ALV-J诱发鸡成红细胞白血病的临床病例分析

2010—2011年检测3批病例,分别来自泰安新泰的110日龄麻鸡、济宁泗水的90日龄麻鸡和济南20日龄蛋雏鸡。病鸡均表现消瘦、精神萎靡、嗜睡、鸡冠稍苍白或发绀等,死亡率分别为20%、12%和18%。剖检,3批病鸡均可见肝脏、脾脏及肾脏严重肿大,胸腺、肌肉、腺胃等组织器官出血。新泰病鸡肝脏和肺脏表面有明显的白色肿瘤结节。血液涂片与骨髓涂片观察发现大量红细胞转变为体积较大,胞质丰富蓝染,胞核大呈圆形、核内有很纤细的染色质、核周围有空泡的成红细胞,以晚幼成红细胞为主;组织学检查发现,在所有组织脏器血管及间质内均可观察到大量聚集的与血涂片中形态相一致的成红细胞,并且可观察到核分裂相,但未见淋巴细胞聚集。通过血液学和组织学观察不仅排除马立克氏病和网状内皮组织增生症,而且排除中毒及代谢性疾病的可能。以肝脏组织DNA为模板,在3批病鸡中利用PCR检测均扩增出J亚群禽白血病病毒(ALV-J)gp85基因924bp的特异性片段,而A亚群禽白血病病毒(ALV-A)、B亚群禽白血病病毒(ALV-B)阴性。免疫组织化学检测结果表明,发病鸡肺脏和脾脏等含血量丰富的组织内发现组织细胞及成红细胞胞质呈ALV-J抗原阳性。根据以上检测结果确定此3批患有成红细胞白血病病鸡均由ALV-J感染引起。ALV-J引起单纯鸡成红细胞白血病在国内为首次发现。ALV-J在我国鸡群中的多潜能致瘤机制需要进一步的研究。     

IMC10200株ALV-J实验诱发禽骨髓性白血病的研究

对分离自肉种鸡群亚临床感染的J亚群禽白血病病毒IMC1o200株进行了实验感染诱发禽骨髓性白血病的病理学研究.IMC10200株J亚群禽白血病病毒尿囊腔接种11日龄肉鸡胚和SPF蛋鸡胚,孵出后跟踪观察.9周龄时随机抽检感染鸡,感染肉鸡特异引物PCR检测全部为阳性;组织病理学观察感染鸡无明显病变.至21周龄时感染肉鸡出现第一例典型骨髓性白血病病例;感染SPF蛋鸡未见明显J亚群禽白血病相关病变.     

鸡E.necatrix早熟株致病性的研究

鸡球虫病是由一种或多种球虫寄生于鸡的肠粘膜上皮细胞而引起的一种急性流行性原虫病。已报道的有9种球虫,其中毒害艾美尔球虫（Enecatrix）是9种鸡球虫中致病力最强的虫种之一,其无性生殖阶段可导致鸡的中后段肠上皮细胞大量破坏和严重出血,影响营养物质的吸收并易引起继发性坏死肠炎,常导致巨大的经济损失。     

鸡胚和雏鸡接种ALV-J相关急性纤维肉瘤浸出液的致病性比较

为了比较鸡胚接种ALV-J相关急性纤维肉瘤浸出液对胚体及雏鸡的致病性,将含ALV-J相关病毒的肉瘤浸出液分别经5日龄胚卵黄囊、11日龄胚绒毛尿囊膜、1日龄雏鸡腹腔接种,比较不同接种方式对SPF鸡胚及雏鸡的致病性.结果表明,5日龄卵黄囊接种的鸡胚在18～22日龄死胚率为14/30,肿瘤发生率为8/14; 11日龄绒毛尿囊膜接种的鸡胚在18～22日龄引起鸡胚死亡率为17/30,肿瘤发生率为6/17.对雏鸡的致病性比较表明,绒毛尿囊膜接种的13只出壳雏鸡全部死亡,有11只出现肿瘤.结果提示,绒毛尿囊膜接种的致病性不仅高于卵黄囊接种,也高于1日龄雏鸡接种.绒毛尿囊膜接种不仅肿瘤发生率高,且发生得更早、更快,可作为这种急性纤维肉瘤进一步作人工造病的实验模型.     

龙胜凤鸡中一株A亚群禽白血病病毒的基因组分析及其对SPF鸡的致病性研究

为了解中国地方品系鸡中禽白血病病毒(ALV)的基因组序列特征及其致病性,本研究通过DF-1细胞接种、间接免疫荧光和PCR等方法,从某龙胜凤鸡保种鸡群的种蛋中分离到一株A亚群ALV(ALV-A),命名为SDAU14A1株,并对其全基因组进行测序。将该序列与不同参考病毒株进行序列对比,结果显示SDAU14A1分离株与日本矮脚鸡分离株Tym S_90全基因组同源性最高,其U3区同源性达到100%,而与其它中国地方品系鸡分离株同源性较低。人工感染试验显示该病毒分离株感染SPF鸡后不仅引起感染鸡的生长迟缓和免疫抑制,还能够诱发淋巴细胞肿瘤,特别是具有较强的水平传播能力。本研究有助于了解我国地方品系鸡群中ALV-A的分子演变及其致病性,为我国地方品系中ALV净化提供参考依据。     

黄芪多糖和甲砜霉素影响ALV-J对SPF鸡致病性的分析

为验证育雏早期应用黄芪多糖及甲砜霉素对ALV-J先天性感染雏鸡发病作用的影响,通过5日龄SPF鸡胚卵黄囊接种1 000TCID50ALV-J,鸡胚出壳后随机分为3组,两试验组分别定期口服黄芪多糖和甲砜霉素,一组作为病毒感染对照。对试验雏鸡泄殖腔排毒规律、病毒血症、疫苗免疫水平、免疫器官指数、体重、肿瘤发生率、肿瘤类型等进行动态测定,评估黄芪多糖和甲砜霉素对雏鸡先天感染ALV-J发病作用的影响。结果表明,两种药物对ALV-J病毒血症、ALV-J抗体及疫苗免疫抗体的产生无显著影响。黄芪多糖组与病毒感染对照组体重差异不显著;甲砜霉素组早期体重明显高于其他两组,但后期体重却明显低于另外两组。甲砜霉素组育雏早期血液中白细胞和淋巴细胞的水平显著低于另外两组,60日龄后脾和法氏囊的免疫器官指数显著降低,与另外两组差异显著。肿瘤发生率以甲砜霉素组最高,达28.57%(10/35),其次是病毒感染对照组,为20%(7/35),黄芪多糖组最低,仅为11.43%(4/35)。另外,甲砜霉素组肿瘤类型多,出现血管瘤、髓样细胞瘤、淋巴肉瘤、纤维肉瘤和腺癌,并且肿瘤进展快,病变重。育雏早期应用甲砜霉素会导致雏鸡免疫抑制,促进ALV-J的致瘤作用,患病鸡肿瘤呈多样化特征。黄芪多糖对ALV-J的致病性有一定的抑制作用,但未发现对病毒血症的影响。两种药物对ALV-J的致病作用的影响机制有待于进一步研究探讨。     

ALV-J经卵黄囊接种对鸡的致病性与逆转录酶抑制剂类药物对鸡的保护作用

通常鸡群通过垂直传播感染ALV-J后的致病性比通过水平传播更为严重。本研究通过对SPF鸡胚卵黄囊接种模拟了ALV-J经垂直传播感染鸡群后的致病性,在此基础上通过联合使用逆转录酶抑制剂类药物Zidovudine(AZT)和Lamivudine(LAM)并观察其对减缓ALV-J垂直传播致病性方面的作用。结果显示未使用药物的病毒感染组其体重、死亡率以及免疫ND和AI-H9灭活疫苗所产生的抗体水平均显著低于使用药物的病毒感染组(P0.05),更显著低于未接毒的生理盐水对照组(P0.05)。研究表明AZT和LAM等逆转录酶抑制剂类药物的使用有助于降低ALV-J垂直传播感染对鸡群的危害。     

一株鸡毒支原体致病性研究与药敏试验

为进一步掌握鸡毒支原体的致病性,从某养殖场分离一种鸡毒支原体的毒株,开展致病性试验和药敏试验。选择使用20枚孵化5日龄的SPF鸡胚,使用2种不同浓度的菌液进行攻毒试验,观察鸡胚的死亡情况和解剖情况,并按照支原体培养方法分离得到病原后进行常规药敏试验,确定哪种抗生素对支原体敏感。研究结果表明,不同浓度均会造成鸡胚死亡,低浓度鸡胚死亡率70%左右,高浓度造成鸡胚全部死亡。分离得到的毒支原体对盐酸沃尼妙林、盐湖索酸泰妙菌素、强力霉素敏感性最强,其次是盐酸大观霉素、水溶性氟苯尼考、酒石酸泰乐菌素。研究结果可知,分离得到的一株鸡毒支原体的致病性较强,同时分离出的高敏药物对支原体具有很强的抑制作用。     

6株牛支原体分离株对鸡胚和小鼠的致病性研究

为通过复制不同牛支原体(Mycoplasma bovis)感染模型,筛选出毒力较强的M.bovis分离株,本研究采用等浓度的6株M.bovis分离株(W70、1738、677、Q1、Q3、JX02)感染7日龄健康鸡胚和6周龄～8周龄SPF级BALB/c小鼠,观察并比较各组受试动物死亡情况及病理剖检变化,取死亡鸡胚尿囊液或卵黄液,以及小鼠肺组织进行病原学分离培养和PCR鉴定.实验结果表明:各感染组BALB/c小鼠虽然出现一定程度的体重增长抑制,但小鼠并无任何临床呼吸道症状和病理剖检变化,并且病原学分离培养及PCR鉴定结果也均为阴性.在鸡胚感染试验中,6株M.bovis分离株对鸡胚表现出较好的感染性和致死性.感染组鸡胚致死率与对照组比较差异极显著(p＜0.01),而6个分离株间鸡胚致死率也表现出显著差异(p＜0.01).其中,以W70株感染后鸡胚死亡率最高,达63.3％;677株感染后死亡率最低,仅为20％,鸡胚死亡情况大多发生在感染后一周内,而后期仅有零星死亡.综合上述实验结果,初步筛选出W70株、1738株、Q1株、Q3株为毒力相对较强的分离株;与此同时,BALB/c小鼠的建模还需进一步研究.     

6种鸡艾美耳球虫兰州株的致病性研究

在试验条件下,测定了鸡艾美耳球虫兰州株的毒力,为进行鸡球虫病疫苗免疫和药物防治效果评价试验等研究提供攻虫剂量的选择依据.试验设空白对照组(NC)、不同剂量感染组1组～8组,共9个组,每组20R鸡.结果显示:(1)NC组、第1组～第7组(第8组全部死亡)相对增重率依次为100%、77.23%、77.02%、76.42%、72.86%、63.91%、67.19%和42.06%,其中NC组相对增重率极显著高于所有感染组(p<0.01);第1组和第2组显著高于第5组和第6组(p<0.05),极显著高于第7组间(p<0.01);第7组极显著低于其他试验组(p<0.01).(2)空白对照组、第1组～第7组各组料肉比依次为2.01、2.21、2.24、2.29、2.33、2.78、2.94和4.06,呈现出剂量依赖关系,其中第7组极显著高于其他各组(p<0.01);第6组和第5组显著大于NC组和第1组～第5组(p<0.05).(3)攻虫后第8 d,每组剖检5只鸡,各肠段平均病变记分各组依次为0、1.79、2.33、2.54、2.63、2.5、2.67和2.8.(4)感染后排卵囊高峰期间,各组平均每克粪便中卵囊数(OPG)值分别为0、3.05×104、2.35 X 104、32.20×104、62.23×104、60.45×104、103.51×104和150.11×104(第8组除外).(5)各组死亡率依次为0、5.0%、5.0%、15%、25%、40.0%、45.0%、95%和100%.结果表明:本试验所选用虫株均具有较强的毒力,每只鸡感染6个虫种每个虫种1×104个孢子化卵囊时,感染鸡生长严重受阻;感染剂量为6个虫种每个虫种2×105/只时,半数感染鸡死亡;6个虫种每个虫种3×105/只的感染剂量可导致全部感染鸡死亡,因此.攻虫试验时选择6个虫种每个虫种1×104/只～1×105/只的剂量为宜.     

鸡传染性喉气管炎病毒LJS09株致病性的研究

为鉴定鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株(于2009年分离自江苏省)的致病性,本研究将ILTV LJS09以102 EID50的剂量人工感染SPF鸡。结果表明在感染后4 d~6 d(dpi),感染鸡表现出呼吸困难等临床症状;剖检时可见明显的喉气管病变及典型的组织病理学变化;临床指数达到1.4;发病率和死亡率分别为80%和10%;感染鸡血清抗体水平于8 dpi开始转为阳性(30%),20 dpi血清抗体全部转阳(100%)。另外,荧光定量PCR检测结果表明ILTV在感染鸡体内分布广泛,主要嗜性组织为喉头、气管、哈德氏腺、脑、盲肠和腺胃。根据感染鸡的临床指数、发病率和死亡率,表明ILTV LJS09株对鸡具有较强的致病性。     

HB2015株A亚群禽白血病病毒的蛋鸡实验性感染研究

通过鸡胚静脉接种,对分离于湖北某蛋鸡群的A亚群禽白血病病毒(ALV-A)HB2015株进行实验性感染研究。结果:试验组鸡胚孵出14只雏鸡,对照组孵出3只;ALV-A特异性PCR结果显示:试验组孵出的小鸡4周龄时有11只(11/14)的血液样本呈ALV-A核酸阳性,3只(3/11)呈ALV-A核酸阴性,对照组则全部为ALV-A核酸阴性;16周龄试验组鸡血涂片中可见少量髓细胞性瘤细胞,剖检可见内脏器官有不同病变结节;病理组织学观察显示,内脏组织中可见原淋巴细胞、髓细胞性瘤细胞、成红细胞等多种瘤细胞增生;感染鸡的肝组织中可分离到病毒,表明ALV-A HB2015株通过鸡胚静脉接种可诱发蛋鸡多种类型瘤细胞增生。     

一株鸡传染性贫血病毒对不同日龄SPF鸡的致病性研究

为评价鸡传染性贫血病毒AV1550株的致病性,取1日龄、7日龄和14日龄SPF鸡分别经胸部肌肉注射不同病毒含量的病毒液,同时设置正常对照,隔离饲养观察21日。感染后14日采血测定红细胞压积,21日统计死亡率、体重变化以及胸腺、骨髓、法氏囊病变情况并测定1日龄SPF鸡感染后不同组织中的病毒载量。结果表明,1日龄SPF鸡感染AV1550株后,表现出精神沉郁、增重减缓、贫血等明显的临床症状,死亡率为53.9%;死亡鸡或观察期结束时存活鸡剖检,可见胸腺萎缩,骨髓变成淡黄色;不同剂量感染后14日,均能引起红细胞压积显著下降;21日时,胸腺病毒载量最高,可达106.7copies/mg 。7日龄SPF鸡感染后,出现增重减缓,高感染剂量（100000EID50）出现贫血,部分鸡出现胸腺萎缩和骨髓病变,但病变率低于30%。14日龄SPF鸡感染后,不引起明显临床症状。研究证实,CAV对SPF鸡的致病性具有明显的日龄依赖性,红细胞压积降低、骨髓病变、胸腺萎缩以及胸腺病毒载量测定可作为评价CAV致病的指标。     

一株鸡传染性贫血病毒的分离鉴定及其致病性研究

从北京某鸡场发生疑似鸡传染性贫血病毒(CAV)感染的鸡只病料中分离到了一株CAV,通过PCR和全基因组测序等方法对其进行了鉴定,命名为AV1550。将其全基因组序列与NCBI上的参考毒株序列进行同源性比对和进化分析,结果显示AV1550株与CAV参考毒株的同源性在91.7%~99.7%,与中国分离株LN15170的亲缘关系最近。VP1序列分析表明AV1550在75、89、125、141和394位氨基酸均为强毒株特征。1日龄SPF鸡经胸部肌肉途径接种含10000 EID50的AV1550病毒液后,接种鸡只出现明显的贫血症状,增长迟缓,死亡率高达50%,表明AV1550是一株具有较强致病性的CAV野毒株。     

柔嫩艾美尔球虫郑州株对鸡致病性试验

通过用孢子化球虫卵囊感染豫州褐壳蛋鸡913系35日龄公雏,测定了柔嫩艾美尔球虫郑州株的致病力。结果表明:该球虫株毒力较强,每只鸡接种5000～50000个卵囊均引起严重的临床盲肠球虫病和典型病变,增重率和饲料转化率显著低于对照组,每只鸡接种3～5万个卵囊引起严重死亡(60％),接种5000～1万个卵囊引起部分死亡(20％)。建议在应用该球虫株进行鸡球虫病药物防治和免疫防治效果评价时,攻虫剂量以2万个卵囊为宜。     

一株较强致病性鸡大肠杆菌的分离与防控

从某鸡场病死鸡的肺、肝、脾脏3种器官分离出一株病原菌,经过16S rRNA扩增测序及生理生化检测,确定为大肠杆菌.后续经药敏试验、益生菌抑制试验及动物感染、防治试验,结果表明,该大肠杆菌具有较强的感染能力,致病性强,且对新霉素、庆大霉素、四环素等7种常见抗生素具有耐受性,但能被植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌等乳酸...     

鸡源致病性大肠杆菌地方株的分离与鉴定

从山东省泰安地区典型大肠杆菌病的病、死鸡肝脏、心血中分离出了18株致病性大肠杆菌,并进行了培养特性、染色特性、生化试验、血清型鉴定及致病性试验,为研制大肠杆菌灭活疫苗提供相对应的菌株,为更有效地做好当地大肠杆菌病的防制工作提供依据。     

1株QX基因型鸡传染性支气管炎病毒的致病性

通过对8日龄SPF鸡人工感染鸡传染性支气管炎病毒(IBV)QX株发病,分别在攻毒后3,7,30 d剖杀并采集气管、肺、肾、脾、胸腺、法氏囊制作病理组织切片。攻毒7 d后,采集上述器官相同部位进行免疫组织化学法分析。根据IBV-QX株NP基因的保守序列设计引物,构建质粒标准品,建立了IBV-QX Real-time PCR标准曲线,并跟踪检测试验鸡的口腔、泄殖腔排毒情况。此外,观察并记录了2组鸡的临床症状、体质量差异等信息。结果显示,发病初期(3 d),气管、肺几乎无明显病理变化,其他器官均出现不同程度的炎性反应;临床症状明显期(7 d),所涉及的器官均有不同程度的病理变化;发病后期(30 d),气管纤毛有所恢复,肺、脾炎性反应有所减轻,但肾脏和法氏囊的病变依然严重。免疫组织化学法检测到上述器官均有可见抗原聚集。30 d时被感染鸡的口腔、泄殖腔仍可检出病毒核酸。试验鸡临床症状明显,体质量差异显著。本试验旨在探究具有组织嗜性的IBV-QX毒株对宿主的免疫器官和该病毒的主要靶器官的病理损伤以及被损伤器官的自我修复情况,抗原分布差异,排毒规律等,为后续研究宿主免疫器官发挥天然免疫的相关机理打下基础,也为研发新的疫苗、相关药物的临床药效评价、制定合理的疫苗接种策略提供参考。     

鸡源致病性大肠杆菌地方株的分离与鉴定

从山东省秦安地区典型大肠杆菌病的病、死鸡肝脏、心血中分离出了18株致病性大肠杆菌，并进行了培养特性、染色特性、生化试验、血清型鉴定及致病性试验．为研制大肠杆菌灭活疫苗提供相对应的菌株，为更有效地做好当地大肠杆菌病的防制工作提供依据。