自体骨髓间充质干细胞与造血干细胞共移植治疗恶性血液病患者的护理

目的 探讨自体骨髓间充质干细胞(MSCs)与造血干细胞共移植治疗恶性血液病患者的护理.方法 从无骨髓浸润的恶性血液病患者本人骨髓中分离、培养间充质干细胞.经放化疗等预处理后,与造血干细胞共移植治疗恶性血液病患者5例,并对其进行全程共移植护理.结果 在移植过程中5例患者均未出现感染,无移植并发症.自体骨髓间充质干细胞和造血干细胞输注过程中未见明显不良反应.移植后造血功能恢复,中性粒细胞≥0.5×109/L的中位时间为9.4(8～11)d,血小板≥20×109/L的中位时间为12.2(10～14)d.结论 自体骨髓闻充质干细胞与适血干细胞共移植治疗恶性血液病安全性好,不良反应小;做好移植护理是减少感染和并发症的重要措施.     

自体骨髓间充质干细胞与造血干细胞共移植治疗恶性血液病患者的护理

目的探讨自体骨髓间充质干细胞（MSCs）与造血干细胞共移植治疗恶性血液病患者的护理。方法从无骨髓浸润的恶性血液病患者本人骨髓中分离、培养间充质干细胞,经放化疗等预处理后。与造血干细胞共移植治疗恶性血液病患者5例。并对其进行全程共移植护理。结果在移植过程中5例患者均未出现感染,无移植并发症。自体骨髓间充质干细胞和造血干细胞输注过程中未见明显不良反应。移植后造血功能恢复,中性粒细胞≥0．5×10^9／L的中位时间为9．4（8～11）d,血小板≥20×10^9／L的中住时间为12．2（10～14）d。结论自体骨髓间充质干细胞与造血干细胞共移植治疗恶性血液病安全性好,不良反应小;做好移植护理是减少感染和并发症的重要措施。     

骨髓间充质干细胞的输注时机对小鼠骨髓移植后急性移植物抗宿主病的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)输注时机对异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响及其机制.方法 以Babl/c小鼠为供者,于无菌条件下获取其骨髓,制成MSCs悬液及骨髓细胞悬液.C57BL/6小鼠为受者,经电子直线加速器行全身照射后,分为5组进行allo-BMT.骨髓移植组受者经尾静脉输注骨髓细胞悬液和RPMI 1640培养液各0.2 ml;联合移植组受者经尾静脉输注骨髓细胞悬液和MSCs悬液各0.2 ml;延迟输注Ⅰ组受者经尾静脉输注骨髓细胞悬液0.2 ml,3 d后再输注MSCs悬液0.2 ml;延迟输注Ⅱ组受者经尾静脉输注骨髓细胞悬液0.2 ml,7 d后再输注MSCs悬液0.2 ml;对照组受者经尾静脉输注RPMI 1640培养液0.4 ml.记录受者存活时间及aGVHD的发生情况,检测外周血白细胞、CD4+ 和CD8+淋巴细胞数,测定血清γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平,观察死亡小鼠的肝、脾、小肠及皮肤等组织病理学变化.结果 对照组受者均于移植后14 d内死亡.骨髓移植组于移植14 d以后出现aGVHD的表现,且均于23 d内死亡.联合移植组aGVHD的发生率为30%,延迟输注Ⅰ组aGVHD的发生率为60%,两组受者的存活时间均长于骨髓移植组.延迟输注Ⅱ组与骨髓移植组间aCVHD发生率和死亡时间的差异无统计学意义.受者的白细胞数均于全身照射后3 d降至最低,各移植组白细胞数皆于移植后回升,但骨髓移植组和延迟输注Ⅱ组的白细胞数未能恢复至正常水平,而联合移植组和延迟输注Ⅰ组的白细胞数均于移植后28 d恢复正常.输入MSCs者,CD4+淋巴细胞数量明显升高,而CD8+淋巴细胞数量下降,以联合移植组最为明显.联合移植组的IFN-γ水平明显低于骨髓移植组,而IL-4水平高于骨髓移植组.各组发生aGVHD的小鼠的肝、脾、小肠及皮肤病理改变基本一致.结论 MSCs与骨髓同时输注时aGVHD的发生率最低,受者的存活时间也最长,其机制可能与细胞因子水平有关.     

单倍体相合造血干细胞移植联合间充质干细胞输注治疗异染性脑白质营养不良

目的探讨单倍体相合造血干细胞移植联合间充质干细胞输注治疗异染性脑白质营养不良的疗效。方法 7岁患儿,采用单倍体相合造血干细胞移植联合间充质干细胞输注的方法,经氟达拉滨、马利兰、环磷酰胺和抗人胸腺细胞球蛋白方案进行预处理,供者应用G-CSF动员和联合免疫抑制剂(包括环胞菌素A、氨甲喋呤、霉酚酸酯、CD25单抗)预防移植物抗宿主病。造血重建后,每周输注脐带来源的间充质干细胞1次,连续4周。结果患儿造血重建迅速,11 d时中性粒细胞0.5×109/L、血小板20×109/L;14 d时血白细胞芳基硫酸酯酶A水平明显上升;28 d时达正常水平。患者无急性GVHD发生。移植后1个月经植入证据检测,证实为完全供者造血,神经系统症状逐渐恢复。结论单倍体相合造血干细胞移植,联合间充质干细胞输注,治疗异染性脑白质营养不良,安全、有效,血白细胞芳基硫酸酯酶A水平回升迅速。这种新型疗法可能是治疗缺乏HLA全相合供者的异染性脑白质营养不良疾病患者的可靠选择。     

外胚间充质干细胞对射线照射后大鼠造血系统的影响

目的探讨颌突外胚间充质干细胞对γ射线照射后大鼠造血系统的影响.方法取孕11.5 d SD大鼠胚胎颌突,用消化法培养获得外胚间充质干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态和生长状况.雄性SD大鼠80只,体重220 g,随机分为A、B、C、D 4组,每组20只,A、B和C组给予60Co γ射线全身一次性照射,照射剂量为6.0 Gy.A组:照射后6 h,尾静脉移植第2代外胚间充质干细胞;B、C组尾静脉分别移植真皮成纤维细胞和生理盐水作为阴性对照;D组未照射,为正常对照组,注射生理盐水0.3 ml/只.分别于1、2、3和4周动态观察大鼠外周血白细胞及血红蛋白的变化,并于第4周行骨髓有核细胞计数,测定大鼠骨髓粒细胞巨噬细胞集落形成单位(colony forming unit-granulocyte macrophage,CFU-GM),采用内源性脾结节法测定脾集落形成单位(colony forming unit-spleen,CFU-S),进行大鼠骨髓组织学检查.结果培养的原代外胚间充质干细胞呈单层生长,似成纤维样梭形,有2～4个突起.移植后第3、4周,A组白细胞数明显高于B、C组(P＜0.05),A、D组大鼠外周血血红蛋白含量高于B、C组(P＜0.05).移植后第4周,A组大鼠骨髓有核细胞计数明显多于B、C组(P＜0.01), CFU-S计数明显多于B、C组(P＜0.01),A、D组CFU-GM数量均较B、C组多(P＜0.01).结论颌突外胚间充质干细胞具有干细胞的特征,能够促进辐射损伤后大鼠造血功能的修复与重建.     

经诱导的绿色荧光蛋白转基因C57BL雄鼠脾细胞移植重建雌鼠造血功能研究

目的探讨雄性C57BL绿色荧光蛋白（GFP）鼠诱导的脾细胞移植对造血衰竭小鼠造血重建的作用。方法建立小鼠造血衰竭模型,移植鱼卵提取物诱导的雄性C57BL荧光鼠脾细胞,检测诱导后细胞的干细胞标志抗原表达;观察受体存活时间,检测外周血白细胞计数、外周血GFP阳性细胞,进行荧光原位杂交检测Y染色体;各组受体脾和肺切片观察GFP细胞分布。结果鱼卵提取物诱导的雄性C57BL荧光鼠脾细胞比未诱导的脾细胞表达更多的干细胞标志抗原。1×106个脾细胞经尾静脉回输经致死剂量照射的雌性小鼠,明显延长小鼠存活时问,提高小鼠外周血白细胞计数。诱导组受体外周血中检测到GFP阳性细胞,骨髓中检测出60％的细胞含Y染色体。诱导组受体脾和肺切片观察到GFP阳性细胞分布。结论鱼卵提取物诱导的小鼠脾细胞中含较多的多能干细胞,回输给造血衰竭小鼠能重建其造血功能。     

第三方脐血细胞辅助输注对小鼠单倍型造血干细胞移植后造血重建的影响

目的分析以脐血细胞作为第三方细胞辅助输注对小鼠单倍型造血干细胞移植后造血重建的影响。 方法以CB6/F1雄性小鼠为供鼠,以BALB/C小鼠为受鼠。受鼠经Co60全身照射清髓后回输供鼠干细胞,建立单倍型造血干细胞移植模型。将40只受鼠分为对照组和实验组,每组各20只,对照组受鼠回输供鼠干细胞,实验组受鼠回输供鼠干细胞＋脐血单个核细胞。于移植后＋7 d、＋14 d、＋21 d、＋28 d和＋50 d对存活受鼠进行断尾采血,检测白细胞、血红蛋白和血小板,分析造血重建情况。处死小鼠时取外周血1 mL,采用荧光原位杂交技术检测Y染色体比例,计算嵌合率。两组受鼠各时间点白细胞、血红蛋白及血小板检测结果采用成组t检验进行比较,嵌合率采用卡方检验进行比较。P<0.05为差异有统计学意义。 结果移植后＋14 d实验组和对照组白细胞数量分别为(8.4±2.6)×10⁹/L和(3.8±1.0)×10⁹/L,差异有统计学意义(t＝6.968,P<0.05);其他时间点两组白细胞数量差异无统计学意义。移植后两组受鼠各时间点血红蛋白检测结果差异均无统计学意义。移植后＋7 d实验组和对照组血小板数量分别为(125±40)×10⁹/L和(64±15)×10⁹/L,移植后＋14 d分别为(282±47)×10⁹/L和(163±41)×10⁹/L,差异均有统计学意义(t＝6.366和8.093,P均<0.05);其他时间点两组血小板数量差异无统计学意义。 结论使用脐血细胞作为第三方细胞辅助输注后,可促进单倍型造血干细胞移植受鼠早期白细胞和血小板较快恢复。     

异基因骨髓间充质干细胞移植治疗小鼠前列腺癌的实验研究

目的观察非清髓性异基因骨髓间充质干细胞移植对小鼠前列腺移植瘤的治疗效果。方法应用全骨髓培养法培养BALB/c小鼠骨髓间充质干细胞,通过流式细胞术检测第四代细胞中CD44阳性细胞率,并通过油红染色鉴定由骨髓间充质干细胞分化的脂肪细胞。应用C57小鼠源性前列腺癌株RM-1(2×10~6/只)制成C57BL小鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和异基因骨髓间充质干细胞移植组,每组10只。应用FC方案(氟达拉滨30mg/m~2,-d~(1-5);环磷酰胺300mg/m~2,-d~(1-3))对非对照组小鼠进行非清髓性预处理。异基因干细胞移植组小鼠经尾静脉注入骨髓间充质干细胞1×10~6个/只。记录并比较两组小鼠的肿瘤体积及生存时间。结果全骨髓培养法培养的第四代细胞中CD44阳性率为84.29%,油红染色证实由骨髓间充质干细胞自然分化的脂肪细胞存在。与对照组相比,异基因骨髓间充质干细胞移植显著的抑制了小鼠前列腺癌的生长(P=0.047),并明显延长了异基因骨髓间充质干细胞移植组小鼠的生存时间(P=0.00001)。结论异基因骨髓间充质干细胞移植显著的抑制了小鼠前列腺癌的生长,延长了受体小鼠的生存时间,预示了将骨髓间充质干细胞作为抑癌基因载体的良好前景。     

异基因造血干细胞联合脐带间充质干细胞移植术后并发症的护理

异基因造血干细胞移植是目前治疗恶性血液病的最有效手段，但是仅有25％的患者能找到人类白细胞抗原（HLA）全相合的亲缘供者从而顺利实施移植。因此HLA单倍体相合移植越来越受到重视，但移植后排异反应及并发症严重影响患者的生活质量，甚至威胁生命。人脐带间充质干细胞（MSC）具有多能干细胞特性，输注后可重建骨髓微环境、促进移植后造血干细胞的植入，减少相关并发症的发生。     

HSCT联合不同剂量内皮祖细胞输注对小鼠造血重建的影响

目的 探讨异基因造血干细胞移植联合不同剂量内皮祖细胞(EPC)输注对移植后造血重建的影响.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,Balb/c小鼠为受鼠,进行HSCT,输注骨髓单个核细胞数量为5×106个/只.仅进行HSCT者为单纯骨髓细胞移植组;行HSCT的同时经尾静脉输注供者骨髓单个核细胞诱导培养的EPC的受鼠为EPC联合移植组,EPC的输注量分别为5×104、1×105、5× 105和1×106个/只.另设正常对照组和致死量照射组.观察小鼠的存活率、造血重建情况及骨髓微环境的变化.结果 各EPC联合移植组小鼠存活时间长于单纯骨髓移植组,5×105 EPC联合移植组至观察结束时存活率为100％,高于其他各组(P＜0.05).移植后10和15 d,5×105 EPC联合移植组外周血白细胞数量高于其他组(P＜0.05).移植后15 d,5×105 EPC联合移植组外周血血小板数量高于其他组(P＜0.05).5×105 EPC联合移植组造血组织增生程度也好于其他组.5×105 EPC联合移植组骨髓内HSC比例为(1.06±0.03)％,高于其他各组(P＜0.05).结论 小鼠异基因骨髓移植中联合输注5×105 EPC能够有效促进造血重建,提高小鼠存活率.     

肿瘤干细胞与肝癌干细胞

肿瘤起源于干细胞的假说正在各种人类肿瘤中得到证实,肿瘤不单是一种基因病,而且是一种干细胞病,基因突变作用于干细胞,干细胞突变成为肿瘤干细胞,这是肿瘤发生、再生、转移和复发的关键。肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一,其中是否存在“肝癌干细胞”的问题一直倍受人们关注。该文介绍肿瘤干细胞与肝癌干细胞的研究情况。     

Investigations of prostate epithelial stem cells and prostate cancer stem cells

Although both prostate epithelial stem cells and prostate cancer stem cells are implicated in the differentiation of the normal prostate gland and carcinogenesis of prostate cancer, there has, until recently, been little information regarding their biology. This review summarizes the recent advancements in cell biological research including various in vitro culture systems that have offered the characterization and isolation of prostate epithelial stem cells and prostate cancer stem cells. In addition, the stromal niche or microenvironment of stem cells plays an essential role in proliferation and differentiation of normal stem cells. Stroma surrounding cancer cells, which also provide another unique niche, may involve the initiation and development of cancer stem cells. Investigation of stem cells and their microenvironments in the prostate should lead to the elucidation of biological features and the development of novel treatments for prostate cancer.     

Immunosuppressive mechanisms of embryonic stem cells and mesenchymal stem cells in alloimmune response

Although both embryonic stem cells (ESCs) and mesenchymal stem cells (MSCs) are known to have immunosuppressive effects, the mechanisms of immunosuppression are still controversial. Both types of stem cells suppressed not only the proliferation but also survival of CD4⁺ T cells in vitro. They suppressed secretion of various cytokines (IL-2, IL-12, IFN-??, TNF-??, IL-4, IL-5, IL-1??, and IL-10), whereas there was no change in the levels of TGF-?? or IDO. Classic and modified transwell experiments demonstrated that immunosuppressive activities were mainly mediated by cell-to-cell contact. Granzyme B in the ESCs played a significant role in their immunosuppression, whereas PDL-1, Fas ligand, CD30 or perforin was not involved in the contact-dependent immunosuppression. However, none of the above molecules played a significant role in the immunosuppression by the MSCs. Interestingly, both stem cells increased the proportion of Foxp3⁺ regulatory T cells. Our results showed that both ESCs and MSCs suppressed the survival as well as the proliferation of T cells by mainly contact-dependent mechanisms and increased the proportion of regulatory T cells. Granzyme B was involved in immunosuppression by the ESCs in a perforin-independent manner.     

人诱导性多潜能干细胞向表皮样干细胞分化的实验研究

目的 探讨人诱导性多潜能干细胞( iPSC)向表皮样干细胞分化的可能性.方法 (1)以经过灭活处理的小鼠胚胎Fb株作为滋养层,将人iPSC株接种于其上,加入胚胎干细胞完全培养液培养,Ⅳ型胶原酶消化法传代,倒置相差显微镜下观察人iPSC形态及生长状况并行碱性磷酸酶(AKP)染色.以胚胎干细胞不完全培养液悬浮培养iPSC,观察拟胚体形成能力.(2)将人iPSC接种于铺有人羊膜的6孔培养板培养,设为诱导组;另于未铺羊膜的6孔培养板上培养iPSC,作为对照组.观察2组iPSC形态,免疫细胞化学染色法检测整合素β1和细胞角蛋白19( CK19)表达.结果 (1)人iPSC在胚胎干细胞完全培养液中呈典型的干细胞克隆状生长,边界清楚,增殖旺盛;AKP染色阳性.iPSC在无滋养层条件下悬浮培养可形成拟胚体.(2)诱导组iPSC经培养4d后形成干细胞克隆,部分细胞整合素β1和CK19表达阳性.对照组细胞大量死亡,未见整合素β1和CK19表达.结论 人iPSC在羊膜诱导下可定向分化为表皮样干细胞,有望成为皮肤组织工程新的种子细胞.     

脂肪组织来源干细胞与脂肪瘤间充质干细胞特性的比较研究

目的 比较体外培养的脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)与脂肪瘤间充质干细胞(lipoma-derived mesenchymal stem cells,LMSCs)的生物特性,以探讨ASCs移植的安全性.方法 对正常脂肪组织和脂肪瘤组织进行切片染色,分离培养ASCs和LMSCs,观察细胞形态;MTS比色法检测细胞活性并绘制细胞生长曲线;流式细胞仪测定细胞周期及表面分子表达;QRT-PCR检测高迁移率族蛋白2(HMGA2)表达水平;免疫组织化学染色法鉴定端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达.结果 正常脂肪组织和脂肪瘤组织切片差异明显;ASCs细胞形态一致性好,而LMSCs具有不均质性;MTS活性测定ASCs增殖活性要远低于LMSCs细胞(P=0.000);流式细胞仪检测结果显示ASCs与LMSCs在干细胞标志CD29、CD44、CD105上表达类似,而在肿瘤干细胞标志CD133表达上,ASCs(5.35%)要远低于LMSCs(26.87%);细胞周期显示ASCs的增殖能力低于LMSCs;定量PR-PCR显示ASCs中HMGA2平均aQ值为1,远低于在LMSCs中的表达(1.79),两者差异具有统计学意义(P<0.01);免疫细胞化学结果:hTERT在ASCs和LMSCs中的累计吸光度A值分别为1 379.597±498.617和3 328.108±902.856,面积分别为132 390.27±35 568.945和238 000.53±49 264.289,平均吸光度A值分别为0.009±0.003和0.014±0.003,ASCs中hTERT表达远低于LMSCs.结论 体外培养的ASCs生物学特性与LMSCs存在显著差异,未发现其恶性转、化为肿瘤干细胞的证据.     

干细胞向生殖细胞分化的研究进展

干细胞(SCs)具有在体外分化为生殖细胞的潜能,为研究生殖细胞(GCs)早期发育提供了良好的模型,并将为干细胞移植修复生殖功能提供细胞资源。本文综述了胚胎干细胞/诱导多能干细胞(ESCs/iPSCs)、新生儿附属物来源干细胞(NDSCs)以及成体干细胞(ASCs)向生殖细胞分化所取得的研究进展,同时总结了各类干细胞向生殖细胞分化时所遇到的障碍及所面临的挑战,为干细胞在生殖医学领域的应用提供理论依据。     

Renal differentiation from adult spermatogonial stem cells

Abstract

There is considerable interest in the use of multi-potent stem cells in kidney tissue regeneration. We studied if spermatogonial stem cells have the ability to undergo kidney differentiation. Spermatogonial stem cell differentiation was induced using in vitro and ex vivo co-culture techniques. Conditioned media from human kidney fibroblasts induced the expression of epithelial and endothelial lineages in spermatogonial stem cells, consistent with nephrogenesis. Furthermore, we showed that these cells up-regulated renal tubular-specific markers alkaline phosphatase, mineralocorticoid receptor, renal epithelial sodium channel and sodium-glucose transporter-2 (p?<?0.05). GFP-labeled spermatogonial stem cells were engrafted into metanephric kidney organ cultures harvested from E12.5 mouse embryos. After 5 days of organ culture, focal anti-GFP staining was detectable in all inoculated kidneys demonstrating integration of spermatogonial stem cells into the developing kidney (p?<?0.01). Histological assessment showed early nephron-like architecture. In summary, we show that spermatogonial stem cells have the potential to generate renal tissue and lay the foundations for further investigations into a novel therapeutic approach for renal insufficiency.     

Role of stem cells in kidney repair

End-stage renal disease and acute renal failure are the most important issues of practical and clinical nephrology, bearing in mind their high mortality rate, solely symptomatic treatment, and overall economic impact on society. The advances in stem cell biology opened the door for the new era in treatment of many disorders, including renal, offering new therapeutical solutions. Findings suggesting that the adult kidney contains stem cells and that stem cells from bone marrow have potential to differentiate into renal cells focused research on the possible application of these cells in therapy of kidney disorders. The other promising candidates for stem cell therapy for the kidney are embryonic stem cells and amniotic fluid-derived stem cells. This article focuses on the characteristics and possible application of these types of stem cells.     

肝癌干细胞的研究进展

肿瘤起源于干细胞的假说正在各种人类肿瘤中得到证实.肿瘤不仅是一种基因病,而且是一种干细胞病,基因突变作用于干细胞,干细胞突变成为肿瘤干细胞,这是肿瘤发生、再生、转移和复发的关键.为证实肝癌干细胞的存在,有两个问题必须提出:(1)肝细胞型肝癌是否来源于肝干细胞?(2)肝细胞型肝癌中是否具有干细胞特征的细胞?最新研究表明:肝细胞型肝癌可能是由肝干细胞未分化或分化不全引起的.对于肝癌细胞的研究我们知道肝细胞型肝癌中的细胞具有干细胞特性,如永生性、可移植性以及对治疗手段的抵抗性.但是,至今为止,确切的肝癌干细胞的标记物没有找到,而且没有分离出肝癌干细胞.     

胶质瘤干细胞趋化神经干细胞迁移及其机制研究

目的 观察神经干细胞( NSC)向胶质瘤干细胞(GSC)及其分化细胞的迁移能力,探讨其趋化机制。方法 干细胞条件培养U251和3例原代胶质瘤干细胞,以流式细胞术和Western blot对其鉴定;Transwell小室法检测GSC和其分化细胞条件培养液(CM)对NSC迁移的趋化能力;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测CM中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的分泌水平,并以表皮生长因子(EGF)、bFGF为对照分析CM对NSC的化学趋化作用;进一步以Dio和Dil分别标记NSC和GSC,体外混合培养观察NSC向GSC的迁移、以及对肿瘤干细胞球生长的影响。结果 干细胞培养条件下的胶质瘤干细胞球,高表达干细胞标志物Nestin和/或CD133( 11.02％～ 33.55％);分化后干细胞标志物表达下降,分化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达增加(P＜0.05);GSC与其分化细胞比较,分泌高水平的趋化因子VEGF和bFGF(P ＜0.05),并对NSC有高度趋化能力;体外混合接触培养也显示NSC向肿瘤干细胞球的迁移和包绕,并且能够显著抑制肿瘤干细胞球的生长(P＜0.05)。结论 GSC体外可趋化NSC向其迁移,其趋化作用较分化的肿瘤细胞更为显著,并且与其分泌高水平的生长因子有关;向肿瘤干细胞球迁移的NSC可抑制其体外生长。