端粒酶活性两种检测方法的相关性研究

[目的]用TRSP-银染法及TRAP-ELISA法两种方法测定端粒酶活性并对其特异性、敏感性及相关性进行研究.方法以人肺腺癌A549细胞为实验材料,用RNA酶、加热、倍比稀释的等因素处理A549细胞,TRAP-银染法对其特异性、敏感性进行检测;用2mmol/LCINN加入A549细胞培养体系,用两种方法检测诱导分化剂CINN对肿瘤细胞前后端粒酶活性的改变,及对其相关性进行分析.结果端粒酶活性在A549细胞中有很强的特异性,且可以检出约102个肿瘤细胞的端粒酶活性;CINN可抑制端粒酶活性并对时间有依赖性;TRAP-银染法及TRAP-ELISA法两种方法作等级相关分析,呈正相关(rs=1.000,P＜0.01).结论两种方法测定端粒酶活性有很高的特异性及敏感性且呈正相关.     

端粒酶活性检测方法的研究概况

端粒、端粒酶与细胞永生化、细胞恶变等均有密切的关系，而端粒酶作为肿瘤标记以及肿瘤基因治疗的新手段已逐渐为医学界所重视。本文介绍端粒酶的检测原理及当前的主要几种研究方法。如端粒酶重复扩增法（TRAP法）、TRAP-银染法、TRAP-ELISA法等，并陈述其优点及不足。     

端粒酶活性与卵巢癌预后的关系

目的：探讨端粒酶活性水平对卵巢癌化疗敏感性和预后的影响。方法：以TRAP—PCR—ELISA法检测卵巢癌组织中端粒酶的活性。结果：在34例卵巢癌组织中，端粒酶阳性者30例。在16例端粒酶活性低于2U者中，15例化疗有效，仅1例出现复发，无死亡。在14例端粒酶活性高于2U者中，化疗有效9例，进展与复发或死亡5例。结论：随着端粒酶活性的增高，卵巢癌对化疗的敏感性下降，复发率增加。     

端粒酶活性与卵巢癌预后的关系

目的:探讨端粒酶活性水平对卵巢癌化疗敏感性和预后的影响。方法:以TRAP-PCR-ELISA法检测卵巢癌组织中端粒酶的活性。结果:在34例卵巢癌组织中,端粒酶阳性者30例。在16例端粒酶活性低于2 U者中,15例化疗有效,仅1例出现复发,无死亡。在14例端粒酶活性高于2 U者中,化疗有效9例,进展与复发或死亡5例。结论:随着端粒酶活性的增高,卵巢癌对化疗的敏感性下降,复发率增加。     

端粒酶活性与卵巢癌预后的关系

目的:探讨端粒酶活性水平对卵巢癌化疗敏感性和预后的影响.方法:以TRAP-PCR-ELISA法检测卵巢癌组织中端粒酶的活性.结果:在34例卵巢癌组织中,端粒酶阳性者30例.在16例端粒酶活性低于2U者中,15例化疗有效,仅1例出现复发,无死亡.在14例端粒酶活性高于2U者中,化疗有效9例,进展与复发或死亡5例.结论:随着端粒酶活性的增高,卵巢癌对化疗的敏感性下降,复发率增加.     

改良TRAP法检测胃粘膜标本端粒酶活性

为探讨端粒酶活性与胃癌发生的关系。本文以改良TRAP法对43例胃粘膜活检标本的端粒酶活性进行检测。结果发现：胃癌的端粒酶阳性率为87%（20/23），萎缩性胃炎的端粒酶阳性率为28.6%(2/7)，而中度胃炎与浅表性胃炎无一例阳性，它提示端粒酶活性的检测对于胃癌的诊断可能具有重要意义。     

siRNA体外合成体系中GMP浓度优化及其对HeLa细胞端粒酶抑制的研究

目的在小片段干扰RNA（short interfering RNA，siRNA）体外合成的反应体系中加入不同浓度的GMP，比较RNA转录效率的高低，探讨siRNA体外合成体系中GMP的最佳浓度。并以该法合成的siRNA对肿瘤细胞端粒酶基因表达进行RNA干扰来验证其干扰效应。为简便、高效、低成本体外合成制备siRNA提供优化的实验条件，为广泛开展RNA干扰实验打下基础。方法以本实验室根据端粒酶hTERT基因（genebankgi：2347128）2653—2673位的核酸序列，构建的末端带T7启动子的部分双链DNA为模板，用T7RNA聚合酶体外合成方法合成siRNA。在siRNA体外合成的反应体系中加入不同浓度的GMP，以分光光度法测定合成的RNA量来比较RNA转录效率的高低；从而确定siRNA体外合成中GMP的最佳浓度。并以磷酸钙共沉淀法将合成的siRNA转染Hela细胞。用TRAP-银染法和PCR—EIA分别检测siRNA转染后的Hela细胞端粒酶活性，以验证其干扰效应。结果在T7RNA聚合酶体外转录合成siRNA的反应体系中加入不同浓度的GMP，结果显示以GMP终浓度为5mM时的RNA转录效率为最佳。用该法合成的siRNA转染Hela细胞后端粒酶表达被抑制。结论GMP可提高T7RNA聚合酶体外转录体系的转录效率，本实验研究的反应体系中以5mM GMP终浓度为其最佳。以该优化法合成的针对端粒酶hTERT的siRNA对端粒酶的表达产生了干扰效应。     

检测腹水脱落细胞端粒酶活性对良恶性腹水鉴别诊断的意义

目的 探讨检测腹水脱落细胞端粒酶活性对良恶性腹水鉴别诊断的价值。方法 收集各种类型腹水脱落细胞，用聚合酶链反应端粒重复扩增（PCR-TRAP）银染法检测端粒酶活性，并与细胞学检查及腹水肿瘤标志物检查结果进行对比分析。结果 脱落细胞端粒酶活性检测对恶性腹水诊断的灵敏度为77．33％，显著高于脱落细胞学检查（37．33％）及肿瘤标志物检查（58．67％），特异度和细胞学检查差异无统计学意义。结论 腹水中脱落细胞端粒酶活性检测可作为临床良恶性腹水鉴别诊断依据之一。     

高血压病患者淋巴细胞端粒酶活性的研究

目的　探讨高血压病患者外周血淋巴细胞的端粒酶活性。　方法　采用聚合酶链反应 -酶联免疫吸附(PCR -ELISA)方法测定 91例高血压病患者和 43例血压正常者外周血淋巴细胞端粒酶活性。　结果　高血压组外周血淋巴细胞的端粒酶活性 (A值 0 .45± 0 .2 2 )比正常对照组 (A值 0 .2 4± 0 .11)明显增高 (P <0 .0 0 1) ,根据血压水平分级和定量预后的危险因素分层各组间端粒酶活性无显著性差异 (P >0 .0 5 )。　结论　高血压病患者外周血淋巴细胞的端粒酶活性增高 ,这种酶的变化并不随血压水平和预后危险因素的增加而增加。     

乳腺组织中端粒酶活性的临床意义

目的：探讨分析端粒酶在乳腺组织中的表达对乳腺癌早期诊断的临床价值。方法：应用PCR－ELISA法，对170例患者分别进行端粒酶活性检测。结果：端粒酶的表达与乳腺癌的临床分期、腋淋巴结转移密切相关（P＜0．01）。特别是它在乳腺癌前病变中有表达。结论：端粒酶对乳腺癌的早期诊断具有重要价值，进一步探讨与其他癌基因的关系，可望成为特异性临床诊断指标。     

不同端粒酶抑制剂对肝癌细胞端粒酶活力的影响

目的通过多种端粒酶抑制剂同时作用于人肝癌SMMC-7721细胞,比较各种端粒酶抑制剂抑制癌细胞端粒酶活力的效果。方法利用针对端粒酶RNA的反义寡核苷酸(ASODN)和正义寡核苷酸(NODN),针对端粒酶催化亚基的反义寡核苷酸(HASODN)和正义寡核苷酸(HNODN),以及没食子酰表没食子儿茶素(EGCG),3’-叠氮3’-脱氧胸苷(AZT),全反式维甲酸(ATRA),盐酸阿酶素(ADM)作用于人肝癌SMMC-7721细胞株,实时荧光定量端粒重复序列扩增法(real-timefluorescentquantitativeTRAPassay,FQ-TRAP)检测端粒酶抑制剂作用后SMMC-7721细胞端粒酶活力变化。结果FQ-TRAP法可检测到102个细胞的端粒酶活力,ASODN、NODN、HASODN、HNODN、EGCG、AZT、ADM、ATRA作用于SMMC-7721细胞后,与对照组比较,癌细胞的端粒酶活力均受到抑制(P<0.05),其端粒酶活力的下调率分别为93.30%、43.44%、41.02%、39.26%、58.15%、48.93%、24.44%和53.49%。结论FQ-TRAP法可快速、简便及定量检测人端粒酶活力。ASODN,EGCG抑制SMMC-7721细胞端粒酶活力的效果较明显。     

食管癌端粒酶表达与其活性关系

目的探讨食管癌端粒酶亚基因表达及其与端粒酶活性的关系。方法采用端粒末端重复序列扩增技术检测29例食管鳞癌组织及其相应癌旁正常组织、47例食管鳞状上皮不典型增生组织的端粒酶活性;采用逆转录聚合酶链反应技术检测端粒酶各亚单位基因mRNA的表达。结果端粒酶活性阳性检出率、亚单位基因端粒酶逆转录酶(mTERT)mRNA表达在食管癌、不典型增生组织和癌旁正常组织之间差异有统计学意义(P<0.001);而端粒酶亚单位基因hTR或TP1mRNA在3种食管组织中表达差异无统计学意义(P>0.05)。在105例食管癌组织、癌旁正常组织和不典型增生组织中hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈显著正相关(P<0.001);而hTR或TP1mRNA表达与端粒酶活性无明显相关(P>0.05)。结论端粒酶在食管癌的发生发展过程中可能起关键性作用:hTERT与端粒酶活性密切相关;端粒酶有望成为食管癌的生物标志物。     

hTERT基因反义核酸对A2780细胞端粒酶活性影响

目的检测hTERT基因反义核酸对A2780细胞端粒酶活性的影响及其机制。方法TRAP法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测hTERT蛋白表达。结果端粒酶活性检测结果显示,A2780细胞吸光度A值为0.492±0.051,hTERT反义核酸作用48hA值降为0.351±0.047,hTERT反义核酸作用72hA值降为0.238±0.024。hTERT蛋白表达检测结果显示,A2780细胞hTERT蛋白阳性率89.513%±3.389%,hTERT反义核酸作用48h后hTERT蛋白阳性率低至71.237%±2.872%,hTERT反义核酸作用72hhTERT蛋白阳性率低至47.767%±1.226%。而hTERT正义核酸无上述作用。结论hTERT反义核酸能降低A2780细胞端粒酶活性,其机制可能是降低hTERT蛋白表达量。     

端粒、端粒酶系统的调控与研究现状

端粒是指位于真核细胞线性染色体末端的特殊结构 ,由TTAGGG的DNA重复序列和端粒结合蛋白所构成的一种核蛋白复合体。端粒酶对端粒结构的稳定起着重要的作用 ,而端粒结构和端粒结合蛋白也影响端粒酶活性。在大多数组织端粒酶活性的抑制是在出生前由于hTERT转录水平的抑制 ,而在 90 %以上的癌细胞中通过hTERT表达上调被激活。端粒酶活性受多水平调控 ,本文从以下方面描述 :端粒酶活性和细胞分化、端粒酶活性的分子调节、端粒酶活性与细胞周期、端粒酶与肿瘤现状及端粒酶活性与其他因素 ,因此 ,可能在不同的细胞有不同的因素。     

三氧化二砷对卵巢癌细胞端粒酶活性及hTERT蛋白表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对卵巢癌细胞株A2780端粒酶活性的影响。方法应用端粒酶多聚酶联反应-酶联免疫测定(PCR-ELISA)方法检测As2O3作用后卵巢癌细胞系A2780细胞端粒酶活性的变化并使用流式细胞仪检测hTERT蛋白表达。结果0.25μmol/LAs2O3(24~72h)可抑制卵巢癌细胞系A2780的端粒酶活性及hTERT蛋白表达,抑制作用呈时间依赖性效应。结论AsO可以通过降低hTERT蛋白表达进而抑制卵巢癌细胞的端粒酶活性。     

端粒酶和妇科肿瘤的研究进展

端粒酶是一种RNA依赖的逆转录酶 ,能够延长染色体末端的端粒长度。它由三个主要部分组成———端粒酶RNA亚单位、端粒酶催化亚单位及连接二者的端粒酶相关蛋白。端粒酶激活是细胞永生化和肿瘤形成的关键步骤 ,其活性受到多种因素的调控。端粒酶催化亚单位hTERTmRNA可能是其激活的关键限速步骤。在妇科肿瘤的癌变过程中 ,端粒酶活性不同程度地升高 ,hTERT不断上调。端粒酶及其催化亚单位有可能成为妇科肿瘤筛查的一种重要的肿瘤标志物     

端粒酶对细胞周期调控和肿瘤发生的影响

自端粒酶发现至今的十几年中,人们对其结构和功能进行了系统的研究,发现端粒酶与肿瘤发生具有明显的关联。肿瘤细胞具有细胞周期失调的共同特点,而正常细胞脱氧核糖核酸在受到损伤后能够发生细胞周期阻滞以及时修复损伤,即通过细胞关卡调控,这是保持基因组稳定的关键事件。细胞周期关卡调节异常可导致遗传改变,并可能导致细胞的恶性转化。本文就端粒酶激活、细胞周期失调对肿瘤形成的影响以及两者之间关系的研究做一综述。