几种生长因子在人表皮细胞无血清培养中的作用

目的为生长因子在烧伤创伤面的应用提供理论依据。方法采用无血清培养系统,以3H－TdR掺入法测定表皮生长因子（EGF）、牛垂体提取物（BPE）和乙醇胺（Etha）对人表皮细胞DNA合成的影响。结果EGF和BPE在无血清培养基中对培养表皮细胞DNA合成有明显的促进作用（P＜0．01）;Etha对培养表皮细胞DNA合成也有促进作用（P＜0．05）;EGF和Etha在本培养体系中具有协同作用（P＜0．05）。结论生长因子在烧伤创面的治疗中具有应用价值。     

HSS促进人肝癌细胞凋亡的研究

目的研究肝刺激物(hepatic stimulator substance,HSS)对人肝癌细胞凋亡的影响.方法用无血清培养人肝癌细胞诱导典型的细胞凋亡,以此为模型应用流式细胞术及流式细胞免疫荧光技术,检测HSS作用不同时间后,对无血清培养人肝癌细胞诱导凋亡比率的影响,并观察HSS对常规培养人肝癌细胞的P53蛋白表达变化的影响.结果HSS作用于无血清培养的人肝癌细胞,细胞凋亡比率随时间延长而增加;HSS作用于常规培养的人肝癌细胞,细胞P53蛋白的表达随时间延长而减弱.结论HSS对无血清培养人肝癌细胞凋亡有促进作用.     

绿茶对体外培养的人乳腺癌细胞和血管内皮细胞bFGF表达的抑制作用

目的 研究绿茶对人乳腺癌细胞及人脐静脉内皮细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及机制。方法 ELISA法检测bFGF的蛋白表达水平；mRNA的水平用：Northern印迹杂交法研究。结果 40μg/mL的绿茶提取物(green tea extract,GTE)或绿茶主要有效成分表没食子儿茶素-3没食子酸（epigallocatechin-3gallste,egcg）①能够抑制人脐静脉内皮细胞及人乳腺癌细胞株细胞内及细胞分泌入条件培养基中bFGF多肽水平，这种抑制作用呈剂量依赖性；②能明显抑制MDA-MB231细胞内的bFGFmRAN表达水平。结论 GTE或EGCG能够在mRNA和蛋白水平抑制乳腺癌细胞及脐静脉内皮细胞的bFGF表达，绿茶可能通过该机制抑制肿瘤新4血管形成。     

无血清饥饿法去除神经组织培养中的成纤维细胞

介绍去血清饥饿培养方法去除神经组织培养中的成纤维细胞。取 2日龄大鼠双侧坐骨神经和双侧嗅球 ,酶消化、离心 ,1 0 %胎牛血清 (FCS)DMEM体外培养 ,如果成纤维细胞生长迅速 ,换无血清DMEM培养液培养。根据细胞生长状况可反复上述过程。S 1 0 0免疫荧光染色鉴定雪旺细胞和嗅鞘细胞纯度。结果 :换无血清培养液后 ,成纤维细胞迅速死亡 ,S 1 0 0免疫荧光染色雪旺细胞和嗅鞘细胞的纯度可达 98%～ 99%。此方法简捷、易操作 ,为神经组织培养中去成纤维细胞的一种好方法。     

胚胎大鼠神经干细胞的培养及鉴定

目的：探讨胚胎大鼠神经干细胞培养，传及鉴定方法。方法：从胚胎大鼠脑室下区（SVZ）组织分离得到神经干细胞，采用无血清培养技术进行培养，并诱导分化，采用SABC法对分化后后的细胞进行神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸蛋白（GFAP）检测及姬姆萨染色进行细胞鉴定。结果：成功培养出了胚胎大鼠神经干细胞，培养出的细胞具有自我更新能力的增殖能力，可分化为神经元，神经胶质细胞及少突胶质细胞，结论：胚胎大鼠神经干细胞在体外适宜的培养条件下具有自我更新，增殖和多向分化潜能。     

人bFGF基因克隆表达及表达产物的纯化和生物学活性分析

目的：通过融合蛋白表达方式将编码人碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＤＨ５α中的表达,为ｂＦＧＦ进一步研究提供材料来源。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术将ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－５Ｚ载体并测序,然后克隆到表达载体ｐＸＨ上。结果：转化重组质粒ｐＬＸ１的大肠杆菌经４２℃温控诱导４５ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白的分子量约３５０００,薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的９９％。经ＦａｃｔｏｒＸａ酶切后得到分子量约为１７０００的ｂＦＧＦ,其生物学活性ＥＤ５０为２２９ｎｇ／ｍｌ。结论：经ＰＣＲ方法扩增的ｂＦＧＦ可在大肠杆菌中高效表达,为其进一步结构与功能研究打下基础     

膀胱癌病人血清和尿液中bFGF表达水平的检测

目的检测膀胱癌病人的血清和尿液中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平,并探讨其临床意义。方法采用ELISA方法检测36例膀胱癌病人术前和术后1周及14例健康对照者的血清及尿液中bFGF表达水平。结果膀胱癌病人血清和尿液中bFGF水平分别为(8.7±3.3)pg/mL、(4.1±2.0)pg/mL,均分别显著高于正常对照者的(4.6±1.8)pg/mL、(1.9±0.6)pg/mL,P<0.01。膀胱癌病人术后血清和尿液中bFGF水平均显著低于术前。膀胱癌病人术前血清和尿液中bFGF水平均与肿瘤病理分级、分期和复发之间密切相关。结论膀胱癌病人的血清和尿液中bFGF水平显著升高,且可能是膀胱癌诊断和生物学行为评价有价值的标记。     

人肝癌细胞和成纤维细胞共育时超微结构的改变

采用定位培养技术 ,将人肝癌细胞和成纤维细胞有序地接种在同一容器内培养 ,电镜下观察 2种细胞接触时细胞切面超微结构的变化。结果 :与肝癌细胞伪足接触的成纤维细胞膜下出现多个吞饮泡 ,使骨架纤维下移 ,局部断裂。 2种细胞的线粒体肿胀 ,溶酶体增多 ,胞质中出现许多泡状结构。提示 ,在肝癌细胞侵袭成纤维细胞早期、成纤维细胞膜尚未受到破坏时 ,细胞内的结构已发生了改变。     

bFGF在宫颈癌中表达的临床意义

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）在宫颈癌中的表达及与宫颈癌的关系。方法采用免疫组化SABC法检测bFGF在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变（CIN）及正常宫颈组织中的表达。结果 bFGF在宫颈癌中的表达明显高于CIN及正常宫颈组织（P〈0.05）。bFGF的表达与临床分期、组织学分级、淋巴结转移及宫旁浸润有关。结论 bFGF可作为判断宫颈癌生物学行为的客观指标。     

血小板源性内皮生长因子在肝癌的表达及意义

目的　探讨 PD- ECGF在肝癌诊断、鉴别诊断中的意义。　方法　应用 SP免疫组织化学方法观察 5例肝癌细胞的血小板源性内皮细胞生长因子 (PD- ECGF)表达情况及其在癌旁组织 (小结节性肝硬化、肝细胞增生等 )和正常肝细胞的不同表达 ,分析其与肝癌诊断的关系。　结果　肝癌细胞 PD- ECGF表达强阳性 ,癌旁增生的肝细胞 PD- ECGF弱阳性 ,正常肝细胞 PD- ECGF弱阳性或阴性。 PD- ECGF表达与组织学分型无关。　结论　 PD-ECGF的表达情况可作为肝癌诊断、鉴别诊断的一种标志物。     

鼻咽癌中碱性成纤维细胞生长因子的实验研究

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子在鼻咽癌中的表达,探讨它与鼻咽癌的增生、浸润及转移的关系。方法在26例鼻咽癌及相应癌旁组织和10例正常鼻咽部黏膜组织中,应用 RT-PCR和免疫组织化学方法检测碱性成纤维细胞生长因子mRNA和蛋白质的表达。结果碱性成纤维细胞生长因子在鼻咽癌组织中高表达,在正常鼻咽部黏膜中低表达,差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论碱性成纤维细胞生长因子与鼻咽癌的生长、浸润及转移有密切关系。     

人子宫内膜细胞原代体外培养方法

目的改良人子宫内膜细胞原代体外培养方法的建立,并对其进行特征鉴定。方法将选择的子宫内膜组织机械法分离,复合酶消化,传代自然增殖法纯化细胞,进行单层培养。通过倒置显微镜观察其大体形态,HE染色观察其胞核情况,免疫细胞化学染色法对间质细胞(endometrial stromal cell,ESC)及上皮细胞(endometrial glandular epithelial cell,EEC)进行鉴定。结果培养的子宫内膜细胞均有ESC和EEC两种形态细胞。EEC和ESC经角蛋白单抗体和波形蛋白单抗体染色,凡是胞质被染成棕黄色的细胞为阳性细胞。结论成功培养了原代人子宫内膜细胞,方法经济、简单,获得细胞成活率高,生长稳定。成功建立子宫内膜细胞原代体外培养体系,为从细胞和分子水平方面研究子宫内膜的各种功能及干预调节奠定基础。     

人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

目的:摸索人脐静脉内皮细胞体外培养的方法和注意事项。方法:采用0.25%胰蛋白酶分离人脐静脉内皮细胞,用含20%FBS的DMEM培养基培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶消化传代,并以倒置显微镜观察内皮细胞的生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果:原代培养的细胞在接种4h后开始贴壁生长,3～5天后融合成单层,倒置显微镜下观察细胞呈铺路石状排列,免疫组化显示人第Ⅷ因子相关抗原阳性。结论:用胰蛋白酶消化脐静脉可获得内皮细胞且成活率较高,是一种可靠的方法。     

人肝癌裸小鼠模型的建立及其生物学特性的研究

将７例原发性肝癌手术切除标一分别移植于ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠皮下，１例获得成功，并能在裸鼠体内连续传代。１１个月内已传了１０代。其潜伏期为１１ｄ左右，荷瘤鼠血清可测得甲脂蛋白、γ－谷氨酰转肽酶和酸性同工铁蛋白三种有意义的肝癌血清标记物。移植癌病理结构与瘤原相似，其遗传学特征与人类恶性肿瘤相同。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响 I.乳酸的作用

研究了无血清批培养中乳酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响，当乳酸浓度低于5．3mmol/L时，乳酸对细胞生长和代谢无明显影响，当乳酸浓度在10mmol/L-25mmol/L时，对杂交瘤细胞的生长代谢有弱抑制，当乳酸浓度高于34mmol/L时，对细胞生长代谢有较明显的抑制。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响Ⅲ.丙氨酸的作用

研究了无血清培养中的代谢副产物丙氨酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响。丙氨酸浓度在0～ 8.9mmol/L范围时 ,丙氨酸对细胞生长影响不大 ,对单抗的生成没有直接影响 ,但对细胞代谢有较大的影响。随着丙氨酸浓度的提高 ,葡萄糖的消耗增加 ;同时 ,乳酸的生成增加 ,而丙氨酸和氨的生成减少     

原发性胆囊癌nm23表达与细胞增殖活性的关系

目的 :探讨 nm2 3表达与胆囊肿瘤良恶性、分化程度、浸润能力、淋巴结转移、预后及细胞增殖活性的关系。方法 :5 6例原发性胆囊癌石蜡包埋标本 ,免疫组化 S- P法检测。结果 :nm2 3在原发性胆囊癌表达的阳性率 ,无论是高、中、低分化均显著高于胆囊良性病变 (P <0 .0 1) ;与分化程度、浸润程度、淋巴结转移亦有明显关系。生存期分析表明 :nm 2 3表达阳性者生存期长 (P <0 .0 5 )。 nm 2 3表达阴性组 PCNA明显高于阳性组 (P <0 .0 1)。结论 :nm 2 3是反映原发性胆囊癌生物学特性良好的标志物 ,与 PCNA互补可做为判断胆囊良恶性、恶性程度、淋巴结转移及预后的客观指标。     

A Study on Changes of Langerhans Cells in Human Epidermal Cell Culture

Human epidermal cells (ECs) were grown in vitro from normalhuman foreskin and the changes of Langerhans cells (LCs) within theoriginal explants and the epidermal outgrowth were observed in culturewith ATPase staining, HLA - Dr monoclonal antibody indirectimmuno-fluorescence and enzyme labelling avidin-biotin complex (ABC)staining. The capacity of ECs to stimulate the proliferation of allogeniclymhocytes was tested in the mixed skin-lymphocyte culture response(MSLR). The ATPase HLA-Dr positive LCs were gradually decreasedand significantly deformed within the original explants in culture. 70% ofLCs was decreased 3 days after culture. 90% of LCs was lost and the LCsremained in the original explants were only seen their outline 7 days afterculture. LCs approximatively disappeared within the original explants 14to 21 days after culture. The ATPase, HLA - Dr positive LCs have neverbeen found within the epidermal outgrowth. The ECs which were freshlyisolated from skin explants potently stimulated the proliferation ofallogenic lymphocytes in the MSLR. The ECs which were separated fromthe original explants after 3 days of culture were significantly declinedtheir ability to stimulate the proliferation of allogenic lymphocytes in theMSLR. The ECs separated from the original explants after 7 days ofculture were lost their ability to stimulate the proliferation of allogeniclymphocytes in the MSLR. The ECs separated from the epidermaloutgrowth failed to stimulate the proliferation of allogenic lymphocytes inthe MSLR. These results suggested that the ECs grown in our culturesystem were declined their immunogenety of skin allografts.