脂多糖诱导成骨细胞增殖的Notch信号通路研究

目的:探讨脂多糖(LPS)对成骨细胞增殖的Notch信号通路的诱导激活作用.方法:以MC3T3-E1细胞为模型,设计正常对照组、LPS浓度梯度组(5、10μg组)、DAPT组(先加入DAPT,随后加入10μg LPS)和DMSO组(先加入DMSO,随后加入10μg LPS).分别于OBDM培养基中诱导分化5d和15d时加入不同浓度的脂多糖、DAPT和DMSO,培养3d后进行MTT实验,随后采用PCR检测各组细胞中HES1mRNA表达量.结果:与对照组相比,加入脂多糖5μg组第5天,脂多糖10 μg组第5、6、7天时细胞吸光度显著降低(P＜0.01);与正常对照组相比,5μg组和10 μg组脂多糖均能够使MC3T3-E1细胞和成骨细胞前体细胞增殖能力降低(P＜0.01),而仅5μg组LPS能够使成骨细胞增殖分化能力降低(P＜0.01);不同浓度LPS均能够诱导HES1mRNA的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);随着LPS浓度增加,HES1mRNA表达量显著增加(P＜0.01);与对照组相比,DM-SO组HES1mRNA量显著较高,差异具有统计学差异(P＜0.05).结论:脂多糖抑制骨头发育和愈合,可能是通过激活经典的Notch信号通路,诱导HES1mRNA的表达,抑制成骨细胞及其前体细胞的增殖分化造成.     

白黎芦醇对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞活化的抑制作用

目的探讨脂多糖（LPS）诱导的大鼠腹腔巨噬细胞（PMA）活性变化及白黎芦醇（RESV）对它的抑制作用。方法分离大鼠PMA，随机分为对照组、LPS组和RESVI-V组。培养24h后，分别用免疫组化方法检测核网子-kB（NF-kB）活性，酶联免疫吸附法和硝酸还原法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）和一氧化氮（NO）水平。结果对照组仅有少量NF-kB的活化。LPS诱导后，PMA出现大量NF-kB的活化，继而细胞上清液中TNF-α、IL-1和NO的水平显著升高。RESV治疗后NF-kB的活性较PMA组逐渐降低，具有剂量依赖性，并且相应的细胞上清液中TNF-α、IL-1和NO水平明显降低。结论RESV可以抑制PMA中NF-kB的活化，从而减少TNF-α、IL-1和NO的过度分泌。     

基于Notch1通路研究白藜芦醇对脂多糖诱导HT-29细胞紧密连接蛋白损伤的作用及机制

目的:探讨白藜芦醇(RSV)对脂多糖(LPS)诱导的HT-29细胞紧密连接蛋白损伤的作用及机制.方法:体外培养人结肠癌上皮HT-29细胞,CCK-8法检测不同浓度LPS、RSV和γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对细胞活力的影响.将HT-29细胞分为对照组、LPS组、RSV低剂量组、RSV高剂量组和Notch1通路抑制剂组(...     

基于Notch1信号通路调控巨噬细胞极化改善佐剂关节炎大鼠关节炎症的机制

目的：探讨Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号轴通过调控巨噬细胞向M2型极化对佐剂性关节炎（AA）大鼠炎症反应的影响。方法：大鼠随机分成3组（6只）：健康组（NC）、模型组（MC）及Notch1抑制剂组（FLI）,在致炎后12 d开始给予药物,并于30 d后检测各组大鼠的关节炎指数（AI）、右后足关节肿胀度（E）;采用流式细胞仪测定CD80+和CD163+细胞在大鼠外周血巨噬细胞中的表达量;ELISA检测大鼠血清中IL-4、IL-10、IL-1β、及TNF-α的水平;Western Blot检测大鼠关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白的表达。结果：MC组AA大鼠的E及AI均明显高于NC组（P<0.01）;CD80+细胞的表达显著高于对照组（P<0.01）,而CD163+细胞的表达显著低于对照组（P<0.01）;IL-1β、TNF-α表达水平明显升高（P<0.01）, IL-4、IL-10表达水平明显降低（P<0.01）;Notch1、RBP-Jκ、Jagged1、Hes1蛋白的表达量明显增加（P<...     

p38蛋白激酶在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞活化中的作用

目的探讨p38蛋白激酶在脂多糖(LPS)刺激肺泡巨噬细胞激活机制中的作用.方法分离培养大鼠肺泡巨噬细胞,设正常对照组、LPS刺激组、SB203580干预组(SB203580 LPS组).分别采用免疫组织化学和原位分子杂交方法检测p38蛋白质及其mRNA的表达,用放射免疫分析法检测细胞培养上清TNF-α、IL-8的含量.结果LPS刺激肺泡巨噬细胞p38胞核染色阳性细胞百分比、胞浆p38mRNA的表达以及培养上清TNF-α、IL-8含量显著升高,分别为正常对照组的5.75倍、1.44倍、3.57倍和3.22倍;加入SB203580预处理后,上述指标均较LPS刺激组显著下降,较正常对照组稍高,但差异无显著性.肺泡巨噬细胞p38蛋白质胞核染色阳性细胞百分比及其mRNA的表达与培养上清TNF-α、IL-8含量均呈显著正相关.结论LPS刺激肺泡巨噬细胞释放炎性细胞因子可能是通过p38蛋白激酶介导的,抑制p38的活性可能成为治疗炎症反应的一条新途径.     

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞缺氧诱导因子-1α表达的信号通路研究

目的研究体外常氧环境下脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的相关信号通路。方法以LPS单独或联合NF-κB抑制剂柳氮磺胺吡啶（SSZ）、一氧化氮合酶（NOS）抑制剂L-单甲基精氨酸（L-NMMA）作用于BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HIF-1αmRNA的变化,用免疫细胞化学法检测HIF-1α蛋白的变化,用Griess反应检测培养上清中亚硝酸盐浓度的变化。结果LPS作用于小鼠巨噬细胞10h后,HIF-1αmRNA水平无明显变化（P〉0.05）,HIF-1α蛋白水平则明显增加（P〈0.05）。SSZ和L-NMMA组HIF-1α蛋白的表达则明显低于LPS组（P均〈0.05）。与对照组相比,LPS可明显增加巨噬细胞NO的生成（P〈0.05）,SSZ则可明显抑制LPS诱导的NO的产生（P〈0.05）。结论LPS可通过NF-κB及iNOS等转录后信号途径上调HIF-1α的表达。     

Notch信号通路调控巨噬细胞极化加重自身免疫性甲状腺炎

目的探讨Notch信号通路调控巨噬细胞向M1型极化对自身免疫性甲状腺炎的影响。方法将NOD.H-2h4小鼠随机分为对照组(无菌水)和实验组(0.05%碘化钠水),在喂养4周、8周和16周后分批处死小鼠。ELISA法检测抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)滴度,HE染色甲状腺组织,流式细胞术检测腹腔巨噬细胞群分布,实时PCR法检测Notch信号通路的mRNA表达。结果喂养4周后实验组和对照组小鼠均不发生甲状腺炎。高碘喂养8周和16周后的小鼠发生自身免疫性甲状腺炎,且实验组与对照组相比,腹腔M1型巨噬细胞比例和骨髓巨噬细胞Notch1、Notch3、Jagged1、Delta1的表达均明显升高,M2型巨噬细胞比例明显下降,而碘诱导4周的实验组小鼠并无上述变化。结论 Notch信号通路调控巨噬细胞极化参与自身免疫性甲状腺炎的发生发展。     

p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580（p38蛋白激酶抑制剂）＋LPS组、PDTC（NF—κB抑制剂）＋LPS组和SB203580＋PDTC＋LPS组。分别采用免疫细胞化学（SP法）和Western blot检测NF—κB、p38蛋白激酶和NF—κB抑制蛋白（I-κB）的表达。结果与正常对照组相比，LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强，而I—κB的表达显著降低（均P〈0．01）。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB，p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比，并显著增强I—κB的表达（均P〈0．05）。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞，与LPS刺激组相比，p38蛋白激酶和NF—κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低（P〈0．05），I-κB的表达显著增强（P〈0．05），但分别与SB203580＋LPS和PDTC＋LPS组相比，差异均无显著性意义（均P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF—κB活化；p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF—κB的活化，NF—κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。     

细菌脂多糖诱导THP1细胞丝裂原信号传导通路活化及细胞因子释放

丝裂原活化的蛋白激酶(ＭＡＰＫ)系列包括一蛋白激酶瀑布群,即癌基因ｐ21ｒａｓ和或蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ),ｒａｆ1蛋白激酶,丝裂原活化蛋白激酶的激酶1和2(ＭＥＫ)以及ＭＡＰＫ(也称细胞外信号调节的蛋白激酶ＥＲＫ)。细菌脂多糖是巨噬细胞的强力活化剂,能刺激巨噬细胞释放多种细胞因子和二十烷类免疫反应介质。已有报道,细菌内毒素脂多糖(ＬＰＳ)刺激ＭＡＰＫ磷酸化及活化并诱导肿瘤坏死因子(ＴＮＦα)和ＩＬ1β产生[1]。为明确ＬＰＳ及癌基因ｒａｓ和蛋白激酶ｒａｆ在调节丝裂原信号传导通路活性中的作用,更好了解ＬＰＳ激活单核巨噬细胞的…     

ERK1/2信号通路参与LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达的调节

目的：探讨ERK1/2信号通路与LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达的关系。方法：采用RT-PCR和蛋白免疫印迹方法观察ERK1/2信号通路特异性抑制剂PD98059对LPS诱导的iNOS表达的影响。结果：PD98059能够以剂量依赖方式抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达。结论：LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达部分依赖了ERK1/2信号通路。     

内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的机制探讨

细胞凋亡在形态学上表现为染色质浓缩 ,生物化学上则表现为核酸酶酶切DNA。本研究试图探讨内毒素 (脂多糖 )诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的机制。结果显示 ,内毒素能诱导巨噬细胞凋亡 ,与对照组比 ,细胞吞噬机能显著下降 (P <0 .0 1) ,腹腔灌洗液中NO-2 /NO-3 浓度显著升高。NO阻断剂AG和活性氧阻断剂PDTC均能部分抑制巨噬细胞凋亡 ,细胞吞噬机能也获得部分恢复。用LPS和IFN模拟在体情况 ,也能诱导培养的巨噬细胞凋亡。与整体情况类似 ,AG和PDTC亦能部分抑制小鼠巨噬细胞凋亡。提示内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡系经NO及活性氧介导.     

白藜芦醇对脂多糖诱导的巨噬细胞极化改变的影响

目的：探讨白藜芦醇对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞极化表型改变的影响。方法体外培养的RAW264．7小鼠巨噬细胞在六孔板孵育12 h ,分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS（100 ng／mL）组、LPS（100 ng／mL）＋白藜芦醇（30μmol／L）组,LPS＋白藜芦醇组在加入LPS前预先加入白藜芦醇孵育12 h;上述细胞在LPS刺激12 h后分别收集细胞和培养上清液;实时定量PCR（RT‐qPCR）检测经典的炎症活化型巨噬细胞（M1）型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA表达,以及替代活化巨噬细胞（M2）型相关基因IL‐10、PPARγ和Arg‐1 mRNA表达,Western blot检测细胞iNOS、Arg‐1蛋白表达,ELISA检测培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、IL‐10和 TNF‐α的水平。结果 RT‐qPCR检测结果显示,与LPS组相比,M1型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA较LPS＋白藜芦醇组显著上升（P＜0．05）,而M2型相关基因IL‐10、PPARγ、Arg‐1 mRNA表达显著下调（P＜0．05）。Western blot检测发现,LPS组iNOS蛋白水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而Arg‐1蛋白水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。ELISA检测发现,LPS组培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、TNF‐α水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而IL‐10和水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。结论白藜芦醇可能促进了LPS刺激的RAW264．7巨噬细胞向M2型极化改变。     

内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的机制探讨

细胞凋亡在形态学上表现为染色质浓缩,生长化学上则表现为核酸酶酶切ＤＮＡ。本研究试图探讨内毒素（脂多糖）诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的机制。结果显示,内毒素能诱导巨噬细胞凋亡,与对照组比,细胞吞噬机能显著下降（Ｐ〈０．０１）,腹腔灌洗液中ＮＯ２＾－／ＮＯ３＾－浓度显著升高。ＮＯ阻断剂ＡＧ和活性氧阻断剂ＰＤＴＣ均能部分抑制巨噬细胞凋亡,细胞吞噬机能也获得部分恢复。用ＬＰＳ和ＩＦＮ模拟在体情况,也能诱导培养     

激活Notch1信号通路对胰腺癌细胞增殖的影响

目的探讨转染人Notch1受体胞内段（NICD）质粒激活Notch1信号通路对胰腺癌细胞增殖的影响及其可能机制。方法构
建带免疫荧光的NICD质粒与对照质粒,细胞转染后荧光激发显微镜下观察转染效率,Real-time PCR检测靶基因Hes1表达水
平变化;CCK-8法计算NICD质粒转染后胰腺癌细胞增殖的影响;caspase 3试剂盒检测NICD转染后凋亡通路关键酶caspase 3
活性的变化。结果荧光激发显示NICD转染效率在60%~80%之间;NICD转染可促进靶基因Hes1表达,提示激活Notch1信号
通路。NICD转染可显著促进胰腺癌细胞生长增殖;caspase 3活性在NICD转染后明显下降,差异均具有统计学意义。结论应
用NICD质粒转染激活Notch1信号通路活性可通过抑制凋亡而促进胰腺癌细胞生长增殖。
     

基于Notch/NF-κB/NLRP3信号通路的巨噬细胞活化与溃疡性结肠炎的研究进展

溃疡性结肠炎是一种以腹泻、腹痛、脓血便为主要表现的肠道免疫炎症性疾病,由巨噬细胞超活化所导 致的非可控性炎症是溃疡性结肠炎发病和逐渐恶化的重要原因,因此抑制巨噬细胞超活化是治疗溃疡性结肠炎的 有效途径之一。Notch信号通路参与了调节巨噬细胞的免疫应答并促进炎症反应,NF-κB信号通路是参与炎症反应的 “明星通路”,NLRP3炎症小体参与了巨噬细胞的活化过程,在已有的免疫炎症性疾病中Notch,NF-κB,NLRP3炎 症小体三者之间构成了上下游的信号转导通路,Notch可通过NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路调节巨噬细胞的活化。     

青蒿琥酯对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞激活的抑制作用

目的 观察青蒿琥酯对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,观察青蒿琥酯（0.5、1.5、3.5 μmol/L）对细胞的作用.MTT检测细胞活性;Griess试剂法检测一氧化氮（NO）的释放;Western Blot检测核转录因子κB（NF-κB）的蛋白表达.结果 青蒿琥酯减少了活化的BV-2小胶质细胞NO的释放,降低了核内NF-κB的蛋白表达.结论 青蒿琥酯可能通过抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活从而抑制NO的产生,发挥抗炎作用。     

丙泊酚对内毒素诱导人单核细胞释放细胞因子和表达SOD1蛋白的影响

目的观察丙泊酚对内毒素（LPS）诱导人单核细胞（THP-1）表达超氧化物歧化酶（SOD1）的影响及对细胞因子释放的影响。方法将体外培养的人单核细胞THP1细胞分为四组：正常对照组（C组）、LPS刺激组（L组）、丙泊酚处理组（P组）和丙泊酚预处理合并LPS刺激组（P＋L组）,并用Western blot法检测各组内SOD1含量的变化。采用ELISA法检测四组不同处理因素对THP1细胞分泌IL6、IL8、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响。结果在LPS刺激12 h后收集细胞,与对照组比较L组中SOD1的表达量明显降低,IL6、IL8、肿瘤坏死因子α（TNF-α）均明显增高（P〈0.01）;L＋P组中SOD1的表达量明显高于L组,IL6、IL8、TNF-α均明显降低（P〈0.01）。结论体外THP1细胞培养下,丙泊酚可以明显抑制LPS刺激THP1细胞IL6、IL8、TNF-α的大量释放和逆转LPS刺激下对THP1细胞内SOD1表达的抑制。     

氟西汀对神经干细胞增殖和Notch1信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨Notch1信号系统在氟西汀促进神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖中的作用?方法:不同浓度的氟西汀干预神经干细胞,获取最适作用浓度?分别予γ泌肽酶抑制剂(DAPT)和氟西汀干预神经干细胞后,采用MTT检测神经干细胞的增殖,Western Blot法检测Notch1信号各因子的蛋白表达?结果:①不同浓度的氟西汀干预细胞48 h后,10 μmol/L?15 μmol/L和20 μmol/L组NSCs的活性高于0 μmol/L组;②与对照组相比,氟西汀组的细胞活性增高,DAPT组的活性降低;与氟西汀干预组相比,氟西汀+DAPT组细胞活性降低;③与对照组相比,DAPT组Hes1 和Hes5蛋白表达水平显著降低;与对照组相比,氟西汀组NICD?Hes1和Hes5蛋白表达水平显著增高;与氟西汀干预组相比,氟西汀+DAPT组的NICD因子?Hes1因子和Hes5因子蛋白表达水平均显著降低?结论:氟西汀促进神经干细胞的增殖;氟西汀可以上调Notch1信号系统的表达;氟西汀可能通过调控Notch1信号的传导促进NSCs的增殖?     

PKD1对HeLa 细胞中AP1的转录激活作用

目的 研究蛋白激酶D1(PKD1)对人HeLa细胞中AP1转录激活作用,为探讨PKD1作用的AP1靶基因的功能作用奠定基础.方法 首先将对照质粒pcDNA3.1、PKD1野生型质粒(pcDNA-PKD1)或无激酶活性突变型质粒pcDNA-PKD1-DN与AP1转录活性报告质粒pAP1-luc及内参照报告质粒pRL-SV40共转染人HeLa细胞,同时将对照siRNA(si-CTL)或PKD1 siRNA(siRNA-PKD1)与AP1转录活性报告质粒pAP1-luc及内参照报告质粒pRL-SV40也共转染人HeLa细胞.转染48 h后,分别收集细胞裂解液进行Western blot 检测外源性PKD1过表达或内源性PKD1敲低状况,并以Promega双报告基因分析试剂盒测定AP1荧光素酶活性,计算AP1相对转录活性.结果 Western blot证实HeLa细胞中外源性pcDNA-PKD1、pcDNA-PKD1-DN过表达,而且siRNA-PKD1明显敲低HeLa细胞中内源性PKD1表达;双色荧光素酶报告基因检测表明,与对照质粒pcDNA3.1比较,pcDNA-PKD1过表达明显增强AP1转录活性(P<0.05),相反,与pcDNA-PKD1比较,pcDNA-PKD1-DN过表达则明显降低AP1转录活性(P<0.05).与之相符,与si-CTL比较,siRNA-PKD1对内源性PKD1敲低,也明显抑制AP1转录活性(P<0.01).结论 PKD1表达和激酶活性增强HeLa细胞中AP1转录激活,提示PKD1 可能通过AP1调控相关靶基因表达.