蛋白激酶C活性变化对Adipophilin介导THP-1巨噬细胞脂质蓄积的影响

以THP-1巨噬细胞为研究对象,观察蛋白激酶C(PKC)激动剂佛波酯(PMA)和抑制剂钙磷酸结合蛋白C(CalphostinC)对胞膜PKC活性、胞膜PKCα及胞浆内过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)和adipophilin表达以及细胞内脂质蓄积的影响,初步探讨PKC调控adipophilin表达及脂质蓄积的作用机制.采用PepTagRAssay、RT-PCR、蛋白质印迹、油红O染色和高效液相色谱法,观察到100nmol/LPMA在激活胞膜PKC((0.2514±0.0154)U/ml)的同时可以与氧化低密度脂蛋白(oxLDL)协同增强PKCα、PPARγ和adipophilin表达并使细胞内脂滴的蓄积极大地增强.细胞内胆固醇酯/总胆固醇比值增至(69.8±9.5)%;300nmol/L CalphostinC对荷脂THP-1巨噬细胞的处理则抑制酶活性至((0.0927±0.0056)U/ml,细胞内脂滴减少,胆固醇酯/总胆固醇比值降至(40.1±9.1)%;CalphostinC呈剂量依赖性的方式下调酶活性、PKCα、PPARγ和adipophilin表达,400nmol/LCalphostinC基本上可以逆转50mg/LoxLDL诱导的酶活化和PKCα、PPARγ和adipophilin表达的上调.结果提示,蛋白激酶C活性的改变可以影响adipophilin介导的脂质蓄积,其中PPARγ可能在这一调控机制中发挥了重要作用.     

人牛精浆相关蛋白的亚细胞定位及生物活性

利用红色荧光蛋白表达载体pDsRed1-N1与人睾丸中牛精浆相关蛋白基因(hbrp)重组为pDsRed1-N1/hbrp,真核表达载体pcDNA3.1-myc-his与hbrp重组为pcDNA3.1-myc-his/hbrp,分别转染HEK293细胞,建立稳定的真核表达细胞系。在荧光显微镜下观察HBRP的亚细胞定位,并用放射自显影检测该细胞系的蛋白激酶C(PKC)活性。HBRP定位在细胞膜及胞浆近膜处;HBRP对PKC活性有明显的抑制作用。从而确定了人新的精子结合蛋白HBRP在细胞内的定位,并认定了HBRP为有生物活性的功能蛋白。     

甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞信号传递系统的作用

为了探讨阿片肽与细胞表面受体结合后所产生的生物效应及其机制 ,用不同浓度甲硫氨酸脑啡肽 ( MENK)及抗 δ阿片受体单克隆抗体处理小鼠的骨髓瘤细胞 ( NS- 1 ) ,然后测定蛋白激酶A( PKA) ,蛋白激酶 C( PKC)活性及三磷酸肌醇 ( IP3 )含量 .研究结果表明 ,NENK可升高细胞胞浆及胞膜 PKA的活性 ,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗 .MENK对 PKC影响呈双向反应 ,0 .1 μmol/L MENK可以升高胞浆 PKC活性 ,但却明显降低胞膜 PKC活性 ;在 MENK浓度为 1 0μmol/L时则情况刚好相反 .1 μmol/L的 MENK可明显降低胞浆及胞膜 PKC活性 ,抗体可拮抗这种下调作用 .MENK可降低细胞内 IP3 的含量 ,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗 .由此可以推论 :MENK在与 δ阿片受体结合后 ,可以经过多种信号传导系统来调节细胞功能 ,从而产生不同的生物效应 .     

蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞中Ha-ras基因表达的影响

运用基因转染技术,将蛋白激酶C(PKCα)cDNA正向插入的真核表达重组质粒pXJ41-PKCα,导入人正常肝细胞（L-02）,经蛋白质免疫印迹等检验,表明成功构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型（LT3）,用LT3和表达反义PKCα的人肝癌细胞HT6为细胞模型,通过RT-PCR,蛋白质印迹(Western blot)等分析和进一步运用自行构建的真核表达质粒prasGL3,进行荧光素酶活性检测表明：过表达PKCα可以促进L-02细胞的增殖速率,并引起Ha-ras基因转录水平上升和Ha-ras启动子活性升高;反之,表达反义PKCα的BEL-7402细胞增殖被抑制,Ha-ras基因转录水平下降,Ha-ras启动子活性降低.通过实验我们首次观察到,PKCα亚类对Ha-ras癌基因表达的影响与其对Ha-ras启动子活性的作用有关,PKCα可能参与了对Ha-ras基因表达的调控.     

豚鼠精子信号通路的研究

钙调素(CaM)拮抗剂三氟拉嗪(TFP)在10~100 μmol/L浓度范围内对豚鼠精子获能和顶体反应具有极显著的促进作用,且不依赖于外源Ca²⁺的存在.Forskolin,dbcAMP和咖啡因对非同步培养系统获能早期豚鼠精子的顶体反应有显著的促进作用,但对同步培养系统获能早期精子的顶体反应无显著影响.若在同步培养系统获能培养较长时间(15h)使精子获能,则这3种药物对顶体反应均具有显著的促进作用,且不依赖外源Ca²⁺的存在.蛋白激酶C(PKC)激活剂PMA和PDB对获能前期豚鼠精子的顶体反应无显著影响,但对获能精子的顶体反应有显著的促进作用,且这种促进作用也不依赖于外源Ca²⁺的存在.相反,PKC抑制剂stau-rosporine对顶体反应有显著的抑制作用.     

蛋白激酶C蛋白质抑制剂对细胞增殖的影响

在生物体内许多不同组织细胞中陆续发现存在有蛋白激酶C(PKC)的内源性蛋白质类抑制剂.应用某些PKC抑制剂所作的研究结果表明,PKC抑制剂能够促进神经母细胞瘤细胞的分化,促进脑损伤后轴突的再生和功能的恢复,抑制细胞的生长,特别是对癌细胞的生长抑制和细胞毒性尤为明显,而在精子中发现的PKC抑制剂可能在受精或受精卵发育过程中起某种十分重要的作用.     

ACh对人垂体腺瘤细胞内蛋白激酶C、胞内游离钙及cAMP/cGMP的影响

我们曾发现ACh可明显地抑制垂体腺瘤细胞的增殖代谢,为深入探讨ACh抑制垂体腺瘤细胞增殖作用的机制,观察了ACh作用后垂体腺瘤细胞内蛋白激酶C(PKC)、[Ca^2 ]i及cAMP／cGMP的变化。结果发现：(1)与空白处理组相比,使用PKC的激动剂PMA处理培养的人垂体腺瘤细胞时可使胞浆、胞膜和细胞总PKC活性浓度均升高,但ACh(10μmol/L)作用15min后,胞浆、胞膜和细胞总PKC活性均下降,且此作用可被阿托品阻断;(2)ACh(10μmol/L)作用于单个人垂体腺瘤细胞后,立即使垂体腺瘤细胞[Ca^2 ]i相对水平降低,但此作用可被阿托品阻断;(3)ACh作用于人垂体腺瘤细胞15min后,胞内cAMP水平均明显升高,而cGMP没有改变。该结果为探讨ACh抑制垂体腺瘤细胞增殖的分子机制提供了重要线索,同时提示,ACh对垂体瘤细胞增殖分化的调控作用是细胞内多信息系统相互整合的结果。     

蛋白激酶C对血管内皮细胞锚蛋白、CD44表达及亚细胞分布的影响

通过外源性底物对[γ-32P]-ATP的摄入量来测定豆蔻酰佛波醇乙酯(phorbol-myristate-acetate,PMA)处理后的人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)膜蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)的活性;利用间接免疫荧光标记和Western印迹方法分析蛋白激酶C活性对锚蛋白及CD44的亚细胞分布及蛋白质表达的影响。结果发现HUVECs的锚蛋白及CD44表达水平趋势与PKC活性变化相吻合;PKC活化导致CD44在细胞膜上呈聚集状,而锚蛋白则移位并聚集于CD44处;PKC抑制剂能抑制PKC活化所带来的上述作用。结果表明PKC活化通过磷酸化作用能上调锚蛋白及CD44表达,并同时导致二者发生一致性运动及共分布。     

蛋白激酶C在晚期糖基化终产物促进人腹膜间皮细胞分泌纤维连接蛋白中的作用

目的:观察晚期糖基化终末产物(AGEs)对人腹膜间皮细胞合成和分泌纤维连接蛋白(FN)的影响及细胞内蛋白激酶C(PKC)在其中的作用。方法:在体外制备晚期糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA),分别用不同浓度的(0,100,500,1 000μg/ml)AGE-HSA作用于人腹膜间皮细胞,用荧光实时定量PCR和ELISA方法测定人腹膜间皮细胞FN的表达;用ELISA方法观察AGEs对人腹膜间皮细胞PKC活性影响,应用PKC激活和抑制剂观察PKC在AGE-HSA促进人腹膜间皮细胞合成FN中的作用。结果:AGE-HSA呈时间剂量依赖性激活人腹膜间皮细胞中的PKC(P<0.05);AGE-HSA同时以时效和量效方式促进人腹膜间皮细胞中FN基因和蛋白的表达(P<0.05);PKC激活剂佛波酯(PMA)也能刺激人腹膜间皮细胞合成FN,先用PMA耗竭细胞内PKC或用PKC抑制剂calphostin C后,可抑制AGE-HSA诱导的FN分泌(P<0.05)。结论:AGEs可能部分通过活化PKC促进人腹膜间皮细胞合成和分泌FN,参与腹膜纤维化。     

青藤碱对家兔主动脉血管平滑肌细胞内游离钙浓度及蛋白激酶C的影响

观测青藤碱对培养家兔血管平滑肌细胞内游离钙浓度及正常和缺血缺氧刺激下蛋白激酶C（PKC）活性的影响。方法：Fura-2／AM作Ca^2＋指示剂,检测青藤碱对培养家兔主动脉血管平滑肌细胞静息Ca^2＋浓度及去甲肾上腺素,高K^＋,咖啡因刺激作用下的改变,并与钙拮抗剂维拉帕米进行对照研究;复制血管平滑肌细胞缺血缺氧模型,液闪仪测定PKC活性。结果：青藤碱剂量依赖性抑制高K^＋去极化引起[Ca^2＋]i升高,青藤碱10×10^-6mol.L^-1、3×10^-5mol.L^-1、10^-4mol.L^-1,对NE通过受体介导引起的[Ca^2＋]i增高也有明显抑制。但对静息状态下及咖啡因刺激的血管平滑肌细胞[Ca^2＋]i无明显影响。正常时,青藤碱处理后血管平滑肌细胞胞浆、胞膜PKC活性均升高;缺血缺氧状态下,胞浆PKC活性升高,但胞膜PKC活性降低,青藤碱处理后胞浆PKC活性下降,胞膜PKC活性上升。结论：青藤碱可能抑制血管平滑肌细胞电压依赖性钙通道和受体操纵性钙通道,降低细胞内游离钙水平。调节缺血缺氧条件下血管平滑肌细胞PKC活性。     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.