酶法生产L-半胱氨酸培养基的响应面分析优化

利用SAS软件的Plackett—Burman设计法对微生物酶法生产L-半胱氨酸的培养基组成进行筛选，筛选出4个影响较大的重要因素，即葡萄糖、玉米浆、尿素、DL-2-氨基-△^2-噻唑啉-4-羧酸(DL-2-mino—△^2—Thiazoline-4-Carboxylic Acid，缩写为DL—ATC)，并且用SAS软件二次响应面分析法进行回归分析，得到了各因素的最佳水平值，经五批培养验证，预测值与验证试验平均值接近．5L发酵罐培养试验表明，在优化条件细胞酶活力提高25．4％.     

NaCS-PDMDAAC微胶囊固定化假单胞菌TS-1138从ATC合成L-半胱氨酸

采用非均相反应制备NaCS(硫酸纤维素钠),考察了反应液中正丙醇-硫酸的最佳比例为25∶35,NaCS和PDMDAAC的最适滴制浓度分别为4%和3%;利用NaCS-PDMDAAC微胶囊对假单胞菌TS-1138进行固定化并进行连续培养,结果表明,菌体能在胶囊内很好的生长和繁殖,连续培养132h后菌浓可达到4.5×1011个/mL胶囊,是在相同条件下游离培养的6倍;固定化菌体以ATC为底物生成L-半胱氨酸的催化活性是游离培养菌体的2.5倍,并且固定化菌体的重复使用能力明显优于游离菌体.重新考察固定化菌体的最适催化反应时间为3h,在一定程度上弥补了微胶囊传质性相对较差的不足.     

5,5′-二硫硝基苯甲酸分光光度法测定微生物酶法转化液中的L-半胱氨酸

以5,5′-二硫硝基苯甲酸(DTNB)分光光度法测定微生物法转化液中的L-半胱氨酸,测定波长为412 nm,L-半胱氨酸在5～40μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(R2>0.999 3),高、中、低浓度水平的L-半胱氨酸加标回收率为99.2%～102.5%,RSD为2.3%.该法准确、简单、快速,可以用于对微生物转化进行实时检测.     

假单胞菌TS-1138 L-半胱氨酸脱巯基酶的纯化和性质研究

假单胞菌TS-1138L-半胱氨酸脱巯基酶经DEAECellulose-52阶段洗脱、SephadexG-100柱层析被纯化了80.3倍,SDS-PAGE鉴定为单一条带,该酶的相对分子质量为53.0kDa;酶反应的最适pH为7.5,最适反应温度为35℃,该酶的米氏常数为2.37μmol/L,最大反应速度为0.11μmol/mL·min·Pb2+对该酶有很强的激活作用,Zn2+对该酶有较强的抑制作用,羟胺为该酶特异性的抑制剂.     

DL-ATC对TS1138菌株酶法生产L-半胱氨酸的影响

以假单胞菌(Pseudomonas sp.)TS1138菌株为供试菌株,研究了在转化DL-ATC生产L-半胱氨酸过程中.DL-ATC对产酶和转化的影响.结果表明:DL-ATC对TS1138菌株产酶具有诱导作用,产酶培养中必须适量添加.从L-半胱氨酸的产量和DL-ATC转化率两个方面综合考虑,酶法生产L-半胱氨酸的最适DL-ATC为9 g·L-1,采用间歇流加DL-ATC方式可使L-半胱氨酸的产量提高56.25%.     

L-半胱氨酸产生菌恶臭假单胞菌TS1138的鉴定和诱变育种

从土壤中分离得到一株利用DL-2-氨基-△^2-噻唑啉4-羧酸合成L-半胱氨酸的TS1138菌株，通过形态学特征、生理生化特征、（G＋C）（摩尔分数）和16S rRNA基因序列对其进行了分类鉴定，确定TS1138菌株为恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）．该菌株具有将DL-2-氨基-△^2-噻唑啉-4-羧酸不对称地水解生成L-半胱氨酸的性能．采用了L-半胱氨酸产物的检测方法即18-磷钨酸法、薄层层析法和旋光度法．将TS1138菌株进行亚硝基胍诱变，得到TS1138菌株脱巯基酶缺失突变株TS1138-10，其产L-半胱氨酸能力较出发菌株提高了50％以上．TS1138-10的稳定性实验表明，该菌株的高产L-半胱氨酸能力具有稳定性的遗传特性．     

利用ATC产半胱氨酸菌的筛选及产酶条件的测定

从土样中分离筛选出一株性能较好的能利用 2 -氨基 - Δ2 -噻唑啉 - 4羟酸 (2 - Amino- Δ2 -thiazoline- 4 - carboxylic acid ATC)合成半胱氨酸的菌株 SB- 6。该菌的较适产酶培养基 :葡萄糖2 % ;(NH4 ) 2 SO4 0 .3% ;无机盐溶液 ;较适产酶条件 :培养基起始 p H值为 7.5;33℃振荡培养。加大通气量 ,以甘油为碳源有益于产酶。菌体的生长条件与产酶条件略有不同     

电合成L-半胱氨酸高活性电极的研制

采用化学修饰和电沉积方法在Ｔｉ表面镀覆一层结合牢固的Ｓｎ层，从而制成钛基锡电极，该电极和Ｐｂ电极比较，对Ｌ－半胱民合成反应，具有更高的电催化活性，电流效率大于９９．０％，电解收率为９８．０％以上，明显优于Ｐｂ电极电解。     

微生物法制备L一半胱氨酸分离提纯的方法

采用微生物法制备L-半胱氨酸,产物浓度低、易氧化和被脱巯基酶进一步分解,L-半胱氨酸的分离提纯难度较大,是制约产品收率提高的控制步骤.目前多采用将L-半胱氨酸氧化为L-胱氨酸,分离后再电解还原的氧化法和离子交换法,离子交换法以其简洁的工艺成为今后的研究方向.     

酶法大量合成13C标记尿苷二磷酸葡萄糖

建立了一种经济、简便的一步酶法 ,大量合成尿苷二磷酸葡萄糖 (UDPG) .在酶法合成中 ,用UTP代替ATP ,并建立了UTP的再生系统 ;建立了反复补加法和酶回收法 ,使酶的利用率达到 85% .在 0 .5g规模上用该法合成UDP [4 13 C] 葡萄糖 ,总产率为 6 9.7% .     

海洋细菌THN1发酵产右旋糖酐酶的条件优化及酶学性质研究

为提高海洋细菌THN1产右旋糖酐酶的能力,本研究利用单因素试验和响应面试验对菌株THN1的发酵条件进行优化,并探究菌株THN1右旋糖酐酶的酶学性质。优化结果表明,菌株THN1的最佳产酶条件为麸皮5 g/L、胰蛋白胨20 g/L、NaCl 10 g/L、右旋糖酐T20 5 g/L,陈海水配置,pH值为8.2,30℃培养24 h。在此条件下,菌株THN1的发酵液酶活力达到3.71 U/mL,是优化前（初始酶活力为0.12 U/mL）的31倍。酶学性质分析表明,右旋糖酐酶的最适反应温度为40℃,在30℃条件下放置5 h酶活力基本保持稳定;最适反应pH值为7.5,在pH值为5.0-9.0的条件下相对酶活力能保持50%以上。本研究成果可为缩短右旋糖酐酶生产周期和降低成本提供数据支撑,并认为菌株THN1右旋糖酐酶在口腔护理方面具有良好的应用潜力。     

澳栗精胺衍生物的酶法合成研究

澳栗精胺具有调节植物生长、抗炎症病变、免疫抑制缺陷和肿瘤转移等方面的功能,澳栗精胺的一些衍生物在抑制人类免疫缺陷病毒和丙肝病毒等方面比澳栗精胺本身活性更高.该文系统地优化了在有机溶剂中酶法合成澳栗精胺衍生物的条件,并且纯化得到了6-O-丁酰澳栗精胺.结果表明:合成澳栗精胺衍生物的最优条件为Lipozyme RM IM在四氢呋喃中、30 ℃下催化反应60 min,其中澳栗精胺的转化率为84.3%,6-O-丁酰澳栗精胺的得率为39.2%.纯化得到的6-O-丁酰澳栗精胺与标准品在高压液相色谱中的保留时间相同.     

二苯羟乙酸糖酯酶促合成

二苯羟乙酸衍生物及糖类化合物分别具有重要的生理功能．二苯羟乙酸糖酯有可能同样具有一定的生理价值．本文着重对这类化合物的酶促合成进行探讨，选择定位合成二苯羟乙酸糖酯．     

乙酰短杆菌酶法合成5—甲基尿苷

用乙酰短杆菌完整细胞为酶源,以鸟苷和胸腺嘧啶为底物,酶法合成５－甲基尿苷。最佳反应条件为：底物浓度１００－２００ｍｍｏｌ／Ｌ,ｐＨ８．０,磷酸盐缓冲液尝试１０－５０ｍｍｏｌ／Ｌ,６０℃,摇床转速１２０ｒ／ｍｉｎ,反应１ｈ即达到平衡,５－甲基尿苷转化率达６０％以上。     

碱性脂肪酶产生菌的筛选与产酶条件及酶学性质研究

作者从泸州油脂厂附近的土壤中,筛选到一株产碱性脂肪酶活性较高的细菌,经初步鉴定为假单胞菌(Pseudomonassp.).经对该菌株进行产酶条件和酶学性质研究发现,该菌株的最适产酶发酵培养基为(%):酵母浸出汁1.5,黄豆粉1,NaCl0.2,K2HPO40.2,NaH2PO40.2,MgSO4·7H2O0.01,初始pH8.5.100mL三角瓶装液10mL,30℃,150r/min摇床培养48h,酶活最高可达19.1U/mL.酶的最适反应温度40℃,最适pH8.5,该酶具有较好的热稳定性.     

红曲霉液态发酵多糖工艺条件的优化

研究了红曲霉产多糖的液态发酵条件,得出优化后的培养基组成为:蔗糖45 g/L,酵母粉4.5 g/L,KH2PO4·3H2O 3.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.85 g/L.通过单因素实验和正交试验,得到红曲霉N产多糖的优化发酵工艺条件为:种龄30 h,接种量7.5%,发酵培养基初始pH 5.75,装液量162.5mL/1 000 mL三角瓶,发酵时间84 h.在此条件下,红曲霉液态发酵的多糖质量浓度达999.8 mg/L,比优化前的684.2 mg/L提高46.1%。