槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGG-823生长的影响

目的 观察槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGC-823生长和增殖的影响。方法 以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率，荧光显微镜了解凋亡的发生，流式细胞术检测细胞周期变化。结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制SGC-7901和BGC-823细胞增殖的作用明显，呈浓度和时问依赖性，槲皮素处理48h后的Ic50为14．12μm(SGC-7901)和28．13μm(BGC-823)。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化，流式细胞仪检测表明经10～20μm／L的槲皮素处理，SGC-7901细胞周期阻滞于G0／G1期，BGC-823细胞周期阻滞于S期。结论 槲皮素能抑制胃癌细胞的生长并诱导其发生凋亡，是有效的抗癌药。     

木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901作用的研究

目的探讨木黄酮对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法用MTT法检测药物效应，透射电镜及流式细胞仪观察木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞周期和细胞凋亡。细胞免疫化学观察木黄酮处理SGC-7901细胞后，SGC-7901细胞PCNA，FAS，C-mvc的变化。结果①MTT法证实木黄酮对SGC-7901细胞生长有抑制作用，并呈剂量-效应关系。②流式细胞仪分析木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞滞留于G2／M期，并可见凋亡峰。③透射电镜可见SGC-7901细胞出现典型的细胞凋亡及坏死形态学改变。④木黄酮下调PCNA及C—myc表达，上调FAS表达。结论木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901有抑制作用，其抑制作用可能通过下调C-mvc基因表达，上调Fas蛋白表达，下调PCNA表达，从而多途径诱导胃癌细胞凋亡和坏死、阻抑细胞周期进程，抑制SGC-7901细胞增殖。     

细胞G2/M周期阻滞与肾间质纤维化

慢性肾脏病(CKD)是威胁人类公共健康的重大疾病之一,肾间质纤维化是各种CKD进展至终末期肾病的共同病理表现。然而肾间质纤维化的病理机制还有待阐明,临床也缺乏针对肾间质纤维化有效的治疗方法。越来越多研究表明,肾小管上皮细胞G2/M周期阻滞是肾间质纤维化发生发展中的一个重要事件。在多种肾损伤模型中,均发现肾小管上皮细胞G2/M周期阻滞和肾脏纤维化的因果关系,逆转细胞G2/M周期阻滞成为缓解肾脏纤维化的潜在靶点。此外,相关机制研究表明,包括丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、自噬等在内的诸多信号通路与细胞G2/M周期阻滞密切关联,共同影响肾间质纤维化的发生与进展。本文就细胞G2/M周期阻滞参与肾间质纤维化的最新研究作一综述,以期为CKD的临床诊治和新药研发提供思路。     

防风对胃癌SGC-7901细胞抑制作用的实验研究

目的 探讨中药防风对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用及作用机制.方法 应用电子显微镜、流式细胞仪、DNA末端原位标记染色法等,观察防风对胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用及作用机制.结果 防风对SGC-7901细胞的生长有明显的抑制作用,其IC50值为24 mg/ml;检测到SGC-7901细胞凋亡的形态学特征;防风使细胞周期发生改变;细胞凋亡指数最高为27.9%.结论 防风对SGC-7901细胞生长的抑制作用随浓度和时间的增加而增强;防风可诱导SGC-7901细胞凋亡,也可直接杀死肿瘤细胞,这些结果为防风在临床上的进一步应用提供了理论依据.     

TROP2 shRNA真核表达载体转染胃癌BGC-823细胞的沉默作用

目的:构建TROP2特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体, 抑制人胃癌BGC-823细胞TROP2基因的表达.方法:构建TROP2短发夹环RNA, 产生重组质粒转染胃癌BGC-823细胞, 转染24 h后用G418(浓度400 mg/L)筛选, 待细胞稳定后收集, 分别命名为W组(未处理组), HK组(随机阴性对照质粒组), KB组(空质粒组), T1组, T2组, T3组. 并运用实时荧光定量PCR和Western blot检测TROP2的表达.结果:TROP2特异性shRNA片段被成功克隆进pGensil1.1质粒中, 重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致. 与未转染细胞组、随机阴性对照组、空质粒组相比, 转染shRNA重组质粒的人胃癌BGC-823细胞TROP2表达在mRNA和蛋白水平都受到抑制.与T1、T2组相比, T3组对TROP2 mRNA和蛋白抑制作用最明显, 差异具统计学意义(8.79±0.23 vs 9.54±0.20, 9.57±0.23; 3.66±0.11vs 6.46±0.36, 9.31±0.11, 均P<0.05).结论:成功构建了针对TROP2 的特异性shRNA真核表达载体并抑制了TROP2的表达,为进一步研究其基因功能打下了基础.     

Apoptin基因对人胃癌细胞BGC-823的抑制效应及与凋亡信号转导的关系

目的:探讨Apoptin基因对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用及其参与胞内细胞信号转导的机制.方法:应用脂质体转染法将重组质粒pVAX1-Apoptin体外转染BGC-823细胞,运用噻唑兰(methylthiazolyltetrazolium,MTT)分析法检测重组质粒对BGC-823肿瘤细胞的抑制作用;通过AO/EB染色法对pVAX1-Apoptin转染的肿瘤细胞进行形态学观察;运用流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位(△Ψm);通过免疫印迹检测细胞色素c(cytochromec,Cytoc)释放;应用底物显色法检测Caspase-3/9活性.结果:pVAX1-Apoptin转染比pVAX1具有更强的抑瘤效应(10μg质粒转染72h后,23.37%vs99.61%,P<0.01),并且肿瘤细胞的死亡方式以凋亡为主.实验结果显示,pVAX1-Apoptin转染导致细胞线粒体跨膜电位下降,与pVAX1转染BGC-823细胞相比有显著差异(46.7%±7.26%vs70.66%±5.98%,P<0.01);同时伴随细胞色素c的释放.另外,pVAX1-Apoptin和pVAX1转染细胞的Caspase-3/9活性具有显著差异(Caspase-9:0.181±0.032vs0.079±0.013,P<0.01;Caspase-3:0.242±0.041vs0.058±0.023,P<0.01).结论:pVAX1-Apoptin转染BGC-823肿瘤细胞导致线粒体跨膜电位下降,并刺激释放细胞色素c,从而激活Caspase-9.经细胞色素c激活的Caspase-9进而活化凋亡通路下游关键作用因子,并对BGC-823肿瘤细胞产生抑制效应.     

曲古霉素A对人胃癌细胞SGC-7901的作用及其机制

胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤，其病死人数在我国居恶性肿瘤的首位。手术对早期胃癌有较好的疗效，但对中晚期的胃癌疗效欠佳。化疗和放疗对胃癌有效率均较低，只能作为辅助治疗。寻找更有效的治疗手段仍是目前胃癌研究的重点之一。近年研究表明，曲古霉素A（TSA）对肿瘤细胞有明显的抑制作用，但其对胃癌细胞的作用及其机制尚不完全清楚。本实验意在探索TSA对胃癌细胞SGC-7901的作用及其可能机制。[第一段]     

迷迭香酸对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响及机制

目的 探讨迷迭香酸(RA)对胃癌细胞SGC-7901生长、增殖、凋亡的影响及机制。方法 CCK8检测不同浓度RA对胃癌细胞SGC-7901生长的影响,筛选合适剂量;BrdU检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测氧化应激标志物;荧光探针检测活性氧(ROS);流式检测线粒体膜电位的变化;Western印迹检测线粒体损伤标志物(Bax/Bcl-2、Cleaved cas3/cas3)及Nrf2/HO-1通路(p-Nrf2/Nrf2、NQO1、HO-1)相关蛋白表达。结果 与对照组相比,RA浓度为10μmol/L时,RA对细胞生长的抑制作用较小,不具有显著差异。浓度为20μmol/L RA对细胞生长的抑制作用增加,差异显著(P<0.05)。CCK8实验结果将RA浓度分为4个组(RA 0、10、20、40μmol/L);与对照组(RA 0μmol/L)相比,除RA 10μmol/L剂量组差异无统计学意义外,20、40μmol/L剂量组Brdu阳性细胞百分数、线粒体膜电位均显著降低,细胞凋亡率、氧化应激标志物含量[低密度脂蛋白(LDL)、丙二醛(MDA)]、...     

幽门螺杆菌致胃上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株SGC-7901的氧化性损伤

目的: 探讨H pylori对人正常胃黏膜上皮细胞永生细胞株GES-1和人淋巴结转移胃腺癌细胞株SGC-7901的氧化性DNA损伤作用.方法: 采用细菌-细胞共培养的方法, 比较H pylori作用前后GES-1和SGC-7901细胞株的形态学变化;采用激光扫描共聚焦显微镜方法, 比较H pylori作用前后GES-1和SGC-7901细胞株8-羟基脱氧鸟苷(8-OhdG)的表达.结果: H pylori对GES-1和SGC-7901细胞株均具有损伤作用;8-OHdG表达升高, 加菌组与对照组相比差别具有统计学意义(64.9396±17.8142 vs 32.3010±7.3620;102.8344±30.2632 vs 77.1336±32.3223, 均P = 0.000);而且8-OHdG表达的变化程度GES-1细胞显著高于SGC-7901细胞.结论: H pylori能够诱导GES-1和SGC-7901细胞DNA氧化性损伤显著增加;在H pylori氧化损伤的相关研究中, 更适宜选择对损伤作用敏感的GES-1细胞株作为研究对象.     

衣霉素诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡

目的:观察衣霉素(tunicamycin,TM)诱导胃癌BGC-823细胞发生内质网应激介导的细胞凋亡.方法:以浓度为10 mg/L的TM分别处理胃癌BGC-823细胞0、24、36和48 h.Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡,应用RT-PCR、Western blot检测CHOP的表达水平.结果:PI染色法检测凋亡细胞且随时间增加凋亡细胞增多,细胞凋亡率分别为0.0%、11.8%、16.3%、20.4%,具有时间依赖性(P<0.01).RT-PCR及Western blot结果显示,CHOP的表达明显高于对照组,随着处理时间的增加表达量呈上调趋势,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:TM可诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡.     

Paris chinensis dioscin induces G2/M cell cycle arrest and apoptosis in human gastric cancer SGC-7901 cells

AIM:To investigate the anti-tumor effects of Paris chinensis dioscin(PCD)and mechanisms regarding cell cycle regulation and apoptosis in human gastric cancer SGC-7901 cells.METHODS:Cell viability was analyzed by the 3-(4,5-di-methylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide assay.Cell apoptosis was evaluated by flow cytometry and laser scanning confocal microscope(LSCM)using Annexin-V/propidium iodide(PI)staining,and the cell cycle was evaluated using PI staining with flow cytom-etry.Intracellular calci...     

HSP90抑制剂17-DMAG对胃癌细胞株SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响.方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,以不同浓度的17-DMAG处理后采用MTT法检测SGC-7901细胞的生长抑制情况,流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布,流式细胞仪及Annexin V-FITC试剂盒监测17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.结果:不同浓度的17-DMAG对人胃癌细胞SGC-7901有明显的生长抑制作用,各组之间比较(P＜0.01),且呈时效量效依赖关系(F=241.313,246.856,均P＜0.001).17-DMAG作用24 h后胃癌细胞株SGC-7901呈现G2/M期阻滞,试验组与对照组比较(F=231.991,P＜0.001),呈浓度依赖关系.17-DMAG处理胃癌细胞SGC-7901 24 h早期凋亡细胞增加,48 h晚期凋亡细胞增加.结论:17-DMAG可明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,使胃癌细胞SGC-7901阻滞于G2/M期,诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡.     

2'-O-meRNA对人胃癌细胞的抑制作用及对5-FU和BCNU疗效的影响

目的探讨2'-O-meRNA通过抑制端粒酶来杀伤胃癌细胞系SGC-7901的作用及对化疗药5-FU和BCNU疗效的影响。方法培养人胃癌细胞系SGC-7901,分为5-FU组、BCNU组、2'-O-meR- NA组、反义对照组、化疗药与反义抑制剂合用组,观察用药后该细胞系存活情况及端粒酶活性。结果5- FU、BCNU、2'-O-meRNA可有效抑制SGC-7901细胞的活性(P<0.05),BCNU、2'-O-meRNA可有效抑制细胞端粒酶活性,1μM 2'-O-meRNA可加强6.25 μg/ml BCNU的疗效(P<0.01),但是不能加强12.5μg/ml 5-FU的作用(P>0.05)。结论2'-O-meRNA抑制胃癌细胞系SGC-7901的生长。1 μM 2'-O- meRNA与6.25 μg/ml BCNU合用时有协同作用,2'-O-meRNA与5-FU合用时无协同作用。     

VEGF基因表达抑制对胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的:研究siRNA(small interfering RNA)对人胃腺癌细胞SGC-7901的VEGF基因表达的影响．方法:选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因,设计两组针对VEGF mRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸链,体外转录合成siRNA．以人胃腺癌细胞系SGC-7901为靶细胞,应用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞．采用Hoechst33258染色观察siRNA作用于SGC-7901细胞中出现凋亡小体的情况．流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR法比较转染前后VEGF mRNA表达水平的变化, ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化．结果:两组siRNA转染后均能有效地抑制 SGC-7901细胞的生长,诱导细胞凋亡产生凋亡小体．siRNA作用于SGC-7901细胞．其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0／G1 期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0／G1期(siRNA1组,siRNA2组G0／G1期VS 对照组G0／G1期:75．04％,76．52％ vs 58．37％, P<0．01;siRNA1组,siRNA2组S期vs对照组S 期:17．82％,16．73％ vs 39．52％,P<0．01),而其他组则无明显变化．VEGF mRNA的表达量大幅度减少(siRNA1组,siRNA2组vs对照组: 0．638±0．078,0．656±0．085 vs 0．941±0．046, P<0．01),相对应的VEGF蛋白水平也显著降低(164．7±22．7,166．3±26．6 vs 414．0±61．5, P<0．01),而其他组siRNA转染后则无上述作用．结论:应用靶向VEGF基因RNA干扰技术可以有效抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖．     

ezrin基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建及其在人胃癌SGC-7901细胞系中的表达

目的构建ezrin基因RNA干扰慢病毒载体并建立ezrin基因稳定干扰的人胃癌SGC-7901细胞系,为ezrin基因的功能研究奠定基础。方法设计ezrin基因特异性RNA干扰靶序列,与PHR-SIN-CSGW-H1a载体定向连接,构建PHR-SIN-CSGW-H1a真核入门表达载体。通过与psPAX2和PMD2.G载体进行重组,获得ezrin基因真核表达重组慢病毒表达载体。利用包装细胞293FT获得重组的慢病毒,感染人胃癌SGC-7901细胞。结果成功构建PHR-Eai-psPAX2-PMD2.G真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度>1×107U/L。RT-PCR、Western blot结果表明,ezrin基因mRNA及蛋白表达显著降低。结论成功构建人ezrin基因特异性的重组慢病毒干扰载体,获得ezrin基因稳定干扰的人胃癌SGC-7901细胞系。