树突状细胞活化肝癌肿瘤浸润淋巴细胞抗瘤免疫的体外研究

目的　研究负载肿瘤抗原的树突状细胞 (DC)对原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)体外增殖和细胞毒作用的影响。方法　联合应用GM -CSF和IL - 4对原发性肝癌病人外周血分离的单核细胞进行体外诱导 ,加入自体癌细胞匀浆粗提物进行刺激 ,制备负载肿瘤抗原的DC后 ,与自体TIL在含有低浓度IL - 2的完全培养基中混合培养 ,计数TIL增殖数量 ,ELISA法检测培养上清中IFN -γ和TNF -α的含量 ,LDH法测定TIL对自体肝癌细胞、K5 6 2肿瘤细胞的细胞毒作用 ,与单纯在含有低浓度IL - 2的完全培养基中培养的TIL进行比较。结果　TIL在含低浓度IL - 2的完全培养基中与负载肿瘤抗原的DC混合培养 ,较单纯在含低浓度IL - 2完全培养基中培养增殖效果明显 (P <0 .0 1) ;分泌IFN -γ和TNF -α的量明显提高 (P <0 .0 1) ;对自体肝癌细胞的细胞毒作用显著性增强 (P <0 .0 1) ;两组TIL对自体肝癌细胞的细胞毒作用明显高于对K5 6 2肿瘤细胞的细胞毒作用 (P <0 .0 5 ) ,对K5 6 2肿瘤细胞的细胞毒作用无显著性差异(P >0 .0 5 )。结论　负载肿瘤抗原的DC与TIL混合培养 ,可增强TIL的抗肿瘤活性 ,且具有促增殖作用。     

乳腺癌肿瘤浸润淋巴细胞表型分析

国内外曾对晚期癌症肿瘤浸润淋巴细胞 (ＴＩＬ)表型进行了研究[1,2 ] ,我们对 2 6例Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌的ＴＩＬ表型进行了监测与分析 ,旨在探讨静脉输注ＴＩＬ的最佳时间。1　资料和方法1.1　一般资料　本院住院患者 2 6例 ,均为女性 ,36～ 70岁 ,平均 4 8岁 ,按 1998年国际抗癌联盟提出的ＴＮＭ分期法以及术后病理证实均为Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌。其中Ⅱ期 11例 (Ⅱａ期 2例、Ⅱｂ期 9例 ) ,Ⅲ期15例 (均为Ⅲａ期 )。1.2　仪器和试剂　白细胞介素 2 (ＩＬ - 2 )为北京四环生物工程制品厂产品 ,荧光素标记的鼠抗人ＣＤ3+ 、ＣＤ4 + 、ＣＤ8+ 、ＣＤ5 6…     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法:从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果:DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论:肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

树突状细胞激活效应细胞的最佳效靶比及其体外杀伤活性的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)激活肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和小鼠脾淋巴细胞(小鼠脾LC)的最佳效靶比并观察被有效激活的TIL和小鼠脾LC等对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤作用.方法:从荷瘤小鼠四肢长骨提取DC,联合应用GM-CSF、IL-4和小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原致敏DC,然后依据不同的激活效靶比用致敏DC体外激活TIL、小鼠脾LC,分别检测、比较被不同程度激活的TIL、小鼠脾LC以及未激活的小鼠脾LC、未激活的TIL对小鼠H22肝癌细胞的杀伤活性.结果:①当DC:靶细胞(E/T)为1:400和1:200时,所激活的TIL或小鼠脾LC的杀伤活性较弱;当E/T为1:100时,杀伤活性有较明显的提高,与前两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);当E/T=1:50时,杀伤活性增加,与前三者比较差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);而当E/T=1:25、1:12.5和1:6.25时,杀伤活性与E/T=1:50时比较无明显变化(P＞0.05);②当E/T=1:50时,未经DC激活的小鼠脾LC(A组)杀伤率为(9.73±1.40)%,未经DC激活的TIL(B组)和DC激活的小鼠脾LC(C组)杀伤率分别为(50.91±2.36)%和(49.70±2.70)%,DC激活的TIL(D组)的杀伤率为(73.49±2.46)%.A组与其他组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);B组和C组比较差异无统计学意义(P＞0.05);D组与其他各组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:①当E/T=1:50时,DC能很好的发挥抗原提呈作用,使小鼠脾LC和TIL得以充分激活;②充分激活的小鼠脾LC或TIL对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤活性较未激活的小鼠脾LC或未激活的TIL均具有明显的提高,尤以激活的TIL的杀伤活性最强.     

枸杞多糖对荷瘤小鼠肿瘤微环境T淋巴细胞亚群及树突状细胞的影响

目的:研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对荷瘤小鼠体内肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群和树突状细胞(dendritic cells,DCs)的影响,探讨LBP对荷瘤机体免疫逃逸的干预作用.方法:用LBP给H22荷瘤小鼠灌胃,连续2周后,测定肿瘤重量,采用流式细胞术检查肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltrating lymphocyte,TIL)中T淋巴细胞亚群和DCs的数量,以及协同刺激分子CD80(B7-1)表达的变化.结果:LBP可明显抑制肿瘤细胞的生长,增加肿瘤浸润CD4 、CD8 细胞的数量.LBP高剂量组CD4 和CD8 细胞数量的百分比高于模型组(P＜0.05).LBP低剂量和高剂量组肿瘤浸润DCs数量及B7-1表达均较模型组升高,但差异无统计学意义.结论:LBP的抗肿瘤作用可能与恢复荷瘤小鼠TIL中CD4 、CD8 的细胞数量、解除机体的免疫抑制状态及增强机体的抗肿瘤免疫功能有关.LBP能否恢复荷瘤机体DCs的表型及功能尚待进一步研究.     

小鼠肿瘤浸润淋巴细胞的形态学研究

目的　为探讨小鼠肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)的功能和生物学治疗提供形态学基础。方法　建立B1 6 黑色素瘤小鼠模型 ,将 30只小鼠随机分为 3组 ,1组小鼠肿瘤长至 0 .5cm× 0 .5cm ,2组小鼠肿瘤长至 1 .0cm× 1 .0cm ,3组小鼠长至 1 .5cm× 1 .5cm ,分别处死小鼠 ,取瘤周区部位皮肤组织 ,光镜和电镜观察TIL细胞的形态和分布特征。结果　 1组瘤周区肿瘤浸润淋巴细胞最多 ,3组最少。 3组瘤周区肿瘤浸润淋巴细胞形态多呈不规则表现 ,1组瘤周区肿瘤浸润淋巴细胞较规则。结论　肿瘤愈大 ,肿瘤浸润淋巴细胞愈少 ,TIL形态愈不规则     

肿瘤浸润淋巴细胞

肿瘤浸润淋巴细胞孙艳综述陈晓君审阅（郧阳医学院病理教研室十堰４４２０００）肿瘤生物治疗是肿瘤治疗的一个崭新领域。肿瘤生物治疗是细胞因子、活性细胞、单抗、疫苗等生物技术产品作为主要治疗手段，调节患者生物反应以达治疗目的。ＬＡＫ细胞的产生为肿瘤治疗带来了...     

DC联合香菇多糖激活TIL体外抗小鼠肝癌研究

目的:探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的树突状细胞(dendritic cell,DC)联合香菇多糖激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性作用。方法:从荷瘤小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,体外致敏DC,然后用已致敏的DC联合香菇多糖激活从荷瘤小鼠中提取的TIL和脾淋巴细胞,观察受激活后的TIL和脾淋巴细胞作为效应细胞在体外对H22细胞和S180细胞的杀伤活性。结果:各组效应细胞对H22细胞的杀伤活性均高于各自对应的效应细胞对S180细胞的杀伤活性;TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(42.56±2.52)%]高于脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(9.89±1.28)%];香菇多糖激活的TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(62.46±2.82)%]高于TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(42.56±2.52)%],已致敏DC激活的TIL对H22细胞的杀伤活性更高[杀伤率为(72.35±3.21)%],而已致敏DC联合香菇多糖激活的TIL对H22细胞的杀伤活性最高[杀伤率为(82.32±3.83)%],它们之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:用H22细胞全细胞性抗原致敏的DC联合香菇多糖能显...     

肝癌瘤苗激活的TIL在体外抗肿瘤活性的研究

目的：为了提高肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的抗瘤活性。方法：使用肝癌瘤苗来激活ＴＩＬ，观察其抗瘤活性的改变。结果：经瘤苗激活的ＴＩＬ在培养护增１０、２０、３０和４０ｄ的体外对自体肝癌细胞的杀伤率均有明显提高，其中以培养扩增３０ｄ时为最高。结果：经肝癌瘤苗激活的ＴＩＬ具有更高的体外杀伤自体肝癌细胞的能力。     

恶性肿瘤胸腹水中TIL的体外扩增及抗肿瘤作用

①目的探讨恶性肿瘤胸腹水中肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的体外诱导扩增及其抗肿瘤作用。②方法用不连续密度梯度离心法从９例癌性胸水和６例癌性腹水中提取ＴＩＬ进行体外诱导培养，同时用ＭＴＴ单波长比色法测定ＴＩＬ的活性。③结果ＴＩＬ对自体肿瘤靶细胞的杀伤活性达７６％以上，且呈现一定的靶细胞特异性，体外扩增可达１１００倍。④结论ＴＩＬ对肿瘤细胞有明显的杀伤活性，其活性高峰期在诱导培养的７～１５ｄ．     

大肠癌手术切除并用肿瘤浸润淋巴细胞治疗的临床研究

对１４例大肠癌患者进行切除手术并用肿瘤浸润淋巴细胞（ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＴＩＬ）免疫治疗，经临床应用研究显示，手术切除并用ＴＩＬ免疫治疗能使患者在提高机体免疫功能的基础上明显增强了抗癌消瘤能力。     

负载自体肿瘤抗原的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞在乳腺癌的临床研究

目的：探讨负载自身肿瘤裂解物的树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养后，对CIK体外肿瘤细胞杀伤活性的影响，进一步观察负载自身肿瘤裂解物的DC联合CIK治疗乳腺癌患者的临床免疫学疗效、毒副反应。方法：选择20例乳腺癌患者，分离外周血单个核细胞，其中贴壁细胞经GM—CSF和IL-4诱导产生DC，并负载自体肿瘤细胞裂解物；悬浮细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗、IL-1α体外诱导产生CIK细胞。将负载抗原的DC与CIK共培养，观察CIK在体外对自身肿瘤细胞和乳腺癌细胞株SKBR-3的杀伤活性。此外，20例患者在切除原发病灶后，接受Ag—DC＋CIK细胞的过继免疫治疗，观察临床免疫疗效。结果：①CIK细胞培养后可见CD3^＋、CD8^＋和CD3^＋CD56^＋细胞较培养前显著增加；②将负载自身肿瘤抗原的DC与CIK共培养后，CIK的体外特异性和非特异性杀瘤活性明显提高；③细胞治疗后患者外周淋巴细胞Ag—NORs的IS值明显增高；CD3^＋、CD8^＋、CD56^＋升高；PBMC对自身肿瘤细胞的杀伤活性增强（P〈0．05）；④除一过性发热、畏寒外未见其它不良反应。结论：负载自体肿瘤细胞裂解物的DC疫苗联合CIK细胞在体外能明显增强对乳腺癌细胞的杀伤作用，亦能增强乳腺癌患者的细胞免疫功能，取得较理想的临床免疫疗效。     

ConA刺激小鼠T淋巴细胞早期事件研究

本文研究了刀豆蛋白A(ConA)刺激小鼠脾脏T淋巴细胞的早期事件。表明ConA可引起T细胞胞质游离Ca~(2+)浓度的快速显著上升、膜电位的轻微超极化和膜流动性的增大。在膜电位和膜脂流动性的变化中Ca~(2+)均起一定作用,提示Ca~(2+)是ConA刺激T淋巴细胞活化的早期事件中的关键物质。     

树突状细胞的体外培养及鉴定

目的:建立树突状细胞(dendritic cells,DCs)体外培养的方法.方法:从正常人外周血分离获得单核细胞,加入rhGM-CSF1000U/ml、rhIL-4500U/ml体外培养.取培养7天的细胞,采用免疫细胞化学方法和流式细胞仪测定细胞表型,并对其进行鉴定.结果:免疫细胞化学方法显示,90%以上培养7天的细胞表达DCs特异性标志CD1a,而单核细胞特异性标志CD14表达小于5%;FACS分析显示,培养7天的细胞高表达HLA-A、B、C,HLA-DR和协同刺激分子CD40、B7-1.表明加入细胞因子体外培养后,由单核细胞生成了DCs.结论:通过该方法对人外周血单核细胞进行体外扩增,能够得到成熟的DC.