消渴颗粒剂对大鼠系膜细胞TGF-β1表达的影响

目的 :观察高糖和消渴颗粒剂含药血清对大鼠系膜细胞增殖及TGF - β1表达的影响 ,探讨消渴颗粒剂治疗糖尿病肾病的机制。方法 :采用系列筛网法分离肾小球 ,经胶原酶消化后 ,分装至塑料培养瓶中 ,在 5 %CO2 ,37℃恒温恒湿培养箱内孵育培养。 2 - 3周后进行转种。经相差显微镜、扫描电镜观察 (scaningelectronmicroscope,SEM) ,免疫细胞化学染色actin和desmin染色均为阳性 ,证实为系膜细胞后 ,进行以下实验。用 2 0mmol/L葡萄糖刺激系膜细胞 12h、2 4h、4 8h、72h和 96h ,以 5mmol/L葡萄糖为正常对照 ,MTT比色法观察系膜细胞的增殖情况…     

Megsin基因转染对小鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1及细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:观察megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,分别培养12、24、48 h,采用MTT法检测细胞增殖程度,免疫细胞化学和Western blot法检测系膜细胞megsin、MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,ELISA检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果:高糖环境中肾小球系膜细胞megsin、MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,megsin基因转染后上述变化趋势更加显著,而megsin shRNA质粒转染可明显减弱上述变化。结论:Megsin可上调MCP-1及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚。     

TGF-β1基因转染对大鼠树突状细胞生物学特性的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染对大鼠树突状细胞生物学特性的影响。方法 将TGF-β1基因导入体外培养的大鼠树突状细胞，经过G418筛选后，采用Western blot和水貂肺上皮细胞(Mv1)生长抑制试验，了解转染细胞TGF-β1的表达及其生物学活性。通过混合淋巴细胞反应，观察转染的树突状细胞对T淋巴细胞增殖的影响。结果 FGF-β1基因转染的树突状细胞可以分泌TGF-β1，而且具有特异性抑制Mv1增长的生物学活性。在混合淋巴细胞反应中，TGF-β1基因转染的树突状细胞对T淋巴细胞的增殖有抑制作用，而空载体pcDNA3对照组与未转染组的树突状细胞具有强烈的激发T细胞增殖的能力。结论 利用构建的TGF-β1表达质粒转染大鼠树突状细胞，转入的TGF-β1基因可以在树突状细胞内稳定表达，并且使树突状细胞的生物学特性发生相应的改变。     

髓系细胞TGF-β1基因缺失增加小鼠对结肠炎的易感性

目的 探究髓系细胞中TGF-β1基因敲除对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)引发的小鼠结肠炎发病进程的影响以及与神经肽因子的关系。方法 TGF-β1+/+LysM-Cre及TGF-β1f/fLysM-Cre小鼠分别分成2组,饮用无菌水的小鼠命名为TGF-β1+/+LysM-Cre water及TGF-β1f/fLysM-Cre water;饮用含2%DSS无菌水的小鼠命名为TGF-β1+/+LysM-Cre DSS及TGF-β1f/fLysM-Cre DSS。检测小鼠质量;记录死亡率;测量结肠长度;HE染色检测结肠组织中炎症细胞浸润情况;QRT-PCR及免疫组化检测结肠组织中炎症因子,神经肽及其受体的表达水平。结果 TGF-β1+/+LysM-Cre water及TGF-β1f/fLysM-Cre water小鼠均表征正常;而TGF-β1+/+LysM-Cre DSS及TGF-β1f/fLysM-Cre DSS小鼠的结肠炎症状明显,此外,相比TGF-β1+/+LysM-Cre DSS小鼠,TGF-β1f/fLysM-Cre DSS小鼠的质量降低更多,死亡率增加了60%,结肠长度更短,结肠组织炎症细胞浸润更明显,且QRT-PCR及免疫组化结果均显示其炎症因子、神经肽因子及受体表达水平更高。结论 髓系细胞敲除TGF-β1会增加小鼠对结肠炎的易感性,神经肽在其中发挥着一定的作用。     

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白和TGF-β1表达的影响

目的：研究醛固酮（ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（SPI）对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白（FN），以及对转化生长因子B1（TGF-β1）基因表达的影响。方法：（1）以不同浓度的ALD（10^-11、10^-9、10^-7mol／L）及／或10^-7mol／L SPI刺激肾小球系膜细胞48h后，用ELISA法测定培养上清中FN的浓度。用半定量RT-PCR法检测该细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。（2）以10^-9mol／L的ALD刺激系膜细胞不同时间（24、48、72h）后，分别用上述方法测定培养上清中FN的浓度和细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。结果：（1）ELISA的结果显示，ALD可促进系膜细胞合成分泌FN，且呈剂量和时间依赖性，SPI能拮抗ALD的作用。（2）半定量RT-PCR的结果显示，ALD可促进系膜细胞FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达，也呈剂量和时间依赖性，SPI也能拮抗ALD的作用。结论：ALD在蛋白和基因水平上均可促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN，及TGF-β1mRNA的表达，SPI能拮抗ALD的作用，具有一定的肾脏保护作用，从而有益于延缓肾小球硬化的进展。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧和TGF-β1表达的影响

目的 探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧(ROS)和转化生长因子β1，(TGF-β1)表达的影响及茶多酚的干预作用。方法 培养人肾小球系膜细胞，分为正常对照组、高糖组、茶多酚组和茶多酚干预组，培养0、12、36h后，用分光光度比色法测定细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，用半定量RT-PCR和免疫细胞化学法检测细胞内TGF-β1，mRNA和蛋白表达的变化。结果 高糖导致系膜细胞SOD活性下降和MDA含量升高，上调TGF-β1，mRNA和蛋白表达，随时间延长更为明显；茶多酚干预可拮抗高糖时系膜细胞的上述改变。结论 高糖能促进人肾小球系膜细胞ROS产生增加，上调TGF-β1 mRNA和蛋白表达，茶多酚能抑制高糖对系膜细胞的作用。     

ABCE1基因在人肾小球系膜细胞中的表达

ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette transporter E1,ABCE1)属ATP结合盒转运子基因亚家族成员之一,其表达定位于细胞质及线粒体.该基因在人体各组织器官表达具有特异性.     

缬沙坦对高糖环境中肾小球系膜细胞Megsin表达的影响

目的观察缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞megsin、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨缬沙坦对糖尿病肾病的防治作用。方法高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,于培养12 h、24 h、48 h末,应用MTT法检测细胞增殖程度,分别应用免疫细胞化学和Western印迹法检测系膜细胞megsin、p-p38MAPK、MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞megsin、p-p38MAPK、MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,缬沙坦干预组上述变化明显减弱。结论缬沙坦可下调megsin、p-p38MAPK、MCP-1及ICAM-1表达,抑制系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,发挥其独立于降压之外的肾脏保护作用。     

TGF-β1对Heymann肾炎肾小球细胞外基质的影响

目的 探讨TGF-β1对不同病变阶段主动型Heymann肾炎肾小球细胞外基质的影响。方法 建立主动型Heymann肾炎模型，在主动型Heymann肾炎第4、6、8和12周，用RT-PCR法检测TGF-β1 mRNA在病变肾组织内的表达，并用免疫组化SP法检测纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原在Heymann肾炎病变各阶段大鼠肾小球内的表达，再用计算机图像分析系统进行定量分析。结果 自主动型Heymann肾炎模型诱发后第4周开始，TGF-β1 mRNA即有表达，至第8周最明显，第12周有所下调。主动型Heymann肾炎大鼠肾小球内纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原的含量，随TGF-β1表达的上调和病变的进展而增多。结论 TGF-β1可能通过刺激主动型Heymann肾炎大鼠肾小球上皮细胞产生过量细胞外基质，从而介导了主动型Heymann肾炎病变的发生和发展。     

芳维A酸乙酯对体外培养小鼠肾小球系膜细胞增殖、凋亡及TGF-β1分泌的影响

目的研究芳维A酸乙酯(AE)对体外培养小鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响。方法采用MTT法检测芳维A酸乙酯(AE)、全反式维A酸(atRA)对GMC增殖的影响;采用流式细胞仪检测AE干预后GMC的凋亡情况;采用ELISA法检测AE干预后GMC培养上清液中TGF-β1的含量。结果与正常组对比,AE干预组GMC增殖受到抑制(P<0.05),且当浓度在10~(-8)到10~(-5)mol/L范围内时,作用成剂量依赖性。AE能够诱导GMC的凋亡,正常组、10~(-7)mol/L、10~(-5)mol/L的AE干预组的GMC细胞凋亡率分别为(1.13±0.36)%、(9.52±0.99)%和(27.23±2.88)%。AE能够抑制GMC的TGF-β1分泌,与空白对照组,AE干预组TGF-β1表达降低(P<0.05)。AE抑制GMC增殖、诱导GMC凋亡及抑制GMC TGF-β1分泌的作用明显强于atRA。结论AE可以抑制体外GMC增殖并能诱导凋亡,其抑制增殖的作用可能与TGF-β1表达降低有关。AE可干预狼疮性肾炎病理病理进程。     

高糖培养人肾小球系膜细胞对TGF-β1、FN、Smad7表达的影响

目的:通过观察高糖对人肾小球系膜细胞(HMCs)转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)、Smad7表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制。方法:将HMCs于高糖(30mmol/L)环境培养不同时间后,采用RT-PCR方法检测TGF-β1、FN、Smad7 mRNA表达,Western blotting检测Smad7蛋白的表达,采用ELISA检测TGF-β1、FN蛋白水平,同时以低糖培养作为对照组。结果:高糖培养24h、48h、72h后,TGF-β1 mRNA及蛋白的表达均较低糖培养对照组增加,在48h时达到高峰;FN mRNA及蛋白的表达亦较对照组增加,且呈时间依赖性;而Smad7 mRNA及蛋白表达下降。结论:TGF-β1/Smad信号转导途径负反馈调节Smad7蛋白的表达减少,可能是DN发病过程中的重要环节之一。     

细胞因子,地塞米松对肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子—1的影响

探讨细胞因子和地塞米松对肾小球系膜细胞表面表达细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的影响。通过体外系膜细胞培养的方法，分别加入不同的细胞因子，观察其浓度及作用时间产生的影响；并用ＥＬＩＳＡ法检测不同浓度的地塞米松对系膜细胞表达ＩＣＡＭ－１的影响。结果显示系膜细胞表达ＩＣＡＭ－１的强弱与细胞因子的作用呈剂量、时间依赖关系；随着地塞米松浓度的增加，ＩＣＡＭ－１表达逐渐减弱，与未加地塞米松组相比相关均非常     

EGCG对小鼠调节性T细胞的产生及细胞因子TGF-β1表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对小鼠体内调节性T细胞(Treg)的产生及转化生长因子TGF-β1的表达和分泌的影响。方法:选择健康、雄性、体重相近的BALB/c小鼠40只,随机分为4组(n=10),设立不同剂量浓度的EGCG组(10、50、85 mg/kg)和对照组。EGCG组每天给予EGCG腹腔注射一次,连续注射3天,对照组每天给予等体积生理盐水腹腔注射一次,连续注射3天。采用流式细胞仪检测小鼠脾脏Treg细胞的产生。采用荧光定量PCR和ELISA方法分别检测小鼠脾脏细胞和外周血TGF-β1因子的表达和分泌水平。结果:与对照组相比较,EGCG处理组小鼠体内的Treg细胞的比例上升,TGF-β1的基因表达水平和蛋白分泌水平均明显增高,当EGCG剂量为85 mg/kg时,其促进作用最明显。结论:EGCG可促进小鼠体内的Treg细胞产生,增强TGF-β1表达和分泌。     

转化生长因子β1基因转染对大鼠骨髓树突状细胞免疫功能的影响

目的 研究人转化生长因子β1(TGFβ1)基因修饰对大鼠骨髓树突状细胞(DC)免疫功能的影响。方法 构建TGFβ1-pcDNA3质粒并转染未成熟DC。检测转染后DC的TGFβ1表达及其功能变化,输注1周后柃测TGFβ1-DC在受者脾和淋巴结的分布、T细胞凋亡水平及T细胞端粒酶表达。结果 TGFβ1-pcDNA3质粒转染DC能有效抑制DC的成熟和分化,并下调Dc的多种功能。TGFβ1基因转染不仅能降低DC对LPS的反应,同时抑制DC在MLR中刺激T细胞增殖的能力。TGFβ1-DC输注受者后,1周内可在脾和淋巴结内形成微嵌合,并有效诱导T细胞的凋亡,抑制T细胞端粒酶的活性和表达。结论 TGFβ1基因能有效抑制DC的多种功能,可用于诱导机体免疫耐受。     

TGF-β1对SW620结肠癌细胞PD-L1表达的影响

目的 研究TGF-β1对SW620结肠癌细胞体外增殖、迁移和PD-L1表达的影响,探讨ERK、AKT在TGF-β1调节PD-L1表达中的作用.方法 MTT法检测TGF-β 1对SW620细胞增殖能力的影响;细胞划痕方法检测TGF-β1对SW620细胞迁移能力的影响;Real-time PCR、Western blot和...     

重组人TGF-β1对TGF-β1基因启动活性的影响

目的：探讨TGF-β1对人TGF-β1基因自身启动子活性的影响。方法：以人全血基因组DNA为模板，PER扩增获得TGF-β1基因转录起始位点上游5′端-1328～ 812bp和 227～ 812bp的片段，以此作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因而不含启动子的pCAT-enhancer质粒构建成重组质粒，并将其转染至大鼠星状细胞株nFSC中，细胞在DMEM培养基中进行培养，用不同浓度的TGF-β1进行干涉，测定并比较细胞的CAT表达水平。结果：不同浓度的TGF-β1对大鼠的肝脏星状细胞的增殖具有抑制作用，而且这种抑制作用在实验用的浓度范围内具有剂量依赖关系；浓度为2．5ng/ml TGF-β1可以使转染phTGF0．585、phTGF1．120、phTGF1．423、phTGF1．680、phTGF2．140质粒的大鼠肝星状细胞的CAT活性分别增加2～5倍。结论：TGF-β1在大鼠nFSC细胞中对TGF-β1启动子活性具有自身促进作用，为进一步研究TGF-β1的调节机制提供了依据。     

妊高征胎盘滋养细胞中TGF-β1mRNA的表达及意义

目的检测滋养细胞中TGF-β1mRNA表达水平,评估TGF-β1 在妊高征中的作用.方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常妊娠胎盘滋养细胞7例、重度妊高征胎盘滋养细胞7例中TGF-β1mRNA表达水平,并通过紫外凝胶图像分析进行定量检测.结果与正常滋养细胞比较,妊高征滋养细胞TGF-β1mRNA的表达强度显著增强(t＝-4.663,P＜0.05).结论妊高征胎盘滋养细胞表达TGF-β1增多可能抑制其侵润能力.     

rhIL-1受体拮抗剂对大鼠肾小球系膜细胞增殖和合成细胞外基质-胶原的影响

采用肾小球系膜细胞(GMC)培养、~3H-TdR掺入及羟脯氨酸测定的方法,首次观察了重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的大鼠GMC增殖和合成细胞外基质-胶原的影响。结果表明:rhIL-1Ra能拮抗hIL-1β诱导的GMC的增殖和胶原的合成;其拮抗增殖的剂量是rhIL-1β的2～50倍,拮抗胶原合成者为rhIL-1β的25～50倍。提示:rhIL-1Ra有望用于治疗由IL-1参与、介导的以系膜细胞增殖和系膜基质扩大为主要病理改变的肾小球肾炎。     

腺病毒介导hTGF-β1基因体内转染兔椎间盘髓核细胞的表达

目的　观察以腺病毒为载体的外源性治疗基因Ad CMV hTGF β1转染兔椎间盘髓核细胞后的表达。　方法　采用本实验室构建的腺病毒载体基因Ad CMV hTGF β12 0 μl(6× 10 6 pfu)注射于纯种成年新西兰大白兔腰椎间盘髓核内 ;手术后不同时间分别取出椎间盘 ,用免疫组织化学方法对椎间盘髓核细胞进行基因表达产物测定 ;用VIDAS图像分析系统进行半定量观察。　结果　免疫组织化学染色显示注射Ad CMV hTGF β1椎间盘 ,4d组可见髓核细胞内呈现阳性染色颗粒 ;1周组即显示强阳性染色 ,阳性表达持续至 12周组。实验对照组及自身椎间盘对照组呈阴性或弱阳性反应。　结论　椎间盘髓核作为靶细胞能够被外源性基因转染 ;腺病毒载体基因Ad CMV hTGF β1转染兔椎间盘髓核细胞后能在相当长时间内表达TGF β1蛋白     

hMIP-1β基因转染小鼠结肠腺癌CT26细胞对免疫细胞的体内外趋化作用

探讨转染人巨噬细胞炎性蛋白1β(human macrophage inflammatory protein-1 beta,hMIP-1β)基因的小鼠结肠腺癌CT26细胞的生物学特性、致瘤性及对免疫细胞的体内外趋化作用。利用重组腺病毒载体携带hMIP-1β基因(AdhMIP-1β)转染CT26细胞。X-gal染色法检测基因转染效率;ELISA法检测基因转染CT26细胞培养上清中hMIP-1β的含量;Boyden趋化小室法检测培养上清对CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)的趋化作用。小鼠皮下接种转染hMIP-1β基因的CT26细胞,观察其体内致瘤性和对免疫细胞的趋化作用。结果显示,腺病毒载体可携带hMIP-1β基因转染CT26细胞并高效表达hMIP-1β(P<0.01),培养上清含hMIP-1β且对免疫细胞有明显趋化作用。转染hMIP-1β基因的CT26细胞皮下接种后成瘤率降低,肿瘤生长速度减慢,肿瘤内可见明显坏死灶,坏死灶内和周围可见较多淋巴细胞浸润。提示hMIP-1β基因转染CT26细胞后,通过分泌hMIP-1β趋化淋巴细胞等免疫细胞到肿瘤局部发挥有效的抗肿瘤作用,从而为肿瘤的免疫治疗提供新的思路和策略。