金黄色葡萄球菌耐药性及mecA、qacA／B和pvl基因检测

金黄色葡萄球菌是临床上最常见的致病菌之一,可产生多种毒素和酶,包括凝固酶、葡萄球菌溶血素、杀白细胞素、肠毒素和表皮溶解毒素等。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）具有多药耐药特征,是导致医院感染的主要革兰阳性菌,已成为临床抗感染治疗的难题。监测金黄色葡萄球菌的耐药现状,了解金黄色葡萄球菌的耐药和致病机制,以及分析感染的危险因素与治疗对策具有重要的临床意义。     

浙江省耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子分型及耐药性分析

目的探讨浙江省分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的分子分型及菌株的耐药性。方法连续收集2009年1月至2010年12月浙江省11家三级甲等医院临床分离的MRSA147株。采用琼脂稀释法对13种抗菌药物进行最小抑菌浓度（MIC）测定。通过多位点序列分型（MLST）、SCCmec分型和spa分型进行菌株同源性分析,并比较不同分型菌株的耐药谱。利用辛普森指数计算三种分型方法的分辨率并进行比较。结果147株MRSA菌株共分为14种ST型,其中ST239（75株）、ST5（24株）和ST59（23株）为主要流行克隆;SCCmec分型以Ⅲ型为主（76株）,其次是Ⅳ型（32株）、Ⅱ型（24株）和V型（9株）,6株菌株无法分到已知型;spa基因分型被分为23种,其中以t030、t437、t002和t037菌株数最多,分别为57,17,15和12株。药敏结果显示,MRSA菌株除对利奈唑胺、替考拉宁、万古霉素和去甲万古霉素敏感外,对其他常用抗菌药物的耐药率均很高,尤其是主要流行克隆ST239以及SCCmecⅢ型菌株耐药情况严重。三种分型方法的分辨率分别为0．6885,0．6577和0．8165,其中spa分型方法对菌株的区分能力更强。结论浙江省临床分离的MRSA菌株存在主要流行克隆ST239-SCCmecⅢ-t030-MRSA,耐药形势严峻,应加强院内耐药菌株的监测。     

1 245株金黄色葡萄球菌临床感染分布及耐药性变迁

目的探讨临床分离的金黄色葡萄球菌的感染分布及耐药性变迁,为临床经验性用药及院内感染控制提供数据支持。 方法回顾调查分析本院2012年1月至2015年12月于住院部及门诊送检标本分离到的金黄色葡萄球菌耐药数据,使用Microscan Walkaway 40 Plus对金黄色葡萄球菌进行鉴定及抗菌药物敏感性试验,采用WHONET 5.6版本软件进行统计分析。 结果共分离1 245株金黄色葡萄球菌,主要分离自患者痰液（565株,45.4%）、伤口分泌物（234株,18.8%）、脓液（136株,10.9%）和血液（89株,7.1%）;检出657株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,检出率为52.8%,其中,痰液中MRSA检出率最高（75.6%）。金黄色葡萄球菌主要来源于神经外科（197株,15.8%）、ICU（172株,13.8%）、创伤骨科（161株,12.9%）和呼吸内科（132株,10.6%）;神经外科以MRSA检出率最高（77.2%）。金黄色葡萄球菌对利福平、复方新诺明、达托霉素、利奈唑胺、万古霉素和奎奴普丁/达福普汀敏感性较好,对青霉素类敏感性最差。MRSA仅对达托霉素、利奈唑胺、万古霉素和奎奴普丁/达福普汀敏感性较好,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）对常用抗菌药物除青霉素类以外的抗菌药物耐药率较低;MRSA对常用抗菌药物耐药率显著高于MSSA。 结论临床MRSA检出率较高,且对常用抗菌药物耐药形势严峻,临床科室经验用药同时应配合加强院内感染控制,预防及减少MRSA感染的发生。     

泌尿系统的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染及其耐药性研究

目的了解泌尿系统耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）感染的现状及其耐药性。方法采用ＮＣＣＬＳ制订的方法和标准测定从泌尿系统感染标本中分离的２８２株金黄色葡萄球菌的耐药性,通过ＷＨＯＮＥＴ－３统计分析。结果本组ＭＲＳＡ占同期金黄色葡萄球菌感染的６５６％,其中以肾盂引流液、血液和伤口分泌物分离的ＭＲＳＡ比例较高。全部ＭＲＳＡ均对青霉素,氨苄青霉素和苯唑西林耐药;对第一、二、三代头孢类抗生素、氨基糖甙类和新型喹诺酮类抗生素均有程度不同的耐药,仅万古霉素和伊米配能对其仍敏感。结论对严重ＭＲＳＡ感染应在药敏试验指导下选用敏感抗生素治疗。     

金黄色葡萄球菌临床分离株功能基因及其二元分型研究

目的 研究一组金黄色葡萄球菌临床分离株毒力基因和耐药基因的存在状况.方法 连续收集浙江省宁波市第一医院2013年7至9月临床分离的金黄色葡萄球菌共40株,采用聚合酶链反应（PCR）的方法分析42种毒力基因和11种耐药基因,再以10类毒力基因和1种耐药基因mecA检测结果作二元分型.结果 40株金黄色葡萄球对青霉素的敏感率为12.5％ （5/40）,对红霉素的敏感率为42.5％（17/40）,对其余15种抗菌药物的敏感率均大于65.0％.除了人主要组织相容性复合体（M HC）类似蛋白编码基因map未检出,其他几类毒力基因：黏附素、细胞毒素、荚膜抗原、超抗原、丝氨酸蛋白酶均有检出,检出率为2.5％～100.0％.耐β-内酰胺类、氨基糖苷类、红霉素类、四环素类、季铵盐消毒剂、抗菌肽的耐药基因均有检出,检出率为2.5％～37.5％.40株菌株经二元分型可分为16种阳性基因检出模式,每株菌最少检出3类毒力基因,最多检出7类毒力基因和1类耐药基因mecA.结论 本组菌株耐药表型和耐药基因型符合率较高,菌株携带多种毒力基因和耐药基因.     

重症监护病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及基因分型研究

目的 对重症监护病房（ICU）耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染进行分子流行病学调查,探讨临床分离菌株的同源性,为预防和控制医院感染提供参考.方法 采用药敏纸片法（K-B法）、葡萄球菌染色体mec盒基因（SCCmec）分型及葡萄球菌蛋白质A（spa）基因分型技术对2009年11月24日-12月3日宁夏医科大学附属医院ICU、急诊ICU、烧伤ICU、呼吸ICU的MRSA感染患者、医护人员携带及周围环境中的MRSA进行药物敏感性试验和同源性分析.结果 440份样本中共分离出78株金黄色葡萄球菌,其中MRSA 62株（79.48%）,主要分离于烧伤ICU（22/62,35.48%）.SCCmec分型结果显示,50株为医院获得性MRSA（SCCmecⅢ型43株、SCCmec Ⅰ型4株、SCCmecⅡ型3株）,未分型12株.进行spa分型研究的37株MRSA中,28株医院获得性MRSA为SCCmecⅢ-t030,呈现高度的克隆一致性.结论 MRSA菌株具有多药耐药的特征,SCCmecⅢ-t030型是其主要型别,MRSA 临床株与环境株可能具有同源性.     

2008~2010年某院金黄色葡萄球菌感染现状及耐药性变迁分析

目的 了解本院院内金黄色葡萄球菌的临床分布及耐药性变迁,为临床合理使用抗菌药物提供一定的依据.方法 收集分离自2008年1月至2010年12月本院住院患者金黄色葡萄球菌共859株,采用 VITEK-2 Compact 进行鉴定,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,头孢西丁纸片扩散法鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),采用双纸片扩散法检测诱导型克林霉素耐药情况,应用WHONET 5.4软件进行数据处理.结果 本研究共检出金黄色葡萄球菌859株,主要分离自痰液524株(61.0%),伤口分泌物153株(17.8%);科室分布情况为:呼吸内科291株(33.9%),肿瘤科157株(18.3%),神经内科133株(15.5%).本研究所分离菌株中MRSA共253株(29.5%),诱导型克林霉素检测阳性菌155株(49.1%).MRSA检出率逐年升高,MRSA对16 种抗菌药物的耐药率均高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),其中三者对头孢唑啉、头孢呋辛、环丙沙星、左氧氟沙星和利福平的耐药率比较,差异具有统计学意义(P< 0.05),未检出耐万古霉素和利奈唑胺菌株.结论临床中应根据病原学药敏结果合理选择抗菌药物,减少因抗菌药物滥用而导致的耐药菌株的产生.     

我院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性及肠毒素分析

收集了我院１９９４年１０月至１９９５年４月金黄色葡萄球菌１００株，应用药敏试验筛选ＭＲＳＡ，并检测其对１２种抗生素的耐药性，计算ＭＩＣ５０和ＭＩＣ９０，应用乳胶凝集试验法，测定其肠毒素产生率。结果我院总的ＭＲＳＡ阳性率为６０％，烧伤科的ＭＲＳＡ的阳性率为６７．４％，内科６２．５％，骨科４４．５％，ＭＲＳＡ耐药性低于５０％的有万古霉素（３．３％）去甲万古霉素（５％），丁胺卡那霉素（２１．５％）３种，     

金黄色葡萄球菌感染诱导成骨细胞参与免疫反应

成骨细胞的主要功能是合成骨的细胞外基质及调控破骨细胞形成和活性,从而维持骨组织平衡。近年研究发现金黄色葡萄球菌感染能诱导成骨细胞大量分泌白细胞介素-6、白细胞介素-12和单核细胞趋化蛋白-1等免疫炎性因子,诱导成骨细胞膜表面表达主要组织相容性复合体Ⅱ和分化抗原簇40等免疫反应受体,诱导激活成骨细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体、Toll样受体及丝裂原活化蛋白激酶等免疫反应通路,参与免疫反应。该文主要就金黄色葡萄球菌感染诱导成骨细胞参与免疫反应的机制研究作一综述。     

天津市耐甲氧西林葡萄球菌的耐药状况和基因分型

目的 分析耐甲氧西林葡萄球菌的耐药状况及耐药基因,了解目前葡萄球菌耐药的流行病学特征.方法 对临床分离的138株葡萄球菌进行耐药性检测,用聚合酶链反应（PCR）检测mecA耐药基因,并结合两种多重PCR方法对mecA阳性菌株进行葡萄球菌染色体mec盒基因（SCCmec）分型.结果 138株葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌65株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）7株,阳性率为10.8%;凝固酶阴性葡萄球菌73株,其中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（methicillin-resistant coagulase negative Staphylococcus,MRCNS）44株,阳性率为60.3%,二者差异具有统计学意义（x2=37.05,P＜0.01）.所有菌株对万古霉素和呋哺妥因均敏感.经PCR检测52株葡萄球菌mecA基因阳性,阳性率为37.7%（52/138）,SCCmec分型发现Ⅰ型16株,Ⅱ型1株,Ⅲ型13株,Ⅳ型9株,Ⅴ型4株.结论 耐甲氧西林葡萄球菌的耐药情况日益严重,临床上MRCNS比MRSA更常见,SCCmec Ⅰ型和Ⅲ型菌株为主要流行菌株.     

男性泌尿生殖道感染患者分离的金黄色葡萄球菌耐药性及耐消毒剂基因流行特性研究

目的:研究男性泌尿生殖道感染患者尿道分泌物中分离的金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物和消毒剂的耐药情况及消毒剂耐药基因携带情况。方法:收集男性泌尿生殖道感染患者尿道分泌物标本中分离的金黄色葡萄球菌152株,琼脂稀释法检测临床常用抗菌药物以及消毒剂氯已定对其最低抑菌浓度(MIC),同时采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增法确定其中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA);多重PCR对MRSA菌株进行SCCmec耐药基因盒(SCCmec)分型,PCR扩增耐消毒剂基因qac;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析qacA/B基因阳性MRSA菌株间的同源性。结果:152株金黄色葡萄球菌中,MRSA占59.9%(91/152);SCCmec分型结果显示以SCCmecⅤ型为主,占63.7%(58/91),Ⅰ型8株(8.8%),Ⅱ型2株(2.2%),Ⅲ型19株(20.9%),Ⅳ型4株(4.4%)。临床分离的金黄色葡萄球菌对青霉素、红霉素、环丙沙星、左氧氟沙星非敏感率较高,依次是:95.4%、72.4%、42.8%、44.7%,对呋喃妥因、替考拉宁、利奈唑胺以及万古霉素具有较高的敏感性。琼脂稀释法测得氯已定对152株菌的MIC值范围为0.25~16μg/ml;对MRSA菌株的MIC50=2.0μg/ml,MIC90=4.0μg/ml,对MSSA菌株的MIC50和MIC90均为1.0μg/ml;152株金黄色葡萄球菌中,有72株(47.4%)携带qacA/B基因,6株(3.9%)携带smr(qacC+qacD)基因,9株(5.9%)携带qacEΔ1基因,2株(1.3%)携带qacH基因,未检出qacG、qacJ基因。PFGE结果显示qacA/B基因阳性MRSA菌株呈多克隆分布。结论:临床分离的金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物表现出不同程度耐药,部分菌株对消毒剂氯已定耐受力较强,耐消毒剂基因以qacA/B为主,临床医生应该合理使用抗菌药物和体外消毒剂。     

荆州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的流行和耐药特征分析

目的 调查荆州地区社区相关性和医院相关性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA和HA-MRSA)的流行和耐药特征.方法 连续收集2012年1月至2013年12月分离自荆州市中心医院门诊和住院患者送检样本的MRSA 159株.检测16种抗菌药物对所有菌株的最小抑菌浓度,采用多重PCR检测所有菌株的SCCmec分子型别,并分别以脉冲场凝胶电泳(PFGE)和耐药谱聚类分析对ICU的MRSA进行同源性分析.采用WHONET 5.6和SPSS 19.0软件对相关数据进行统计分析.结果 159株MRSA中,HA-MRSA 131株(82.4％),CA-MRSA 28株(17.6％).HA-MRSA和CA-MRSA在患者年龄、病区分布、来源样本类型、住院时间、抗感染治疗时间、感染类型和基础疾病的构成上差异有统计学意义(x2=19.103,31.372,59.756,71.703,54.153,59.756和54.232,P＜0.01).159株MRSA中未检出对万古霉素、利奈唑胺、替加环素和呋喃妥因耐药的菌株,但所有菌株对青霉素、头孢西丁和苯唑两林均耐药.HA-MRSA对莫西沙星、利福平、左氧氟沙星、环丙沙星和庆大霉素的耐药性高于CA-MRSA(x2=30.179,27.352,28.523,28.523和25.987,P＜0.01),但对红霉素和克林霉素的耐药性低于CA-MRSA(x2=13.106和11.743,P＜0.01).159株MRSA中,SCCmecⅡ型12株(7.5％),Ⅲ型113株(71.1％),Ⅳ型26株(16.4％),未能分型8株,CA-MRSA和HA-MRSA分别以Ⅳ(26/28,92.9％)型和Ⅲ型(113/131,86.3％)为主.ICU病区分离的49株HA-MRSA,经PFGE分型可分为6型,以Al(24株,49.0％)、A2亚型(9株,18.4％)和B型(9株,18.4％)为主;耐药谱聚类分析发现3群相关性很高的HA-MRSA,其对应的PFGE型别显示其分属于A1、A2亚型和B型.结论 荆州地区流行的MRSA以HA-MRSA为主,其与CA-MRSA在患者年龄、病区分布、感染类型以及耐药性等方面均显示出差异.HA-MRSA以SCCmecⅢ型为主,且在ICU病区存在HA-MRSA暴发流行.     

甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌基因分型及耐药现状研究

目的 研究烧伤病房分离的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)的葡萄球菌盒式染色体mec(SCCmec)基因分型及耐药现状. 方法 2012年9月-2013年9月,从笔者单位烧伤整形科ICU及普通病房送检的患者创面分泌物、血液及痰液标本r中,检出非重复金黄色葡萄球菌179株(ICU来源68株、普通病房来源111株).采月头孢西丁K-B纸片扩散法检测金黄色葡萄球菌MRSA表型,对ICU和普通病房中MRSA检出率进行比较.采用PCR法对MRSA进行SCCmec.分型,经检测甲氧西林耐药决定子mecA基因对前述MRSA鉴定结果进行验证 . 采用用 K-B纸片扩散法检测MRSA与甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)对23种临床常用抗菌药物的耐药情况 除去MRSA对其耐药率为100.0％或0的抗菌药物,将SCCmecⅢ型MRSA与非SCCmecⅢ型MRSA 对剩余抗菌药物的耐药率进行比较对数据行Pearsonx2检验或校正x2检验. 结果 179株金黄色葡萄球菌中148株鉴定为MRSA占82.7％,其中ICU来源62株、普通病房来源86株;其余31株为MSSA占 17.3％.ICU中 MRSA在该病区内检出金黄色葡萄球菌中所占百分比为91.2％(62/68),显著高于普通病房中的77.5％(86/111),x2=5.526,P=0.019. PCR检测显示148株MRSA均携带mecA基因,其中106株为SCCmecⅢ型阳性占71.6％;ICU与普通病房中 SCCmecⅢ型MRSA占各自病区内检出MRSA的百分比分别为72.6％ (45/62)和70.9％ (61/86),差异无统计学意义(x2=0.048,P=0.826).148株MRSA对青霉素及头孢类抗生素共8种抗菌药物100.0％耐药,对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、替加环素、呋喃妥因及奎奴普丁/达隔普汀的耐药率均为0除2种菌对其耐药率为0的6种抗菌药物外,MRSA对剩余17种抗菌药物的耐药率均显著高于MSSA(x2值为4.091 ～138.546,P＜0.05或P＜0.01) 106株SCCmecⅢ型MRSA对左氧氟沙星、环丙沙星、利福平、四环素、红霉素、林可霉素、庆大霉素、克林霉素的耐药率分别为56.6％(60/106)、85.8％ (91/106)、89.6％ (95/106) 、86.8％(92/106)、84.9％ (90/106)、78.3％(83/106)、92.5％ (98/106)、74.5％ (79/106),均显著高于42株非SCCmecⅢ型MRSA的33.3％ (14/42)、61.9％(26/42) 、71.4％ (30/42)、66.7％ (28/42) 、69.0％(29/42)、57.1％(24/42)、71.4％(30/42)、52.4％ (22/42),x2值为4.801 ～11.377,P＜0.05或P＜0.01. 结论 笔者单位烧伤病房的MRSA检出率高且耐药现状十分严峻,流行情况以SCCmec.Ⅲ型为主,未见对糖肽类抗生素耐药情况.     

金黄色葡萄球菌对万古霉素临界耐药的遗传学机制研究进展

耐万古霉素金黄色葡萄球菌（VRSA）的出现引起了临床上对治疗革兰阳性菌感染的担忧,其中中度耐药金黄色葡萄球菌（VISA）的耐药机制至今仍不清楚。在对1名患儿应用万古霉素治疗的过程中,研究人员陆续分离出多株万古霉素敏感和中度耐药的金黄色葡萄球菌,若按分离时间排列,这些菌株表现出万古霉素耐药程度的逐渐升高,而各菌株的遗传背景高度一致。     

Targeting intracellular Staphylococcus aureus to lower recurrence of orthopaedic infection

Staphylococcus aureus is often found in orthopaedic infections and may be protected from commonly prescribed antibiotics by forming biofilms or growing intracellularly within osteoblasts. To investigate the effect of non‐antibiotic compounds in conjunction with antibiotics to clear intracellular and biofilm forming S. aureus causing osteomyelitis. SAOS‐2 osteoblast‐like cell lines were infected with S. aureus BB1279. Antibiotics (vancomycin, VAN; and dicloxacillin, DICLOX), bacterial efflux pump inhibitors (piperine, PIP; carbonyl cyanide m‐chlorophenyl hydrazone, CCCP), and bone morphogenetic protein (BMP‐2) were evaluated individually and in combination to kill intracellular bacteria. We present direct evidence that after gentamicin killed extracellular planktonic bacteria and antibiotics had been stopped, seeding from the infected osteoblasts grew as biofilms. VAN was ineffective in treating the intracellular bacteria even at 10× MIC; however in presence of PIP or CCCP the intracellular S. aureus was significantly reduced. Bacterial efflux pump inhibitors (PIP and CCCP) were effective in enhancing permeability of antibiotics within the osteoblasts and facilitated killing of intracellular S. aureus. Confocal laser scanning microscopy (CLSM) showed increased uptake of propidium iodide within osteoblasts in presence of PIP and CCCP. BMP‐2 had no effect on growth of S. aureus either alone or in combination with antibiotics. Combined application of antibiotics and natural agents could help in the treatment of osteoblast infected intracellular bacteria and biofilms associated with osteomyelitis. © 2017 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 36:1086–1092, 2018.

     

2002-2006年灼伤病房金黄色葡萄球菌耐药情况分析

目的：分析上海瑞金医院灼伤科2002-2006年住院患者金黄色葡萄球菌耐药率的变化和抗菌药物的使用情况,为合理应用抗菌药物提供依据。方法：调查上海瑞金医院2002-2006年灼伤病房细菌的流行病学,抗菌药物的使用量以及金黄色葡萄球菌的耐药变化。结果：①病房分离的主要细菌是金黄色葡萄球菌（29.48%-41.06%）和铜绿假单胞菌（15.59%-23.39%）。②头孢拉定（80.45-286.34DDDs/100住院人天）、头孢哌酮（11.64-238.97 DDDs/100住院人天）等β-内酰胺类抗生素是病房使用最多的抗菌药物,万古霉素（43.19-82.18 DDDs/100住院人天）、阿米卡星（38.99-125.52 DDDs/100住院人天）、环丙沙星（1.96-163.41 DDDs/100住院人天）的使用量也比较大。③金黄色葡萄球菌对几种常用抗菌药物的耐药情况研究显示,青霉素（98.0%-100.0%）、阿米卡星（72.4%-86.1%）、头孢唑啉（68.5%-85.1%）、环丙沙星（51.5%-81.2%）、苯唑西林（72.7%-85.1%）耐药率都比较高,而万古霉素尚未发现耐药菌株。青霉素和阿米卡星的耐药情况较严重,使用量也有相应减少。环丙沙星的耐药情况有所缓解,使用量则相应增加。结论：病房金黄色葡萄球菌的耐药情况比较严重,临床必须严格掌握抗菌药物的使用指证,根据药敏结果选择合适的抗菌药物,通过联合用药、选择不常用的敏感抗菌药物、减少耐药严重的抗菌药物的使用等手段来缓解细菌耐药情况。