高糖毒性通过JNK信号通路对胰岛β细胞系INS-1细胞活性和凋亡的影响

目的:研究高糖毒性通过JNK信号分子对INS-1细胞功能影响的分子机制。方法:在5.6mmol/L(5.6G)、11.2mmol/L(11.2G)、33.3mmol/L(33.3G)葡萄糖浓度下加入或者不加IGF-1培养INS-1细胞,观察细胞的活性和凋亡,并通过添加或不添加JNK抑制剂后,观察JNK信号分子和IRS的丝氨酸磷酸化改变。结果:INS-1细胞活性随暴露高糖环境中的葡萄糖浓度和时间增加而下降,IGF-1有增加细胞活性的作用,但其作用随糖浓度增加而受抑制。流式细胞术检测3组细胞总的凋亡率分别为11.3%、12.7%、28.2%,33.3G组凋亡发生率是5.6G组的2.49倍(P0.01)。高糖激活JNK和IRS的丝氨酸磷酸化,在33.3G组2种蛋白的磷酸化水平分别是11.2G组的3.33倍(P0.01)和1.17倍(P0.01),加入IGF-1以后,进一步抑制它们的丝氨酸磷酸化水平。添加JNK抑制剂SP600125后,可以完全抑制JNK的激活,但仅部分抑制IRS的丝氨酸磷酸化水平,并且使33.3mmol/L葡萄糖培养下细胞活性增加8%(P0.05),凋亡减少49%(P0.01)。结论:高糖通过激活JNK信号分子抑制IRS信号系统,从而抑制胰岛β细胞活性,促进凋亡发生。阻断JNK信号分子可以通过抑制IRS的丝氨酸磷酸化而减少细胞凋亡,改善胰岛β细胞功能。     

白藜芦醇对NIH3T3细胞Shh信号通路的影响

目的探讨白藜芦醇对NIH3T3细胞Shh信号通路的影响。方法实验分为对照组和白藜芦醇组。白藜芦醇处理NIH3T3细胞24 h。CCK-8法测定细胞活力,免疫荧光法检测初级纤毛蛋白(Ac-tu)、Smo和Gli-1的表达,Western blotting法检测Shh、Ptc、Smo、Gli-1蛋白的表达。结果 1.0.5和1μmol/L白藜芦醇组(0.679±0.047,0.774±0.054)细胞活力分别较对照组(0.585±0.039)明显增强(P<0.05),其中以1μmol/L白藜芦醇组最强。之后随白藜芦醇浓度(10、20、40、80μmol/L)的增高,细胞活力逐渐降低(0.428±0.043,0.395±0.031,0.373±0.017,0.361±0.016),且均较对照组明显减弱(P<0.05),而0.1μmol/L(0.602±0.065)和5μmol/L组(0.556±0.041)细胞活力与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。2.NIH3T3细胞表达Ac-tu、Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1从蛋白,有1根初级纤毛,Smo和Gli-1蛋白位于细胞质。白藜芦醇处理24 h时,Gli-1从细胞质进入细胞核,Smo从细胞质进入初级纤毛,且Shh(0.756±0.659比0.441±0.769,P<0.05)、Ptc-1(0.655±0.347比0.351±0.026,P<0.05)、Smo(0.779±0.064比0.451±0.035,P<0.05)和Gli-1(0.856±0.044比0.560±0.058,P<0.05)蛋白表达较对照组高。结论白藜芦醇可能通过激活Shh信号通路增强NIH3T3细胞的活力。     

槲皮素通过PTEN/PI3K/JNK信号通路减轻小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症

目的：探讨槲皮素（quercetin, Que）对细菌脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的小鼠巨噬细胞炎症模型的抗炎效应及其与第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）信号通路联合抗炎的效果和机制。方法：以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象。采用CCK-8实验确认0～100μmol/L Que的安全实验浓度。将细胞分为对照组、LPS炎症细胞模型组（LPS组）和不同浓度的Que处理LPS炎症细胞模型组（Que组）。Griess法检测各组细胞内一氧化氮（nitric oxide, NO）的分泌;ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达;RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测Que...     

脂多糖诱导的急性肾损伤小鼠模型肾脏中JNK信号通路的激活

目的 探讨JNK信号通路激活在脂多糖(LPS)诱导的急性肾损伤(AKI)发病中的作用.方法 48只小鼠随机分为对照组和AKI组,分别检测血清尿素氮、肌酐以及胱抑素C,HE染色观察肾组织病理改变,免疫组化、West-ern blot检测肾组织p-JNK和p-c-Jun蛋白表达部位及强度,ELISA检测血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素1β(IL-1β)水平.结果 小鼠腹腔注射LPS后,血清尿素氮、肌酐、胱抑素C均较对照组均明显升高,肾组织病理损伤呈进行性加重.正常小鼠各时间点可见p-JNK和p-c-Jun在肾小管、肾小球系膜区有微量表达.AKI组小鼠p-JNK及p-c-Jun在肾小管等部位大量表达.与对照组相比,AKI组p-JNK和p-c-Jun蛋白水平在1h后即开始升高,以造模4h时增高最明显,30 h时逐渐下降.与之相应,血中TNF-α和IL-1β水平亦明显升高,于4h达峰值后逐渐下降.结论 JNK信号通路激活在LPS诱导的AKI发病中起重要作用,JNK信号通路活化后可诱发TNF-α和IL-1 β等炎性因子的表达,继而介导AKI的发生和发展.     

青藤碱在JNK/c-Jun信号通路中对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响

目的：探究青藤碱（SIN）通过JNK/c-Jun信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法：培养肺上皮细胞MLE-12,通过CCK-8检测SIN的毒性。流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光检测自噬体形成数量,Western blot检测细胞中凋亡、自噬以及JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达水平。结果：LPS造模后,细胞凋亡率和自噬体数量升高,Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1蛋白水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-JNK/JNK和p-c-Jun/c-Jun均升高（P<0.05）;Bcl-2、P62蛋白水平均降低（P<0.05）。SIN处理可明显改善LPS对细胞凋亡和自噬的影响,以及对JNK/c-Jun信号通路的调控（P<0.05）。细胞自噬抑制剂3-MA或JNK激动剂ANISO处理均可部分逆转SIN对LPS诱导的肺上皮细胞的保护作用（P<0.05）。结论：SIN可通过调控JNK/cJun信号通路相关蛋白提高细胞自噬,保护被LPS损伤的肺上皮细胞。     

let-7a通过抑制MAP4K3/MKK4/JNK信号通路减少脑出血大鼠神经元调亡

目的:研究微小RNA let-7a对脑出血(ICH)大鼠神经元凋亡的影响及其分子机制。方法:从48只健康SD大鼠中随机选取8只作为假手术组,将2μLⅦ型胶原酶注入其余大鼠苍白球以构建ICH模型。将造模后的大鼠随机分为模型(2μL生理盐水)组、let-7a激动剂(agomir)组、阴性对照(NC)agomir组、let-7a拮抗剂(antagomir)组和NC antagomir组,每组8只,在侧脑室注射相应药物。7 d后进行神经功能评分;HE染色观察病理损伤;RT-qPCR和Western blot检测相关蛋白表达水平;TUNEL染色检测神经元凋亡情况;利用生物信息学软件预测let-7a与丝裂原活化的蛋白激酶激酶激酶激酶3(MAP4K3)的靶向关系,并在HEK293T细胞中用双萤光素酶报告基因实验进一步验证。结果:动物实验中,let-7a过表达时,神经功能评分降低,病理损伤减轻,胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)低表达,神经元凋亡减少,cleaved caspase-3和cleaved PARP低表达(P<0. 05)。细胞实验中,MAP4K3是let-7a的靶基因之一,且两者为...     

PI3K/Akt信号通路及其抑制剂的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/丝氨酸-苏氨酸激酶（Akt）信号通路在信号转导的调控中扮演着重要角色,能调节细胞增殖、凋亡、代谢、运动、血管生成等生物过程。与其他信号通路相比,PI3K/Akt信号通路的组成部分更庞大,在肿瘤中更多见。目前已证实多种肿瘤中存在PI3K/Akt信号通路的超活化,对肿瘤细胞的存活、生长、运动、血管生成和代谢意义重大。因此,抑制PI3K和与通路相关的成分可能会使肿瘤生长受抑,使患者预后改善。PI3K/Akt信号通路抑制剂包括针对单一成分的抑制剂和双重抑制剂。目前大量的PI3K抑制剂已在临床前期研究中取得良好结果,有些已经在血液恶性肿瘤和实体肿瘤中进行了临床试验。在此综述中,我们简单的总结了PI3K-AKt通路的研究成果,讨论了PI3K抑制剂从临床前研究到临床研究的发展前景。     

散结片对肝癌大鼠巨噬细胞极化及MAPK/JNK信号通路的作用机制

目的 ：探究散结片对肝癌大鼠巨噬细胞极化及MAPK/JNK信号通路的作用机制。方法 ：选取SPF级SD雄性裸鼠,随机分为正常组、模型组、索拉非尼组、散结片组,记录大鼠死亡数量并绘制生存曲线,H-E染色检测肝组织病理形态,免疫组织化学显色检测肝组织巨噬细细胞特异型标志物的蛋白表达,免疫印迹法检测肝组织MAPK/JNK信号通路相关蛋白表达。结果 ：与正常组比较,模型组大鼠死亡数量、肝组织CD163、p38MAPK、JNK蛋白表达明显增多,生存曲线、肝组织中CD11c蛋白表达明显降低;与模型组比较,索拉非尼组、散结片组死亡数量、肿瘤质量及体积、肝组织CD163、p38MAPK、JNK蛋白表达显著减少,生存曲线、肝组织中CD11c蛋白表达显著升高,且散结片组比索拉非尼组变化显著;而抑制剂组与散结片组肝织中p38MAPK、JNK蛋白表达相比差异无统计学意义,联合组比抑制剂组明显降低。结论 ：散结片可能是通过抑制MAPK/JNK信号通路,抑制巨噬细胞向M2型极化,促进其向M1型极化,进而抑制肝癌大鼠肿瘤生长。     

结直肠癌组织和SW480细胞系中SKA3蛋白的表达及对PI3K/AKT信号通路的影响

目的 探讨结直肠癌组织中SKA3的表达及临床意义,观察转染SKA3-siRNA对结直肠癌SW480细胞增殖、迁徙的影响及在PI3K/AKT信号通路中的作用.方法 采用免疫组化法观察69例结直肠癌和癌旁组织中SKA3蛋白的表达水平.结直肠癌SW480细胞转染SKA3-siRNA干扰后,应用Western blot法观察细...     

PI3K/AKT信号通路在SjCystatin诱导M2巨噬细胞分化过程中的影响

目的:进一步确定日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Sj Cystatin)诱导M2巨噬细胞分化的亚型及相关机制。方法:用ELISA、RT-q PCR或Western blot法测定IL-10、IL-12、巨噬细胞亚型表面标志物LIGHT(M2b)及Arg-1(M2a+M2c)的表达;用Western blot法测定AKT的磷酸化水平。结果:Sj Cystatin处理组在6 h、12 h和24h时IL-10表达量持续增加;处理12 h,LIGHT的mRNA和蛋白表达量增加但Arg-1的mRNA和蛋白表达量降低;AKT磷酸化水平增加。PI3K/AKT抑制剂处理组IL-10的释放量在12 h和24 h持续降低;24 h,LIGHT的mRNA和蛋白表达量降低但Arg-1的mRNA和蛋白表达量增加;AKT的磷酸化水平减少。结论:Sj Cystatin促进了活化的M2巨噬细胞分化为M2b亚型巨噬细胞,并且PI3K/AKT信号通路参与了这一过程。     

JNK信号转导通路对神经干细胞增殖的影响

目的 探讨JNK信号转导通路对新生大鼠海马神经干细胞增殖的影响.方法 采用无血清培养技术体外培养新生大鼠海马神经干细胞,传至第4代,大多数克隆球直径约为200 μm时,进行单细胞克隆培养,单细胞克隆形成的克隆球进行传代.将培养细胞随机分为2组,对照组采用神经干细胞培养液进行培养,实验组中在神经干细胞培养液的基础上添加不...     

丹参酮ⅡA通过JNK通路诱导人骨肉瘤HOS细胞凋亡

目的:探究丹参酮ⅡA对人骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:采用CCK-8实验考察丹参酮ⅡA对HOS细胞活力的影响,并确定给药剂量。集落形成实验与细胞迁移实验研究丹参酮ⅡA对肿瘤细胞增殖与迁移能力的影响。Hoechst 33258染色、透射电镜与流式细胞技术检测丹参酮ⅡA对肿瘤细胞凋亡的影响。Western blot进一步检测细胞凋亡与JNK通路相关蛋白的变化;并通过JNK抑制剂验证肿瘤细胞中上述通路与凋亡的关系。结果:一定剂量的丹参酮ⅡA能抑制HOS细胞的增殖与迁移能力,且效应呈浓度依赖与作用时间依赖性,并能诱导凋亡发生。Western blot进一步表明,随着药物浓度增加,cleaved caspase-3与Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白表达下降,JNK通路相关蛋白表达上升,这些变化可被JNK抑制剂SP600125缓解。CCK-8实验结果显示,抑制JNK通路可减少药物导致的细胞活力抑制。结论:丹参酮ⅡA可通过JNK通路诱导人骨肉瘤HOS细胞发生凋亡,具有显著抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

曲古抑菌素A通过JNK/MAPK信号通路介导乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡

目的　探讨TSA对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。 方法　采用MTT、克隆形成、流式细胞术检测TSA对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学功能的影响;Western Blot 和qRT-PCR 检测细胞增殖、凋亡和MAPK信号通路蛋白及mRNA 的表达水平的影响;抑制JNK通路检测可能的作用机制。 结果　TSA呈剂量依赖性抑制细胞增殖和诱导凋亡,使细胞阻滞于G1期;TSA可上调P21、Caspase-3、Bax、p-JNK蛋白及mRNA表达,下调Cyclin D1、Cdk4、Bcl-2蛋白及mRNA表达;抑制JNK通路后,p-JNK蛋白和细胞总凋亡率降低,Caspase-3、Bax蛋白及mRNA表达减少,Bcl-2蛋白及mRNA表达增多。 结论　TSA通过MAPK信号通路介导JNK的磷酸化,调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡。     

p38信号通路对SETD4在细胞中的表达和定位的影响

目的: 观察SETD4(SET domain containing 4)蛋白在不同细胞中的表达和定位情况,以及亚砷酸钠(NaAsO₂)刺激对细胞SETD4表达和定位的影响,探讨NaAsO₂诱导SETD4的改变是否依赖于p38信号通路。方法: 用Western blotting检测SETD4在不同细胞中蛋白的表达情况,用细胞免疫荧光技术检测SETD4在细胞中的定位;用NaAsO₂刺激 p38 ^+/+和 p38 ^-/-细胞,分别收集细胞总蛋白检测SETD4蛋白的表达变化,同时观察SETD4的定位和移位改变。结果: SETD4蛋白无论在鼠源还是人源的细胞中均有表达;细胞免疫荧光结果显示SETD4在整个细胞中分布,以胞质较多; p38 ^+/+和 p38 ^-/-细胞受NaAsO₂刺激后其SETD4蛋白的表达趋势一致,即均在6 h时有明显减少; p38 ^+/+细胞受NaAsO₂刺激后SETD4蛋白从胞质向胞核移位,而 p38 ^-/-细胞SETD4的移位现象不明显。结论: SETD4蛋白在不同种属及组织来源的细胞中均有表达,表现为全细胞分布,以胞质为主;NaAsO₂刺激可影响细胞SETD4蛋白的表达水平及定位,NaAsO₂诱导的SETD4移位改变有赖于p38 MAPK介导的信号通路。     

盐酸小檗碱通过PI3K/Akt信号通路促进小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的分化

目的:研究盐酸小檗碱对小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1分化与矿化的调控作用及其机制。方法:MC3T3-E1细胞给予不同浓度(0、1、5、10和20 mg/L)的盐酸小檗碱刺激3 d,CCK-8法检测细胞活性。不同浓度的盐酸小檗碱分别干预3 d和7 d,检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。进一步将实验随机分为4组:对照组、盐酸小檗碱组、盐酸小檗碱+LY249002(PI3K/Akt通路抑制剂)组及LY249002组。干预2 d后,采用real-time PCR检测成骨细胞分化相关因子ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达情况,采用Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt的表达水平。将MC3TC-E1细胞用矿化培养基诱导21 d,茜素红染色检测其矿化情况。结果:与对照组相比,不同浓度的盐酸小檗碱对细胞活性的影响没有明显差异;不同浓度的盐酸小檗碱处理MC3T3-E1细胞后ALP活性有不同程度升高。Real-time PCR结果表明,盐酸小檗碱(5 mg/L)促进ALP、OCN、OPN及Runx2的mRNA表达(P 0. 01),而LY294002能抑制这些分化相关因子的表达。Western blot检测结果表明,盐酸小檗碱(5 mg/L)促进p-Akt蛋白的表达(P 0. 01),其作用被LY249002抑制。茜素红染色发现盐酸小檗碱组矿化明显,但LY294002能抑制盐酸小檗碱的促进作用。结论:盐酸小檗碱可以促进小鼠前成骨细胞的分化与矿化,其机制可能与其激活PI3K/Akt信号通路有关。     

PI3K/SGK1信号通路上调小鼠肺上皮钠通道表达的研究

目的:探讨磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/血清-糖皮质激素调节激酶1(SGK1)信号通路对小鼠肺上皮钠通道(ENaC)表达的影响.方法:24只健康成年C3H/HeN小鼠随机分为对照组、急性肺损伤(ALI)组、胰岛素组和PI3K siRNA组,每组6只.收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测量肺泡液体清除率(AFC),免疫...     

Antidepressant effect of electroacupuncture on modulating the expression of c-Fos/AP-1 through the JNK signaling pathway

The effectiveness and safety of electroacupuncture (EA) for depression have been identified by abundant clinical trials and experimental findings. The c-Jun-NH(2)-terminal kinase (JNK) signaling pathway is considered to be involved in the antidepressant mechanism of EA. However, the antidepressant effect of EA via modulating the expression of c-Fos/activator protein-1 (AP-1) under the condition of JNK inhibition remains unexplored. In this study, we investigated the antidepressant effect and possible mechanism of EA in regulating the expression of c-Fos/AP-1 under the condition of JNK inhibition by SP600125 in rats exposed to chronic unpredictable mild stress (CUMS). The depression-like behaviors were evaluated by the body weight, sucrose preference test (SPT), and open field test (OFT). The expression levels of c-Jun in the hypothalamus, c-Fos in the pituitary gland, and c-Fos and AP-1 in the serum of CUMS induced rat model of depression were detected by ELISA. The results indicated that treatment with EA and fluoxetine can reverse the CUMS-induced depression-like behaviors in rats and can up-regulate the expression levels of c-Jun in the hypothalamus, c-Fos in the pituitary gland, and c-Fos and AP-1 in the serum. Of note, the data demonstrated that SP600125, the inhibitor of JNK signaling pathway, can exert synergistic effect with EA in regulating CUMS-induced abnormal activation of the JNK signaling pathway. The antidepressant effect of EA might be mediated by modulating the expression of c-Fos/AP-1.     

PI3K/Akt信号通路上调急性肺损伤大鼠肺泡上皮钠通道表达

目的 探讨PI3K/Akt信号通路对急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡上皮钠通道(ENaC)α、β和γ亚基表达的影响.方法 成年SD大鼠随机分为对照组、ALI组(脂多糖)、胰岛素组及渥曼青霉素组,每组5只.观察肺组织病理改变,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测量总肺水含量,RT-PCR和Western blot测定ENaC mRNA和蛋白、p-Akt表达.结果 胰岛素组BALF蛋白含量、髓过氧化物酶(MPO)活性、总肺水含量较ALI组显著减少(P＜0.05),渥曼青霉素组BALF蛋白含量、MPO活性及总肺水含量较胰岛素组显著增加(P＜0.05).ALI组α-、β-和γ-ENaC蛋白表达显著低于对照组(0.33 ±0.06 vs 1.27 ±0.07,0.18±0.04 vs 0.72±0.04,0.37±0.04 vs0.69±0.05)(P＜0.05).胰岛素组蛋白表达α-ENaC(2.19 ±0.04)、β-ENaC(1.18 ±0.07)和γ-ENaC(1.18 ±0.08)显著高于ALI组(P＜0.05).渥曼青霉素组蛋白表达α-ENaC(0.86 ±0.09)、β-ENaC (0.58±0.05)和γ-ENaC (0.59±0.02)显著低于胰岛素组(P＜ 0.05).胰岛素组ENaC mRNA和p-Akt较ALI组显著升高(P＜0.05).渥曼青霉素组ENaC mRNA和p-Akt较胰岛素组显著降低(P＜0.05).结论 激活H3K/Akt通路上调3种ENaC亚基表达,从而清除肺水肿液.     

米诺环素通过调控PI3K/Akt通路抑制硝普钠诱导的PC12细胞凋亡

 目的： 探讨PI3K/Akt信号通路在米诺环素（minocycline,MC）抑制硝普钠(sodium nitoprusside,SNP)诱导的PC12细胞凋亡中的作用。方法：将体外培养的PC12细胞分为4组：空白对照组、SNP组、MC+SNP组和PI3K抑制剂LY294002+ MC+SNP组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测不同时点（0.5、1、2、3 h）各处理组PI3K/Akt通路蛋白p-Akt和Akt的表达。结果：SNP处理PC12细胞24 h能抑制细胞生长,加入10 μmol/L MC预处理30 min可明显提高细胞活力,降低细胞凋亡率（P<0.05）,抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。MC组的p-Akt表达高于其它组,而加入LY294002后可阻断MC的上述效应。结论：MC可通过调控PI3K/Akt通路抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。