益生屎肠球菌RS3的分离鉴定及增殖条件的优化

为筛选具有益生作用的乳酸菌,该研究从泡菜中筛选到1株细菌菌株RS3,经菌落形态观察、生化试验和16 S rRNA序列分析确定为屎肠球菌。为高效获得屎肠球菌RS3菌体,对其最佳增殖条件进行优化研究。利用单因素筛选和中心复合响应面试验对屎肠球菌RS3菌体增殖用液体培养基和增殖条件进行研究,优化的最佳培养基为乳糖15 g/L、胰蛋白胨25 g/L、初始pH值为8.2、培养温度37℃。与优化前培养条件相比,优化后培养条件下菌体生物量提高了54.9%,乳酸产量提高了53%,为后期规模化培养和益生菌剂开发奠定基础。     

广式腊肠加工过程中肠球菌变化规律及其分离鉴定

本文对广式腊肠烘烤加工过程中肠球菌的变化规律进行了研究,结果发现:肠球菌在烘烤0-18 h时数量增加,烘烤18,,-54h数量下降,烘烤54h后数量缓慢提高,至烘烤结束时肠球菌数量为2.74logcfu/g,占乳酸菌总数的0.04%,为次要茵群.分离得到的两株肠球菌AD4和AD8经鉴定为屎肠球菌.AD4和AD8能够在50℃生长以及耐受6.5%NaCl,因此能够适应广式腊肠的环境;AD4和AD8均不具有明胶酶活性,但都具有溶血性,表明广式腊肠中的肠球菌具有某些毒力因子.     

自然发酵乳中粪肠球菌和屎肠球菌的4种鉴定方法的比较

采用传统生理生化鉴定方法,16S rRNA基因序列分析技术,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术,变性梯度凝胶电泳技术(DGGE),对分离于自然发酵乳中的9株粪肠球菌和6株屎肠球菌进行鉴定,并对4种鉴定方法进行比较和评价。结果表明,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术和DGGE技术不但可以快速、精确地区分粪肠球菌和屎肠球菌,而且能够将粪肠球菌和屎肠球菌种内的不同基因亚型区分开,而传统生理生化鉴定方法和16S rRNA基因序列分析技术较以上两种方法区分效果略差。     

基于比较基因组学研究粪肠球菌乳源分离株的安全性

粪肠球菌为同型发酵乳酸菌,在食品生产中应用广泛。然而,很多粪肠球菌为条件致病菌,使其在食品中的应用存在很大的争议。本文以粪肠球菌乳源分离株为研究对象,探究粪肠球菌乳源分离株的安全性。采用Illumina Hiseq高通量测序平台对35株粪肠球菌乳源分离株进行全基因组测序,与NCBI数据库中下载的21株粪肠球菌粪便分离株进行比较基因组学分析。结果表明,粪肠球菌整体基因组长度为(2.93±0.13)Mb,GC含量在(37.43±0.13)%,转运RNA(tRNA)有(56±4)个,编码序列(CDS)数量在(2 768±146)个。粪肠球菌乳源分离株平均基因组长度与粪便分离株无显著差异,而平均CDS数量显著高于粪便分离株。系统发育树结果显示同分离源的菌株聚类在同一进化分支,该结果与平均核苷酸一致性(ANI)聚类结果基本一致。乳源分离株含有5~11种耐药基因、8~24种毒力因子及18~31个可移动遗传元件,与粪便分离株相比较,乳源分离株平均每株菌少携带3个耐药基因和毒力因子,多2.4个可移动遗传元件。因此即使是在乳制品中分离得到的粪肠球菌,也存在致病的风险,使用前需要经过严格的安全性评价。     

欧拉型藏羊源粪肠球菌的分离鉴定及药敏实验

从健康欧拉型藏羊肠道内容物中分离粪肠球菌,进行初步鉴定,旨在筛选出具有优良益生特性的菌株并研究其生长特性。对分离菌株EF1-mh进行分离纯化、革兰氏染色镜检、生化测定试验、16S rDNA测序鉴定试验、生长曲线测定和产酸能力检测、药敏试验和抑菌试验。结果显示,分离菌株EF1-mh为无芽孢、无菌毛的革兰氏阳性球菌。生化测定试验显示分离菌株EF1-mh能分解麦芽糖、葡萄糖、果糖等,不能分解甘露醇、山梨醇、棉子糖、L-鼠李糖、阿拉伯糖等,具有L-精氨酸双水解酶活性,胆汁七叶苷琼脂指示剂结果呈黑色,不产生硫化氢,吲哚试验、VP试验呈阴性,不利用西蒙氏枸橼酸盐和葡萄糖酸盐作为能源,不能还原硝酸盐。16S rDNA测序鉴定分离菌株EF1-mh为粪肠球菌（Enterococcus faecalis）。生长曲线测定和产酸能力结果显示EF1-mh菌株具有较强的生长能力和弱产酸能力。药敏试验结果显示EF1-mh菌株对苯唑西林、头孢呋辛、头孢氨苄、头孢拉定、多西环素、米诺环素表现出中度敏感;对呋喃唑酮、复方新诺明、头孢他啶、多粘菌素B表现出耐药。抑菌试验结果显示EF1-mh菌株上清液可有效抑制常见致病菌的生长,对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和产气荚膜梭菌4株常见致病菌都具有抑制作用,抑菌效果较好;其中对产气荚膜梭菌抑菌能力最强。研究结果将为进一步探索藏羊源微生态制剂提供基础候选菌株。     

产细菌素屎肠球菌SC-Y112的体外益生性及安全性评价

屎肠球菌SC-Y112是一种具有广谱抗菌性质的产细菌素乳酸菌,为更深入了解其菌株性质,本研究通过模拟胃肠液耐受实验、胆盐耐受实验、抗氧化活性测定、溶血活性测定、明胶液化实验、有害代谢物质检测、耐药性评价及肠球菌毒力基因检测对屎肠球菌SC-Y112的体外益生性质与安全性质进行分析评价.结果表明:屎肠球菌SC-Y112对模...     

1株分泌细菌素屎肠球菌ZJ19的筛选和鉴定

从浙江大学医学院附属妇产科医院的健康初生婴儿粪便中分离获得76株乳酸菌,通过琼脂平板扩散法筛选到1株乳酸菌菌株,该菌不仅对革兰氏阳性菌,如单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有抑菌活性,同时对大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血性杆菌等阴性菌也有较好的抑菌活性。通过排除有机酸、过氧化氢等的干扰后,该菌发酵液离心后的上清液仍有较强的抑菌活性,用蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶分别处理后该上清液均失去抑菌活性,由此确定该乳酸菌产生的抑菌活性物质具有蛋白质属性,为1种细菌素。该细菌素具有热稳定性,在pH 3.75,121℃热处理30 min,抑菌活性仍保持在80%以上。经过生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定菌株为屎肠球菌,命名为Enterococcus faecium ZJ19。     

北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌种水平鉴定及耐药特征

目的评价和比较不同肠球菌种水平鉴定方法的准确性,了解北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌的种水平分布及耐药特征。方法利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和VITEK 2 COMPACT两种方法对北京市集贸市场生鲜猪肉肠球菌开展种水平鉴定,两种方法鉴定结果不一致的菌株使用API 20 Strep、16S rRNA和23S rRNA序列分析再次鉴定。比较不同种肠球菌对10种临床常用抗生素的药物敏感性。结果在5种肠球菌种水平鉴定方法中,16S rRNA序列分析和最终结果的符合率最高,为100.0%;VITEK 2 COMPACT符合率最低,仅为4.0%(1/25)。在86株肠球菌中,粪肠球菌占82.6%(71/86),其次为希拉肠球菌占14.0%(12/86)。粪肠球菌对环丙沙星(CIP)的耐药率高于希拉肠球菌,差异有统计学意义(χ~2=10.751,P0.01);对四环素(TET)、高浓度链霉素(HLSR)和高浓度庆大霉素(HLGR)的耐药率均高于希拉肠球菌,但差异无统计学意义(TET:χ~2=3.865,P0.05;HLSR:χ~2=1.608,P0.05;HLGR:χ~2=0.553,P0.05),但对红霉素(ERY)和氯霉素(CHL)的耐药率明显低于希拉肠球菌,差异有统计学意义(ERY:χ~2=20.244,P0.01;CHL:χ~2=14.139,P0.01)。结论 16S rRNA和MALDI-TOF-MS序列分析技术在肠球菌种水平快速鉴定上有较高准确性,不同种属肠球菌呈现不同耐药特征,本研究为有效监测食源性耐药肠球菌的传播和流行提供了科学数据。     

泡菜源屎肠球菌RS3的菌株生长特性及耐药谱研究

为获得安全高效抗逆性强、性状优良的乳酸菌菌株,对从泡菜中分离获得的屎肠球菌RS3进行生长特性和耐药谱研究。结果表明屎肠球菌RS3为革兰氏阳性兼性厌氧细菌,菌体呈椭圆形或圆形,4个～5个成团簇状或短链状分布;菌体无运动能力;菌体脂肪酸指纹图谱分析发现其特征峰主要为十四碳烷酸、十六碳烷酸、十六碳烯酸、十八碳烯酸和十八碳二烯酸;可特征性发酵山梨醇和D-棉子糖,但不可发酵L-阿拉伯糖和甘露糖,在牛奶培养基发酵液中乳酸含量为5.73 g/L;对氨苄西林霉素敏感,对头孢噻吩等抗生素表现出一定的耐药性,该研究为进一步评估并利用此株屎肠球菌RS3开发为益生菌剂提供了理论参考。     

两株粪肠球菌的安全性评价

乳酸菌KLDS6.0610和KLDS6.0611是两株分离于传统乳制品的粪肠球菌,这两株菌均会产生高效抗李斯特菌的细菌素,而且产生的细菌素具有良好的加工稳定性。本实验主要是评价这两株菌的安全性,为其实际应用提供可靠的理论依据。通过对两株菌的耐药性、有害代谢产物、机体指标、急性毒理实验以及溶血性和易位实验得到:急性毒理实验中,动物的体重变化正常而且主要脏器无异常;两株菌对大部分常见的抗生素都没有耐药性,只是对庆大霉素具有抗性,不含有可转移的质粒;而且菌株的生长代谢过程中不会产生硝基还原酶、胆盐羧化酶和氨基脱羧酶;谷胱甘肽和丙二醛含量基本正常,不会产生溶血和易位现象。通过对两株菌的安全性评价可知乳酸菌KLDS6.0610和KLDS6.0611是安全的。     

Isolation and identification of enteropathogenic Campylobacter spp. from chicken samples in Taipei

A total of 95 chicken samples that consisted of 34 whole chickens, 32 organs (gizzards and livers), and 29 chicken parts (drumsticks, wings, and breasts), collected from traditional retail markets (no chilling facilities) and supermarkets in Taipei, were examined for the occurrence of enteropathogenic campylobacters. Three selective media, Peterz's charcoal cefoperazone deoxycholate agar, Campy-Cefex agar, and charcoal-based selective medium, were evaluated for their efficacy to isolate Campylobacter spp. from chicken samples. The results showed that there were no differences among the three media to isolate Campylobacter spp. from all chicken samples (P > 0.05). However, there were markedly different isolation rates of campylobacters between supermarket and retail market (P < 0.05). Enteropathogenic campylobacters (C. jejuni and C. coli) were found on 68% of whole chickens, 100% of chicken parts, and 100% of organs from retail markets. In supermarkets, the isolation rates of these campylobacters from whole chickens, chicken parts, and organs were 42%, 53%, and 60%, respectively. The low isolation rates of the two campylobacters isolated from chicken samples in supermarkets differed statistically from those obtained from traditional retail markets (P < 0.10). The API CAMPY test kit also was evaluated for the identification of Campylobacter spp. as compared with the conventional identification method. The results showed that the API CAMPY test kit (Biomerieux, Marcy-l'Etoile, France) could efficiently detect 87 Campylobacter spp. isolates from chicken samples examined, with 100% agreement at the genus level to 94% at the species level as compared with conventional methods.     

食品香辛料和调味品中克罗诺杆菌的分离与鉴定

利用生理生化鉴定方法和分子生物学方法对从湖南、湖北、江苏和上海等地的8个地区采集的64份干制食品香辛料和调味品样品进行了克罗诺杆菌分离与鉴定,结果从19份样品中检出了克罗诺杆菌,污染率为29.7%,其中检出率较高的样品为白胡椒粉、花椒粉和红辣椒粉,污染率分别为62.5%、50.0%和33.3%。本研究从采样的7个地区的样品中检出了克罗诺杆菌,其中检出率最高的地区为湖南永州,其次为上海市和湖北赤壁,检出率分别为50.0%、37.5%和33.3%。利用基于fus A基因序列分析的方法对克罗诺杆菌分离株进行了种的水平的鉴定,结果将本研究分离得到的克罗诺杆菌鉴定为5个种,其中9株(47.4%)被鉴定为阪崎克罗诺杆菌(C.sakazakii),4株(21.0%)为苏黎世克罗诺杆菌(C.turicensis),3株(15.8%)为都柏林克罗诺杆菌(C.dublinensis),2株(10.5%)为丙二酸盐阳性克罗诺杆菌(C.malonaticus),1株(5.3%)为尤尼沃斯克罗诺杆菌(C.universalis)。研究结果表明市售干制食品香辛料和调味品中存在克罗诺杆菌的污染,应该加强对该类食品中克罗诺杆菌的流行病学监测。      

Assessment of probiotic characteristics of lactic acid bacteria isolated from fermented yak milk products of Sikkim,India: Chhurpi,Shyow, and Khachu

The present study documents the probiotic attributes of indigenous lactic acid bacteria (LAB) isolated from local fermented Yak milk products namely Chhurpi, Shyow and Khachu prepared in the northern and eastern region of Sikkim in the Himalayas. Samples were collected aseptically and a total of 170 LAB was isolated and screened for putative probiotic properties like hypocholesteromic effect, acid tolerance, bile tolerance, bile salt hydrolase (BSH) activity and cell surface hydrophobicity. It was observed that 70 LAB isolates showed cholesterol lowering activity, out of which 35 isolates were selected that showed 50% and less cholesterol reducing effect in vitro. Acid tolerance test revealed good tolerance of 12 isolates at pH 2.5 and pH 2.0 for up to 2 hours. The tolerance to 0.5% and 1% of three bile salts acid revealed more growth in MRS broth containing taurocholic acid with the isolates revealing good BSH activity leading to bile acid deconjugation. The cell surface hydrophobicity ranged from 20–95%. Furthermore, 16S rRNA gene sequencing revealed Lactobacillus plantarum YD5S and YD9S, L. pentosus YD8S, L. paraplantarum YD11S, Enterococcus lactis YHC20 and E. faecium YY1 as the best isolates with technological properties. The isolates may serve as potential probiotic candidates with potential for hypocholesteromic benefits in the future.     

人母乳源乳酸菌的筛选、鉴定及益生活性的初步研究

本研究从人母乳中分离乳酸菌。采用透明圈法从产后10³0 d的人母乳样品中筛选到一株产酸能力较强的乳酸菌。对筛选菌株进行形态学观察、生理生化实验及16S r DNA序列鉴定。结果发现,该菌株为革兰氏阳性,短杆状,无芽孢;生理生化特性符合鼠李糖乳杆菌的基本特征;16S r DNA序列及进化树分析进一步确认该菌株为鼠李糖乳杆菌,命名为鼠李糖乳杆菌Z5。在p H3.0的条件下模拟人工胃肠液共消化6 h后该菌存活率仍达90%以上,在0.15 g/L胆盐质量浓度培养6 h,菌株存活率为76.14%;抑菌实验发现,菌株培养液对沙门氏菌及大肠杆菌的生长有明显的抑制作用,抑菌圈直径达20 mm以上。细胞黏附实验发现,该菌株可有效黏附到Caco-2细胞表面,对Caco-2细胞的平均黏附数为7.54×105cfu/m L。从人母乳中获得了这株具有潜在益生性质的鼠李糖乳杆菌,为明确母乳中益生菌的功效及开发新型益生菌产品研究提供了良好的实验材料。      

豆腐酸浆老汤中产酸菌的分离筛选与鉴定

利用MRS选择性培养基,从分别采自山东邹平、陕西榆林、河北涞源、云南石屏、云南建水及云南元阳的6份酸浆老汤中分离纯化出12种菌落形态不一样的乳酸菌,分别采用MC改良培养基和发酵黄浆水p H及产酸量的监测对12种菌进行初筛及复筛,筛选出一株产酸较快、较高的乳酸菌,并对该菌株进行了菌落形态、生理生化及16S r DNA序列分析的鉴定实验,结果表明:该菌株为革兰氏阳性菌,菌落特征为白色,圆形,表面突起,不透明,边缘整齐,镜检发现该菌为球菌、直径为0.8μm,四联或成串排列,经生理生化及16S r DNA序列鉴定确定该菌为肠球菌属中的屎肠球菌(Enterococcus faecium),遗传稳定性较好。      

食品能力验证中沙门氏菌的分离和鉴定

目的为了提升实验室食品中沙门氏菌检测能力,增强实验室竞争能力,本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的沙门氏菌检测能力验证活动。方法依据中华人民共和国国家标准GB 4789.4-2010,采用传统分离方法和血清学鉴定,联合全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2-compact)对分离出的疑似菌进行生化鉴定。结果编号为CODE1样品+CODE1奶粉混合样检出纽波特沙门氏菌和科林德尔沙门氏菌,CODE3样品+CODE3奶粉混合样检出维普拉沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和埃科沙门氏菌,其余8个样品未检出。结论顺利完成本次能力验证活动。     

一株高效油脂降解菌的分离鉴定及其性能研究

从餐馆隔油池废水中筛选分离得到一株能高效降解油脂的芽孢杆菌DK-1,经16S rDNA同源性序列分析,鉴定为解淀粉类芽孢杆菌,并进一步考察了菌株的生物量、油脂去除率、CODCr去除率及乳化活性等性能。实验结果表明,菌体的乳化指数为65%,在初始油脂质量浓度为5 g/L,CODCr为55 000 mg/L左右的模拟高含油有机废水中,该菌株能生长并快速降解油脂,在48 h内油脂去除率为97.3%,CODCr的去除率为91.9%。     

一株椰糠纤维降解菌的分离、鉴定及特性研究

以椰糠作为碳源,从红树林土壤中分离了一株高产纤维素酶的真菌,命名为DZ10。经形态、生理生化和分子生物学试验,鉴定菌株DZ10为长枝木霉菌（Trichoderma longibrachiatum）。该菌在pH值为6.5、培养温度为35 ℃、初始NaCl含量为2.0%、添加K+终浓度为0.1 mmol/L条件下,椰糠降解率最高为39.88%;在pH值为6.5、培养温度40 ℃、初始NaCl含量3.0%、添加K+终浓度为0.1 mmol/L条件下,羧甲基纤维素酶活力（CMCA）最高值为80.07 U/mL;在pH值为6.0、培养温度35 ℃、初始NaCl含量1.5%、添加K+终浓度为0.1 mmol/L条件下,滤纸酶活力（FPA）最高值为73.81 U/mL。Ca2+、K+对菌株DZ10产酶和椰糠降解率有促进作用,Mg2+抑制菌株DZ10产酶和椰糠降解率。     

健康成人粪便中双歧杆菌的分离鉴定及其发酵乳体内特性研究

为筛选具有潜在益生功能的双歧杆菌,采用MRS培养基,结合菌落形态观察和16S rDNA基因序列同源性分析,从上海地区健康的成人粪便中分离鉴定双歧杆菌,通过7 L发酵罐发酵试验筛选优良菌株,并利用其制备发酵乳,对发酵乳的体内特性进行研究。结果表明,分离并鉴定到3株长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）（编号为P-1、P-2和P-3）,其中菌株P-2制备的发酵乳在稳定期活菌数最高,遗传稳定性好,被确定为优良菌株,并被命名为DD98。菌株DD98制备的发酵乳能显著增加小鼠胃肠道内有益菌、减少有害菌的表达（P＜0.05）,具有调节肠道菌群的作用。此外,能维持小鼠正常的体质量、血常规指数,有利于小鼠脏器的生长。     

青方腐乳中益生乳酸杆菌的筛选鉴定及益生特性研究

该研究从青方腐乳样品中分离具有潜在益生功效的乳酸杆菌,通过形态学观察及分子生物学技术对其进行鉴定。对筛选菌株进行人工胃液、胆盐的耐受性及其细胞表面特性测定,并对复筛菌株进行清除亚硝酸钠、降胆固醇、乳糖消耗、抑菌和抗氧化等益生特性试验。结果表明,从青方腐乳样品中共分离筛选得到24株菌（编号为S1～S24）,通过人工胃液、胆盐的耐受性及其细胞表面特性测定复筛得到8株菌,分别为菌株S6、S10、S11、S13、S17、S21、S23、S24,其中菌株S6被鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）;其降亚硝酸钠、胆固醇及乳糖的能力分别为86.84%、61.22%、29.13%;羟基、DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率分别为79.15%、56.29%、58.14%。综上,菌株S6对所有试验病原菌的拮抗能力最强,可作为潜在的益生菌。