自体骨髓间充质干细胞移植梗死心肌猪的心功能变化

背景：干细胞移植可改善缺血性心肌血供并改善心功能。 目的：进一步验证自体骨髓间充质干细胞在心肌梗死后的应用及效果评价。 方法：15只健康太湖梅山猪通过冠脉栓塞建立心肌梗死模型。随机分为3组,每组5只,其中2组分别在心肌梗死后3 h,2周行自体骨髓干细胞移植,模型组不移植细胞。行心脏超声观察心脏功能各指标的改变;并在不同时间点检测血清血管内皮生长因子值;在实验终点取大体标本并通过免疫组织化学检测移植细胞在心肌内定植及分化情况,检测心肌血管密度。 结果与结论：心肌梗死3 h组与模型组比较,射血分数、左室舒张期内径、左室收缩期内径各项心功能指标及心肌血管密度、不同时间点血清血管内皮生长因子水平差异无显著性意义。心肌梗死后2周移植组与模型组相比,心功能指标均有改善,心肌血管密度大于模型组,血清血管内皮生长因子水平明显高于较移植前(P < 0.05)。提示不同时间点心肌微环境对于骨髓来源的间充质干细胞分化及定植的影响,心肌梗死后急性期内局部微环境不利于移植细胞的存活,在瘢痕修复早期行骨髓干细胞移植对骨髓干细胞的分化和定植以及对心功能的改善有较好的效果。     

经静脉心肌超声造影对心肌梗死患者自体骨髓单个核细胞移植后心肌微循环的评价

目的利用经静脉心肌超声造影（IMCE）观察心肌梗死患者自体骨髓单个核细胞移植术前后心肌微循环的变化。方法40例急性心肌梗死患者在病情稳定后7～10d,行延迟经皮冠状动脉成形术（PCI）。随机分成骨髓细胞移植组（20例）和对照组（20例）,观察术前、术后1月、术后6月左心室舒张末内径（LVDd）,左室射血分数（LVEF）和术前及术后1个月的IMCE,测量平台期的心肌显像增大强度A,曲线上升平均斜率β及A与β之积在手术前后的变化。结果移植组LVEF由术前的（37.26±4.21）1月后上升到（54.42±5.26）（P〈0.05）;而对照组差异不显著（38.86±4.63对40.28±4.56）（P〉0.05）。LVDd移植组术后6月与术前比较差异不显著（50.23±3.42对52.48±3.26）（P〉0.05）;而对照组（50.96±2.68对64.31±3.28）（P〈0.05）心脏有扩大趋势。IMCE示手术后相关心肌节段的A、β及A.β均较术前显著增加。其中A.β（dB/s）移植组由术前的2.37±0.16（dB/s）增加到术后的15.60±0.24（dB/s）;较对照组（2.06±0.12至7.98±0.23）增加更为明显（P〈0.05）,示急性心肌梗死延迟PCI术后梗死相关节段心肌血流灌注速度和灌注量均有增加,自体骨髓单个核细胞移植组增加更明显。结论自体骨髓单个核细胞移植可改善梗死区心肌微循环,明显增加心肌血流量。     

自体骨髓单个核细胞移植治疗下肢动脉闭塞症

背景：下肢缺血性疾病治疗中血管再生技术已成为研究的热点。 目的：观察自体骨髓单个核细胞移植后下肢缺血性疾病患者肢体缺血症状的改善情况。 方法：东南大学医学院附属江阴医院胸心血管外科及南京大学医学院附属南京市鼓楼医院血管外科于2007年10月至2011年10月采用自体骨髓单个核细胞治疗35例下肢缺血性疾病患者,抽取自体骨髓单个核细胞,沿下肢动脉走行路径进行多点注射,测定患肢疼痛程度、冷感缓解程度、踝肱指数、经皮氧分压及皮肤溃疡或坏疽面积的改变,动脉造影观察血管新生情况。 结果与结论：①疼痛评分：骨髓单个核细胞移植后2个月和1年的疼痛评分均较移植前有下降趋势,差异有显著性意义(P < 0.05)。移植后2个月与移植后1年评分比较,差异无显著性意义(P > 0.05)。②冷感缓解程度：移植后2个月缓解率为51%,移植后1年缓解率为60%,与移植前比较差异有显著性意义(P < 0.05)。③踝肱指数的变化：移植2个月踝肱指数均较移植前有升高趋势,但差异无显著性意义 (P > 0.05),移植后1年踝肱指数较移植前有明显增高,差异有显著性意义(P < 0.05)。④经皮氧分压的变化：对经皮氧分压增加值进行比较,移植后2个月及移植后1年均较移植前明显增加,差异有显著性意义(P < 0.05),移植后1年与移植后2个月比较差异无显著性意义(P > 0.05)。⑤行走距离：移植后2个月和移植后1年的行走距离明显增加,与移植前比较差异有显著性意义(P < 0.05),移植后1年与移植后2个月比较差异无显著性意义(P > 0.05)。⑥溃疡创面的变化：移植后2个月和1年的溃疡面积均较移植前有缩小趋势,差异有显著性意义(P < 0.05)。⑦新生血管评价：移植后股动脉造影显示缺血下肢注射骨髓单个核细胞的部位毛细血管增生明显,且与已有的毛细血管相互连接形成侧支循环,促进了缺血下肢的血液供应。     

骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死的初步研究

目的观察自体骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死的效果及可行性。方法22例急性心肌梗死患者在入院后随机分为骨髓干细胞移植组(n=6)和对照组(n=16)。干细胞移植组于入院后在常规治疗基础上加用自体骨髓干细胞经冠状动脉注入;对照组按急性心肌梗死常规方法治疗。于入院后第10 d,术后2、4、8周,分别对两组患者左心室射血分数(LVEF)进行观察,并行核素心肌灌注断层显像,测量心肌梗死面积。结果干细胞移植组术前及术后第两周与对照组的心功能及梗死面积无明显差别(P>0.05);术后第4周,患者心功能较第二周明显改善(P<0.01);第六周优于第四周(P<0.01);术后第八周与第六周无明显区别,但明显优于对照组。心肌梗死面积由术前的32.45%±6.5%下降至术后第4周26.23%±5.7%,第六周18.32%±5.34%;而对照组变化不明显(P>0.05)。结论自体骨髓干细胞移植可缩小心肌梗死的范围,有效改善心功能,有望为心肌梗死患者提供一种新的治疗方法和思路。     

骨髓单个核细胞移植治疗脑出血

BACKGROUND:It has been proved that bone marrow mononuclear cell transplantation can obviously improve neurological function of rats with cerebral hemorrhage. OBJECTIVE:To investigate the effects of transplanted bone marrow mononuclear cells on the neurological function and apoptosis in perihematomal brain tissues following cerebral hemorrhage in a rat model. METHODS:Twenty-four Sprague-Dawley rats were given stereotaxical injection of collagenase IV into the caudate nucleus to establish cerebral hemorrhage models in transplantation group (n=12) and model group (n=12), and then at 6 hours after cerebral hemorrhage, rats in these two groups were administrated 3x10¹⁰/L allograft bone marrow mononuclear cells and the same amount of PBS, respectively. Another 12 rats were given no interventions as control group. Neurological functions of rats were assessed at 1, 4, 8, 16 days after cerebral hemorrhage; pathological changes of the injury sites were observed at 16 days after transplantation; neuronal apoptosis rates in the perihematomal brain tissue were detected by flow cytometry at 2 and 4 days after transplantation. RESULTS AND CONCLUSION:The modified neurologic severity scores in the transplantation group were significantly lower than those in the model group at 8 and 16 days after cerebral hemorrhage (P < 0.05). In the control group, cells in each layer arranged closely with complete structure, and neurons and glial cells were in good shape; in the model group, perihematomal brain tissues were loose with intercellular gap, in which most neurons and glial cells became necrotic; in the transplantation group, cells in each layer arranged closely and regularly, and glial cell proliferation occurred. Besides, compared with the model group, the neuronal apoptosis rate in the transplantation group was significantly lower (P < 0.05). To conclude, bone marrow mononuclear cells can significantly enhance the neurological function recovery and reduce neuronal apoptosis in the brain of cerebral hemorrhage rats.     

不同途径移植骨髓单个核细胞修复创伤性脑损伤

背景：干细胞移植存在多种途径,目前还无法确定哪一种是最佳途径。而对于不同的脑损伤个体,所移植的细胞种类、移植途径和移植时间都将会影响到治疗效果。目的：探讨不同途径移植骨髓单个核细胞对脑损伤大鼠神经功能的影响。方法：Ficoll淋巴细胞分离液梯度离心分离大鼠骨髓单个核细胞,CFDA-SE体外标记后备用;自由落体法制备大鼠创伤性脑损伤模型,模型制作成功后,立即通过损伤区、侧脑室和颈内动脉移植CFDA-SE标记的骨髓单个核细胞,每一种移植途径都设对照组(以等体积的DMEM代替骨髓单个核细胞)。治疗后不同时间点进行mNSS评分,最后一次行为学评分完毕取脑组织,荧光倒置显微镜下观察骨髓单个核细胞在损伤区域的存活和迁移情况。结果与结论：治疗后7,10,14 d,对照组和移植组mNSS评分均较1 d和3 d时降低(P < 0.05);治疗后7 d和10 d,颈内动脉移植组和对照组相比mNSS评分降低(P < 0.05);治疗后14 d,颈内动脉移植组荧光细胞数量较其他组多(P < 0.05),且分布广。结果表明经颈内动脉移植骨髓单个核细胞能明显改善大鼠神经功能,且移植细胞能够在损伤区大量存活和迁移。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

自体骨髓单个核细胞移植治疗缺血性心脏病临床疗效观察

目的 研究经冠状动脉内移植骨髓单个核细胞治疗缺血性心力衰竭的可行性和疗效。方法 缺血性心力衰竭病人20例，抽取骨髓用密度梯度离心法分离出骨髓单个核细胞，经外周动脉穿刺插管，将自体骨髓单个核细胞注入冠脉。比较病人的临床症状，NYHY分级和治疗后由于心血管事件造成的再住院情况。结果 病人自觉症状改善，心功能提高，ECT检查显示在缺血区有血管新生。结论 自体骨髓单个核细胞移植是安全有效的。     

自体骨髓单个核细胞移植治疗大鼠后肢缺血

目的　探讨自体骨髓单个核细胞（BM-MNC）移植用于大鼠缺血后肢的治疗后实现血管再生的能力。方法　建立大鼠后肢缺血动物模型,将取于自体的BM-MNC制成细胞悬液注射于缺血部位,分别在移植后2和30d时行动脉造影,用免疫组化方法检测内皮祖细胞（EPC）,毛细血管密度以及测定血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果　缺血肌组织中的EPC含量增高（P<0.01）。BM-MNC移植组在移植早期VEGF表达显著增高（P<0.01）。细胞移植后30dBM-MNC移植组毛细血管密度明显高于其他组（P<0.01）,血管造影可见侧支循环建立。结论　自体骨髓单个核细胞移植于大鼠后肢缺血区能促进血管新生,改善侧支循环,可望成为一种简单有效的治疗下肢缺血的方法。     

骨髓干细胞动员对大鼠缺血心肌的治疗作用

目的：了解干细胞动员剂动员的骨髓干细胞的心肌细胞分化潜能及对缺血心肌的影响。方法：用异丙肾上腺，素(ISO)制作大鼠心肌梗死模型，联用粒细胞集落刺激因子(C-CSV)和辛伐他汀动员大鼠自体骨髓干细胞释放和迁移至心肌梗死区，用ISO后24小时、4周杀死大鼠，取出心脏，通过免疫组化、HE染色和VG染色方法观察大鼠心梗灶的CD34^ 细胞的浸润及心肌血管再生、心肌纤维化的情况。结果：用ISO后24小时，动员组大鼠心梗区可见CD34^ 细胞浸润，并有CD34^ 的新生心肌细胞生长，4周时瘢痕组织少，心肌纤维化程度轻，缺血心肌基本结构得到保护。结论：急性心梗发生后，联用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和辛伐他汀能迅速动员自体骨髓干细胞向心梗区内迁移、存活和向心肌细胞、血管内皮细胞等分化；并能抑制缺血心肌纤维化和保护缺血心肌基本结构。     

骨髓间充质干细胞移植对缺血心肌的血管新生及增殖-凋亡影响

 目的 探讨骨髓间充质干细胞（BMSC）移植对缺血心肌的血管新生及增殖-凋亡的影响。方法 将雄性小鼠BMSC经尾静脉输入异丙肾上腺素性心肌缺血雌性小鼠（BMSC组）。另设正常对照组和未治疗组。5周后处死小鼠,荧光定量PCR检测心肌Y染色体鉴别基因(SRY)、血管内皮生长因子（VEGF）的表达。天狼猩红染色分析心肌胶原含量。免疫组织化学染色观察心肌VEGF、核增殖抗原(PCNA)和细胞凋亡蛋白酶（caspase-3）的分布。 结果 BMSC组心肌SRY表达明显升高（11.22±0.90 vs 1.05±0.47, P<0.05）。与未治疗组相比,BMSC组的心肌胶原沉积减少(3.44±0.84 vs 8.44±1.09, P<0.05),VEGF(14.19±0.37 vs 11.88±0.28, P<0.05)和PCNA(4.08±0.18 vs 0.64±0.05, P<0.05)表达上调,caspase-3降低（0.46±0.11 vs 3.12±0.28, P<0.05）。 结论 BMSC能归巢至缺血心肌并促进微血管新生,改善心肌增殖-凋亡状态。     

Cardiac contractility after transplantation of autologous mononuclear bone marrow cells in patients with myocardial infarction

Autologous bone marrow mononuclear cells were transplanted by intracoronary infusion to patients with myocardial infarction after recovery of coronary perfusion. Controls received traditional therapy alone. Echocardiography was carried out before and 3 and 6 months after cell therapy. Cell transplantation did not appreciably improved left-ventricular contractility in comparison with the control group. In none patient cell therapy provoked malignant ventricular arrhythmias. Intracoronary infusion of bone marrow mononuclear cells in patients with myocardial infarction did not improve cardiac contractility and did not aggravate the course of the disease. __________ Translated from Kletochnye Tekhnologii v Biologii i Meditsine, No. 1, pp. 15–20, January, 2006     

骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗塞的实验研究

目的研究自体骨髓间充质干细胞(MSC)经冠脉内注射治疗急性心肌梗死(AMI)的有效性和可行性。方法球囊阻塞法制成AMI模型。经冠脉注入标记的MSC,4周后核素心肌断层显像检测相对心肌梗死面积、心肌灌注评分和射血分数,经导管检测左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、压力升高最大速率( dP/dt)和压力下降最大速率(-dP/dt)。免疫荧光法分析MSC的植入和分化。结果与对照组相比,细胞治疗组射血分数显著增加(P<0.05),心肌灌注评分和相对心肌梗死面积显著降低(P<0.01,P<0.05),LVSP、 dP/dt和-dP/dt显著增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01),LVEDP显著降低(P<0.05)。标记的MSC在心肌中阳性表达肌凝蛋白重链、连接蛋白43、平滑肌肌动蛋白和Ⅷ因子相关抗原。结论MSC在体内分化为心肌和血管组织,可改善AMI猪的心功能。     

同种异体骨髓单个核细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死实验研究

目的探讨大鼠同种异体骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells，BM—MNCs）在急性心肌梗死区分化增殖潜能及其修复重建心肌作用。方法健康雄性Wistar大鼠24只，用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型，随机分为对照组（AMI＋培养基，12只），移植组（AMI＋BM—MNCs，12只）；分别将制备的培养基和BM—MNCs悬液心外膜下植入梗死心肌周围。移植术后4周，观察心肌梗死区及其周边区组织形态学特点、心肌梗死面积变化。结果实验组与对照组相比心肌梗死面积明显缩小（P〈0．01）；实验组心肌梗死区内有BrdU标记阳性的BM—MNCs移植细胞存活，向心肌源性细胞分化并且诱导了大量的新生毛细血管。结论同种异体BM—MNCs移植在细胞水平完成了对心肌梗死区再心肌化和再血管化过程，可以改善急性心肌梗死后的心脏功能。     

骨髓单个核细胞移植后心肌梗死区的血管生成及细胞因子分泌

背景：干细胞移植为治疗心肌梗死带来新的希望,但研究结果不一致,存在争议。细胞移植能否长期持久地改善心脏功能、改善缺血心功能的机制这些问题均不明确。 目的：观察经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死犬心功能、血管生成和细胞因子分泌的影响。 方法：杂种犬分为骨髓单个核细胞组(n=10)和生理盐水组(n=6),前上嵴或髂后上棘穿刺分离得到骨髓单个核细胞,结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,于心肌梗死后2 h分别经冠状动脉内移植骨髓单个核细胞和生理盐水,心肌梗死后2 h及6周时分别测定超声心动图指标,骨髓单个核细胞移植后6周vWF免疫组化染色检测心肌组织的毛细血管密度,RT-PCR检测血管内皮生长因子(血管内皮生长因子188、血管内皮生长因子164)、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶9 mRNA的表达。 结果与结论：经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植后6周,超声心动图显示,骨髓单个核细胞组射血分数和每搏输出量比生理盐水组显著升高;梗死边缘区新生血管数量明显高于生理盐水组。骨髓单个核细胞组梗死区血管内皮生长因子188、血管内皮生长因子164和碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达水平显著高于生理盐水组。骨髓单个核细胞组梗死区基质金属蛋白酶9 mRNA 表达水平显著低于生理盐水组。结果说明自体骨髓单个核细胞经冠状动脉内注射移植,改善急性心肌梗死后心功能,促进梗死边缘区血管生成,提高促血管生长因子血管内皮生长因子188、血管内皮生长因子164和碱性成纤维细胞生长因子的mRNA表达水平,减少基质金属蛋白酶9 mRNA表达水平。     

MRI活体示踪心肌梗死大鼠骨髓间充质干细胞的移植

背景：干细胞移植的疗效和安全性评估均需要对体内干细胞的存活、分布、迁徙、增殖及分化进行连续监测。 目的：观察MRI示踪超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞在缺血心肌组织的分布、迁徙情况。 方法：直接贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,获得的细胞进行免疫鉴定。以新型超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞,体外MRI成像确定其体内示踪的可行性。标记后锥虫蓝拒染试验、MTT比色试验分别检测标记细胞的活力、增殖情况。60只SD大鼠随机分为3组,制备大鼠心肌梗死模型2周后再次开胸移植含标记骨髓间充质干细胞的PBS混合液、含未标记骨髓间充质干细胞的PBS混合液和等量PBS。于移植后第1天、第3周行MRI检查,动态观察移植细胞的分布、迁徙,并根据MRI图像定位选择性行CD90免疫组化检查。 结果与结论：骨髓间充质干细胞标记后,普鲁士蓝染色见胞浆内蓝色铁颗粒,标记效率为99%,标记细胞与未标记细胞间锥虫蓝拒染率、MTT吸光度差异无显著性意义。体外MRI可检测到标记细胞,并在T2WI及T2W/FFE序列上呈低信号。细胞移植1 d后,在T2WI及T2W/FFE序列上可见标记细胞在梗死心肌边缘呈类圆形低信号;移植3周后,移植区域信号边界模糊,范围扩大,对比度降低。CD90免疫组化检测证实移植细胞可由梗死边缘向梗死区域迁徙。结果可见新型超顺磁性氧化铁可成功对大鼠骨髓间充质干细胞进行标记,细胞标记后可被MRI检测。     

骨髓间充质干细胞移植心肌梗死大鼠的心功能

背景：前期研究发现移植的骨髓间充质干细胞能在受损心肌组织内存活和分化。 目的：进一步观察局部注射移植同种异体骨髓间充质干细胞对心肌梗死模型大鼠心功能的影响。 方法：体外培养的同种异体骨髓间充质干细胞达到一定数量(10⁶)后用BrdU标记。24只SD大鼠随机分为3组：正常对照组未行冠状动脉前降支结扎,取骨髓间充质干细胞约1 mL直接注射到冠状动脉前降支心肌的周围;假移植组：在冠状动脉前降支结扎后7 d,取等量DMEM培养液直接注射到梗死心肌的周围;骨髓间充质干细胞移植组：冠状动脉前降支结扎后7 d,取等量骨髓间充质干细胞直接注射到梗死心肌的周围;分别于移植前、移植后5周测定大鼠心功能。 结果与结论：①移植后5周假移植组最大左室收缩末压、左室内压最大(最小)变化速率均低于移植前(P < 0.01),而左室舒张末压高于移植前(P < 0.01);移植后5周骨髓间充质干细胞移植组最大左室收缩末压、左室内压最大(最小)变化速率高于移植前(P < 0.01),而左室舒张末压低于移植前(P < 0.01)。②移植后5周,骨髓间充质干细胞移植组大鼠的最大左室收缩末压、左室内压最大(最小)变化速率均高于假移植组(P < 0.01),而左室舒张末压明显低于假移植组(P < 0.01)。结果可见骨髓间充质干细胞移植可明显改善心肌梗死模型大鼠心功能。