氟化钠对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响

目的 探讨氟化钠(NaF)对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响.方法 以0、10-2、10-1、1、10、102、5×102、103、5×103、104、2×104、4×104 μmol/L NaF染毒MG-63细胞,培养48 h.采用MTI实验观察NaF对MG-63细胞增殖能力的影响,以流式细胞技术检测MG-63细胞周期变化.结果 MTr实验结果显示,MG-63细胞开始有增殖活性时的NaF浓度为102 μmol/L,增殖活性最大时的浓度为5×103 μmol/L,增殖活性受到抑制时的浓度为2×104 μmol/L.流式细胞技术检测结果显示,采用MTT实验中确定的3个关键浓度染毒细胞48 h后,高剂量(2×104 μmol/L)组的MG-63细胞凋亡率最高(6.001％),细胞增殖指数(PI)最低(0.339);中剂量(5×103μmol/L)组的细胞凋亡率最低(2.220％),PI最高(0.632);低剂量(102 μmol/L)组的PI及细胞凋亡率均与对照组无明显差异.结论 NaF对成骨细胞具有双向作用,低浓度下促进细胞增殖,超过一定浓度后因其增殖抑制而使细胞凋亡增加.     

胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2基因表达的影响

目的观察胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2（IRS-2）基因mRNA表达的影响。方法用胰岛素干预人成骨肉瘤MG-63细胞，半定量RT-PCR检测细胞IRS-2基因mRNA的表达量。结果10^-10mol/L～10^-6mol/L胰岛素上调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05），且具有剂量依赖性。胰岛素的调节还存在时效依赖性，10^-8mol/L胰岛素干预12h可下调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05），干预24h～48h上调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05）。结论胰岛素可影响人成骨肉瘤MG-63细胞IRS-2基因mRNA的表达，胰岛素可能对1型糖尿病患者骨质疏松的发生和发展起着重要的作用。     

牛蒡子苷对分化的小鼠C2C12细胞的影响

目的观察牛蒡子中木脂素成分牛蒡子苷对C2C12成肌细胞及分化后肌细胞生长的影响并探讨其作用机制。方法以0、0.01、0.1、1、10、100和1000 ng/ml共7种剂量大豆苷原和牛蒡子苷分别处理体外培养的C2C12成肌细胞和经2%马血清诱导分化的肌细胞。大豆苷元作为对照,采用四唑盐(MTT)比色法检测C2C12成肌细胞增殖能力,以诱导分化后的肌细胞内蛋白含量和磷酸肌酸激酶含量变化为指标观察大豆苷原和牛蒡子苷对分化后的肌细胞生长的影响,采用real-time PCR分析C2C12细胞中雌激素受体β(ERβ)mRNA表达量。结果牛蒡子苷和大豆苷原终浓度为10 ng/ml时均能极显著促进C2C12成肌细胞增殖(P<0.01),促进肌细胞总蛋白质的合成(P<0.01),促进肌细胞肌酸激酶的活性(P<0.01),促进肌细胞中ERβmRNA表达量极显著上升。结论牛蒡子苷可提高C2C12成肌细胞的增殖和分化后的肌细胞肥大,促进骨骼肌细胞肥大型生长。这种促生长作用是通过直接作用于肌细胞上的ERβ介导的,提示牛蒡子苷有望开发为一种新型的绿色有效的生理调节剂。[营养学报,2012,34(4):395-399]     

siRNA干扰△Np63基因表达对人宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡影响研究

目的 通过抑制宫颈癌细胞株Siha中△Np63的表达,探讨△Np63对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 将宫颈癌细胞株Siha分为实验组和对照组,实验组转染△Np63的特异性siRNA,对照组转染阴性对照siRNA.实时荧光定量PCR(QRT-PCR)及蛋白质印迹法检测Siha细胞转染前后△Np63基因在mRNA及蛋白水平的变化;CCK8法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的mRNA表达为0.32±0.06,低于阴性对照组0.95±0.08(t=10.92,P＜0.05).实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的蛋白表达为0.32±0.09,低于阴性对照组1.00±0.06(t=9.78,P＜0.05).实验组Siha细胞生长速度明显低于阴性对照组,实验组Siha细胞凋亡率为2.13±0.75,低于阴性对照组14.19±1.36(t=15.36,P＜0.05).结论 人宫颈癌细胞株中存在△Np63的表达,特异性siRNA可下调宫颈癌细胞株Siha中△Np63基因的表达,对细胞的增殖具有负性调节作用,并能诱导细胞凋亡.     

NALP1基因与骨肉瘤细胞的相关研究

目的:探讨NALP1基因在骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的表达,以及高表达NALP1基因对于骨肉瘤细胞体外凋亡的影响.方法:使用RT-PCR、Western-blot法检测骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的mRNA及蛋白表达水平并与人成骨细胞株hFOB1.19比较.将NALP1基因转染质粒PcDNA3.1,将重组质粒转染骨肉瘤细胞,分成高表达基因组、空质粒组及对照组,加入抗肿瘤药物顺铂及甲氨蝶呤促使肿瘤细胞凋亡,使用流式细胞仪测定各组肿瘤细胞凋亡率.结果:通过统计分析,骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的mRNA及蛋白表达水平均低于人成骨细胞株hFOB1.19 (P＜0.05),NALP1高表达组的肿瘤细胞凋亡率明显高于空白质粒组及对照组.结论:上调骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的NALPl的表达量可以促进肿瘤细胞凋亡.     

氯化钇对人表皮细胞生长及凋亡的影响

目的：探讨稀土化合物氯化钇（YCl3）对人表皮细胞生长及凋亡的影响。方法：在无血清培养条件下，用MTT法检测人表皮细胞增殖功能。采用Tunel检测紫外线照射后人表皮细胞凋亡。结果：YCl3＜1．0mmol/L时对人表皮细胞生长无明显抑制作用（P＞0．05），而YCl3＞2．0mmol/L时对人表皮细胞生长有明显抑制作用（P＜0．01）。低浓度YCl3(0.1mmol/L）对紫外线诱导的人表皮细胞凋亡有抑制作用（P＜0．05），而高于0．5mmol/L YCl3对此外线诱导的人表皮凋亡无明显影响（P＞0．05）。结论：低浓度的YCl3对表皮细胞生长无影响，对此外线诱导的表皮细胞凋亡有一定的保护作用。     

黄连素对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄连素对人卵巢癌细胞株OVCAR3增殖和凋亡的影响,为卵巢瘤的治疗提供实验依据。方法采用不同浓度的黄连素处理人卵巢癌细胞株OVCAR3,等体积培养基培养正常对照组细胞。CCK-8法观察黄连素对卵巢癌细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测黄连素处理后细胞凋亡情况;RT-PCR、Western Blot分别检测卵巢癌细胞中Caspase-3、Caspase-8mRNA及蛋白表达情况。结果黄连素抑制人卵巢癌细胞株OVCAR3的增殖且呈时间剂量依赖性,并促进细胞凋亡。RT-PCR、Western Blot结果显示:黄连素作用于OVCAR3细胞株后,细胞Caspase-3、Caspase-8 mRNA及蛋白表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论黄连素能够通过抑制人卵巢癌细胞株OVCAR3增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用,可为临床卵巢癌治疗策略提供新的思路。     

牛蒡苷元对自发性高血压大鼠的降压及对靶器官的保护作用

目的研究牛蒡苷元（ARC—G）对自发性高血压大鼠（SIqR）和正常Wistar大鼠血压的调节、靶器官的保护作用。方法12周龄的SHRs（280g～320g）40只随机分为牛蒡苷元高、中、低剂量组（100mg／kg、50mg／kg、25mg／kg）,硝苯地平（3mg／kg）阳性对照组,溶剂对照组;相应周龄的Wistar大鼠16只,随机分为牛蒡苷元（100mg／kg）和溶剂对照组。所有溶剂均为1％羧甲基纤维素,灌胃给药8周。观察牛蒡苷元对SHR和Wistar大鼠血压、心、肾高血压主要靶器官质量指数的影响。结果牛蒡苷元对各组大鼠体重无影响,但可剂量依赖性地降低SHR大鼠血压;牛蒡苷元和硝苯地平能明显抑制SHR左心室肥厚,SHR各组的SBP和左室质量指数、肾脏质量指数均明显高于同龄Wistar大鼠耿0．01）。给药治疗2周后,与SHR对照组比较ARC—G高中剂量组可明显降低SBP（P〈0．05或尺0．01）,可明显降低左室质量指数（P〈0．05或P〈0．01）;对肾脏质量指数无明显影响（P〉0．05）;牛蒡苷元对Wistar大鼠各指标均无明显影响,与对照组相比（P〉0．05）。结论牛蒡苷元对SHR有降压及逆转左心室肥厚的作用。     

氟化钠对人成骨肉瘤Saos-2细胞PI3K/Akt信号表达及凋亡的影响

目的观察氟化钠(NaF)对人成骨肉瘤Saos-2细胞磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号表达及凋亡的影响。方法采用成组设计,按NaF剂量将Saos-2细胞分为0(对照)、5、10、20、40 mg/L染氟组(n=3)。体外培养24、48 h后收集细胞,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测PI3K、Akt和线粒体凋亡途径相关分子Forkhead转录因子(FoxO)1的蛋白表达,采用流式细胞仪检测Saos-2细胞的凋亡水平。结果体外培养24、48 h时,各组Saos-2细胞PI3K、Akt蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。24 h时,5、10、20、40 mg/L染氟组磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白表达(0.40±0.06、0.45±0.02、0.37±0.06、0.32±0.06)均高于对照组(0.28±0.04,P均<0.05);48 h时,5、10 mg/L染氟组p-PI3K蛋白表达(0.46±0.06、0.58±0.03)均高于对照组(0.29±0.04,P均<0.05),而40 mg/L染氟组(0.21±0.03)低于对照组(P<0.05)。24 h时,5、10、20 mg/L染氟组磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达(0.27±0.01、0.30±0.03、0.27±0.03)均高于对照组(0.20±0.02,P均<0.05);48 h时,5、10 mg/L染氟组p-Akt蛋白表达(0.42±0.04、0.60±0.02)均高于对照组(0.27±0.01,P均<0.05),而40 mg/L组(0.18±0.02)低于对照组(P<0.05)。24 h时,10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达(0.38±0.07、0.41±0.06、0.47±0.08)均高于对照组(0.34±0.04,P均<0.05);48 h时,5、10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达(0.36±0.08、0.37±0.10、0.54±0.04、0.73±0.04)均高于对照组(0.28±0.04,P均<0.05)。24、48 h时,对照组和5、10、20、40 mg/L染氟组细胞凋亡率分别为(2.867±0.583)%、(3.647±0.035)%、(3.773±0.095)%、(5.440±0.325)%、(7.203±0.476)%,(3.707±0.286)%、(4.023±0.241)%、(4.970±0.368)%、(12.473±0.949)%、(19.387±1.892)%。24 h时,40 mg/L染氟组凋亡水平高于对照组(P<0.05);48 h时,20、40 mg/L染氟组凋亡水平均高于对照组(P均<0.05)。结论氟可以直接激活成骨细胞内的PI3K/Akt信号通路,进而产生抗凋亡作用。     

Assessment of the Nutraceutical Effects of Oleuropein and the Cytotoxic Effects of Adriamycin,When Administered Alone and in Combination,in MG-63 Human Osteosarcoma Cells

Oleuropein (OLEU) is the most distinguished phenolic compound found in olive fruit and the leaves of Olea europaea L., with several pharmacological properties, including anti-cancer actions. Adriamycin (ADR) is an anthracycline widely used as a chemotherapeutic agent, although it presents significant side effects. The aim of the present study was to investigate the effect of oleuropein alone (20 μg/mL) and in co-treatment with ADR (50 nM), in MG-63 human osteosarcoma cells. Therefore, cellular and molecular techniques, such as MTT assay, flow cytometry, real-time Polymerase Chain Reaction (PCR), western blot and Elisa method, as well as Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectroscopy, were applied to unveil changes in the signal transduction pathways involved in osteosarcoma cells survival. The observed alterations in gene, protein and metabolite levels denote that OLEU not only inhibits MG-63 cells proliferation and potentiates ADR’s cytotoxicity, but also exerts its action, at least in part, through the induction of autophagy.     

Effects of Thymus serpyllum Extract on Cell Proliferation,Apoptosis and Epigenetic Events in Human Breast Cancer Cells

Thymus (T.) serpyllum (wild thyme) is an aromatic medicinal plant due to its several biological properties, including anticancer activity. Breast cancer is one of the most common malignancies and increasing evidence supports that it is not only a genetic but also an epigenetic disease. Epigenetics investigates changes in gene expression caused by mechanisms that do not involve alterations in DNA sequence. DNA methylation and histone acetylation are the most widely studied epigenetic changes in cancer cells. This study evaluated the effects of T. serpyllum on apoptosis and epigenetic events in breast cancer cells. XTT cell viability assay was used to determine cytotoxicity. DNA fragmentation and caspase 3/7 activity assays were used in the assesment of apoptosis. DNA methyltransferase (DNMT) and histone deacetylase (HDAC) activities were evaluated by ELISA and verified by qRT-PCR. T. serpyllum extract induced significant cytotoxicity in breast cancer cells (MCF-7 and MDA-MB-231) but not in normal cells. It also induced apoptosis and inhibited the DNMT and HDAC activities in MDA-MB-231 cells. In the present study, the first preliminary data on the effects of the methanolic extract of T. serpyllum in normal and breast cancer cells were obtained and suggest that T. serpyllum may be a promising candidate in the development of novel therapeutic drugs for breast cancer treatment.     

舒林酸对结肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响

目的在体外通过细胞培养,研究非甾体消炎药舒林酸对结肠癌HT-29细胞生长的影响及其引起细胞死亡的机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法研究舒林酸对HT-29细胞增殖的影响;应用流式细胞仪(Flow Cytometry,FCM)对舒林酸作用下HT-29细胞调亡情况进行分析;在透射电镜下观察舒林酸作用HT-29细胞前后的形态变化。结果 MTT法显示舒林酸抑制HT-29细胞增殖呈时间、剂量依赖性;FCM法显示舒林酸促进细胞的凋亡;透射电镜显示,舒林酸作用后HT-29细胞后出现凋亡小体、染色质凝聚、核仁消失及核碎裂。结论舒林酸能抑制结肠癌HT-29细胞的生长,其机制可能与阻滞细胞周期的进程,促进细胞凋亡有关。     

短期碘缺乏和碘过量对大鼠甲状腺细胞凋亡和增殖的影响

目的 检测碘缺乏和碘过量对甲状腺细胞凋亡和增殖的影响,以期为防治碘致性甲状腺疾病提供理论依据.方法 将断乳后1个月Wistar大鼠随机分为低碘组、适碘组、5、10、50倍碘组,各组大鼠分别以0.6、6.15、30.75、61.5、307.5μg/d进行饮水染毒.在实验第7、14、28天,处死动物并分离甲状腺.采用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因fas、fasL mRNA表达,免疫组化方法检测细胞Fas、FasL蛋白及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞.结果 与适碘组比较,各时间段低碘组大鼠甲状腺fas和fasL mRNA的表达均无明显变化,5、10、50倍碘组有随碘摄入量增加而增强的趋势.Fas和FasL蛋白在各时间段,低碘组和适碘组稳定的表达为阴性或弱阳性,5、10、50倍碘组阳性强度随碘摄入量和摄入时间增加而增强.在各时间段,与适碘组比较,低碘组大鼠甲状腺PCNA表达阳性细胞率较高;5、10、50倍碘组无显著变化.各组大鼠各时段均未发现阳性凋亡细胞.结论 短期碘缺乏未引起细胞凋亡,但促进细胞增殖;短期碘过量对甲状腺细胞凋亡和增殖活性均无影响;机体对碘过量有较强的适应能力.     

MTSS1基因对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究

目的探讨MTSS1基因在骨肉瘤组织中的表达情况,对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法 qRT-PCR、Western blot和免疫组化染色分别检测骨肉瘤组织及其对应的癌旁组织样本中MTSS1的mRNA和蛋白表达水平。构建MTSS1表达载体在骨肉瘤细胞株MG63中过表达MTSS1,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况;通过Transwell细胞迁移和侵袭实验分别检测对细胞迁移和侵袭能力的影响;检测MMP2和MMP9的表达情况。结果骨肉瘤组织中MTSS1 mRNA和蛋白表达显著低于癌旁组织。MTSS1高表达能够抑制MG63细胞的增殖,抑制细胞凋亡。MTSS1表达上调显著降低细胞的迁移和侵袭能力。MG63细胞中过表达MTSS1可以降低MMP2和MMP9的表达。结论 MTSS1基因在骨肉瘤中低表达,MTSS1能够降低MG63细胞的增殖并促进细胞凋亡,可能通过抑制MMP2和MMP9的表达调控骨肉瘤的侵袭和转移。     

以甲醇和汽油为燃料的汽车尾气对RAW 264.7细胞的细胞毒性及对其增殖和凋亡的影响

目的研究以甲醇和汽油为燃料的汽车尾气（以下简称甲醇车尾气和汽油车尾气）对小鼠RAW264．7细胞的细胞毒性及对其增殖和凋亡的影响。方法用甲醇车尾气和汽油车尾气对RAW264．7细胞染毒,用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法确定受试物的染毒剂量。RAW264．7细胞分甲醇车尾气组（分别用0．0078、0．0156、0．03125、0．0625、0．125L／ml的甲醇车尾气染毒）和汽油车尾气组（染毒剂量与甲醇车尾气组相同）,并分别设空白对照组。分别对各个组进行乳酸脱氢酶（LDH）活力测定、细胞形态学观察、检测细胞周期并计算细胞增殖指数及计算凋亡率。结果在MTT试验中,汽油车尾气组在0．125、0．5、1、2、4L/ml剂量组的光密度（OD）值低于对照组（P〈0．01）,甲醇车尾气组在0．5、1、2、4L／ml剂量组的OD值低于对照组（P〈0．01）。汽油车尾气组在0．1250．0625、0．03125L／ml剂量组的LDH活力高于对照组（P〈0．05）;汽油车尾气组0．03125、0．0625L／ml剂量组和甲醇车尾气组0．0625L／ml剂量组的细胞增殖指数低于对照组（P〈0．05）;甲醇车尾气组和汽油车尾气组在0．0156、0．03125、0．0625L／ml剂量组凋亡率均高于对照组（P〈0．05）。结论同等剂量下甲醇车尾气的细胞毒性明显大于汽油车尾气;汽油车尾气和甲醇车尾气对RAW264．7细胞株凋亡的影响相近;汽油车尾气对细胞增殖的抑制作用略大于甲醇车尾气。     

钛微粒对成骨细胞护骨素基因表达的调控

目的探讨磨损微粒引起假体周围骨溶解过程中的骨形成能力，为人工关节假体松动的机制及预防研究打下基础。方法MG-63细胞在无酚红的MEM培养基中单层培养，采用不同浓度细胞可吞噬钛微粒（粒径小于3um）对其进行24小时干预或采用0．05％钛微粒干预0h、12h、24h、36h及48h，半定量RT-PCR观察其对护骨素（OPG）基因表达的影响。结果随着钛微粒浓度及刺激时间逐渐增加，OPG mRNA表达上调逐渐增加。结论在假体松动病理过程中，骨形成能力增加，虽然其增加程度不及骨溶解，但为干预假体松动提供了基础。