PCR—SSP快速HLA—DR基因分型法的建立及临床初步应用

采用序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对２２份国际标准细胞株ＤＮＡ及２３例临床血标本ＤＮＡ进行了ＨＬＡ－ＤＲ基因分型，扩增条件为９４℃，３０ｓ，５８℃３０ｓ共３０个循环，对各个标准ＤＮＡ的分型结果显示，符合率为１００％，无假阳性及假阴性，提示本方法快速，准确，适合于临床应用。     

PCR—SSP检测HLA—B27基因的方法及临床意义

目的：建立快捷、特异的PCR－SSP检测HLA－B27基因的方法。方法：以钾缓冲液提取50－200μl外周血中的DNA，设计序列特异性的HLA－B27引物进行PCR扩增检测HLA－B27基因，结果与淋巴细胞毒方法（MLCT）相对比。结果：所设计引物可扩增出目的基因片段，钾缓冲液提取DNA可满足PCR要求，全部检测过程可在6h内完成。在225例门诊和住院患者中，HLA－B27阳性率在PCR方法和MLCT方法分别为77．3％和68．0％，两者的一致率为83．6％，在88例肯定的脊柱关节病（SpAs)住院患者中，HLA－B27阳性率在PCR方法为92．1％，在MLCT方法为81．8％，两者的一致率为89．8％。结论：PCR方法检测HLA－B27较MLCT方法敏感，特异和快捷，标本用量少、采集和保存方便，便于大量样本的临床和流行病学研究。     

HLA—DR4基因与类风湿关节炎的关联性研究

目的探讨人类白细胞抗原HLA-DR4基因与类风湿关节炎(RA)的关联性.方法采用特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法对山东地区汉族人群132例类风湿关节炎患者及130例正常健康者的HLA-DR4基因进行分析,并测定其基因频率.结果 HLA-DR4基因在132例类风湿关节炎患者中的基因频率(46.2%)显著高于其在130例正常对照组中的基因频率(19.2%,x2=21.624,P＜0.01).结论 HLA-DR4基因与山东地区人群的类风湿关节炎易感性有关联.     

福建省1型糖尿病患者HLA—DR基因频率及其与病情的关系

对福建省汉族人群ＨＬＡ－ＤＲ与１型糖尿病的遗传易感相关性及其与病情的关系进行研究。方法用聚合酶链反应反应及序列特异性引物基因分型方法，以６１例１型ＤＭ患者为研究对象，１０２例正常成年人对照。     

人类白细胞抗原—DR标准血清学分与基因分型的比较研究

目的比较研究顺序特异引物聚合酶反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法与标准血清学方法以夫类白细胞抗原ＤＲ（ＨＬＡ－ＤＲ）分型的精确性和临床价值。方法 选择肾移植受者１０１例，供者６１例，采用ＰＣＲ－ＳＳＰ和血清学方法同步双盲行ＨＬＡ－ＤＲ分型，比较其检测时间、敏感性、特异性和临床实用性。结果１６２份样本，ＰＣＲ－ＳＳ分型均获成功，检出ＤＲ等位基因总数３０８个，分型时间５小时，特异性和重复性１００％。血清学分耗     

PCR-SSP方法作HLA-DR亚区的基因分型

采用序列特异性引物－聚合酶链反应（ＰＣＲＳＳＰ）技术对ＨＬＡＤＲ亚区进行基因分型。使用鉴定ＤＲ１～ＤＲｗ１８的序列特异性引物和阳性对照引物，双盲检测了２２例已知ＤＲ血清型的标本，二者完全一致。并对未知血清型的标本作ＤＲ基因分型。本法具有较高分辨度、高特异性和简便快速的特点，为临床器官组织移植配型、疾病相关性分析、法医鉴定和人类学研究提供了新的技术方法     

中国南京地区汉族人HLA－DR4DNA的快速分型

应用ＡＲＭＳ（ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ）方法对南京地区１００例汉族健康人ＨＬＡ－ＤＲ４进行基因分型，结果表明，本地区汉族人ＨＬＡ－ＤＲ４基因纯合子占６％，杂合子占１５％，非ＤＲ４占７９％。本法较ＰＣＲ／ＳＳＯ法简单、快速，结果可靠，可用于ＨＬＡ配型。检测结果为ＨＬＡ相关联疾病及人类学的研究提供了参考依据     

多重等位基因特异性PCR—HLA—Ⅱ DNA分型

目的：对人类组织相容性抗原（Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｓｙｓｔｅｍ）Ⅱ类进行高分辨基因分析。方法：用多重ＰＣＲ和等位基因特异性ＰＣＲ技术相结合＾［１,２］,建立多重等位基因特异性。结果：２４对引物成功在分辨４３份ＤＮＡ的ＨＬＡ－ＤＲＢ１、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５＾＊５１个等位基因和ＱＤＢ１＾＊１５个等位基因的４位数字特异性,识别基因片段长度为２８１ｂｐｏ。结论：多重等位基因特异性ＰＣ     

HLA—DR两种分型方法的比较

目的 探讨肾移植供受体HLA-DR血清学分型与PCR-SSP基因分型方法的优缺点。方法 对已作HLA-DR血清学分型的供受体标本,进行PCR-SSP基因分型法作HLA-DR抗原分型;并对4例血清学分型为HLA-DR一个位点,而PCR-SSP为两个位点的受者,重新抽血作HLA-DR血清学业分型。结果 血清学法耗时80min,PCR-SSP法耗时145min;血清学方法误差率（不包括重新血清学分型的例数）为11.3%(受者14.7%,供者8.0%).重新作血清学分型的4例中,有1例结果为两个们点,与PCR-SSP结果一致,其余与原结果相同.结论 改进的血清学方法暂时还适合我国尸体供肾快速配型的需要.PCR-SSP法分型具有准确、简便、快速的优点,随着其方法学的不断发展将逐步取代血清学方法在HLA-DR分型中的应用。     

脐血HLA—I类抗原PCR—SSP分型的研究

目的 探讨PCR－SSP（聚合酶链反应－序列特异性引物）分型方法在脐血HLA－I类抗原分型中的应用价值。方法 53例脐血用免疫磁珠分离T淋巴细胞，单克隆抗体配型板作血清学分型，其中38例脐血用DNA快速抽提技术提取DNA后进行PCR－SSP基因分型，对两种方法分型结果进行对比研究。结果 38例脐血中，HLA－A位点PCR－SSP方法与血清学分型方法结果符合率100％，HLA－B位点血清学方法分型误差率为13．2％，其中1个抗原错误（占1．3％），9个抗原漏检（占11．8％）。脐血采集后24小时内作血清学分型较理想，超过24小时则半数以上不能进行血清学分型。抽提脐血DNA一次成功率100％，不受时间限制。结论 在脐血HLA－I类抗原分型中，PCR－SSP方法准确、省血、标本限制少，明显优于血清学方法，适用于脐血库。     

HLA—Ⅱ血清学分型与微量SSP法基因分型的比较分析

目的 验证微量序列特异性引物（SSP）技术进行HLA－Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法 采用聚合酶链反应结合微量SSP技术（简称微量PCR－SSP法）以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果 （1）微量PCR－SSP法检测的110例样本中，99例检出HLA－DR的396个等位基因、11例检出HLA－DQ的22个等位基因，检出10％的单倍型个体；（2）两种方法对比研究发现单克隆抗体血清学分型检出错误和漏检率较高，其误差在DR和DQ分别为38．81％和50．75％；（3）错误发生和易混淆的抗原为：DR15／16、11／12、13／14、8、12和DQ5／6、8／9。结论 微量SSP法可以准确检定血清学易漏检和发生错误的抗原等位基因。     

PCR—RSSO基础上HLA—I、Ⅱ基因分型的研究

目的：通过对PCR－DNA技术的分析，探讨人类白细胞抗原（HLA）基因分型方法。方法：采用PCR反向序列特异性寡核苷酸（polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术，建立改良半量扩增体系全自动HLA－I、Ⅱ等位基因分型方法，进行了635份血液标本HLA－A、B、C、DR、DQ等位基因分型，其中166份DNA同时采用序列特异性引物技术（PCR－SSP）和手工全量扩增体系PCR－RSSO技术。对全自动半量PCR－RSSO、PCR－SSP、手工PCR－RSSO 3种方法做两两比较。结果；全自动半量PCR－RSSO的分型成功率为98．4％（3124／3175），PCR－SSP为98．8％（656／664），手工PCR－RSSO为88．3％（733／830）。经χ^2检验，全自动半量PCR－RSSO与PCR－SSP的分型成功率无统计学差异，与手工PCR－RSSO有显著差异（P＜0．05）。结论：PCR－RSSO可识别HLA－I、Ⅱ共706个等位基因，覆盖WHO命名委员会2000年公布的36个等位基因的75．43％；对706个HLA等位基因的分型均为中－高分辨率，有分辨纯合子等位基因的能力；易长期保存书面的实验原始资料，即杂交条；具有成本低、劳动强度低、省时和DNA消耗量少等优点。PCR－RSSO适合于造血干细胞移植和建立造血干细胞及脐带血干细胞库的组织配型。     

PCR和SSO探针分析HLA—DQ位点的基因型探讨

用ＰＣＲ－ＳＳＯ方法对４２名汉族常人ＨＬＡ－ＤＱＡ、ＤＱＢ位点多态性等位基因进行了基因型分析。结果发现，ＤＱＡ位点有２０种基因型，ＤＱＡ０１０１／０１０３占２１％，ＤＱＡ０１０１／０５０１占１１．９％。ＤＱＡ０１０１／０１０３、０１０１／０５０１和０１０１／０６０１三种杂合子基因型占研究人数的４２．８％。     

HLA—DR基因分型中三种DNA提取法的比较

目的：寻找简便快速的ＨＬＡ－ＤＲ基因分型方法。方法：比较了标准酚－氯仿抽提法、ＮＰ－４９０法及快速盐析法抽提ＤＮＡ对ＨＬＡ－ＤＲ基因分型的影响。结果：３种方法抽提的ＤＮＡ含量、纯度、琼脂糖凝胶电泳结果及用于ＨＬＡ－ＤＲ基因分型的效果无差异,但酚－氯仿抽提法抽提ＤＮＡ所需时间比ＮＰ－４０法及快速盐析工。结论：ＮＰ＝４０法及快速盐析法可作为ＨＬＡ＿ＤＲ快速基因分型时提取ＤＮＡ的方法。     

内蒙古地区蒙古族人HLA—DQA1基因多态性研究

目的：了解内蒙古地区蒙古族HLA-DQA1基因多态性。方法：采用PCR-SSP技术对内蒙古地区97例内蒙古族人群进行HLA-DQA1等位基因型别分析。结果：蒙古族中高频率的HLA-DQA1等位基因为*0301、*0501、*0102,最少见的为*0601。结论：蒙古族人群HLA-DQA1基因分布,既有汉族人的特点,又有其独特性。     

肺癌患者肺泡巨噬细胞表现HLA—DR的表达

目的 了解肺癌患肺泡巨噬细胞表面人白细胞原－ＤＲ（ＨＬＡ－ＤＲ）的表达。方法 经支气管肺泡灌洗获肺泡巨噬细胞,贴壁分离及培养,免疫组化方法检测ＨＬＡ－ＤＲ表达的阳性细胞百分率。结果 ①肺癌及良性肺病患,其肺泡巨噬细胞未经刺激,均忆有部分表达ＨＬＡ－ＤＲ,但前明显高于后;②干扰素α（ＩＦＮ－α）或脂多糖（ＬＰＳ）刺激后,ＨＬＡ－ＤＲ的表达均增加,且两联合刺激优于单独刺激;③无论刺激与否,肺     

用顺序特异引物聚合酶链反应技术行HLA—A抗原DNA分型

作者采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）建立了汉族人群ＨＬＡ－Ａ,位点ＤＮＡ分型方法。研究采用ＰＣＲ－ＳＳＰ对３４５例肾移植供受者样本ＤＮＡ行ＨＬＡ－Ａ位点基因分型均获得成功,共检出Ａ位点等位基因总数６３５个,其中纯合子５５例,杂合子２９０例,可准确分辨ＨＬＡ－Ａ位点等基因２０个,无假阳性和假阴性出现,重复率１００％,总耗时５小时分型结果经标准ＤＮＡ验证和美国加州大学配型中心双盲验证     

Graves病与HLA—DR,DQ抗原关联的研究

探讨ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ抗原与Ｇｒａｖｅｓ病发病的关系。方法：检测５０例Ｇｒａｖｅｓ病患者１４种ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ抗原，并与５０健康献血员对照。结果：Ｇｒａｖｅｓ 病患者ＨＬＡ－ＤＲ；抗原频率和相对危险度明显高于对照组。结论：ＨＬＡ－ＤＲ１抗原与Ｇｒａｖｅｓ病呈相关联，Ｇｒａｖｅｓ病的发病有一定的遗传基础。