胃癌组织中AEG-1、Cyclin D1的表达及其意义

目的 观察胃癌组织中星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)、Cyclin D1的表达,分析二者表达与胃癌侵袭、转移的关系.方法 应用免疫组化EnVision法检测110例胃癌组织中AEG-1和Cyclin D1的表达,并复习相关文献.结果 AEG-1在胃癌组织中的阳性率为69.1％,AEG-1表达与癌组织Lauren分型、淋巴结转移、浸润深度和pTNM分期密切相关(P＜0.05),与患者性别、年龄、发生部位和肿瘤大小无关(P ＞0.05);Cyclin D1在胃癌组织中的阳性率为57.3％,Cyclin D1表达与癌组织浸润深度、淋巴结转移和pTNM分期有关(P＜0.05),与患者性别、年龄、发生部位、肿瘤大小和Lauren分型无关(P＞0.05).相关性分析显示,胃癌组织中AEG-1与Cyclin D1的表达呈正相关(P＜0.05).结论 AEG-1可能通过上调Cy-clin D1的表达而促进胃癌细胞的侵袭、转移.AEG-1可能作为胃癌治疗的一种潜在分子靶点.     

HLJ1高表达对结直肠癌细胞周期和侵袭能力的影响

目的构建并鉴定p CDNA3.0-HLJ1真核表达质粒,检测HLJ1基因表达上调对结直肠癌细胞周期和侵袭能力的影响。方法利用反转录PCR法钓取HLJ1基因片段并与p CDNA3.0载体连接,酶切及测序鉴定p CDNA3.0-HLJ1重组质粒。在结直肠癌细胞SW480和HT29中分别转染p CDNA3.0和p CDNA3.0-HLJ1,应用荧光定量PCR和Western blot法检测HLJ1的表达,分别应用流式细胞仪和细胞侵袭实验检测其对细胞周期和侵袭能力的影响。结果 p CDNA3.0-HLJ1重组质粒构建成功,并在结直肠癌细胞中成功表达。转染p CDNA3.0-HLJ1质粒入结直肠癌细胞后,肿瘤细胞G_1/G_0期比例明显增加(P0.05),侵袭能力明显减弱(P0.05)。结论 p CDNA3.0-HLJ1质粒为进一步研究HLJ1在结直肠癌中的作用提供实验基础。HLJ1将结直肠癌细胞阻滞在G_1期并抑制其侵袭能力。     

Cripto-1基因沉默对人肝癌MHCC-97H细胞侵袭、迁移能力的影响

 目的: 探讨Cripto-1蛋白在人肝癌组织和肝癌细胞系中的表达,研究沉默Cripto-1基因后对肝癌细胞MHCC-97H侵袭和迁移能力的影响及可能的机制。方法: 采用Western blot检测11对肝癌组织及相应的癌旁组织和不同肝癌细胞株中Cripto-1蛋白的表达;收集80例肝癌石蜡标本,免疫组织化学方法检测Cripto-1蛋白的表达情况;Cripto-1 siRNA转染肝癌细胞MHCC-97H细胞后,real-time PCR和Western blot分别检测转染效率;Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot分别检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达。结果: Western blot检测结果显示肝癌组织中Cripto-1蛋白的表达明显高于对应的癌旁组织,Cripto-1蛋白在各肝癌细胞系中均有表达,且表达量高于对照细胞,其中高侵袭性肝癌细胞MHCC-97H表达量最高;免疫组织化学结果显示Cripto-1蛋白在88.7%的肝癌组织中表达;Cripto-1 siRNA转染MHCC-97H细胞后能显著降低Cripto-1 mRNA和蛋白的表达水平,并且能降低其侵袭和迁移能力;Western blot结果表明,Cripto-1基因沉默后能抑制MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论: Cripto-1在肝细胞癌中的高表达可能与肝癌的发生发展密切相关,下调Cripto-1的表达可以抑制肝癌细胞侵袭和迁移能力,其机制可能与下调MMP-2、MMP-9的表达有关。     

HLCDG1基因siRNA表达质粒的构建及其对A549细胞周期和增殖的影响

目的:本研究旨在应用RNA干扰技术，诱导转基因肺癌细胞HLCDG1基因沉默并观察其对肺癌细胞周期和增殖的影响。 方法:构建HLCDG1基因短小干扰双链RNA表达载体，筛选HLCDG1基因表达沉默的肺癌细胞株并应用MTT和流式细胞仪分析这一肺癌细胞株增殖和细胞周期分布状况。 结果:根据siRNA表达载体的设计原则，构建了能在哺乳动物细胞稳定表达的siRNA载体5个（4个位点匹配实验组和1个位点错配对照组），依次命名为pHL-si-1、pHL-si-2、pHL-si-3、pHL-si-4 和 pHL-si-c。上述载体分别与表达HLCDG1的重组体pcDNA3.1(+)/HLCDG1共转染A549细胞，筛选到一株共转染pHL-si-1载体和pcDNA3.1(+)/HLCDG1重组体的A549细胞，它几无HLCDG1基因表达，这株细胞暂命名为A549-HLCDG1-si-1。MTT和流式细胞仪分析表明，A549-HLCDG1-si-1细胞增殖能力明显提高，进入S期和G2+M期增多，滞留G1期减少。 结论:采用RNAi技术特异阻断HLCDG1基因表达，验证了HLCDG1基因对A549肺癌细胞有生长抑制作用。     

下调RALA表达抑制人白血病K562细胞迁移和侵袭

目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制v-ral 白血病致病因子RALA基因表达对人白血病K562细胞迁移和侵袭的影响.方法 利用LipofectamineTM 2000将化学合成的RALA siRNA转染体外培养的K562细胞,Real-time PCR检测细胞内RALA mRNA的表达水平;Western印迹检测...     

RNA干扰对宫颈癌细胞中E6AP基因的影响及其意义

目的 探讨RNA干扰(RNAi)对宫颈癌细胞系HeLa细胞E6AP基因表达及细胞增殖和凋亡的影响.方法 实验分为3组:空白对照组(未经转染的HeLa细胞)、转染阴性对照的小干扰RNA(siRNA)组及转染特异性E6AP siRNA组.采用半定量RT-PCR技术、Western blot方法 检测E6AP mRNA、蛋白表达水平,用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测细胞增殖状况,用流式细胞术检测细胞凋亡.结果 转染E6AP siRNA 24、48、72 h后,E6AP siRNA组E6AP mRNA表达水平与对照siRNA组比较下降33%、72%、70%.Western blot结果 显示,在转染48及72 h,E6AP蛋白表达下降38%、59%.MTT法检测显示,转染HeLa细胞24、48、72、96 h后细胞生长速度明显降低,E6AP siRNA组与空白对照组(F=101.38,P＜0.05)、对照siRNA组(F=38.64,P＜0.05)比较,差异均有统计学意义.E6AP siRNA作用24、48、72 h后E6AP siRNA组凋亡率明显高于对照siRNA组(F=41.48,P＜0.05)和空白对照组(F=86.36,P＜0.05),差异有统计学意义.结论 体外合成的siRNA能有效封闭宫颈癌细胞中E6AP基因的表达,抑制细胞增殖,促进细胞的凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供理论依据.     

小干扰RNA抑制CD97的表达及其对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的: 设计合成有效的siRNA-CD97,体外转染胃癌细胞株,观察CD97表达改变及其与胃癌细胞株迁移、侵袭能力改变的关系。方法: 采用AGS和MGC803胃癌细胞株。针对 CD97 基因设计siRNA,采用化学法合成,筛选出最有效的siRNA-CD97。siRNA-CD97转染胃癌细胞后分别用real-time RT-PCR、免疫荧光流式细胞术检测CD97 mRNA和蛋白表达的改变,MTT法检测细胞活性的改变,并用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果: 在siRNA-CD97转染后48 h,real- time RT-PCR结果显示AGS和MGC803细胞CD97 mRNA的表达量相对于未转染的细胞分别下降了(89.34±9.95)%和(95.42±1.93)%。转染后72 h,流式细胞术结果显示AGS细胞CD97^EGF和CD97^stalk抗原的表达强度相对于未转染的细胞分别下降了(19.29±3.45)%和(30.11±5.93)%, MGC803细胞CD97^EGF和CD97^stalk抗原的表达强度相对于未转染的细胞分别下降了(26.25±5.73)%和(16.22±3.23)%。MTT法检测结果显示,siRNA-CD97转染前后细胞的吸光度值没有显著差异。迁移和侵袭实验结果显示,AGS细胞siRNA-CD97转染组迁移和侵袭细胞相对于未转染组分别下降了(67.63±12.03)%和(68.02±15.63)%,MGC803细胞转染组迁移和侵袭细胞相对于未转染组分别下降了(14.92±2.03)%和(22.09±5.43)%。结论: 胃癌细胞转染 siRNA-CD97能够抑制CD97 mRNA和蛋白表达,随着CD97表达的降低,细胞迁移和转移的能力也明显减弱。     

肺癌细胞中PAK1的表达下调抑制肺癌细胞的增殖和侵袭能力

目的探讨P21激活激酶1(PAK1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其对NSCLC细胞增殖和侵袭能力的影响。方法采用免疫组化和Western blot(WB)方法检测正常肺组织及NSCLC组织中PAK1的蛋白表达水平。利用PAK1-siRNA下调肺癌细胞系A549和LK-2中PAK1的表达后,通过MTT和Transwell等实验方法,明确PAK1对NSCLC细胞增殖和侵袭能力的影响。结果与正常肺组织相比,PAK1在肺癌组织中呈现明显的胞浆强表达,并且其异常表达与肺癌组织的TNM分期(P=0.020)、组织类型(P=0.007)和淋巴结转移相关(P=0.040)。肺癌细胞系中,PAK1的表达下调能够明显抑制肺癌细胞的侵袭和增殖能力(P0.05)。结论 PAK1促进肺癌细胞的增殖及侵袭能力,发挥着重要的促癌基因功能。     

RhoC基因沉默对口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的：分析RhoC对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法：利用UALCAN和K-M plotter在线数据库预测分析RhoC在OSCC中的表达及其与病理分期分生存率的关系,并结合IHC实验检测OSCC组织中RhoC的表达水平。按照人RhoC基因构建两条小干扰RNA(siRNA)并将细胞进行实验分组。RT-qPCR检测转染后各组细胞RhoC的mRNA表达水平,Western blot法分析实验分组细胞中RhoC、FAK、MAPK、p-FAK、p-MAPK、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达;此外,比较各实验分组细胞的穿膜细胞数和划痕愈合面积分析细胞的侵袭和迁移活动。最终通过构建裸鼠肺转移模型对上述实验进行验证。结果：RhoC在OSCC中高表达,并和病理分期和病理分级等关联性大。RhoC的mRNA和蛋白相对表达量在OSCC中增高（P<0.01）;RT-qPCR及Western blot结果显示,敲减RhoC表达后,RhoC的mRNA和蛋白表达水平显著下降（P<0.01）,Western blot结果显示p-FAK、p-MAPK、M...     

下调人高迁移率族蛋白1对人前列腺癌细胞PC-3的影响

目的研究小干扰RNA(siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对PC-3侵袭和转移的影响。方法构建真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1siRNA,转染PC-3细胞系,通过RT-PCR和Western blot检测HMGB1的mRNA及蛋白;通过细胞划痕、transwell和明胶酶谱分析检测PC-3体外侵袭能力。结果成功构建siRNA表达载体Pgene-sil-1/HMGB1siRNA,可使PC-3细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),并能有效抑制PC-3体外侵袭和转移活性(P<0.05)。结论应用siRNA技术能有效的抑制基因的表达,同时也能有效抑制PC-3细胞的体外侵袭和转移,为肿瘤的生物学治疗提供了新思路。     

低氧-复氧对人鼻咽癌细胞增殖、细胞周期、黏附和侵袭能力的影响

目的: 研究细胞外微环境低氧-复氧对人鼻咽癌细胞(CNE-2Z)增殖、细胞周期、黏附和侵袭能力的影响。方法: 以混合气体(5% CO₂, 95% N₂, O₂<0.1%)置换法建立体外低氧培养模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期分布;同质黏附实验和细胞-基质黏附实验检测细胞黏附能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果: (1) 低氧24 h后抑制CNE-2Z细胞增殖(P<0.01),复氧后细胞快速增殖,在复氧第5 d A值与常氧对照组相比无显著差异(P>0.05);(2) 低氧24 h后细胞阻滞于G₁期(P<0.01),复氧后G₁期阻滞得到快速解除,在复氧24 h细胞周期分布与常氧对照组相比无显著差异(P>0.05);(3)低氧24 h后细胞的同质黏附能力下降(P<0.01)而细胞-基质黏附能力无明显改变(P>0.05),细胞侵袭能力降低(P<0.01);复氧24 h细胞同质黏附能力恢复至常氧对照组水平(P>0.05),而细胞-基质黏附能力(P<0.01)和细胞侵袭能力较常氧对照组显著增加(P<0.01)。结论: 鼻咽癌细胞能耐受微环境低氧的不利影响;低氧环境下存活的鼻咽癌细胞产生的适应性变化赋予肿瘤更强的增殖和转移潜能,从而促进肿瘤细胞的恶性演进。     

野生型PTEN基因对卵巢癌细胞株的影响

目的： 观察转入野生型PTEN基因的卵巢癌细胞生物学行为变化，探索该基因对卵巢癌细胞周期的影响和抑制肿瘤侵袭的机制。 方法： 将野生型PTEN基因的pcDNA3.1Hygro(-)真核质粒载体转染SKOV3细胞系，潮霉素筛选稳定表达细胞株并扩增培养；采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化；用MTT法检测细胞抑制率。分别用RT-PCR检测转染前后PTEN mRNA表达水平变化；采用重组基底膜侵袭模型，观察转染前后细胞侵袭力的变化。 结果： 成功转染SKOV3并稳定表达PTEN，转染PTEN可以明显改变SKOV3细胞周期，使其阻滞于S期；明显抑制肿瘤细胞的侵袭力。 结论： 提示转染外源野生型PTEN基因可使SKOV3细胞周期阻滞于S期，并且通过抑制肿瘤细胞侵袭与生长，而具有明显的抑癌作用。     

下调CENP-W对人脑胶质瘤U87细胞的影响

目的:研究下调着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)的表达水平对人脑胶质瘤U87细胞的影响。方法:采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人脑胶质瘤U87细胞CENP-W的表达,采用RT-qPCR和Western blot法评价siRNA的干扰效果,采用MTT法、BrdU实验和平板集落形成实验测定细胞的增殖,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的改变。结果:MTT实验、平板集落形成实验和BrdU实验显示转染siRNA的实验组U87细胞的增殖能力、集落形成能力较空白对照组及阴性对照组明显降低;Transwell实验和划痕实验显示实验组细胞的迁移、侵袭能力较空白对照组及阴性对照组明显减弱;流式细胞术分析表明实验组细胞的细胞周期被阻滞在G_0/G_1期;实验组细胞凋亡比例较对照组增多(P0.05)。结论:下调CENP-W的表达可抑制人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进细胞的凋亡,提示CENP-W有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。     

异丹叶大黄素下调膀胱癌细胞的细胞周期蛋白D1表达并诱导G0/G1细胞周期阻滞

 目的：探索异丹叶大黄素（ISO）抑制膀胱癌细胞侵袭、转移和增殖活性的机制。方法：以ISO作用于人源性膀胱癌UMUC3细胞后,倒置相差显微镜下观察并以ATP生物荧光法检测癌细胞增殖活性;以RT-PCR和Western blotting法检测细胞周期蛋白D1表达;以流式细胞术检测细胞周期的变化;细胞划痕法检测细胞迁移活性。结果：20 μmol/L浓度以上ISO可显著抑制UMUC3细胞的增殖,其IC50为(22.5±2.8) μmol/L。同时 UMUC3细胞的细胞周期蛋白D1 mRNA和蛋白水平均显著降低。以低浓度5 μmol/L ISO预处理UMUC3细胞后,与对照组（47.33%）进行比较,可分别在12 h（58.82％）和24 h（63.94％）显著诱导细胞G0/G1期阻滞（P<0.01）。细胞划痕法检测证实5 μmol/L ISO可显著抑制膀胱癌细胞的迁移活性。结论：ISO可抑制膀胱癌细胞增殖,下调细胞周期蛋白D1表达,诱导G0/G1细胞周期阻滞,抑制细胞的迁移能力。     

Prdx4蛋白表达改变对HeLa细胞迁移和侵袭的影响

 目的: 观察过氧化物还原酶4(peroxiredoxin 4,Prdx4)蛋白表达的改变对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法: 采用脂质体瞬时转染法将表达质粒pcDNA3.0-HA-Prdx4转染HeLa细胞;LV-Prdx4 RNAi重组病毒感染HeLa细胞,构建Prdx4 shRNA HeLa细胞系沉默Prdx4的表达;用蛋白质印迹法证实Prdx4蛋白表达水平的变化;应用划痕愈合实验和Transwell迁移及侵袭实验分别检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果: pcDNA3.0-HA-Prdx4质粒转染组HeLa细胞的Prdx4蛋白表达水平明显上调(P<0.05),而Prdx4 shRNA HeLa稳定干扰细胞系Prdx4表达水平明显下调(P<0.05)。Prdx4过表达组HeLa细胞的迁移和侵袭能力明显增强,与空白对照组及空载体转染组比较,差异显著(P<0.01)。Prdx4表达干扰组HeLa细胞的迁移和侵袭能力明显受到抑制,与空白对照组及阴性对照组比较,差异显著(P<0.01)。结论: 上调Prdx4蛋白表达水平可促进HeLa细胞的迁移和侵袭,在宫颈癌的发生和发展过程中可能起重要作用;下调Prdx4蛋白表达水平可以明显抑制HeLa细胞的迁移和侵袭能力,Prdx4有可能成为临床治疗宫颈癌的一个潜在靶点。     

DDX3表达上调在人宫颈癌细胞增殖中的作用分析

目的:探讨DDX3表达上调在人宫颈癌细胞增殖中的作用。方法:采用免疫组织化学方法检测2012年4月至2013年3月河南省人民医院59例宫颈癌组织及癌旁非肿瘤组织标本中的DDX3表达情况。同时,以宫颈癌细胞HeLa为研究对象,通过慢病毒介导的宫颈癌细胞过度表达来检测DDX3的功能。采用细胞增殖与活性检测试剂盒评估细胞存活...     

锌指转录因子Snai1通过E-钙黏蛋白调控胃癌侵袭及淋巴结转移

目的 探讨锌指转录因子Snai1在胃癌发生发展中的作用,以及胃癌组织中Snai1与E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达的关系.方法 收集本院普外科2010年1月至2012年1月收治的65例胃癌患者手术切除的胃癌组织及邻近的正常胃黏膜组织,免疫组织化学检测Snai1和E-cadherin的表达.体外培养人胃腺癌细胞株SGC-7901,分为3组：空白对照组不进行转染,阴性对照组转染不含靶向作用于Snai1的siRNA的空质粒,转染组转染靶向作用于Snai1的siRNA.转染结束后实时定量PCR和免疫印迹法检测3组细胞Snai1和E-cadherin的表达.结果 胃癌组织中Snai1表达阳性率较正常胃黏膜组织明显增高（58.5％比0.0％,P＜0.001）,而E-cadherin表达阳性率明显降低（43.1％比100.0％,P＜0.001）.Snai1阳性和阴性的胃癌组织中E-cadherin表达的阳性率分别为28.9％ （11/38）、63.0％（17/27）.Snai1阳性的胃癌患者较Snai1阴性的胃癌患者淋巴结转移率明显升高（78.9％比40.7％,P＜0.001）.体外细胞实验显示,空白对照组与阴性对照组比较,Snai1和E-cadherin的表达差异无统计学意义（均P＞0.05）;与空白对照组比较,转染组Snai1 mRNA和蛋白表达下调,而E-cadherin mRNA和蛋白表达上调（均P＜0.05）.结论 Snai1可通过抑制E-cadherin表达,促进胃癌发生局部浸润及淋巴结转移.     

冬凌草甲素对人肺癌NCI-H460细胞侵袭和迁移的影响

 目的：研究冬凌草甲素对人肺癌NCI-H460细胞侵袭和迁移的影响。方法：将NCI-H460细胞分为高剂量（HD）组、中剂量（MD）组、低剂量（LD）组和对照（N）组,前3组（实验组）加入不同浓度的冬凌草甲素,N组不加冬凌草甲素,观察细胞生长情况;用MTT法测定细胞增殖;比较细胞侵袭能力和迁移能力;Western blotting检测细胞MMP-2和MMP-9表达。结果：实验组细胞数量低于对照组,细胞增殖受抑制,HD组抑制率为48.94%,MD组为36.17%,LD组为19.15%;实验组穿透滤膜细胞数明显减少,HD组为26.67±5.16,MD组为36.17±5.08,LD组为44.33±5.50;实验组的迁移速率及迁移细胞数均降低;实验组的MMP-2和MMP-9表达水平明显低于N组（P<0.01）。结论：冬凌草甲素能抑制NCI-H460肺癌细胞的侵袭和迁移,其作用与下调MMP-2和MMP-9表达有关。