龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌牙龈素基因片段的检测

目的：检测慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）的2个基因片段kgp-cd和rgpB-cd,探讨2个基因片段的存在和缺失与牙周临床指标之间的关系.方法：选择慢性牙周炎患者龈下菌斑84个,对P.gingivalis阳性的龈下菌斑样本进行kgp-cd和rgpB-cd基因片段检测;根据2个基因片段的有无,将P.gingivalis分为A型和B型,采用SPSS11.5统计软件包,用t检验和x2检验分析不同基因型P.gingivalis与牙周临床指标的关系.结果：A型P.gingivalis在慢性牙周炎中的检出率高于B型（P＜0.05）,分别为85.29%和14.71%.不同基因型P.gingivalis引起的牙周袋探诊深度和牙龈出血倾向存在显著性差异（PD：t=2.85,P＜0.05;BOP：P＜0.05）.结论：kgp-cd和rgpB-cd基因与P.gingivalis的致病性有关.     

牙龈卟啉单胞菌在龈下菌斑中的分布

研究牙龈卟啉单胞菌在牙周炎患者病变部位和健康部位龈下菌班中的分布情况,方法：选择６４例成年牙周炎患者,取龈下菌斑,经厌氧培养,挑战产黑色素菌落,经多聚酶链反应鉴定牙龈卟啉单胞菌。结果：产黑色素Ｇ＾－厌氧杆菌和牙龈卟啉单胞菌的患者检出率分别是６７．２％和６０．９％。牙龈卟啉单胞菌在病变部位和健康部位的检出率分别是３５．９％和２８．１％,二者差异无统计学意义;牙龈卟啉单胞菌在病变部位和健康部位的检出株     

青春期龈炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌kgp基因型的研究

目的 研究青春期龈炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）的特异kgp基因型，评估其与疾病严重程度之间的关系。方法检查并记录青春期龈炎组与牙龈健康组各36例的牙周临床指数，收集龈下菌斑样本，提取染色体DNA，采用聚合酶链反应（PCR）方法扩增编码牙龈蛋白酶K（KGP）催化域的序列片段。PCR产物用限制性内切酶Mse I消化。结果 P.gingivalis有毒株W83表现为kgp-A型，而无毒株ATCC33277表现为kgp-B型。所有P.gingivalis阳性个体的龈下菌斑中只检测到一种kgp基因型。kgp-A型在青春期龈炎组P．gingivalis阳性个体中的检出率为79．0％，在牙龈健康组为22．2％，两组kgp基因型的检出率差异有统计学意义（P=0．028）；青春期龈炎组有P.gingivalis定植的个体中，牙周临床指数与kgp的基因型无相关关系（P〉0．05）。结论青春期龈炎个体定植的Pgingivalis的kgp基因型多与有毒株P.gingivalis W83的表现相同，有必要监测kgp-A型阳性的个体，因其个体发展为牙周疾病的危险度可能会增高。     

青春期龈炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的检测

目的:检测青春期龈炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的存在情况,探讨青春期Pg与牙龈健康状况的关系。方法:14～17岁青春期龈炎患者及牙龈健康者各36例,采用16SrRNA聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测2组受检者的龈下菌斑样本中Pg的存在,并用电泳凝胶成像分析软件检测各电泳条带的平均灰度值,计算Pg的相对含量;同时检测并记录受检者的各牙周指数测值,观察其与Pg相对含量的相关性。数据用SPSS11.5软件包作统计学分析。2组Pg阳性检出率的比较采用χ2检验;Pg的相对含量以及Pg阳性检出者与阴性检出者的牙龈炎严重度的比较采用Wilcoxon秩和检验;Pg的相对含量与各牙周指数之间的相关关系采用Spearman相关分析。结果:青春期龈炎组与牙龈健康组的龈下菌斑中Pg的阳性检出率分别为47.22%和25.00%,两者之间具有显著性差异(P<0.05);青春期龈炎组与牙龈健康组的Pg在龈下菌斑中的平均相对含量分别为48.02%和21.46%,统计学上有高度显著性差异(P<0.01);在青春期龈炎组Pg阳性个体中,Pg的相对含量与牙龈指数(gingivalindex,GI)、龈沟出血指数(sulcusbleedingindex,SBI)、探诊深度(probedepth,PD)数值的高低呈正相关;青春期龈炎组中,Pg阳性检出者的GI、SBI数值高于阴性检出者,两者之间具有高度显著性差异(P<0.01)。结论:青春期个体的龈下菌斑中有Pg的定植,且与牙龈健康状况有密切关系。     

不同牙周状态下龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌kgp基因差异研究

目的：探讨不同kgp基因型P.gingivalis在慢性牙周炎发生发展中的作用。方法：选择不同牙周状态下的龈下菌斑样本104个,根据kgp—cd基因序列的不同用限制性片断长度多态性分析的方法将P．gingivalis分为4个基因型。结果：慢性牙周炎患者病变重部位和病变轻部位检出率最高的分别为kgpcdⅡ型（56．25％）和Ⅰ型（51．72％）,对照组仅检出kgp--cdJ型（25％）和Ⅲ型（75％）。结论：kgpcdⅡ型P．gingivalis可能与慢性牙周炎的关系最密切,在致病过程中起主要作用,而kgp—cdⅠ型可能与慢性牙周炎无关,为健康人群或牙周健康部位的定置菌。     

牙周炎患者基础治疗后牙龈卟啉单胞菌的定植研究

目的 通过对牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalu,Pg)的检测,探讨慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)和侵袭性牙周炎(aggressive periodontitis,AgP)患者牙周基础治疗后Pg的定植规律.方法 选取90例CP患者和90例AgP患者,在牙周基础治疗前、治疗后6周、12周共采集龈下菌斑样本1620个,运用AmpliFluor终末点定量聚合酶链反应方法 检测Pg含量.结果 治疗后6周CP和AgP组Pg活动位点分别为61(22.6%)和66(24.4%)个,两者差异无统计学意义(P>0.05);治疗后6周Pg活动位点在治疗前检测的牙周临床指数高于Pg静止位点.治疗后12周两组Pg活动位点分别为96(35.6%)和18(6.7%)个,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后12周Pg活动位点在治疗后6周时检测的牙周临床指数高于Pg静止位点.结论 在牙周基础治疗后6周时,CP和AgP患者Pg定植均已开始,仉是两组定植规律存在一定差异.在牙周基础治疗后,治疗前牙周组织炎性反应严重的龈下位点Pg易于定植.     

青春期龈炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的牙龈蛋白酶K的表达

目的:检测并比较青春期龈炎的牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)临床分离株的分泌蛋白和菌体蛋白中牙龈蛋白酶K(Kgp)的表达强度,揭示Kgp与青春期龈炎之间可能存在的致病关系。方法:受试对象为14～17岁青春期龈炎患者36例,检测并记录受检者的各牙周指数GI、SBI和PD测值,取龈下菌斑进行P.gin-givalis的分离培养,16SrRNAPCR法鉴定。将P.gingivalis临床分离株于对数生长期末提取分泌蛋白和菌体蛋白,用抗KgpN-末端IgG亚基的单克隆抗体进行Westernblot检测,采用SPSS11.0软件包,秩相关检验分析Kgp的表达强度与各牙周指数之间的相关关系。结果:青春期龈炎的P.gingivalis临床分离株的分泌蛋白和菌体蛋白中,KgpN-末端IgG亚基的表达强度与各牙周指数数值的高低有正相关关系,统计学上有显著性差异(P<0.01)。结论:Kgp对青春期龈炎有一定的致病作用。     

牙龈卟啉单胞菌在龈下菌斑和颊黏膜中的检测

目的　检测牙周健康者及牙周炎患者在颊黏膜和龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的阳性率,探讨其与牙周炎发生和发展的关系。方法　选取40例牙周健康者和39例慢性牙周炎患者,分别收集颊黏膜和龈下菌斑样本,提取细菌DNA,设计细菌通用引物和牙龈卟啉单胞菌的特异引物用于PCR扩增,检测牙龈卟啉单胞菌的阳性率。结果　牙周健康组菌斑样本和颊黏膜样本牙龈卟啉单胞菌的阳性率分别为37·5%和32·5%,而牙周炎组菌斑样本和颊黏膜样本牙龈卟啉单胞菌的阳性率分别为69·23%和46·15%。牙周炎组菌斑的牙龈卟啉单胞菌阳性率高于牙周健康组,颊黏膜的牙龈卟啉单胞菌阳性率在组间无统计学差异;牙周炎组菌斑牙龈卟啉单胞菌阳性率高于颊黏膜, 牙周健康组两部位阳性率无统计学差异。结论　牙龈卟啉单胞菌除在菌斑中有高检出率外,在颊黏膜中也有较高的检出率,提示颊黏膜也是牙周细菌在口腔定植的重要部位,牙龈卟啉单胞菌也可在健康人群中检出,提示其有可能是口腔内固有菌群之一。     

牙龈卟啉单胞菌脂蛋白基因在慢性牙周炎及牙周健康者中的检测

目的 应用基因芯片技术检测3种脂蛋白基因PG0717、PG0183、PG2135在慢性牙周炎患者和牙周健康者牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)中的分布,探讨这些基因与牙周临床指数之间的关系,为研究脂蛋白在Pg致病过程中的作用提供依据.方法 选取41例慢性牙周炎患者(牙周炎组)及76例牙周健康者(健康对照组),记录探诊深度、附着丧失、探诊出血及牙齿松动度,取龈下菌斑进行细菌分离培养,以临床采集的样本提取的DNA为探针,以抑制消减杂交技术获得的PgW83特异基因片段PG0717、PG0183、PG2135为目标序列,采用Cy5荧光标记目标序列.应用基因芯片技术检测PG0717、PG0183、PG2135基因在牙周炎组病变部位、非病变部位和健康对照组Pg中的分布.结果在牙周炎组病变部位PG0717、PG0183、PG2135基因的检出率分别为90%(18/20)、70%(14/20)、70%(14/20),非病变部位的检出率分别为60%(12/20)、45%(9/20)、40%(8/20),而在健康对照组PG0717、PG0183、PG2135的检出率分别为55%(11/20)、25%(5/20)、30%(6/20).3种脂蛋白基因在牙周炎组病变部位和健康对照组中的检出率差异均有统计学意义(P＜0.05),并且与牙周探诊深度、临床附着丧失、探诊出血及牙齿松动度相关.结论 带有PG0717、PG0183、PG2135基因的Pg菌株致病力强.     

慢性牙周炎患者龈下菌斑中不同基因型牙龈卟啉单胞菌的检测

摘要 目的:建立临床标本中牙龈卟啉单胞菌(P.g)的PCR检测方法,探讨慢性牙周炎患者不同牙位的龈下菌斑中P.g基因型的差异。方法:采用培养法分离鉴定慢性牙周炎患者不同牙位龈下菌斑中P.g,同时采用PCR检测 P.g16SrDNA、prtC和fimA基因。部分扩增产物测定了核苷酸序列。结果:在66例患者的127个龈下菌斑标本中, P.g16SrDNA、prtC和fimA多重引物扩增的阳性率为9814%;PCR阳性率显著高于培养法P.g的检出率(P< 0101)。3010%的患者(18/60)同时感染了不同基因型的P.g菌株。P.g16SrDNA、prtC和fimA扩增片段的核苷酸序列同源性在98162%~100%之间。结论:本文所建立的P.g的PCR检测方法具有较高的敏感性和特异性,适用于P.g的快速临床诊断。同一患者可被不同感染来源的多株P.g同时感染。     

大鼠实验性牙周炎中牙龈卟啉单胞菌rgpB和kgp变化的研究

目的:通过建立大鼠实验性牙周炎模型,检测不同时段大鼠上颌第一磨牙龈下人工定植的牙龈卟啉单胞菌、牙龈素rgpB和kgp相对含量的改变,动态观察牙周炎发展不同阶段牙龈卟啉单胞菌致病基因的变化。方法:选择6周的成年雄性大鼠13只,应用钢丝结扎法和细菌种植法建立大鼠实验性牙周炎模型。分别在4周和8周取上颌第一磨牙龈下菌斑,提取细菌DNA,应用PCR方法进行牙龈卟啉单胞菌、牙龈素基因rgpB和kgp特异引物扩增,应用SPSS13.0统计软件,分析大鼠牙周炎不同时段rgpB和kgp的相对变化。结果:大鼠实验性牙周炎模型,龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的相对含量实验组明显高于对照组,8周组高于4周组;实验组牙龈卟啉单胞菌牙龈素rgpB和kgp明显高于对照组,4周组和8周组rgpB和kgp相对含量无显著性差异。结论:rgpB基因和kgp基因与牙周炎的致病性有关而与牙周炎的严重程度可能无直接相关。     

维吾尔族慢性牙周炎中牙龈卟啉单胞菌菌fimA毒力基因型的分布

目的：分析维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA毒力基因型的分布情况。方法：收集52例维吾尔族慢性牙周炎患者的龈下菌斑，采用16SrRNA PCR法检测牙龈卟啉单胞菌，并根据菌毛fima毒力基因型的特异引物，用聚合酶链反应（PCR）检测Ⅱ型fimA和Ⅳ型fima菌株的分布。结果：16SrRNA PCR法检测牙龈卟啉单胞菌在龈下菌斑中阳性检出率是76．9％。牙周袋PPD〉6mm位点龈下菌斑标本的P．gingivalis检出率高于4〈PPD≤6mm采样的位点，2组差异有统计学意义（P〈0．05）。牙龈卟啉单胞菌菌毛．fimA毒力基因型在牙龈卟啉单胞菌感染者的检出率分别是：Ⅱ fimA型为37．5％，ⅣfimA型为22．5％。结论：维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌有较高的检出率。牙龈卟啉单胞菌存在fima毒力基因多态性。     

牙龈卟啉菌、中间普氏菌的分离、培养和鉴定

目的：采用厌氧培养和鉴定技术，分离牙周炎患者龈下菌斑中的牙龈卟啉菌和中间普氏菌。方法：采集牙周炎患者的龈下菌斑，厌氧培养，分离产黑色素菌。经长波长紫外灯观察，各种生化分析和间接免疫荧光染色，分离和鉴定牙龈卟啉菌，中间普氏菌。结果：在受检的33例牙周炎患者中，24例患者检出了牙龈卟啉菌，总检出率为72．77％，共分离了79株。18例患者检出了中间普氏菌，总检出率为54．54％。共分离了32株。结论：厌氧培养，生化反应鉴定技术的发展，使牙龈卟啉菌和中间普氏菌的分离与培养准确可靠，为今后在分子水平上了解各菌株的致病机理打下了基础。     

Sequence variations in rgpA and rgpB of Porphyromonas gingivalis in periodontitis

Objective:  The aim of the present study was to determine sequence variations in the active centre of the Arg-X-specific protease encoding genes rgpA and rgpB of clinical Porphyromonas gingivalis isolates and to analyse their prevalence in periodontitis patients before and 3 months after mechanical periodontal therapy.
Background:  Genetic diversity at nucleotides 281, 283, 286 and 331 has been shown to result in amino acid substitutions in the catalytic domain of RgpA and RgpB that affect the substrate specificity and thus may influence the efficacy of Arg-X-protease specific inhibitors.
Methods:  Sequence analysis of rgpA and rgpB genes in clinical P. gingivalis strains isolated from subgingival plaque samples of 82 periodontitis patients before and 3 months after mechanical supra- and subgingival debridement was performed.
Results:  No specific variation within the rgpA sequence was observed. However, the rgpB sequence in the region of the active centre showed five different rgpB genotypes, which were named NYPN, NSSN, NSSK, NYPK and DYPN according to the derived amino acid substitution. Porphyromonas gingivalis genotype NYPN was detected in 27 patients (32.9%) before and in 8 patients (9.8%) after therapy, NSSN in 26 (31.7%) and 10 (12.2%), NSSK in 22 (26.8%) and 2 (2.4%), NYPK in 5 (6.2%) and 1 (1.2%), and DYPN in 1 patient (1.2%) and 0 patients (0%), respectively. Only one patient (1.2%) harboured two P. gingivalis rgpB genotypes (NSSK/NYPN) before treatment; these were no longer detected after therapy.
Conclusion:  The results indicate that five rgpB genotypes are maintained in natural populations of P. gingivalis. These data may be of importance with regard to the development of specific rgpB inhibitors.     

Associations between Porphyromonas gingivalis and oral treponemes in subgingival plaque

Colonization and/or proliferation of Treponema denticola may depend on the presence of Porphyromonas gingivalis . The aims of this study were to confirm this synergistic relationship, to determine whether other oral bacteria were similarly associated with P. gingivalis and to relate coinfection to the periodontal status of plaque donors. Subgingival plaque was collected from every tooth except third molars in 106 subjects who were grouped by their worst periodontal condition. In addition to P. gingivalis , monoclonal antibodies were used to identify Campylobacter rectus, Eikenella corrodens, T. denticola, Treponema socranskii and pathogen-related oral spirochetes. Associations of these bacteria with coinfection by P. gingivalis were assessed by estimated odds ratios. The results indicate that coinfection with P. gingivalis is linked to all tested bacteria, but each pair was associated with distinct periodontal conditions. The distribution of coinfected sites suggests biased colonization of facial surfaces over lingual surfaces.