Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的可能机制.方法 运用脂质体介导的转染方法将miR-145阻遏物(miR-145 inhibitors)转染人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以inhibitor negative control(inhibitor NC)作为阴性对照,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-145的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析.结果 (1)miR-145 inhibitors组细胞增殖活性明显高于inhibitor NC组(P<0.05);(2)划痕后miR-145 inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验均显示转染miR-145 inhibitors后,MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01,P<0.05);(4)生物信息学方法预测miR-145的靶基因中,部分发挥了促进细胞增殖、侵袭及迁移的生物学功能.结论 (1)miR-145对人三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用;(2)miR-145可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用.     

miR-29a在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

摘要：目的：检测miR-29a在乳腺癌组织中的表达水平并探讨其对人乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。 方法：用荧光定量RT-PCR检测乳腺癌组织及癌旁组织中miR-29a的表达水平;用脂质体法将miR-29a mimic及miR-29a inhibitor分别转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,通过MTT实验和 Transwell实验观察miR-29a对MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响;miRanda软件预测miR-29a的靶基因,western blot验证其表达结果。 结果：荧光定量RT-PCR检测结果表明,与癌旁组织（2.17±0.89）比较,miR-29a在乳腺癌组织（5.65±1.45）中的表达水平上调（t=3.94,P＜0.01）;MTT实验和Transwell实验结果显示,与mimics阴性对照组［（106.36±5.15)%,(216.70±7.20）个］相比,miR-29a mimics组［（133.32±6.31）%,(294.30±8.60)个］乳腺癌细胞的增殖和迁移能力增加（t分别为3.36和6.85,P均＜0.01）;与inhibitor阴性对照组［（105.35±3.42）%,(240.30±9.50）个］相比,miR-29a inhibitor组［（66.63±3.82）%,(156.30±7.80）个］乳腺癌细胞的增殖和迁移能力降低（t分别为8.18和6.81,P均＜0.01）。miRanda软件预测人第10号染色体缺失的同源性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）可能为miR-29a的靶基因。western blot结果显示,与mimics阴性对照组（0.55±0.01）相比,乳腺癌细胞转染miR-29a mimic后,其PTEN蛋白质的表达水平（0.22±0.01）下调（t=14.29,P＜0.01）;与inhibitor阴性对照组（0.49±0.02）相比,转染miR-29a inhibitor后,PTEN蛋白质的表达水平（1.25±0.02）上调（t=19.39,P＜0.01）。 结论：miR-29a在乳腺癌组织中的表达水平增高,并可能通过下调PTEN蛋白的表达促进乳腺癌细胞的增殖和转移。     

miR-33a-5p通过靶向作用于S1PR1抑制人乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的初步探讨miR-33a-5p和鞘氨醇1磷酸酯受体1(S1PR1)在人乳腺癌细胞中的表达水平,确认二者的潜在靶向关系并观察miR-33a-5p及S1PR1的表达调控对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100及4种乳腺癌细胞中miR-33a-5p、S1PR1的相对表达水平并分析二者相关性;生物信息学方法及双荧光素酶报告基因分别预测和鉴定miR-33a-5p与S1PR1基因的靶向关系,并检测miR-33a-5p mimics转染MDA-MB-231细胞后S1PR1蛋白的表达。后将细胞实验分5组:miR-33a-5p对照组(miRNC)、miR-33a-5p模拟物组(miR-33a-5p mimics)、S1PR1空载体组(pLV-NC)、S1PR1过表达组(pLV-S1PR1)以及miR-33a-5p mimics+pLV-S1PR1组,MTT和划痕实验分别检测各组细胞增殖和迁移能力。结果与正常乳腺上皮细胞HBL-100比较,miR-33a-5p及S1PR1在4种乳腺癌细胞系中的表达分别显著降低和升高(P0.05;P0.01),且二者呈显著负相关性(r=-0.994;P=0.006);预测及验证结果显示,S1PR1为miR-33a-5p的靶基因,且miR-33a-5p mimics能显著降低MDA-MB-231细胞中S1PR1蛋白的表达(P0.01);与miR-NC组比较,miR-33a-5p mimics显著降低了细胞增殖、迁移能力(均P0.01);与pLV-NC组比较,S1PR1过表达显著增加了细胞增殖、迁移能力(P0.05;P0.01);且与pLV-S1PR1组比较,miR-33a-5p mimics能显著逆转S1PR1过表达对细胞增殖、迁移能力的促进作用。结论 miR-33a-5p能显著抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移,其作用机制与靶向负调控S1PR1密切相关。     

miR-217调控TIMP3的表达对喉癌细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-217调控金属肽酶抑制剂3(metallopeptidase inhibitor 3, TIMP3)的表达对喉癌细胞生物学行为的影响。方法选择喉癌并行喉部分切除术或喉全切除术的癌组织32例,同时取距离肿瘤2 cm的癌旁正常喉组织32例。选择人喉癌细胞株Hep2,并将miR-217 mimics、Control mimics转染至细胞,分别作为miR-217 mimics组与miR-217 NC组,再将TIMP3 3'-UTR野生型(Wt)质粒和TIMP3 3'-UTR突变型(Mut)质粒分别转染细胞。实时定量核酸扩增检测(qPCR)miR-217及TIMP3的表达水平,双荧光素酶实验检测验证miR-217与TIMP3在喉癌Hep2细胞株中的调控关系,MTT增殖实验检测细胞增殖数,Transwell检测细胞迁移、侵袭数,分析miR-217在喉癌组织中的表达与其临床特征的相关性。结果 qPCR检测结果显示,癌旁正常喉组织、喉癌组织的miR-217表达量分别为1.53±0.21、0.68±0.13,TIMP3表达量分别为1.18±0.15、0.31±0.08,比较差异有统计学意义(P0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR-217 mimics+TIMP3 3'-UTR Wt组、miR-217 NC+TIMP3 3'-UTR Wt组、miR-217 mimics+TIMP3 3'-UTR Mut组、miR-217 NC+TIMP3 3'-UTR Mut组的荧光素酶活性分别为1.79±0.31、1.15±0.11、1.28±0.28、1.18±0.19,比较差异有统计学意义(t=12.09,P=0.019);miR-217 mimics+TIMP3 3'-UTR Wt组、miR-217 NC+TIMP3 3'-UTR Wt组双荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P0.05)。与miR-217 NC组比较,miR-217 mimics组喉癌细胞增殖数、迁移细胞数及侵袭细胞数降低,差异有统计学意义(P0.05)。miR-217表达与喉癌的病理分期及淋巴结有无转移相关(P0.05)。结论 miR-217调控TIMP3表达以抑制喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-218负调控SFMBT1抑制肝癌细胞增殖

目的探讨miR-218是否通过调控含有4个mbt区域的scm相关基因(SFMBT1)影响肝癌细胞增殖能力。方法 RT-PCR检测人肝癌细胞Hu H-7、Hep G2、SNU-449和人正常肝细胞HH中miR-218的水平。靶基因预测软件预测miR-218的靶基因并用荧光素酶报告基因进行鉴定,RT-PCR和Western blot检测miR-218对靶基因的调控作用。肝癌细胞转染miR-218模拟物(miR-218 mimics组)、SFMBT1小干扰RNA(SFMBT1 siRNA组),同时设置对照组(只加入转染试剂)。噻唑蓝(MTT)检测各组细胞存活率。结果肝癌细胞Hu H-7、Hep G2、SNU-449中miR-218表达水平均明显低于正常肝细胞HH(P0.01)。Hep G2细胞中miR-218表达水平最低,后续选用Hep G2细胞深入研究。miR-218的靶基因是SFMBT1,并且miR-218负调控SFMBT1靶基因。miR-218 mimics组和SFMBT1 siRNA组细胞存活率均明显低于对照组(P0.01)。miR-218 mimics和SFMBT1 siRNA共转染后的细胞存活率比miR-218mimics组和SFMBT1 siRNA组均明显降低(P0.01)。结论 miR-218能够负调控靶基因SFMBT1抑制人肝癌细胞的增殖。     

miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics转染组。实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平。结果与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P<0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P<0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P>0.05),蛋白水平下调。结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一。     

上调及下调MicroRNA-195对人脑胶质瘤影响的初步研究

目的观察上调及下调microRNA-195(miR-195)对裸鼠皮下荷SHG-44人脑胶质瘤生长的影响并探讨其机制。方法使用脂质体瞬时转染法将miR-195 mimics和inhibitor分别转入人脑胶质瘤细胞系SHG-44,同时设立空白对照组和阴性对照组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染前后miR-195的含量变化;流式细胞法检测各组细胞周期分布;裸鼠成瘤实验观察miR-195对体内胶质瘤增殖的影响;肿瘤组织HE染色观察病理学改变;Western blot、免疫组织化学染色检测肿瘤组织周期相关蛋白P21、Cyclin D1的表达变化。结果 qRT-PCR测得转染mimics后miR-195的表达水平提高19倍左右,而转染inhibitor后miR-195的表达水平降低为空白对照组的42%;与空白对照和阴性对照组相比,miR-195mimics组细胞阻滞于G0/G1期(P<0.05);而miR-195 inhibitor组则相反(P<0.05);裸鼠成瘤实验显示,miR-195 mimics组与空白对照组和阴性对照组相比,肿瘤生长速度减慢,体积减小(P<0.05),而miR-195 inhibitor组则结果相反(P<0.05);HE染色结果显示miR-195mimics组肿瘤组织异型性下降,新生血管数减少,而miR-195 inhibitor组则相反;Western blot检测示与空白对照组和阴性对照组比较,miR-195 mimics组P21表达上调,而Cyclin D1表达下调,miR-195inhibitor组结果相反(P均<0.05);免疫组化染色检测显示,与空白对照组和阴性对照组比较,miR-195mimics组中P21表达阳性率较高,而Cyclin D1的表达阳性率较低(P均<0.05),miR-195 inhibitor组情况则相反(P均<0.05)。结论 MiR-195可使P21表达升高,下调Cyclin D1的表达,阻滞G0/G1期向S期转换,从而抑制人脑胶质瘤细胞SHG-44的增殖能力。     

miR-1调控胃癌细胞SGC-7901迁移能力的实验研究

目的探讨微小RNA-1(miR-1)对胃癌细胞系SGC-7901迁移能力的调控作用。方法脂质体转染寡核苷酸片段NCmimics及miR-1-mimics、NC-inhibitor及miR-1-inhibitor至SGC-7901细胞,定量RT-PCR检测转染后SGC-7901细胞中miR-1的表达水平,Transwell实验观察转染后细胞迁移能力,western blot检测转染后细胞上皮间质转化(EMT)指标。结果miR-1-mimics转染组miR-1的表达水平(900.10±240.40)明显高于NC-mimics转染组(1.01±0.18),差异有统计学意义(t=6.48,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组miR-1的表达水平(0.65±0.04)明显低于NC-inhibitor转染组(1.01±0.14),差异具有统计学意义(t=4.19,P0.05)。miR-1-mimics转染组迁移细胞数量[(362±10)个]明显高于NC-mimics转染组[(112±10)个],差异有统计学意义(t=21.65,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组迁移细胞数量[(64±8)个]明显低于NC-inhibitor转染组[(133±14)个],差异有统计学意义(t=17.07,P0.01)。与NC-mimics转染组比较,miR-1-mimics转染组上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)表达减弱(t=19.28,P0.01),神经钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达增强(t=5.43,P0.01;t=23.14,P0.01);与NC-inhibitor转染组比较,miR-1-inhibitor转染组E-cadherin表达增强(t=6.14,P0.01),N-cadherin和Vimentin表达减弱(t=6.78,P0.01;t=7.94,P0.01)。结论 miR-1过表达可促进胃癌细胞的迁移;miR-1低表达能可抑制胃癌细胞的迁移;miR-1可能通过EMT转化增强胃癌细胞的迁移能力。     

MicroRNA-197调控上皮-间充质转化对乳腺癌侵袭和迁移的影响

目的:探讨微小RNA-197(miR-197)抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的能力,以及阻断上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的机制。方法:构建miR-197过表达载体(miR-197mimics),分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,并设对照组;Real-timePCR分别检测以上各组细胞miR-197的表达水平变化;利用Transwell实验和划痕实验对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力进行检测;Western印迹法检测过表达miR-197后对EMT相关标志物E-cadherin,snail和vimentin表达的影响。结果:MiR-197可以抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的迁移和侵袭能力;转染miR-197mimics后,E-cadherin表达降低,snail和vimentin表达增加。结论:MiR-197有可能作为乳腺癌临床治疗的新靶点。     

miR-373对人胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-373在人胃癌SGC7901细胞中表达情况及其对胃癌细胞增殖、迁移的影响。方法人胃癌SGC7901细胞和正常胃黏膜上皮GES-1细胞采用反转录PCR法检测miR-373相对表达量。人胃癌SGC7901细胞分为miR-373类似物组、miR-373抑制物组和空白对照组,分别转染miR-373 mimic、miR-373 inhibitor和miR-373 NC。转染后24、36、48、72 h,采用MTT法检测3组细胞增殖率,转染后48 h,采用Transwell小室迁移实验检测迁移细胞数。结果胃癌SGC7901细胞miR-373相对表达量(0.39±0.05)明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞(0.23±0.04)(P0.05);miR-373类似物组细胞miR-373相对表达量(0.78±0.11)明显高于miR-373抑制物组(0.17±0.02)和空白对照组(0.36±0.06)(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后24 h,3组细胞增殖率比较差异无统计学意义(P0.05),转染后36、48、72 h,miR-373类似物组细胞增殖率明显高于miR-373抑制物组和空白对照组(P0.05),空白对照组高于miR-373抑制物组(P0.05);转染后48 h,相同面积下miR-373类似物组迁移细胞数[(181.28±11.29)个]明显多于miR-373抑制物组[(61.82±8.29)个]和空白对照组[(109.73±8.22)个](P0.05),空白对照组多于miR-373抑制物组(P0.05)。结论 miR-373可能作为癌基因作用于胃癌组织,且能增强胃癌细胞的增殖和迁移能力。     

miR-21在前列腺癌中的表达及抑制其表达对前列腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨抑制前列腺癌细胞中miR-21基因表达对癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 RTPCR检测前列腺癌及癌旁组织中miR-21基因的mRNA表达;空白对照组(Control)、阴性对照组(NC)和miR-21 inhibitor组转染人前列腺癌PC-3细胞,48 h后RT-PCR检测各组细胞中miR-21基因的mRNA表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果前列腺癌组织中miR-21的mRNA表达显著高于癌旁组织(P0.01);转染miR-21 inhibitor后miR-21的表达显著降低;NC组细胞存活率、细胞凋亡率及ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与对照组,差异无统计学意义(P0.05),miR-21 inhibitor组细胞存活率及ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P0.01)。结论抑制前列腺癌细胞中miR-21基因的表达可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA miR-148b-3p在人胶质瘤细胞中的表达及意义

目的检测微小RNA(microRNA,miR)-148b-3p在人胶质瘤细胞中的表达水平,并探讨其对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测胶质瘤细胞A172和正常星形胶质细胞HA1800中miR-148b-3p的表达水平。合成miR-148b-3p mimics及阴性对照(NC),用Lipofectamine 2000将miR-148b-3p mimics和NC转染至人胶质瘤细胞A172。分别采用噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验、流式细胞术检测转染miR-148b-3p mimics对胶质瘤细胞A172增殖、侵袭及细胞周期的影响。结果 miR-148b-3p在胶质瘤细胞A172中的相对表达量为0.27±0.06,显著低于在正常星形胶质细胞HA1800中的相对表达量1.16±0.21(P0.01)。MTT检测到miR-148b-3p mimics组A172细胞增殖率在转染后显著降低,转染24h、48h及72h后,细胞增殖率分别下降(12.33±0.46)%、(18.35±0.64)%和(30.54±1.22)%。Transwell实验结果显示miR-148b-3p mimics组A172细胞穿膜细胞数为23.1±1.8,显著低于NC组的87.1±4.6(P0.01),miR-148b-3p mimics能够抑制A172细胞的侵袭能力。流式细胞术结果显示miR-148b-3p mimics显著阻滞A172细胞从G0/G1期向S期转换。结论 miR-148b-3p在胶质瘤细胞中低表达,miR-148b-3p在胶质瘤细胞中发挥抑制肿瘤增殖和侵袭的作用。     

过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的作用

目的探讨过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。方法通过RT-PCR检测人子宫内膜上皮细胞HEEC和子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平。用Lipofiectamine~(TM)2000将miR-132-3p mimics及NC分别转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,分为miR-132-3p mimics组、NC组以及对照组,对照组不做处理。通过CCK8法检测24 h、48 h、72 h后,三组Ishikawa细胞的增殖情况。流式细胞仪检测转染后三组Ishikawa细胞的凋亡情况。Transwell小室检测三组Ishikawa细胞侵袭、迁移情况。Western-blot检测三组Ishikawa细胞B淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X(Bax)、细胞增殖抗原标记物Ki-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果与人子宫内膜上皮细胞HEEC相比,子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平显著下降。CCK8结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖受到抑制,Ki-67蛋白表达水平显著下降(P0.05)。流式检测结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa的凋亡率显著升高,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。Transwell结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭及迁移能力受到抑制,MMP-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 miR-132-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa中低表达,过表达miR-132-3p能够抑制细胞增殖、侵袭及迁移,并促进细胞凋亡。     

miRNA-34b 对子宫内膜癌细胞凋亡、侵袭、迁移的影响及作用机制

目的 探究miR-34b 对子宫内膜癌(endometrial cancer) 凋亡、迁移、侵袭的影响及对Jag1/Cyclin D1 信号通路的影响。方法 将人子宫内膜癌细胞AN3CA 细胞分为对照组、NC 组和miR-34b 组。通过流式细胞技术、Transwell实验分别检测各组细胞凋亡、迁移能力和侵袭能力;通过定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)及Westernblot 检测各组细胞Jagged-1 蛋白(Jag1)及其靶基因G1/S- 特异性周期蛋白-D1(Cycling D1)mRNA和蛋白的表达水平;通过裸鼠荷瘤实验分析miR-34b 对肿瘤生长的影响。结果 对照组、NC 组和miR-34b 组细胞凋亡比例分别为5.6%±0.12%,5.80%±0.22% 和19.4%±0.51%。miR-34 组细胞凋亡比例高于对照组,差异具有统计学意义(t=8.325,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组细胞迁移数分别为322.15±13.71 个,327.67±9.14 个和162.19±7.49 个,miR-34b 组细胞迁移数低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.945 , P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组细胞侵袭数分别为357.6±14.11 个,364.05±16.12 个和157.58±8.77 个,miR-34b 组细胞侵袭数低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.643,P ＜ 0.01);qPCR 结果表明对照组、NC 组和miR-34b 组Jag1 mRNA 表达为2.75±0.21,2.67±0.14 和1.19±0.19,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.434,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组蛋白表达为1.71±0.11,1.77±0.24 和0.69±0.16,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.895,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组Cyclin D1mRNA 表达为1.29±0.13,1.32±0.11 和0.59±0.13,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=9.124,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组蛋白表达为1.81±0.18,1.79±0.14和1.29±0.16,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.227,P ＜ 0.01);裸鼠荷瘤实验表明过表达miR-34b 裸鼠肿瘤生长曲线与对照组差异有统计学显著性意义,并且肿瘤体积显著低于对照组(t=8.184,P ＜ 0.01)。结论 miR-34b 可以促进人子宫内膜癌细胞的凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力,其机制与Jag1/Cyclin D1 信号通路活性的抑制相关。     

miRNA-192-5p在多发性骨髓瘤中的表达水平及其调控机制研究

目的探讨miR-192-5p在多发性骨髓瘤中的表达水平及其调控机制。方法选取骨髓瘤细胞株U266作为研究对象,利用荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤细胞中miR-192-5p的表达水平;使用生物信息学网站预测miR-192-5p潜在靶基因USP1并利用双荧光素酶报告实验验证其靶向关系;利用细胞转染实验对多发性骨髓瘤细胞株进行miR-192-5p mimics、miR-192-5p inhibitor及相关对照组的细胞转染,采用CCK-8法和流式细胞仪分别检测转染后细胞的增殖和凋亡情况;利用Western blot检测转染后细胞中USP1蛋白表达水平。结果qRT-PCR结果显示,转染后多发性骨髓瘤细胞中miR-192-5p表达水平低于正常骨髓细胞(P<0.01);CCK-8细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell体外侵袭转移实验和流式细胞仪检测实验结果显示,过表达miR-192-5p抑制骨髓瘤细胞的增殖、迁移、侵袭,促进骨髓瘤细胞的凋亡;靶基因预测及验证实验结果显示USP1是miR-192-5p的靶基因,miR-192-5p的表达可以显著降低骨髓瘤细胞中USP1蛋白的表达。结论miR-192-5p在多发性骨髓瘤中可能作为抑癌基因发挥作用,通过靶向作用于USP1抑制多发性骨髓瘤的发展。     

miR-198 通过靶向ZEB2 调控EMT 过程抑制肝癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的 探讨微小核糖核酸-198（miR-198）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织细胞中的表达及其对癌细胞增殖、迁移的影响及其相关机制。方法 采用qRT-PCR 检测miR-198 在HCC 组织及细胞(HepG2,Hep3G,MHCC97H,Huh7) 中的表达情况;采用脂质体2000 向Huh7 细胞中单独转染miR-198 mimics,共转染miR-198 mimics 和pcDNA3.1-ZEB2;生物信息学网站预测miR-198 的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用Western blot 检测E 盒结合锌指蛋白2（E-box binding zinc finger protein 2, ZEB2）及上皮-间质转化（epithelialmesenchymaltransformation, EMT）相关蛋白表达;CCK-8 法和细胞划痕实验检测Huh7 细胞增殖和迁移能力。结果 20 例HCC 组织中miR-198相对表达量（0.354±0.022）明显低于邻近正常组织（4.762±1.135）,差异有统计学意义（t=17.365,P＜ 0.001）。HCC细胞系HepG2（0.589±0.103）,Hep3G（0.495±0.086）,MHCC97H（0.558±0.056）和Huh7（0.362±0.045）中miR-198 相对表达量较正常肝细胞LO2（1.823±0.125）显著降低（t=17.159,18.466,17.590,20.315,均P ＜ 0.05）。miR-198 mimics 组细胞增殖（0.398±0.146 vs 0.691±0.213）和迁移能力（20.012±2.103 vs 84.032±6.512）较对照组明显降低（t=1.965,52.459,均P ＜ 0.001）。miR-198 mimics 组细胞中E-cadherin 表达较对照组明显升高,N-cadherin和Vimentin 表达较对照组明显降低（t=18.478,17.550,19.706,均P ＜ 0.01）。ZEB2 是miR-198 的靶基因,miR-198负调控ZEB2。20 例HCC 组织中ZEB2 相对表达量（3.621±1.143）明显高于邻近正常组织（ 0.736±0.030）,差异有统计学意义（t=11.284,P ＜ 0.001）,与miR-198 表达呈负相关（r=-0.702,P ＜ 0.05）。共转染过表达ZEB2 逆转了miR-198 mimics 对HCC 细胞增殖、迁移和EMT 的抑制作用。结论 miR-198 在HCC 组织和细胞中表达下调,miR-198 通过靶向负调控ZEB2 的表达抑制Huh7 细胞的增殖和迁移。     

lncRNA MSC-AS1通过调节miR429-/RhoA轴对人鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探索长链非编码RNA(lncRNA)MSC-AS1通过调节微小RNA(miR)-429/Ras同源基因家族成员A(RhoA)轴对人鼻咽癌(NPC)细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR法(qPCR)检测NPC细胞系(CNE-1、HNE2、HONE-1细胞)以及人鼻咽上皮细胞系NP69细胞中lncRNA MSC-AS1、miR-429、RhoA mRNA的表达水平。以CNE-1细胞为研究对象,将si-MSC-AS1、miR-429 inhibitor、miR-429 mimics及相应阴性对照分别转染或共转染CNE-1细胞,记为对照组(未转染)、si-NC组、si-MSC-AS1组、mimics NC组、miR-429 mimics组、si-MSC-AS1+inhibitor NC组、si-MSC-AS1+miR-429 inhibitor组。MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶实验分别验证miR-429与MSC-AS1、RhoA的靶向关系;免疫印迹法检测RhoA、B淋巴细胞因子相关x蛋白(Bax)、上皮细胞...     

miR-34a与人乳腺癌细胞系MCF-7多柔比星耐药的关系

目的探讨miR-34a对人乳腺癌细胞系MCF-7多柔比星(Adr)耐药性的影响及其潜在分子机制。方法用低浓度逐步加量诱导法,建立MCF-7的Adr耐药细胞系(MCF-7/Adr),用miRNA芯片结合RT-qPCR筛选并验证miRNA在MCF-7/Adr及MCF-7细胞中的表达差异;用生物信息学软件对miR-34a进行基因靶向预测;通过miR-34a模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)转染实验结合MTT、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)观察miR-34a的表达变化对细胞耐药性的影响,western blot检测转染后Notch1蛋白表达水平。结果成功构建MCF-7/Adr耐药亚系;与MCF-7细胞相比,MCF-7/Adr中有156个差异表达miRNA;其中miR-34a的表达水平明显降低(t=11.597,P=0.000)。与阴性对照组相比,转染miR-34a mimic后MCF-7/Adr细胞miR-34a表达水平增高(t=8.013,P=0.001),且增加了对Adr的敏感性(t=18.160,P=0.000);转染miR-34a inhibitor后MCF-7细胞miR-34a的表达水平降低(t=9.979,P=0.000),且降低了对Adr的敏感性(t=4.130,P=0.009)。靶基因预测结果显示,Notch1为miR-34a的特异性靶基因。western blot结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比,MCF-7/Adr细胞转染miR-34a mimic后,Notch1蛋白的表达水平下降(F=64.949,P=0.000)。MCF-7细胞转染miR-34a inhibitor后,Notch1蛋白的表达水平升高(F=10.938,P=0.010)。结论 MCF-7/Adr及MCF-7细胞miRNA表达谱存在差异;miR-34a参与调节细胞对Adr的耐药过程,Notch1基因可能是调控靶基因之一。     

miR-625靶向HMGA1对食管癌细胞生物学行为的影响及机制

目的分析miR-625靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对食管癌细胞生物学行为的影响及机制。方法收集2018年3月—2019年3月经手术切除的食管癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)标本,体外培养食管癌细胞系(KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706)和正常食管上皮细胞HET-1A,采用RT-qPCR检测不同组织和细胞中miR-625的表达。将miR-625 mimic、miR-625 inhibitor转染ECA109细胞,采用CCK-8实验、流式细胞仪、Transwell小室实验和划痕实验检测miR-625对ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响,Western blot检测增殖、侵袭和迁移相关蛋白的表达。经生物信息学软件在线预测miR-625靶基因,通过RT-qPCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测验证靶向关系。同时干预miR-625和HMGA1,检测ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移。结果 miR-625相对表达量,食管癌组织低于癌旁组织,食管癌细胞系KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706低于正常食管上皮细胞HET-1A(P0.05)。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组miR-625相对表达量、处于G1期细胞比例及p21、E-cadherin表达升高,细胞增殖、侵袭、迁移能力及处于S期细胞比例、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin表达降低(P0.05);miR-625 inhibitor组可逆转上述作用(P0.05)。miR-625与HMGA1 3'端非编码区存在结合位点。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组细胞中相对荧光素酶活性和HMGA1表达降低(P0.05)。与pcDNA3.1-HMGA1组比较,miR-625+HMGA1组HMGA1表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,处于G1期细胞比例升高(P0.05)。结论 miR-625在食管癌中低表达,miR-625过表达可靶向HMGA1抑制食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移。