大豆过氧化物酶纯化及酶学特性研究

大豆过氧化物酶与辣根过氧化物酶类似,是一种含有血红素的Ⅲ类过氧化物酶.我们从大豆加工副产物大豆皮中,采用精简的三步法提取和纯化大豆过氧化物酶,得到Rz值大于2.0的纯酶.三个纯化步骤分别是硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和DEAE Sepharose离子交换层析.同时分析了温度、pH和常见化合物对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.结果表明,大豆过氧化物酶的温度和pH适用范围很宽,热稳定性、酸碱稳定性很高,并且在含有较高浓度有机溶剂的反应体系中的保持很好的酶活力.有这么优越的酶学特性,又有廉价的大豆皮来源,所以大豆过氧化物酶的产业化和应用前景将非常乐观.     

大豆多酚氧化酶、过氧化物酶的酶学特性研究

对大豆氧化还原酶系中的多酚氧化酶和过氧化物酶的酶学特性进行了较深入系统地研究,其中包括酶活力、酶热稳定性、pH值的影响,以及大豆卵磷脂、二巯基丙醇对酶活力的抑制作用.结果表明多酚氧化酶在120℃时,酶活力值已达到不可逆失活状态,pH6～7时酶活力最大,当二巯基丙醇的浓度为1.5mmol/L时其酶活力降至6%以下.过氧化物酶具有较高的耐热性,酶活力最适的pH值为5.5左右,大豆卵磷脂浓度达到80mg/L时其酶活力可降至20%左右.     

牛乳中乳过氧化物酶的分离纯化

采用强阳离子交换色谱梯度洗脱法,对牛乳中的乳过氧化物酶进行了分离和纯化,利用SDS-PAGE定性检测。结果表明,分离出的乳过氧化物酶显示为单一区带,相对分子质量为76186u。该酶酶活回收率为83.07%,纯化倍数达到44.63倍。     

超高压处理对辣根过氧化物酶二级结构及其活力的影响

本文研究了超高压处理对辣根过氧化物酶活力的影响，测定了其CD谱，并分析了酶的二级结构与酶活力的关系。试验压力为0.1～500MPa，温度为20～60℃，保压时间为10min，酶溶液pH7．0。试验结果表明：(1)在处理温度为40℃、保压时间为10min和酶溶液pH7．0的条件下，压力对酶活力有显著影响；在100MPa附近的低压处理时，酶活力会反常升高；大于400MPa处理时，酶活力下降趋势缓慢。(2)在处理压力为500MPa、保压时间为10min、酶溶液pH7．0条件下，在40℃以下的温度范围内，酶的活力下降趋势缓慢：40℃以后，酶活力随温度升高下降迅速。(3)辣根过氧化物酶的活力与β-折叠的含量密切相关；超高压处理将降低酶构象中的β-折叠构象比例，从而使酶失活；温度协同超高压处理将加剧β-折叠的含量的下降，从而加速辣根过氧化物酶活力的降低。     

乳过氧化物酶的分离纯化和酶学性质研究

采用超滤-离子交换色谱分步洗脱法,对牛初乳中的乳过氧化物酶进行了分离和纯化。经SDS-PAGE测定,分离出的乳过氧化物酶显示为单一区带,相对分子质量为75035D。该酶酶活回收率为76.17%,其最适pH为5.0～5.5,最适温度为55℃。在70℃、75℃时LP酶活的热失活曲线呈现一般植物过氧化物酶失活的双相特征。     

辣根过氧化物酶固定化新进展

辣根过氧化物酶是一种重要的酶制剂,被广泛地应用在分析检测、有机合成、生物转化和食品工业等领域,本文评述了近十几年来国内对外辣根过氧化物酶固定化研究的若干新进展,并对该领域的发展作了扼要的展望.     

黄瓜过氧化物酶的分离纯化及酶学性质

新鲜的黄瓜经匀浆、抽提、硫酸铵沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析后获得电泳纯的过氧化物酶。该酶的比活力、回收率及纯化倍数分别为64 177.67 U/mg、9.58%、61.93。该酶的分子质量为41.15 kD,亚基分子质量为40.21 kD。该酶的最适温度和最适pH值分别为60 ℃和6。在25～45 ℃及pH 5～9的范围内非常的稳定。在测定条件下测得该酶的Km值为53.79 mmol/L。硫氰化钾对该酶活力基本无影响。尿素、K+、Mn2+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Cu2+对该酶都具有激活作用且浓度至50 mmol/L时酶活力分别被激活至112%、127%、113%、128%、139%、199%、348%,然而十二烷基磺酸钠、抗坏血酸和草酸对该酶有强烈的抑制作用;Zn2+、甲醇、乙醇和异丙醇对该酶有一定的抑制作用。     

我国大豆种皮过氧化物酶的酶活性及热稳定性研究

经检测的186个我国大豆品种，种皮过氧化物酶（SBP）含量最高达1720U／g，最低为0，平均活性为285．8U／g。根据SBP含量高低，大豆可分为高酶活与低酶活二大类型，分类临界值为100U，高酶活类约占1／3。北方大豆平均酶活性明显高于南方大豆。大豆种皮主要含一种过氧化物酶同工酶，不同品种间分子量相同。SBP热稳定性优异，经70℃（pH5．0）处理24h，45份高酶活品种中有20份剩余酶活超过50％的。种皮在2—6℃贮藏10个月剩余酶活为25．5％-45．27％，种子在室温下贮藏10个月则为8．0％-24．1％。     

藕带过氧化物酶的分离纯化及酶学性质

研究藕带中过氧化物酶(POD)的提取和纯化技术,以及温度、pH值和部分化学物质对POD酶活性的影响。结果表明:藕带中的过氧化物酶提取物经过40%饱和度的硫酸铵除杂、80%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-52纤维素柱层析(100mL,0.1 mol/L NaCl的pH 7.2的磷酸缓冲溶液洗脱)、葡聚糖凝胶G-75柱层析(pH 7.2的磷酸缓冲溶液洗脱)进行分离纯化后,经SDS—PAGE鉴定为单一带,其分子量约为42kD,纯化倍数及蛋白质产率分别为32.68倍和2.11%。藕带中POD的最适温度为40℃,最适pH值为5.0。温度高于80℃基本失活,pH值小于2.0或大于8.0也基本失活。抗坏血酸对POD有明显的抑制作用;尿素、SDS、KSCN对POD具有轻微的抑制作用;草酸在低浓度时对POD具有激活作用,高于0.01 mol/L时有明显的抑制作用。     

大豆脂肪氧合酶研究进展

脂肪氧合酶(LOX)是影响食品风味和色泽最重要酶之一。该文介绍大豆脂肪氧合酶特性,探讨大豆脂肪氧合酶酶促反应特征和机理,概述大豆脂肪氧合酶对大豆性质影响,总结降低大豆脂肪氧合酶活性方法。     

大豆分离蛋白凝胶研究进展

该文概述大豆分离蛋白凝胶性质和机理研究进展及存在问题;探讨蛋白质组成、温度、pH和离子强度、剪切力等因素对凝胶功能性质影响,并介绍在凝胶结构功能研究中采用方法,仪器及能解决问题。     

双水相亲和萃取法从豆壳中分离过氧化物酶

采用双水相金属螯合亲和萃取法从豆壳中分离过氧化物酶,考察了豆壳过氧化物酶在不同类型双水相系统中金属螯合亲和配基聚乙二醇(PEG)-亚氨基二乙酸(IDA)-Cu(Ⅱ)对亲和分配的影响,发现PEG/羟丙基淀粉(PES)系统适合于金属螯合亲和分配豆壳过氧化物酶。进一步考察亲和配基加入量、成相聚合物分子量、系统组成、pH等因素对PEG/PES系统亲和分配的影响,优化分离条件为:PEG20009%,PES20014%,PEG-IDA-Cu(Ⅱ)1%,豆壳过氧化物酶的分配系数达40,纯化因子为2.8,回收率达到93%。     

大豆过氧化物酶基因的克隆及其表达载体的构建

大豆过氧化物酶(soybean peroxidase,sbp)基因的克隆及其表达载体的构建将有利于人们更深入的从分子生物学角度研究sbp 基因的结构与功能。首先从大豆根中获取总RNA,通过RT-PCR 获得sbp 基因。再将sbp 基因与表达载体pPICZα-A 双酶切后连接,构建重组表达载体pPICZα-A-sbp。将pPICZα-A-sbp 转化大肠杆菌筛选阳性克隆体并测序。结果表明：获得的sbp 基因序列与已报道的sbp[U51191(GmEpa1)]基因序列有92% 的同源性。重组表达载体pPICZα-A-sbp 的成功构建为其在毕赤酵母中表达奠定了基础。     

大豆异黄酮糖苷水解研究进展

该文在介绍大豆异黄酮的组成、化学结构、特性及生理功能基础上,详细介绍水解法制备大豆异黄酮苷元原理、工艺流程、大豆异黄酮苷元分离纯化及检测方法。     

速冻毛豆钝化过氧化物酶及胰蛋白酶抑制因子的安全烫漂时间研究

以不同成熟度的毛豆为试材,研究了钝化过氧化物酶及胰蛋白酶抑制因子的安全烫漂时间。结果表明,6～7成熟度的带荚毛豆烫漂时间为2.5min,7～8成熟度的为3min;烫漂液含有3.5%的食盐的6～7成熟度的带荚毛豆烫漂时间为2min,7～8成熟度的为2.5min。     

大豆异黄酮对衰老小鼠羟脯氨酸等物质变化的影响

以13月龄昆明种NIH雌性小白鼠为材料，通过小鼠自由饮用含不同剂量大豆异黄酮的溶液，就大豆异黄酮对老龄小鼠脂质过氧化物含量、谷光甘肽过氧化物酶活性及皮肤羟脯氨酸含量变化的影响作了初步探讨。结果显示大豆异黄酮可显著提高衰老小鼠皮肤羟脯氨酸含量；较高剂量的异黄酮可显著降低老龄小鼠全血脂质过氧化物含量，且随着老龄小鼠月龄增大，大豆异黄酮降低脂质过氧化物作用显著；大豆异黄酮对衰老小鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶活性的提高作用不显著，但在高剂量下，对小鼠在衰老过程中全血谷胱甘肽过氧化物酶活力下降有一定的延缓作用。提示，大豆异黄酮具有一定的延缓机体衰老的功能。     

纳米二氧化铈模拟过氧化物酶的研究进展

过氧化物酶在自然界中广泛分布,其利用过氧化氢来催化各种有机和无机化合物的氧化,在诸多领域得以应用。但由于过氧化物酶属于生物有机材料,存在纯化困难、稳定性差等缺点,也限制了其应用环境。纳米酶作为一种高效、简单、稳定、高性能的天然酶替代物在各种应用中得到了广泛的研究,克服了天然酶在工业等方面的实际局限性,其中纳米二氧化铈（CeO₂NPs）由于具有过氧化物酶特性已成为科学界研究的热点之一。本文综述了近几年纳米二氧化铈模拟过氧化物酶在食品分析、生物标志物的检测、医学、光学传感、仿生等方面应用的研究进展,显示出它在不同研究领域的巨大潜力,希望能为后续进一步研究提供一定的参考。