HoxB5基因在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用

目的 探讨高氧致慢性肺疾病（CLD）早产鼠肺组织HoxB5基因表达规律及其对肺发育的影响。方法 将80只早产鼠随机分为实验组及对照组,采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）等技术,测定肺组织HoxB5 mRNA水平,并同时观察放射状肺泡计数（RAC）的变化。结果 生后1、3d,两组HoxB5 mRNA水平及RAC差异无统计学意义（P〉0.05）,7d时两者均开始降低（P〈0.05）,14d继续下降,21d降至最低（P〈0.01）,且肺组织HoxB5 mRNA水平及RAC呈明显正相关（P〈0.01）。结论 暴露高氧中早产鼠肺组织HoxB5基因呈低表达状态,其表达水平与肺泡发育障碍程度相一致。     

HoxB5基因在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用

目的探讨高氧致慢性肺疾病(CLD)早产鼠肺组织HoxB5基因表达规律及其对肺发育的影响。方法将80只早产鼠随机分为实验组及对照组,采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术,测定肺组织HoxB5 mRNA水平,并同时观察放射状肺泡计数(RAC)的变化。结果生后1、3d,两组HoxB5 mRNA水平及RAC差异无统计学意义(P>0.05),7d时两者均开始降低(P<0.05),14d继续下降,21d降至最低(P<0.01),且肺组织HoxB5 mRNA水平及RAC呈明显正相关(P<0.01)。结论暴露高氧中早产鼠肺组织HoxB5基因呈低表达状态,其表达水平与肺泡发育障碍程度相一致。     

高氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织CDK4 p21的表达及意义

目的：早产儿慢性肺疾病（CLD）的发病机制目前研究还不十分清楚,但CLD的最终病理变化与肺细胞增殖有关。该文采用高氧诱导早产鼠CLD模型为对象,探讨CDK4和p21基因动态表达与肺细胞增殖调控的关系。方法：高浓度氧致早产鼠CLD模型（实验组）和正常对照组各40例为研究对象,每组分别于实验后的1,3,7,14和21 d随机选取8只大鼠处死, 取出肺组织,常规制成5 μm切片。检测观察：①肺组织形态学;②肺组织纤维化评分;③采用免疫组化检测肺组织内PCNA表达;④采用原位杂交检测肺组织CDK4 mRNA和p21 mRNA的表达。结果：两组肺组织细胞PCNA指数：与对照组比较,实验组1 d,3 d PCNA表达均减弱（P﹤0.05）,7 d开始表达增强（P＜0.01）, 14 d和21 d明显高于对照组（P＜0.01）。两组肺组织细胞CDK4 mRNA表达强度： 从7 d开始实验组高于对照组（P﹤0.05）, 14 d,21 d明显高于对照组（P﹤0.01）。两组肺组织细胞p21 mRNA表达强度：实验组1 d,3 d表达明显高于对照组（P﹤0.01）, 7 d 后持续下降, 但也高于对照组（P﹤0.05）。7~21 d肺组织细胞CDK4 mRNA,p21 mRNA 表达分别与PCNA呈显著正、负相关（r分别为0.83和-0.81,P﹤0.05）。结论：高氧可诱导早产鼠肺细胞增殖。肺组织细胞CDK4基因的过度表达、p21基因的表达下降,可能是高氧诱导肺细胞增殖的机制之一。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：595-600］     

高体积分数氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织Foxa2的表达及其意义

目的 研究Foxa2在高体积分数氧(高氧)致慢性肺疾病早产鼠肺组织中的表达及意义.方法 将60只新生早产Wistar大鼠依据吸氧体积分数(FiO2)随机分为实验组(FiO2为950 mL·L-1)和对照组(FiO2为210 mL·L-1),每组30只,雌雄不限.每组分别于实验后的1 d、3 d、7 d随机选取10只早产鼠麻醉后处死,取材.光镜下观察肺组织病理改变,并对肺纤维化程度进行双盲评分;采用免疫组织化学法检测不同时间点大鼠肺组织Foxa2的表达.结果 1 d、3 d、7 d,对照组早产鼠肺组织发育逐渐成熟,肺泡结构逐渐规整,大小均匀,肺泡间隔变薄;实验组早产鼠肺组织逐渐出现肺泡间隔少而厚、少许炎性细胞渗出、部分肺间质纤维化.实验组1 d肺组织纤维化评分与对照组无明显变化,3 d、7 d肺组织纤维化评分明显高于对照组;肺组织Foxa2表达明显低于对照组,其与纤维化评分呈负相关(r=-0.70,P<0.05).结论 高氧可抑制早产鼠肺组织Foxa2表达,其异常表达可能导致肺组织发育受阻,进而发生肺损伤.     

高氧对早产鼠肺表面活性物质及其蛋白基因表达的影响

肺表面活性物质 (ＰＳ)是由磷酯和肺表面活性物质蛋白(ＳＰ)组成 ,虽然磷脂对ＰＳ功能致关重要 ,但只有在ＳＰ同时存在时 ,才能有效发挥其降低表面张力的生理功能[1 ] 。本研究利用高氧早产鼠肺损伤模型 ,探讨了高氧对ＰＳ代谢和ＳＰ基因表达的影响。材料及方法1.高氧暴露实验 :高氧暴露实验的详细过程按参考文献 [2 ]介绍的方法进行。动物于高氧暴露 7ｄ后处死 ,采用双相薄层层析法 (2Ｄ ＴＬＣ)进行了肺组织总磷酯 (ＴＰＬ)、卵磷酯 (ＰＣ)、溶血卵磷酯 (ＬＰＣ)、鞘磷酯 (ＳＰＨ)、磷酯酰甘油 (ＰＧ)、磷酯酰氨酸 (ＰＳ)、磷酯酰肌醇 (Ｐ…     

慢性肺疾病早产鼠转化生长因子β1基因和蛋白动态表达及其对肺发育的抑制作用

转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是一重要的生长调节因子,因其在组织发生、发育及损伤后修复过程中作用,已成为当今研究的热点因子之一。而有关早产儿慢性肺疾病(chronic lung disease,CLD)发生中,TGF-β1基因及蛋白表达的变化规律及其对肺形态发育的影响,至今报道甚少。2003年6月-12月,我们以高浓度氧诱导早产鼠CLD模型为对象,动态观察和评价肺组织形态发育,     

高氧致新生鼠慢性肺疾病HoxB5 SPC AQP5表达及其意义

目的：肺泡上皮损伤是慢性肺疾病（CLD）主要病理改变之一,HoxB5基因是在肺发育过程中表达强烈的基因之一。该文探讨高浓度氧致新生鼠肺损伤时肺泡上皮损伤及修复能力,研究HoxB5在这一损伤中的动态表达规律及其与前者的关系。方法：建立高氧诱导新生鼠CLD模型, 80只早产鼠被随机分为实验组及对照组,分别应用免疫组化及RT-PCR技术测定肺组织HoxB5,SPC,AQP5蛋白及mRNA表达。结果：实验组肺组织HoxB5表达7 d后逐渐减少;高氧肺损伤SPC 3 d表达明显减少,7 d后开始增多,14 d、21 d明显高于对照组;而AQP5随着肺损伤加重表达量进行性下降。结论：高氧肺损伤新生鼠肺泡上皮细胞损伤明显,根据SPC,AQP5表达结果提示I型肺泡上皮细胞（AECI）损伤更甚且未得到正常修复,II型肺泡上皮细胞（AECII）虽然数量有所增加但其分化转化能力明显下降,而 HoxB5表达量减少可能致使大量的AECII失去了分化为AECI的功能。［中国当代儿科杂志,2009,11（1）：51-55］     

高浓度氧对早产鼠肺一氧化氮合酶表达的影响

目的：明确高浓度氧对早产大鼠肺一氧化氮(nitric oxide, NO)合成及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)表达的影响,以探讨内源性NO在新生儿高氧肺损伤中的作用。方法：3日龄早产鼠随机分为空气组和高氧组,检测实验3 d及7 d时两组肺湿重/干重比值(W/D),肺组织病理学改变,支气管肺泡灌洗液中NO含量及诱导型NOS(iNOS),内皮细胞型NOS(eNOS)在肺内的分布和表达(免疫组织化学方法)。结果：3 d时高氧组表现为急性肺损伤：充血、出血、炎性渗出;7 d时,W/D值高于空气组(5.54±0.41) vs (5.00±0.15),(P<0.05),病理改变依然明显。与空气组相比,暴露3 d及7 d时,高氧组灌洗液中的NO含量(17.06±5.86)和(23.75±4.07) μmol/L较空气组(5.59±2.03)和(7.93±2.33) μmol/L明显上升(P均<0.01)。高氧组肺气道和肺泡上皮细胞、炎症细胞iNOS表达强阳性,强度高于空气组(P<0.01),且高氧7 d组高于3 d组(P<0.01)。与空气组比较,7 d时高氧组气道上皮细胞eNOS表达增加(P<0.05)。结论：高氧可上调早产大鼠肺炎症细胞、上皮细胞NOS的表达,促进NO合成,提示内源性NO介导参与了高氧诱导的肺损伤。     

细胞色素氧化酶mRNA在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达变化

目的观察85％高浓度氧（高氧）暴露下早产新生大鼠肺组织的病理改变及线粒体DNA编码细胞色素氧化酶亚基（COXI、COXII、COXIII）mRNA表达的动态变化，探讨其在早产大鼠高氧肺损伤发生、发展中的可能作用。方法早产SD大鼠生后1d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于85％氧气中，空气组置于同一室内常压空气中。两组分别于暴露满1、4、7、10和14d时，每组取动物8只，行肺组织病理学检查，半定量逆转录聚合酶链反应测定COXI、COXII和COXIIImRNA的表达。结果（1）高氧暴露4d即可见肺泡炎和肺发育滞后的改变。（2）与同时问点空气组相比，高氧暴露1d和4d时，COXImRNA的表达显著增强（P〈0．05和P〈0．01），其后开始下降，7d时两组差异无显著性（P〉0．05），10d时较空气组显著降低（P〈0．01），14d时复又增高，且明显高于空气组，差异有非常显著性（P〈0．01）。COXII和COXIIImRNA在各时间点的表达差异无显著性。结论85％高氧暴露诱导早产新生大鼠肺组织线粒体DNA编码COX亚基异常表达，这种变化可能参与了高氧肺损伤的发生。     

高氧暴露对早产大鼠肺组织中HO-1与iNOS表达的影响

目的：探讨血红素加氧酶-1（HO-1）与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在高氧肺损伤大鼠中的表达及作用。方法：将3日龄早产Sprague-Dawley大鼠64只随机分为高氧组、空气组（每组32只）,于实验 3 d及 7 d时,分别检测空气组和高氧组肺组织 HO-1活性、肺泡灌洗液中 NO、肺组织病理学改变及 HO-1、iNOS 在肺内的分布和表达(免疫组织化学方法)。结果：3 d、7 d高氧组存在明显急性肺炎症性改变,iNOS 在中性粒细胞的表达、灌洗液中 NO 含量明显高于空气组 (P均<0.01),且7 d高氧组高于3 d高氧组(P<0.05);3 d、7 d 时高氧组巨噬细胞 HO-1 表达高于空气组(分别P<0.05,P<0.01),且7 d高氧组显著高于3 d高氧组(P<0.01) 。结论：HO-1 与 iNOS在高氧肺损伤大鼠中的表达是增高的,HO-1 与 iNOS 均可能参与了高氧肺损伤。     

结缔组织生长因子在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用

目的：肺纤维化是高氧致慢性肺疾病(chroniclungdiseases,CLD)的最终结局,结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)是近年来发现的与纤维化形成密切相关的因子,但其在CLD肺纤维化中的作用目前尚未见报道。该实验旨在研究CTGF在高氧致CLD中的动态表达规律,并探讨其在CLD中的作用。方法：将50例早产鼠随机分为实验组(高氧组)和对照组(空气组),分别于建立模型后1,3,7,14,21d应用免疫组化技术动态检测肺组织中CTGF的表达部位和强度,对肺组织纤维化程度进行病理组织学评分。结果：对照组小鼠CTGF仅在血管内皮细胞、支气管、细支气管上皮细胞有微弱表达;实验组于建立模型后1,3,7d表达部位与对照组相似,表达强度与对照组无差异(P>0.05),14d表达增强(P<0.01),在部分肺上皮细胞、肺泡间隔、成纤维细胞中出现表达,21d表达明显增强(P<0.01)。高氧组14d和21dCTGF表达水平与肺组织纤维化程度呈明显正相关(分别为r=0.903,r=0.926,均P<0.01)。结论：随着高氧暴露时间的延长和纤维化的发展,CTGF表达增强,其与高氧所致CLD肺纤维化的发生密切相关。     

硫氧还蛋白及其还原酶在新生鼠高氧肺损伤中的表达

目的 研究硫氧还蛋白(Trx)及其还原酶(TR)在早产新生鼠高氧肺损伤的肺组织中的表达变化及意义.方法 早产新生SD大鼠,生后第一天随机分为空气组和高氧组.每组64只.两组分别于高氧或空气暴露后第4、7、10、14天提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx和TR mRNA表达;同时采用HE染色观察肺组织病理学变化,并进行辐射状肺泡计数(RAC).结果 病理学观察显示:与对照组比较,高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后,同时RAC值亦较空气组显著减少(P＜0.05).高氧暴露各组Trx、TR mRNA表达较空气组均明显增强(P＜0.05),且二者表达强度分别于第10天和第7天达高峰.结论 高氧上调肺组织Trx、TR表达;肺组织Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病过程中发挥重要保护作用.     

高氧诱导早产鼠肺纤维化中结缔组织生长因子的表达及其意义

目的：结缔组织生长因子（CTGF）是新近发现与纤维化发生密切相关的一种因子，但其与早产儿慢性肺疾病（CLD）的肺纤维化有何关系，迄今未见报道。该文旨在阐明CTGF在高氧致早产鼠CLD发生、发展的表达规律，并探讨其在纤维化中表达及意义。方法：采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型，应用酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫组织化学及反转录聚合酶链反应（RT-PCR）等技术，动态观察CTGF mRNA表达，并同时测定肺成纤维细胞的增殖性细胞核抗原（PCNA）指数及肺组织 Ⅰ 型胶原的含量和TGF-β1蛋白表达水平。结果：生后1 d，3 d，两组 Ⅰ 型胶原、PCNA指数、TGF-β1蛋白及CTGF mRNA表达水平无差异（P>0.05）；实验组肺组织TGF-β1蛋白表达7 d升高（P<0.05），Ⅰ 型胶原、PCNA指数及CTGF mRNA表达14 d升高（P<0.05），21 d均达高峰（P<0.01）；肺组织CTGF mRNA表达与 Ⅰ 型胶原呈明显正相关（γ=0.89, P<0.01）。结论： 高氧致CLD早产鼠肺组织CTGF mRNA表达水平与肺组织纤维化的程度相一致，CTGF与CLD的肺纤维化密切相关。［中国当代儿科杂志，2007，9（5）：449-452］     

p38丝裂素活化蛋白激酶在新生大鼠高氧肺损伤中的作用

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）在新生大鼠高氧肺损伤中的表达及其特异性抑制剂SB203580，对其产生保护作用的机制。方法 160只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤＋SB203580组和高氧肺损伤＋生理盐水组，建立模型。作用12、24、72h和1周后，分别处死大鼠。取右上肺进行肺组织病理学检查，取右下肺进行肺湿／干重比值（W／D）测定，取左肺以Western免疫印迹法检测肺组织中p38MAPK的表达，以酶联免疫吸附试验检测肺组织中TGF-β1的含量。结果 72h时，高氧肺损伤组和高氧肺损伤＋生理盐水组p38MAPK呈强阳性表达；在这两组中，肺组织TGF-β1浓度随时间延长呈持续上升趋势，在各时相点均明显高于空气对照组和高氧肺损伤＋SB203580组（P均〈0．01）。结论 p38MAPK参与了新生大鼠高氧肺损伤的过程，SB203580能够通过阻断p38MAPK表达，进而抑制TGF-β1表达来减轻这种损伤。     

p38丝裂素活化蛋白激酶在新生大鼠高氧肺损伤中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)在新生大鼠高氧肺损伤中的表达及其特异性抑制剂SB203580,对其产生保护作用的机制。方法160只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤 SB203580组和高氧肺损伤 生理盐水组,建立模型。作用12、24、72h和1周后,分别处死大鼠。取右上肺进行肺组织病理学检查,取右下肺进行肺湿/干重比值(W/D)测定,取左肺以Western免疫印迹法检测肺组织中p38MAPK的表达,以酶联免疫吸附试验检测肺组织中TGF-β1的含量。结果72h时,高氧肺损伤组和高氧肺损伤 生理盐水组p38MAPK呈强阳性表达;在这两组中,肺组织TGF-β1浓度随时间延长呈持续上升趋势,在各时相点均明显高于空气对照组和高氧肺损伤 SB203580组(P均<0.01)。结论p38MAPK参与了新生大鼠高氧肺损伤的过程,SB203580能够通过阻断p38MAPK表达,进而抑制TGF-β1表达来减轻这种损伤。     

维甲酸、血小板衍生生长因子对早产新生大鼠高浓度氧肺损伤的影响

目的观察维甲酸（RA）和血小板衍生生长因子（PDGF）对高浓度氧（简称高氧）抑制早产新生大鼠肺发育的影响，探讨其作用机制。方法1日龄早产SD大鼠随机分为：空气＋生理盐水组（Ⅰ组）、高氧＋生理盐水组（Ⅱ组）、空气＋RA组（Ⅲ组）、高氧＋RA组（Ⅳ组）。Ⅱ、Ⅳ组持续暴露于85％氧气中。Ⅲ、Ⅳ组每目腹腔注射RA500μg／kg，Ⅰ、Ⅱ组注射相同剂量的生理盐水。应用RT—PCR和免疫组织化学法检测各时间点（生后4、7、10、14及21d）各组大鼠肺组织PDGFmRNA和蛋白表达水平。结果随日龄的增加，PDGF—A、-B mRNA及蛋白表达发生不同的变化。与Ⅰ组比较，高氧暴露下PDGF-B mRNA和蛋白表达显著增高（P〈0．05），但PDGF-A mRNA及蛋白表达却显著降低（P〈0．05）。RA上调PDGF—A mRNA及蛋白表达（P〈0．05），但对PDGF—B mRNA及蛋白表达作用不显著（P〉0．05）。结论高氧暴露下，PDGF—AmRNA及蛋白表达受抑，PDGF—BmRNA及蛋白表达增强。PDGF-A、-B共同参与了高氧暴露下肺组织损伤过程。RA上调PDGF—AmRNA及蛋白表达，能部分逆转高氧引起的肺损伤。