黄芪对脑缺血-再灌注后神经细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨黄芪对脑缺血-再灌注后神经细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Fas-L蛋白表达的影响.方法:采用Longa报道的线栓法制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型.将36只SD大鼠随机分为假手术组(生理盐水10 ml·kg-1·d-1灌胃)、模型组(生理盐水10 ml·kg-1·d-1灌胃)和黄芪干预组(黄芪煎剂6 g·kg-1·d-1灌胃),每组12只.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺刻标记技术(TUNEL)检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡,免疫组化与医学图像分析结合的方法检测Bcl-2、Fas-L蛋白的表达.结果:与假手术组相比,模型组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性神经细胞及Bcl-2、FasL阳性细胞表达增多(P均<0.01).与模型组相比,黄芪干预组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性神经细胞及Fas-L阳性细胞表达减少,Bcl-2阳性细胞表达增多(P<0.01).结论:黄芪可增强Bcl-2蛋白表达,下调Fas-L蛋白表达,从而抑制脑缺血-再灌注后神经细胞凋亡,这可能是黄芪对脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用机制之一.     

川芎嗪联合黄芪对脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡及Fos蛋白表达的影响

目的:探讨活血中药川芎嗪联合益气中药黄芪对局灶性脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡及Fos蛋白表达的影响。方法:将60只雄性SD大鼠随机分成假手术组、生理盐水对照组、川芎嗪治疗组、黄芪治疗组及川芎嗪、黄芪合用组,每组12只。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)及免疫组化法分别检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡及Fos蛋白的表达。结果:与假手术组比较,生理盐水对照组大鼠神经细胞凋亡数及Fos蛋白阳性细胞数增多,Fos蛋白阳性细胞平均灰度值下降(P均<0.01);与生理盐水对照组比较,川芎嗪治疗组、黄芪治疗组及川芎嗪、黄芪合用组大鼠神经细胞凋亡数及Fos蛋白阳性细胞数减少,Fos蛋白阳性细胞平均灰度值升高(P均<0.01);与川芎嗪治疗组、黄芪治疗组比较,川芎嗪、黄芪合用组作用最显著(P均<0.01)。结论:川芎嗪、黄芪及两药合用均可通过抑制脑缺血/再灌注后Fos蛋白表达从而减少神经细胞凋亡,两药合用比单用川芎嗪或黄芪下调Fos蛋白表达、减少神经细胞凋亡效果更显著,这可能是临床益气药及活血药联合应用治疗缺血性中风的机制之一。     

中药对缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

自1972年Kerr和Wyllie首次提出细胞凋亡后,一直是人们研究的热点.存在于心肌细胞中的细胞凋亡在心脏的病理生理发展过程中以及维持心脏正常形态结构方面起着重要作用,被认为是心脏由代偿性变化向病理性变化发展的细胞学基础.     

针刺预处理对脑缺血/再灌注大鼠脑水肿及腺苷水平的影响

目的:探讨针刺预处理对全脑缺血大鼠脑水肿及腺苷(ADO)水平的影响,并与缺血预处理的效果进行比较。方法:120只Wistar大鼠被随机分为正常对照组、假手术组、脑缺血组、脑缺血预处理组、针刺预处理组5组,每组24只。采用四动脉阻断法制备大鼠全脑缺血模型。假手术组:仅暴露血管,不制模;脑缺血组:全脑缺血10 min;脑缺血预处理组:全脑预缺血3 min,再灌注24 h后再次全脑缺血10 min;针刺预处理组:缺血10 min前7 d针刺大鼠双侧足三里穴和曲池穴并进行电刺激,每日1次,每次30 min,同时刺激百会穴。每组分别于再灌注12、24、48和72 h各活杀6只动物,取脑组织,用干湿法测脑组织含水量,分光光度计测定ADO含量。结果:假手术组各时间点脑组织含水量与正常对照组比较差异均无显著性;脑缺血组脑组织含水量明显高于假手术组和正常对照组,且随时间延长脑水肿越来越重;脑缺血预处理组与针刺预处理组各时间点比较均明显低于脑缺血组,但差异均无显著性;针刺预处理组48 h和72 h与正常对照组比较差异无显著性。假手术组各时间点脑组织ADO含量与正常对照组比较差异均无显著性;脑缺血组脑组织ADO含量明显高于假手术组和正常对照组;脑缺血预处理组与针刺预处理组各时间点比较均高于脑缺血组,大约是脑缺血组的2倍,但差异无显著性。结论:针刺预处理与脑缺血预处理同样可以使脑组织ADO含量增高,提示针刺预处理发生机制与ADO有着极为密切的关系,增强内源性ADO含量很可能是针刺预处理的脑保护作用机制之一。     

脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制

脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制是一个复杂的多因素过程，目前尚未完全阐明。对凋亡的发生机制的探讨及阻止凋亡发展因素的研究是缺血性脑血管病研究的热点。章就近年来与脑缺血再灌注后神经细胞凋亡有关的发生基因、钙超载、自由基和兴奋性氨基酸的毒性作用，线粒体损伤及一些参与和诱导凋亡的因素等方面的研究进展作了介绍。     

红景天对大鼠脑缺血再灌注c-Fos表达及神经细胞凋亡的影响

目的探讨红景天对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中c-Fos 表达水平及神经细胞凋亡的影响。方法Wistar 大鼠120 只,分为假手术组、模型组和干预组(红景天),各组再分为3 h、6 h、12 h、24 h、48 h 共5 个亚组,每个亚组8 只大鼠。后两组采用大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,干预组术前红景天每天0.672 g/kg 灌胃15 d。参考Longa 法在大鼠麻醉清醒后进行评分,应用免疫组化、TUNEL法检测各组c-Fos 表达及神经细胞凋亡。结果模型组和干预组缺血脑组织中c-Fos 表达明显增加(P<0.01),于再灌注48 h 达高峰;与模型组相比,干预组c-Fos 表达减少(P<0.05),神经元凋亡明显减少(P<0.01),神经功能缺损评分下降(P<0.05)。结论红景天能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中c-Fos 表达,减少神经元凋亡,减轻缺血再灌注损伤。     

γ-羟基丁酸对缺血/再灌注损伤后神经细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨γ-羟基丁酸(GHBA)对缺血/再灌注神经细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax表达的影响及其可能的作用机制。方法采用大鼠局灶性缺血/再灌注损伤模型,大脑中动脉阻塞1h,分别于再灌注后1.5、3、6、12、24、48、72h,用原位末端缺口标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法检测假手术组、生理盐水组和GHBA组海马区的凋亡细胞、Bcl-2、Bax的表达。结果与生理盐水组比较,GHBA组细胞凋亡显著减少(P<0.05),Bcl-2表达增多,Bax表达减少,且Bcl-2/Bax的比率上调(P<0.05)。结论GHBA可能通过增加Bcl-2表达、抑制Bax表达,抑制神经细胞凋亡,并可影响Bcl-2、Bax的平衡。     

脑缺血再灌注后神经细胞凋亡机制及药物保护作用的研究进展

脑缺血再灌注导致神经元损伤,凋亡相关基因及蛋白被激活,与此同时机体内释放大量的细胞因子诱发凋亡发生。目前研究表明,脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的主要机制为线粒体损伤、钙超载及氧自由基的累积等。通过对以上机制的深入研究有助于开发新的脑保护药物,并进一步明确各种脑保护药物的治疗靶点和疗效。     

缺血后处理对脑缺血再灌注损伤后ERK1/2和Akt磷酸化及神经细胞凋亡的影响

目的:观察缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后ERK1/2和Akt及神经细胞凋亡的影响。方法:成年健康SD大鼠72只,随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、缺血后处理(Postcond)组各24只,应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型。分别于再灌注10min、30min、6h、24h后留取大脑皮质。Western blot检测再灌注10min、30min、6h后ERK1/2和Akt活性变化;原位末端标记(TUNEL)检测再灌注后24h神经细胞凋亡。结果:Postcond组再灌注10min、30min、6h后ERK1/2和Akt活性高于I/R组(P<0.05);脑缺血再灌注24h后,Postcond组与I/R组比较,TUNEL阳性细胞减少(P<0.05)。结论:缺血后处理可提高大鼠脑缺血再灌注后皮质内ERK1/2和Akt活性,减少神经细胞凋亡。     

基因芯片评估异丙酚对全脑缺血再灌注大鼠凋亡相关基因表达的影响

背景：异丙酚可能具有抗凋亡作用，从而保护脑缺血神经元耐受缺血性损伤。但是，异丙酚抗凋亡作用的机制还有待深入研究。目的：探讨异丙酚对全脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。设计：随机对照的实验研究。单位：北京天坛医院神经外科。材料：实验于2003-01／2004-01在首都医科大学附属北京神经外科研究所进行研究。成年雄性Wistar大鼠23只，随机分为缺血组(9只)、异丙酚组(9只)和假手术对照组(5只)。干预：制备大鼠全脑缺血再灌注模型。异丙酚组再灌注开始后立即静脉输注异丙酚1．5mL／h，持续30min。每组取5只大鼠于再灌注24h取脑，用流式细胞仪检测凋亡率和坏死率。缺血组和异丙酚组各取4只大鼠，利用基因芯片结合图像分析技术检测凋亡相关基因的差异表达情况。主要观察指标：①凋亡率和坏死率。②基因芯片检测凋亡相关基因的差异表达情况。结果：异丙酚组海马神经元的凋亡率和坏死率[(7．01&;#177;0．79)％和(12．80&;#177;0．92)％]较缺血组[(10．89&;#177;0．80)％和(16．67&;#177;1．04)％]明显降低(P&;lt;0．01)。与缺血组比较，异丙酚组凋亡蛋白酶激活因子(apoptotic protease activating factor 1，APAF1)、DEFT和STM-2三个凋亡相关基因下调。结论：异丙酚具有脑保护作用，其机制可能与APAF1，DEFT和STM-2三个凋亡相关基因下调有关。     

神经生长因子预处理对沙土鼠全脑缺血/再灌注损伤脑神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)预处理对沙土鼠全脑缺血/再灌注(I/R)损伤的脑保护作用的可能机制及最佳给药时间窗。方法采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉造成全脑I/R损伤模型。采用NGF侧脑室注射法进行预处理。沙土鼠30只随机分为5组,每组6只:假手术组(A组)、I/R损伤组(B组)、NGF预处理12、24和48h组(C、D、E组),除A组外各组分别于脑缺血20min、再灌注72h后处死取标本。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测沙土鼠全脑I/R损伤后脑皮质及海马CA1区凋亡神经细胞,用免疫组化法检测凋亡相关调控基因Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与B组比较,NGF预处理各组可显著减少沙土鼠全脑I/R损伤后脑皮质及海马CA1区神经细胞凋亡数目(P均<0.05),诱导Bcl-2蛋白及抑制Bax蛋白的表达(P均<0.05),其中以NGF预处理48h时脑皮质及海马CA1区细胞凋亡指数和Bax蛋白表达的阳性细胞指数最低,Bcl-2蛋白表达的阳性细胞指数最高。结论NGF预处理能明显减轻沙土鼠全脑I/R损伤引起的神经细胞凋亡,而以NGF预处理48h对脑保护效果最好;其抑制神经细胞凋亡的机制可能是通过调节凋亡相关调控基因Bcl-2及Bax的不同表达来发挥作用。     

Fas RNA抑制前后缺血再灌注神经细胞凋亡相关指标的检测

目的探讨针对Fas基因的RNA抑制前后缺血再灌注损伤神经细胞凋亡相关指标的变化。方法NGF诱导PC12细胞为类神经细胞。细胞随机分为对照组、模型组、GFP siRNA组;Fas siRNA组。对照组用完全培养液培养,其他三组细胞制作体外缺血再灌注模型。于制作模型前24小时进行转染。于造模后6h进行Fas、Caspase-3表达检测。24 h进行细胞凋亡相关检测。结果1.凋亡率:模型组细胞(39.13±10.63)明显高于对照组(2.85±0.43),差异有显著性(P<0.01)。Fas siRNA组(1.70±0.31)明显低于模型组,(P<0.01)。2.Fas、Caspase-3阳性率:模型组模型组的Fas阳性率(37.25±8.37)、caspase-3阳性率(28.79±6.23)明显高于对照组(7.21±3.28,8.01±2.31),差异有统计学意义(P<0.01)。GFP siRNA组Fas阳性率(14.35±7.31)c、aspase-3阳性率(16.33±4.15)明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论针对Fas的siRNA能有效地抑制缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡。对神经细胞缺血再灌注损伤有一定的保护作用。     

养阴益气活血冲剂对脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的：探讨养阴益气活血冲剂对脑缺血－再灌注损伤保护作用。方法：制作SD大鼠脑缺血与再灌注损伤模型,随机分为假手术对照组,脑缺血－再灌注损伤组、脑缺血组、养阴益气活血冲不剂量治疗组及维脑路通对照治疗组,观察各组脑组织前列环素（PGI2）和血栓素A2（TXA2）含量;脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;血浆组织型纤溶酶原激活性（t-PA)及其抑制物（PAI）活性等指标的变化。结果：养阴益气活血冲剂可显著提高脑组织PGI2含量,降低TXA2含量;调节血浆t-PA和PAI的活性;显著降低脑组织MDA含量,提高脑组织SOD活性。结论：养阴益气活血冲剂具有抗凝、提高纤溶活性,提高细胞抗氧化等多种作用,对脑缺血－再灌注损伤具有显著保护作用。     

脑缺血再灌注对大鼠不同组织细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响

目的 探讨脑缺血再灌注（CI／RP）对大鼠不同组织细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响。方法 应用TUNEL法和免疫组化法，分别测定CI／RP损伤后各组大鼠脑皮质、丘脑和胸腺组织细胞凋亡及凋亡调控基因bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果 CI／RP损伤后大鼠脑皮质、丘脑和胸腺组织细胞凋亡率明显升高，凋亡调控基因bcl-2和Bax蛋白表达率也呈不同程度的升高，与对照组比较，差异非常显（P＜0．01）。电镜观察结果与之相似。结论 CI／RP损伤后上述3种组织细胞凋亡率增高，凋亡调控基因bcl-2和Bax表达异常。该结果为临床早期防治CI／RP损伤提供了实验依据。     

脑缺血再灌注后细胞色素C和卡配因基因表达对神经细胞凋亡的影响

背景：细胞凋亡与细胞色素C(cytochrome C，Cyt C)、卡配因、Bcl-2家族和半胱天冬酶家族等基因表达有密切关系。脑缺血再灌注过程中，下调卡配因的表达，抑制Cyt C的释放可减少细胞凋亡。目的：研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及其与Cyt C和卡配因基因表达的关系。设计：随机对照的实验研究。地点和材料：实验地点：青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室。动物：成年健康雌性SD大鼠36只，体质量230～270g，清洁级，由中国科学院上海实验动物中心提供。方法：全部实验均由所有作者完成。具体方法：应用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)再灌注模型，应用TUNEL法观察脑缺血再灌注后神经细胞凋亡，原位杂交技术检测Cyt C mRNA和卡配因mRNA的表达。主要观察指标：凋亡细胞数；Cyt C和卡配因的阳性细胞数。结果：脑缺血再灌注后2h脑组织即出现凋亡细胞，在皮质区和纹状体区分别于1d和2d达高峰，此后逐渐减少。脑组织Cyt C mRNA和卡配因mRNA的表达自缺血再灌注后2h后逐渐增高，皮质区12h达高峰[分别为(122．50&;#177;6．69)和(138．50&;#177;6．25)个／视野]，纹状体区1d达高峰[分别为(119.25&;#177;5．12)和(105．00&;#177;4．58)个／视野1，以后逐渐下降。Cyt C mRNA和卡配因mRNA的表达与细胞凋亡的区域基本一致。结论：脑组织皮质区神经细胞较纹状体区对缺血性损伤更为敏感，Cyt C和卡配因基因表达在诱导细胞凋亡中具有重要作用。     

老龄大鼠脑缺血-再灌注神经细胞凋亡变化规律研究

目的　比较研究青年与老龄大鼠脑缺血再灌注 (I/R)后超微结构与神经细胞凋亡特征。方法　采用线栓法建立急性局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ,观察缺血 3h及再灌注 3、6、12、2 4和 72 h脑组织超微结构变化及细胞凋亡。结果　老龄大鼠脑缺血 3h和 I/R12 h脑梗死面积较青年大鼠增大。随着 I/R时间延长 ,脑组织细胞损伤逐步加重 ,老龄大鼠较青年大鼠严重。细胞凋亡随着 I/R时间延长而明显增加 ,老龄大鼠出现的早、持续时间长。结论　老年脑缺血再灌注脑梗死面积增大、超微结构损伤和细胞凋亡出现得早且严重。     

阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌注后NF-κB、表达及神经细胞凋亡的影响

目的：探讨阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中NF-κBp65表达水平及神经细胞凋亡的影响。方法：Wistar大鼠105只,分为假手术组、再灌注组及干预组各35只。干预组阿托伐他汀灌胃20d后,与再灌注组采用大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,参考Longa的5分制法在大鼠麻醉清醒后进行评分,应用免疫组化、TUNEL法检测阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌注后NF-κBp65表达及对神经细胞凋亡的影响。结果：与假手术组比较,再灌注组及干预组大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中NF-κBp65表达明显增加（P〈0．01）,缺血再灌注24h达高峰;干预组给予阿托伐他汀钙干预后与再灌注组比较能减少缺血脑组织中NF-κBp65表达（P〈0．01）,减少神经元凋亡（P〈0．01）,降低神经功能缺损评分（P〈0．01）。结论：阿托伐他汀钙能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中NF-κBp65表达,并能减少神经元凋亡,减轻缺血再灌注损伤。     

脑缺血再灌注对大鼠不同组织细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响

目的探讨脑缺血再灌注(CI/RP)对大鼠不同组织细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响。方法应用TUNEL法和免疫组化法,分别测定CI/RP损伤后各组大鼠脑皮质、丘脑和胸腺组织细胞凋亡及凋亡调控基因bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果CI/RP损伤后大鼠脑皮质、丘脑和胸腺组织细胞凋亡率明显升高,凋亡调控基因bcl-2和Bax蛋白表达率也呈不同程度的升高,与对照组比较,差异非常显著(P<0.01)。电镜观察结果与之相似。结论CI/RP损伤后上述3种组织细胞凋亡率增高,凋亡调控基因bcl-2和Bax表达异常。该结果为临床早期防治CI/RP损伤提供了实验依据。     

生长激素对大鼠心肌缺血/再灌注后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因NF-κB蛋白表达的影响

目的　研究生长激素 (growthhormone ,GH)对大鼠心肌缺血 /再灌注 (IR)后心肌细胞凋亡及相关基因NF -κB蛋白表达的影响。方法　 2 4只大鼠随机分为 3组 ,假手术组 (n =8,仅手术 2 4h)、心肌缺血 /再灌注 (IR)组 (n =8)、GH组 (n =8) ,后两组均缺血 30min ,再灌注 2 4h ,其中GH组的每只大鼠实验术前皮下肌注GH 1U/kg体重 ,连续 7d ,其中第 7次皮下注射于手术前进行。前两组每只大鼠相应皮下肌注生理盐水 0 .5mL/d。检测心肌细胞凋亡及心肌细胞核NF -κB蛋白表达并进行心肌组织病理学检查。结果　大鼠心肌IR 2 4h后心肌细胞凋亡指数明显上升 (对照于假手术组 ,P <0 .0 5 ) ,心肌细胞核NF -κB蛋白表达呈阳性染色指数明显升高 (P <0 .0 5 ) ,心肌病理检查见心肌缺血区呈大小不一的坏死孔灶 ,缺血心肌间有炎症细胞浸润 ,心肌排列不整齐 (HE染色 ) ,而GH组心肌细胞凋亡率及心肌细胞核NF -κB蛋白表达呈阳性染色指数明显好于IR组 (P <0 .0 5 ) ,心肌细胞炎症细胞也明显减少 ,坏死灶也少于IR组。结论　GH可以减少心肌缺血 /再灌注后心肌细胞凋亡及细胞核NF -κB染色阳性指数 ,说明GH对IR后的心肌具有保护作用