Cripto-1基因沉默对人肝癌MHCC-97H细胞侵袭、迁移能力的影响

 目的: 探讨Cripto-1蛋白在人肝癌组织和肝癌细胞系中的表达,研究沉默Cripto-1基因后对肝癌细胞MHCC-97H侵袭和迁移能力的影响及可能的机制。方法: 采用Western blot检测11对肝癌组织及相应的癌旁组织和不同肝癌细胞株中Cripto-1蛋白的表达;收集80例肝癌石蜡标本,免疫组织化学方法检测Cripto-1蛋白的表达情况;Cripto-1 siRNA转染肝癌细胞MHCC-97H细胞后,real-time PCR和Western blot分别检测转染效率;Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot分别检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达。结果: Western blot检测结果显示肝癌组织中Cripto-1蛋白的表达明显高于对应的癌旁组织,Cripto-1蛋白在各肝癌细胞系中均有表达,且表达量高于对照细胞,其中高侵袭性肝癌细胞MHCC-97H表达量最高;免疫组织化学结果显示Cripto-1蛋白在88.7%的肝癌组织中表达;Cripto-1 siRNA转染MHCC-97H细胞后能显著降低Cripto-1 mRNA和蛋白的表达水平,并且能降低其侵袭和迁移能力;Western blot结果表明,Cripto-1基因沉默后能抑制MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论: Cripto-1在肝细胞癌中的高表达可能与肝癌的发生发展密切相关,下调Cripto-1的表达可以抑制肝癌细胞侵袭和迁移能力,其机制可能与下调MMP-2、MMP-9的表达有关。     

肿瘤坏死因子-α对人卵巢功能的影响

卵巢中存在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的自分泌和/或旁分泌调节作用。我们以往的研究发现TNF-α抑制离体大鼠黄体细胞基础孕酮分泌和cAMP生成，Pitzel等报道了TNF-α显著抑制猪黄体细胞孕酮生成，但TNF-α对人卵巢生殖活动的影响国内外尚未见研究报道。本文从血清中TNF-α的浓度与不孕症及功能性子宫出血的关系和TNF-α对颗粒细胞和黄体细胞的直接作用，作了较系统的研究，旨在为临床妇产科疾病的诊治提供有意义的线索。1 材料和方法1.1 材料：TNF-α为北京邦定生物医学公司产品，人绒毛膜促性腺激素(hCG)、胶原酶Ⅱ型、DNA酶Ⅰ型…     

冬凌草甲素对人肝癌MHCC-97H细胞系侵袭和迁移的作用

目的:探讨冬凌草甲素(oridonin)对肝癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法:采用细胞培养技术培养人肝细胞癌MHCC-97H细胞,用不同浓度的冬凌草甲素处理肝癌细胞,采用划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell实验测定细胞的侵袭能力;黏附实验评价细胞的黏附能力;Western blot法检测LIM激酶1(LIMK-1)、丝切蛋白(cofilin)和磷酸化cofilin(p-cofilin)蛋白水平的改变。结果:冬凌草甲素可明显降低肝癌细胞的体外侵袭、迁移及黏附能力(P0.05),且在一定浓度范围内具有明显的量效关系。冬凌草甲素干预处理细胞后,cofilin的蛋白水平无明显变化,LIMK-1和p-cofilin的蛋白水平明显下调。结论:冬凌草甲素体外具有抑制肝癌MHCC-97H细胞侵袭和迁移的作用,其机制可能与调控LIMK-1/cofilin信号通路有关。     

肿瘤坏死因子α基因转导的疫苗对小鼠肝癌移植瘤的影响

应用我院已构建的肿瘤坏死因子基因转导的人肝癌细胞作为免疫原 ,进行小鼠免疫接种 ,观察接种后小鼠对移植的肿瘤细胞的免疫排斥作用 ,探索其能否作为一种肝癌疫苗。培养已转入ＴＮＦ基因的ＢＥＬ 740 4 ＴＮＦ细胞和未转入基因的ＢＥＬ 740 4细胞。分别给予总剂量各为 80Ｇｙ和 40Ｇｙ的60 Ｃｏ照射 ,照射方法为每天 1次每次2 0Ｇｙ连续进行 ,完成总剂量后作为疫苗。昆明种小白鼠 40只 ,雌雄各半 ,随机分转入基因组 (ＢＥＬ 740 4 ＴＮＦ)、转入基因60 Ｃｏ照射组 (ＢＥＬ 740 4 ＴＮＦ Ｃｏ)、未转入基因组 (ＢＥＬ 740 4)、未转入基因60 …     

秋水仙碱对肿瘤坏死因子—α基因表达的影响

微管聚合抑制剂秋水仙碱（Ｃｏｌ，１０μｍｏｌ／Ｌ）可抑制ＬＰＳ刺激ＰＵ５－１．８细胞的ＴＮＦ－ａ基因表达，以前工作曾证实Ｃｏｌ主要抑制ＴＮＦ－αｍＲＮＡ的转录。本研究进一步证实这种抑制作用呈延迟性，即Ｃｏｌ需作用３小时才能充分表现其负性影响。而且这种抑制作用可被蛋白合成抑制剂放线菌酮（ＣＨＸ）完全阻断。单用Ｃｏｌ对ＬＰＳ诱导的ＴＮＦ－αｍＲＮＡ稳定性无明显影响，而与ＣＨＸ联用时则可明显延长ＬＰＳ诱导的ＴＮＦ－αｍＲＮＡ半衰期。以上资料堤示，Ｃｏｌ对ＴＮＦ－α基因表达的影响可能是对其在转录及转录后水平综合影响的结果。     

抗人肿瘤坏死因子α嵌合抗体的研制

目的：研制抗人肿瘤坏死因子(rTNF—α)嵌合抗体。方法：以具有中和TNF—α活性的鼠源性单抗(Z12)的轻、重链可变区基因，构建人—鼠嵌合抗体基因的表达载体，并转染COS7细胞。用RT—PCR、ELISA、免疫印迹及体外中和rTNF—α活性实验，分别对瞬时表达的抗rTNF—α嵌合抗体(CZ12)的细胞培养上清进行检测：结果：①瞬时转染后，细胞系经RT—PCR检测有人—鼠嵌合抗体mRNA的转录：②ELISA和Western blot检测表明，CZ12与TNF—α产牛特异性反应，并识别相对分子质量(Mr)为17000的TNF—α。③竞争抑制实验中，CZ12能竞争抑制Z12与rTNF—α的特异惟结合，④体外中和实验汪实，CZ12能中和TNF—α对L929细胞的毒性。结论：成功地研制具有中和活性的人—鼠嵌合抗体CZ12。     

肿瘤坏死因子α与高血压

高血压（Hypertension）是临床最常见的疾病之一，也是动脉粥样硬化（AS）、脑血管疾病等发生的危险因素，其与胰岛素抵抗（Insulin resistance，IR）、肥胖、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、终末肾血管疾病等密切相关。流行病学调查显示，1991年我国高血压患病率已达11．88％，推算我国现有高血压患者一亿以上，每年新增病例20余万人，严重威胁着人民健康。     

肿瘤坏死因子—α对中性粒细胞凋亡的影响

细胞凋亡是生物界普遍的生命现象,是由基因控制的细胞自主的有序性的死亡,与临床疾病关系密切。中性粒细胞（ＰＭＮ）是一种主要的炎性细胞,本实验通过光镜、电镜、电泳。流式细胞仪等方法研究了重要的炎性介质肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）对正常和炎症状态下外周血ＰＭＮ凋亡的影响。结果表明,ＴＮＦ－α可以诱导ＰＭＮ凋亡,且与作用时间作用浓度相关,ＰＭＮ的凋亡在炎症微环境中被改变,ＰＭＮ凋亡延迟,对ＴＮＦα反应性下     

人肿瘤坏死因子α基因对绒毛膜癌耐药细胞凋亡影响的体内研究

目的　研究转染人肿瘤坏死因子α(huTNF α)基因对裸鼠绒毛膜癌 (绒癌 )耐药细胞移植瘤组织细胞凋亡的影响。　方法　用人绒癌耐药细胞系JEG 3 VP2和转染了huTNF α的绒癌耐药细胞系JEG 3 VP2 huTNF接种裸鼠各 6只 ,行足叶乙甙 (VP16 )化疗后 ,采用RT RCR、HE染色和TUNEL检测方法 ,观察移植瘤细胞的凋亡情况。结果　在接种JEG 3 VP2 huTNF α的移植瘤组织中 ,存在huTNF α基因的表达 ;JEG 3 VP2 huTNF α组出现凋亡小体的细胞和TUNEL阳性细胞明显多于JEG 3 VP2组 ,P <0 0 5。　结论　转染huTNF α基因促进了绒癌耐药细胞的凋亡。     

肿瘤坏死因子α对骨组织细胞的调节

背景：肿瘤坏死因子α是一种作用广泛的炎性细胞因子,在机体的免疫炎症反应中起重要作用。目前的研究认为,肿瘤坏死因子α对多种骨组织细胞具有显著的生物学效应。目的：总结肿瘤坏死因子α在成骨及破骨细胞中的表达及作用途径,以进一步阐明肿瘤坏死因子α对骨组织细胞的调控作用。方法：检索截至2023年3月的PubMed及中国知网数据库中的相关文献,中文检索词包括“肿瘤坏死因子α,成骨细胞,破骨细胞,骨细胞,骨祖细胞”;英文检索词包括“TNF-α,osteoblast,osteoclast,osteocyte,osteoprogenitor cell”,并根据研究需要确立相应的标准,对最终所得文献进行筛选,最终纳入77篇文献进行综述。结果与结论：(1)肿瘤坏死因子α参与调控了骨祖细胞的募集、增殖与分化,但在特定环境下导致骨祖细胞剥离及死亡。同时通过分泌酶类直接或间接参与骨质吸收。(2)肿瘤坏死因子α能够通过激活破骨系细胞中相关信号通路,提高环境中炎性因子水平,或在特定环境下直接诱导破骨细胞生成。(3)肿瘤坏死因子α可通过激活核转录因子κB信号通路,抑制RUNX2和Osterix等转录因子的表达从而抑制成...     

肿瘤坏死因子α拮抗剂的研究进展

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的过量表达与很多疾病密切相关，应用TNF-α的拮抗剂降低这些疾病中的TNF-α水平，将成为一种有效的治疗措施。已开发的TNF-α拮抗剂主要包括TNFR与IgG的Fc段形成的融合蛋白和抗TNF-α的单抗两大类，利用抗体嵌合技术、CDR区移植和噬菌体展示技术对抗TNF-α的单抗进行了人源化，并开展了对类风湿性关节炎和结肠Crohn病等免疫性疾病的临床试验研究。本文就这些TNF-α拮抗剂的研究进展作一综述。     

新型基因工程人肿瘤坏死因子-α对小鼠移植性肿瘤生长的抑制作用

目的 观察新型基因工程人肿瘤坏死因子α（nrhTNF-α)，对小鼠移植性肿瘤（肉瘤S180，肝癌H22，黑素瘤B16和Lewis肺癌）生长的抑制作用。方法 以3种剂量（37．5，75和150万U/kg体重的）nrhTNF-α肌肉注射小鼠，每天1次，连续8d。通过称量所形成的肿瘤重量。观察nrhTNF-α对瘤细胞株的抑制作用。结果 肿瘤抑制率计算结果显示，nrhTNF-α对4株瘤细胞的生长均有较明显的抑制作用，且呈剂量依赖关系。另外，在剂量相同的情况下，nrhTNF-α的抑制作用明显强于重组人TNF－α（rhTNF-α)。结论 nrhTNF-α对小鼠移植性肿瘤生长具有很强的抑制作用。本研究为nrhTNF-α临床的应用提供了重要的实验依据。     

肿瘤坏死因子α拮抗剂的研究进展

肿瘤坏死因子 α(TNF α)的过量表达与很多疾病密切相关 ,应用TNF α的拮抗剂降低这些疾病中的TNF α水平 ,将成为一种有效的治疗措施。已开发的TNF α拮抗剂主要包括TNFR与IgG的Fc段形成的融合蛋白和抗TNF α的单抗两大类 ,利用抗体嵌合技术、CDR区移植和噬菌体展示技术对抗TNF α的单抗进行了人源化 ,并开展了对类风湿性关节炎和结肠Crohn病等免疫性疾病的临床试验研究。本文就这些TNF α拮抗剂的研究进展作一综述。     

人肿瘤坏死因子α组合突变体生物学特性的研究

目的 研究hTNFα的结构与功能。方法 比较了野生型hTNFα与其单突变体Ｒ２Ｋ－、Ｎ３０Ｓ－、Ｒ３２Ｗ－和Ｌ１５７Ｆ－hTNFα及两种组合突变体Ｒ３２Ｗ－Ｌ１５７Ｆ－hTNFα和Ｒ２Ｋ－Ｎ３０Ｓ－Ｒ３２Ｗ－Ｌ１５７Ｆ－hTNFα的细胞毒活性、受体结合能力,以及动物体内毒性。结果 发现两种组合突变体基本保持了与野生型相当的对人肿瘤细胞的细胞毒活性,但对小鼠Ｌ９２９细胞的活性明显下降;两种组合突变体与hTR75的结合能力的下和程度要大于hTR55;小鼠体内毒性测定实验表明,两种组合突变体的毒性显著降低,其中双突变体的ＬＤ５０为野生型的３００倍左右,而四突变体对恒河猴的体内毒性也比野生型hTNFα明显降低。结论 获得具有潜在应用价值的ＴＮＦ－α四突变体。     

肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ对人血管内皮细胞组织因子表达的影响

已知组织因子异常表达可启动血液凝固机制。用细胞发色底物法、ＲＴ－ＰＣＲ等方法分别从蛋白活性、基因表 达水平研究与动脉粥样硬化及高血压发病相关的肿瘤坏死因子、血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞组织因子表达的影响。 结果表明：肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ均诱导血管内皮细胞组织因子的表达,并使其ｍＲＮＡ表达增加。此项研 究为进一步探讨动脉粥样硬化和高血压的共同发病机制打下基础。     

肿瘤坏死因子-α对微循环障碍大鼠心功能的影响

目的:观察微循环障碍大鼠心功能的变化,探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对其心功能的影响。方法:30只SD大鼠随机分为模型组和对照组,每组各15只。模型组用自体微血栓法致大鼠冠脉微血管堵塞,造成微循环障碍。采用冠脉压力温度测量导丝检测冠脉微循环阻力指数(IMR),心脏超声检测左室短轴缩短率(FS),颈动脉心室内插管法评估大鼠左室收缩压(LVSP)和左室舒张末压(LVEDP),ELISA检测血清中TNF-α的含量,比较两组大鼠以上各指标的差异。将造模成功的14只微循环障碍大鼠按照TNF-α的含量分为高炎组(≥170pg/ml,n=7)和低炎组(<170pg/ml,n=7),比较两组大鼠心功能的差异。结果:与对照组比较,模型组大鼠IMR明显增加(P<0.05),FS明显降低(P<0.05),LVSP显著降低(P<0.01),而LVEDP显著升高(P<0.01);模型组血清TNF-α的含量较对照组显著增加(P<0.05)。高炎组FS和LVSP较低炎组均明显降低(P<0.05或P<0.01),而LVEDP显著升高(P<0.05)。结论:冠状微循环障碍大鼠心功能受损与TNF-α水平升高有关。     

肿瘤坏死因子α与肝纤维化

从体外、体内实验和临床研究几方面就目前肿瘤坏死因子α对肝纤维化的启动，肝脏细胞增殖分化的激活，细胞外基质代谢的调节和肝纤维化进程的影响作了介绍。它可能是一种促纤维化形成因子。     

肿瘤坏死因子α多态性与银屑病

肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因位于人类6号染色体短臂主要组织相容性复合体（MHC)Ⅲ区，大量研究表明，TNF-α存在多态性位点，与人类多种疾病的发病相关；银屑病是一种常见的多基因疾病，近年来一些研究提示TNF-α启动子基因的多态性位点-238、-308与银屑病有一定的相关性，从而为银屑病的发病机制研究提供了新的思路。     

人肿瘤坏死因子-α突变蛋白与活性部位分析

利用基因工程技术 ,可以得到大量的hTNF α突变蛋白 ,它们是研究hTNF α活性部位结构与功能关系的有力工具 ,国外许多学者就此方面做了大量的实验研究。本文就影响hTNF α功能的活性区域和主要氨基酸残基以及N端、C端和二硫键与hTNF α生物活性的关系做一综述。