎发育的潜能。     

不成熟卵母细胞的体外成熟培养及玻璃化冷冻

目的 比较显微授精治疗周期中剩余的生发泡(GV)期不成熟卵母细胞的体外成熟培养及玻璃化冷冻效率.方法 将显微授精(ICSI)周期剩余的GV期卵母细胞随机分为3组:①在GV期玻璃化冷冻,解冻后进行体外成熟培养;②体外成熟培养至MII期后行玻璃化冷冻;③对照组:直接进行体外成熟培养(IVM).观察体外培养成熟卵母细胞及不同成熟阶段卵母细胞冷冻后的受精和发育潜力.结果 对照组的成熟率为71.6%(53/74),其中16枚行显微授精(ICSI),受精率为87.5%(14/16),卵裂率为85.7%(12/14),囊胚形成率为14.3%(1/7);组1与组2的存活率分别为97.5%(39/40)和87.5%(35/40),差异没有显著性;但是组1的成熟率28.2%(11/39)显著低于(P<0.01)对照组的成熟率71.6%(53/74);组2的受精率74.1%(20/27)与对照组的受精率87.5%(14/16)相比,差异没有显著性.结论 ICSI周期剩余的GV期卵母细胞能在体外培养成熟并具有良好的发育潜力,将GV期卵母细胞体外成熟培养至MⅡ期更适合于玻璃化冷冻保存.     

昆明小鼠成熟卵母细胞体外受精及受精卵体外培养的研究

目的通过比较获能受精液成分及成熟卵母细胞的处理方法，观察对昆明小鼠体外受精(IVF)效果的影响和用于早期胚胎培养的三种发育培养液培养效果，探讨并建立起适合于昆明小鼠卵子体外受精与受精卵体外发育的实验体系。方法用T6或FM两种获能受精液对采自昆明雄鼠附睾尾的精子与成熟卵母细胞进行体外受精(IVF)，受精前对成熟卵母细胞选用透明质酸酶去除卵丘细胞和不去卵丘细胞(对照组)两种方法进行处理，受精卵分别用M16、改良的CZB液(mCZB)和改良的M16液(mM16)三种发育培养液对体外受精胚进行培养。结果选用FM获能受精液的受精率极显著高于T6液(92．3％对64．7％)，且体外受精前先用透明质酸酶处理的成熟卵母细胞比对照组成熟卵母细胞受精率要低(59．2％对64．7％)，但差异不显著；用mM16培养液进行培养时桑胚率及囊胚率(55．3％和35．6％)显著高于mCZB(13．3％和8．1％)和M16培养液(17．3％和14．7％)，后两者差异不显著。结论昆明小鼠卵子体外受精时宜选用FM受精获能液，不宜用透明质酸酶去除卵丘细胞，且宜选用mM16培养液对昆明小鼠体外受精卵进行早期培养，其中的亚硫磺酸钠可有效的克服2-细胞胚后的体外发育阻滞现象。     

表皮生长因子对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠卵母细胞体外成熟及受精的作用.方法 在体外成熟液中分别添加0、0.1、1、5、10ng/Mlegf,12h后检查成熟率,并观察EGF对体外受精的影响.结果 添加5ng/Ml和10ng/Mlegf组卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),并且5ng/Ml组的效果显著高于其他各组(P<0.05);比较培养液中添加以上浓度EGF对体外受精胚发育的影响,结果发现添加5ng/Ml EGF虽不能显著提高囊胚发育率(P>0.05),但可显著提高其通过二细胞阻滞率和囊胚孵化率(P<0.01).结论 EGF对小鼠卵母细胞体外成熟及受精有促进作用,可提高体外成熟率及囊胚孵化率,还可促进受精卵通过二细胞阻滞.     

卵母细胞体外成熟培养液的改良及研究

目的探讨卵母细胞体外成熟培养液的改良及研究。方法选取昆明小鼠50只作为研究对象,根据培养液的不同将50只小鼠分为A组和B组,每组各25只。A组采用低糖细胞培养基（DMEM）培养,B组采用含15％～20％胎牛血清的人类输卵管液培养,两组在相同条件下进行培养,比较两组的体外受精率、正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、可移植胚胎率、妊娠率及活产率。结果A组小鼠的体外受精率（71．4％）、正常受精率（65．7％）及卵裂率（89．1％）与B组（67．6％、68．1％、85．1％）比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;A组小鼠的优质胚胎率（31．7％）和可移植胚胎率（56．1％）均优于B组（25．0％、42．5％）,差异有统计学意义（X2=8．26、10．17,P〈0．05）。A组小鼠的妊娠率（23.3％）低于B组（32．6％）,差异有统计学意义（X2=7．58,P〈0．05）;但A组小鼠的活产率（17．8％）稍低于B组（18．9％）比较,差异无统计学意义（P〉O．05）。结论低糖DMEM培养液具有较好的应用效果,但仍需进一步的研奔．     

硝酸铅,氯化镍对体外培养小鼠卵母细胞成熟的影响

采用卵母细胞体外的方法研究了硝酸铅、氯化镍对小鼠卵母细胞成熟的影响。结果表明,硝酸铅、氯化镍都能抑制小鼠卵母细胞第一极体的释放,降低卵母细胞的质量和体外存活率,但是对卵母细胞生发泡破裂没有影响,提示,硝酸铅、氯化镍有明显的生殖毒性。     

卵母细胞成熟调控及体外成熟影响因素的研究

自 1993年以来 ,有关未成熟卵母细胞体外成熟培养的研究成为生殖医学领域的又一热点。女性不孕症的主要病因之一是由患顽固性多囊卵巢综合症等因素造成的卵子成熟障碍 ,这种病因即使采用体外授精技术也无法受孕 ;在进行体外授精 胚胎移植(IVF ET)治疗时 ,药物超促排卵可使妇女在同一周期产生多个卵子 ,有成熟和未成熟的 ,其卵子的成熟度直接关系到卵子的受精效率、卵裂效率和妊娠效率。所谓理论指导实践 ,因此深入研究卵子发生发育的机理 ,了解卵母细胞成熟的调控及影响因素至关重要。1　卵母细胞成熟的机制目前 ,人们对哺乳动物卵母细胞…     

In-vitro Maturation of Immature Oocytes from Preantral Follicles in Prepuberal Mice

Objective To observe the morphological changes in in vitro growth of preantral follicle isolated from prepuberal mice and to assess impacts of gonadotropin （Gn）, insulin transferrin selenium （ITS） and epidermal growth factor （EGF） on their development. Methods Early preantral mice follicles （90-130μm diameter） were mechanical isolated and selected from 2 weeks＇ old mice and then cultured in alpha-minimal essential medium （α-MEM） with or without Gn, ITS and EGF. The preantral follicles were cultured singly in 20 miovliters droplets for up to 14 d. The medium was replaced and the .follicles were observed everyday. Granulosa cells （GC） prolification, antrum formation and oocyte maturation were recorded. Results The medium with Gn supported preantral follicle culture in vitro, during which they retained a three-dimensional structure, maintained oocytes viability and increased in diameter and number of somatic cells＇. Preantral follicles cultured in Gn medium grew obviously, while those without Gn grew slowly and after 6 d＇s culture began to shrink and blacken. Significant increase in survival rate and maturation rate of oocytes was observed in Gn group （P〈0.01）, with 92.9% survived and 28.7%formed an antrum. Further supplementation of the Gn medium with ITS and rLH, resulted in the significant increase in survival and maturation of preantral follicle （P〈0.05） Conclusions α-MEM can be the medium for in vitro culture （IVC） of preantral follicles, but need to be added with rLH/rFSH, rHCG/rEGF to facilitate thecal cell attachment, GC proliferation and oocyte maturation.     

体外受精-胚胎移植周期卵泡液中甾体激素水平与卵母细胞发育的关系

目的 :初步了解卵泡液中甾体激素水平与卵母细胞发育、成熟、胚胎着床的关系。方法 :用Gn RHa/FSH/h MG/h CG方案控制下超排卵进行体外受精 -胚胎移植 (IVF-ET)治疗 5 3例不孕患者 ,在取卵时留取卵泡液用放射免疫法测定雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)、睾酮 (T)水平。结果 :受精组 P水平显著高于未受精组 (P<0 .0 1 ) ,E2 /P比显著低于后者 (P<0 .0 1 ) ;未卵裂组 P水平低于卵裂组 ,T高于卵裂组 ,E2 水平在各组间无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;胚胎着床与胚胎未着床之间各参数无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;含过熟卵冠丘复合物 (OCCC)的卵泡液中 P水平显著低于成熟和未成熟组 (P均<0 .0 1 ) ,E2 /P显著高于后两者 (P>0 .0 1 )。结论 :排卵前卵泡液中高孕酮水平提示卵泡成熟健康 ,可能有助于卵母细胞受精 ,E2 与卵母细胞成熟、受精、卵裂无关 ,高睾酮水平可能与胚胎分裂低有关 ,卵泡液中甾体激素水平与胚胎着床无关。     

核抑制剂(Roscovitine)对促排周期人未成熟卵母细胞体外成熟安全性的初步研究

目的 观察核抑制剂(Roscovitine)对人未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)安全性的影响.方法 获取促排周期的GV期未成熟卵随机分为两组,实验组(经二步法):未成熟卵母细胞先用含有200 vmol/LRoseovitine的培养液培养6 h,然后转入IVM成熟培养液培养24～36 h;对照组:直接用IVM成熟培养液培养24~36h.观察两组卵母细胞成熟情况并应用激光扫描共聚焦显微镜观察培养成熟后MⅡ期卵母细胞纺锤体和染色体的形态.结果 实验组共获未成熟卵母细胞61个,经体外成熟培养后50个卵成熟,其中39个卵可观察到纺锤体与染色体,纺锤体的形态异常者为15个,染色体异常者11个;对照组共获未成熟卵母细胞60个,经体外成熟培养后43个卵成熟,其中32个卵可观察到染色体与纺锤体,纺锤体形态异常者14个,染色体异常者11个.结论 Roscovitine能可逆性抑制体外培养的人卵母细胞的核成熟,但未对纺锤体及染色体形态产生不良影响.     

年龄及月经周期时相对不成熟卵母细胞质量及体外成熟的影响

目的　探讨年龄和月经周期时相对不成熟卵母细胞质量及其体外成熟 (invitromaturation ,IVM )能力的影响。方法　对 30例子宫肌瘤、子宫内膜异位症、腺肌症患者的 134个生殖泡 (germinalvesicle,GV)期不成熟卵母细胞进行体外培养 ,观察成熟率、受精率 ;按卵泡期、黄体期和不同年龄组进行分析研究。结果　随年龄增长采集的卵母细胞数目明显下降 ;卵泡期和黄体期采卵数目无差异 ;但卵泡期采集的卵母细胞受精率明显高于黄体期采集的卵母细胞 (P <0 0 1)。结论　大于 39岁妇女的卵巢不推荐作为不成熟卵母细胞的来源 ;若采集不成熟卵母细胞在卵泡期进行优于黄体期。     

心理护理在体外受精-胚胎移植中的应用价值探讨

目的　探讨心理护理在辅助生育技术中的应用价值。方法　选择 2 0 0 1年 6月 1日～ 2 0 0 3年 5月 31日在生殖医学中心进行IVF ET的 2 6 8例难治性不孕症夫妇 ,随机分为A ,B两组 ,A组 192例于促超排卵前、用药过程中、取卵手术前、手术中及胚胎移植前 ,胚胎移植手术中及手术后对夫妻双方进行心理护理。B组 76例不进行心理护理。观察两组病人的用药量、取卵个数、受精率、卵裂率及临床妊娠率 ,并进行比较。结果　两组病人的用药量、取卵个数、受精率、卵裂率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;但A组病人的临床妊娠率明显高于B组 (P<0 .0 5 )。结论　系统而良好的心理护理有利于提高IVF ET的临床妊娠率。     

第一极体位置对卵母细胞显微注射受精后受精和胚胎发育的影响

目的　研究第一极体位置对卵母细胞显微注射受精后受精和胚胎发育的影响。方法　回顾分析了 782个经卵母细胞浆内单精子注射 (ICSI)的卵母细胞 ,分别分析第一极体位于 12点和 6点时的卵母细胞存活率、卵母细胞受精率和卵裂胚胎的发育质量。结果　第一极体位于 6点时的卵母细胞存活率、卵母细胞受精率、卵裂胚胎发育质量均略高于 12点位置 ,但差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　显微注射受精时的第一极体位置对卵母细胞的受精和胚胎发育的影响不大。     

输卵管积水的处理方式对体外受精-胚胎移植结局的影响

【目的】探讨输卵管积水不同处理方式对体外受精-胚胎移植（IVF-ET ）结局的影响。【方法】收集因输卵管因素（102例输卵管积水）行IVF-ET患者154例,根据IVF-ET 术前对输卵管积水不同处理方式将患者分为五组：A 组积水未处理16例;B组输卵管积水抽吸35例;C组腹腔镜下输卵管积水切除15例;D组腹腔镜下输卵管积水近端结扎远端造口36例;E组（对照组）输卵管梗阻,无积水52例,比较各组促性腺激素（Gn）用量、促排天数、人绒毛膜促性腺激素（HCG）日雌二醇（E2）水平、取卵数、移植胚胎数、受精率、妊娠率、流产率、异位妊娠率等指标。【结果】各组的Gn用量、促排天数、hCG日E2水平、移植胚胎数、受精率、异位妊娠率间差异无统计学意义（P ＞0．05）;获卵数C组最少,与其他组相比有统计学意义（P ＜0．05）。临床妊娠率A组最低（25％）,D组最高（56％）,A组与C、D、E组比较有统计学差异（ P ＜0．05）,与B组比较无统计学差异;流产率A 组最高（67％）,D组最低（10％）,A组与C、D、E组比较有统计学差异（ P ＜0．05）,与B组比较无统计学差异。【结论】输卵管积水降低胚胎种植率和临床妊娠率,增加流产率,在IVF-ET 治疗前处理输卵管积水有助于提高胚胎种植率,改善妊娠结局。采用腹腔镜下输卵管近端结扎远端造口术是治疗输卵管积水比较适宜的方式。     

影响猕猴体外受精与胚胎移植成功率的因素分析

将电刺激采集的精液用两种方法优选后进行精子获能处理,然后与超排获得的成熟卵母细胞进行体外受精。受精卵用不同培养体系进行体外发育培养,并对发育到8细胞的11枚胚胎进行冷冻保存,将其中3枚胚胎解冻后移植给一只受体猕猴。结果表明: 上浮法和percoll法都是有效的精子优选法,对受精率的影响差异不显著; 咖啡因和dbcAMP在精子体外获能过程中缺一不可; 理想的受精密度应在2×105精子/ml左右; 在超促排卵后采集的卵母细胞进一步成熟过程中,添加血清和激素会取得更好的结果; 胚胎的发育过程中,血清和氨基酸都是必需的。冷冻保存后的解冻存活率虽然很高,但可能受受体猕猴数量或其他多种因素的影响,移植后并未受孕。     

心理干预对体外受精-胚胎移植临床妊娠率的影响

目的探讨心理干预对体外受精-胚胎移植临床妊娠率的影响及其在辅助生育技术中的应用价值。方法选择2004年5月1日-2006年4月30日在我院生殖医学中心进行IVF-ET的268例难治性不孕症夫妇,随机分为A、B两组,两组病人均填写焦虑自评量表(SAS)及抑郁自评量表(SDS),并进行精神状态评分。A组192例于体外受精-胚胎移植全过程中对其进行系统的心理干预。B组76例顺其自然不进行心理干预。观察两组病人的用药量、取卵个数、受精率、卵裂率及临床妊娠率,并进行比较。结果两组病人的用药量、取卵个数、受精率、卵裂率无显著差异(P>0.05);但A组病人的临床妊娠率明显高于B组(P〈0.05〉。结论系统的心理干预有利于提高IVF-ET的临床妊娠率。     

NO对小鼠卵母细胞及胚胎发育的影响

目的 评价外源性NO对小鼠卵母细胞体内成熟、体外受精及胚胎发育的影响. 方法受试雌性小鼠超排卵期间分别腹腔注射NO供体硝普钠(SNP)1.0、5.0和10.0 mg/kg,对照组雌性小鼠注射等量的生理盐水.注射hCG 15 h后处死小鼠,收集卵母细胞进行体外受精和胚胎培养,观察卵母细胞的成熟度、受精率、早期胚胎的发育能力及其形态学变化.结果 5.0 mg/kg SNP组M Ⅰ期卵母细胞和M Ⅱ期卵母细胞的比例较对照组和1.0 mg/kg SNP组升高(P＜0.05,P＜0.01),而受精率降低(P＜0.01),10.0 mg/kg SNP组小鼠在注射药物20 min后全部死亡;5.0 mg/kg SNP组2-细胞胚胎以后各阶段胚胎的卵裂率低于对照组和1.0 mg/kg SNP组(P＜0.01),并被阻滞在桑葚胚期;5.0 mg/kg SNP组形态异常胚胎的比例高于对照组和1.0 mg/kg SNP组(P＜0.01).结论 较高浓度NO抑制卵母细胞体内成熟、体外受精及早期胚胎发育并影响胚胎的质量.