二步培养和AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响

以甘蓝型油菜（Brassica napus L．）品种浙双758为材料,研究二步培养及添加AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴外植体离体再生的影响。外植体先在含0．5—1．5mg／L2,4-D的MS培养基上预培养3d或7d诱导愈伤组织的产生,再转到含有3mg／LBA和0．15mg／LNAA及添加或不添加2．5mg／LAgNO3的分化培养基上诱导芽的分化。结果表明,外植体愈伤组织诱导率和芽再生率与2,4-D浓度、预培养时间和AgNO3密切相关;分化培养基中添加银离子可显著增加不定芽的再生频率;二步培养及添加AgNO3可使半子叶、完整子叶和下胚轴外植体芽再生频率分别达到了96．1％,96．7％和96．7％。     

提高雨生红球藻细胞密度发酵工艺的优化研究

雨生红球藻细胞培养密度对于虾青素高含量具有重要影响。通过单因素试验考察碳源乙酸钠、pH值、接种量等因素的影响;对发酵工艺的培养时间、碳源乙酸钠含量、初始pH值和接种量4个因素采用L9（34）正交法进行优化试验;对培养基中 4种植物激素 3-吲哚丁酸 （3-indolebutyric acid,3-IBA）、2,4-二氯苯氧乙酸 （2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D）、萘乙酸（1-naphthylacetic acid,NAA）、6-苄氨基嘌呤（6-benzyl aminopurine,6-BA）的添加量进行优化试验。试验结果表明：优化后的发酵工艺为培养时间11 d、接种量30%、初始pH7.5、乙酸钠添加量10 mmol/L,添加植物激素可以提高细胞密度,激素 3-IBA、2,4-D、NAA、6-BA 的最优添加量分别为 0.5、0.1、0.01、0.1 mg/L。优化后雨生红球藻的细胞密度可达1.17×106个/mL,比优化之前提高28倍。     

大肠杆菌E811产苯丙氨酸转氨酶培养基的优化

通过正交试验，确定了大肠杆菌E881产酶的最佳培养基为：葡萄糖（1．5％）酵母膏（1％）KH2PO4（0．3％）（NH4）2SO4（0．2％）。以此培养基培养出来的游离细胞为酶源，在底物浓度为0.2mol/L时进行转氨反应，反应6h，底物摩尔转化率达到90％以上。     

The Fermentation Technology Optimization of the High SAM Producing Baker＇s Yeast

对摇瓶发酵生产富含S-腺苷甲硫氨酸的面包酵母的培养条件和培养基成分进行了优化,单因子实验结果表明,发酵最适pH值为5．0,最适装液量为70／250mL,最佳接种量为2％。正交优化实验结果表明,最佳培养基成分为12°Brix糖蜜,另加酵母粉6．667g／L,（NH4）2SO4 2．829g／L,MgS040．2g／L,ZnSO4 0．1g／L,KH2P041g／L,在该条件下,S-腺苷甲硫氨酸产量为14．26mg／L,含量为1．64mg／g,分别提高了76．5％和84．3％。     

苦瓜愈伤组织的诱导及培养条件优化

利用不同的激素配比,对苦瓜幼苗的各个器官进行愈伤组织诱导,比较其生长情况。通过实验得出,IAA与6-BA搭配比2,4-D与6-BA搭配对苦瓜愈伤组织的诱导及生长要好。当6-BA质量浓度较高（4 mg/L）时,利于苦瓜愈伤组织的诱导。在优化培养条件时,在MS培养基的基础上添加103.125 mg/L的硝酸铵,100 mg/L的水解酪蛋白,蔗糖质量浓度为30 g/L,激素质量浓度为0.5 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L 2,4-D时,可使苦瓜愈伤组织快速增殖。     

尿苷菌种选育及发酵条件优化

以野生型枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）TJ374为出发菌株,根据代控制发酵原理,采用DES（硫酸二乙酯）及UV（紫外）诱变处理,定向选育出一株尿苷产生菌Tc142（2TU。＋6AU％UP^-）,在培养基未经优化的情况下产尿苷2．3-2．4g／L。同时,考察了培养基对菌株产苷的影响,在优化的培养基中发酵积累尿苷3．4g／L,最高可产尿苷3．6g／L。     

响应面法优化谷胱甘肽发酵生产培养基的研究

本研究以酿酒酵母变异株为出发菌株,利用Box—Benhnken中心组合设计和响应面法对该菌株产谷胱甘肽的培养基组成进行优化。实验结果表明：在10°Be’麦芽汁中添加38g／L葡萄糖、6．3g／L（NH4）2SO4及1．9g／L L-半胱氨酸盐酸盐时,谷胱甘肽产量达到120mg／L,生物量达到11．02g／L,比优化前分别提高了71．36％、39．67％。     

响应面法优化玉米生产酵母培养基

利用响应面法优化了玉米生产酵母的培养基,最佳培养基组成为：硫酸铵3.1128g/L,磷酸氢二钾1.51g/L,硫酸镁0.0976g/L,其最佳质量比（NH4）2SO4∶KH2PO4∶MgSO4·7H2O=2∶1∶0.1。且在此条件下进行发酵试验,酵母的细胞浓度达到了38.103g/L,比优化前提高了14.3%。     

霍山石斛原球茎液体培养条件的优化

为采用霍山石斛原球茎为原料，开发出高级保健型清音润喉饮品，本文以液体悬浮培养研究原球茎最适生长条件的优化。在单因素实验的基础上，选择了马铃薯汁、香蕉汁、NAA、IBA作四因素二水平正交试验，试验表明：（1）液体条件下霍山石斛原球茎适宜的基本培养基是1／2MS；（2）1／2MS培养基添加马铃薯汁100g／L、香蕉汁30g／L、IBA1．0mg／L组合，含蔗糖30g／L时，原球茎增殖倍数最大。正交试验结果验证显示：原球茎在40天内的增殖倍数可达12．56倍，多糖含量达8．30mg／g（鲜重）。     

紫薯愈伤组织诱导和培养条件优化及绿原酸类化合物的积累

以紫薯叶片为外植体,通过筛选培养基和培养条件建立了紫薯愈伤组织培养体系。研究6-苄基氨基嘌呤(6-BA)及萘乙酸(NAA)不同浓度组合对紫薯愈伤组织诱导的影响,之后分别考察基础培养基MS、1/2MS、B5、WPM、White及NAA、6-BA、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)三种激素对紫薯愈伤组织继代生长的影响。确定最适基础培养基后,对激素进行单因素实验后再做正交实验。结果表明1/2MS基本培养基中添加1.5 mg/L 6-BA和0.4 mg/L NAA适合紫薯愈伤组织诱导,诱导率为81.82%。MS为优选基础培养基,通过正交实验优化的激素配比组合为1.0 mg/L NAA,0.4 mg/L 6-BA,1.0 mg/L 2,4-D。最佳继代培养基为MS+1.0 mg/L NAA+0.4 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+6 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,此优化激素条件下愈伤组织的生物量增长倍数为23.46倍,3-咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰宁酸、4,5-二咖啡酰宁酸三种绿原酸类化合物含量分别为0.30%、1.91%、1.10%,三者总含量3.31%,因此,通过紫薯愈伤组织培养生产绿原酸类化合物是可行的。     

野葛细胞固定化培养及异黄酮化合物的生产

以海藻酸钠固定化处理的野葛细胞为试材,研究了固定化细胞培养周期中细胞生长、糖源消耗和异黄酮含量的变化。结果表明,野葛细胞生长曲线呈“S”形,可分为3个主要阶段,即迟滞期(0~8 d)、指数生长期(8~14 d)和稳定增长期(14~18 d)。在培养的第18天达到最大生物量(48.56 g(FW)/L),约为初始接种量的3.04倍。同时,糖源随细胞生长量的增加而不断消耗。在野葛细胞培养周期中,固定化细胞胞内黄酮和培养液黄酮逐渐累积,培养体系中的总黄酮含量与细胞生长量呈同步增长的关系,第16天,总黄酮含量约为初始培养时的17.28倍。试验结果为采用野葛细胞固定化培养的方法进行异黄酮化合物的生产提供了实验依据。     

不同培养条件对银杏愈伤组织生长及黄酮含量的影响

以胚为外植体,通过固体培养,研究了培养基,激素和光照对银杏愈伤组织诱导的影响,以及继代培养中激1素和活性炭对愈伤组织生长和产黄酮的影响,结果表明:愈伤组织的诱导的最佳条件为DCR培养基+1.0mg/L2,4-D+0.5mg/LBA+完全暗条件培养。继代培养过程中既能促进愈伤组织生长又使黄酮含量最高的处理为0.3mg/LBA+2.0mg/L2,4-D,活性炭抑制愈伤组织生长但能促进黄酮的积累。     

培养条件对紫苏下胚轴外植体再生的影响

以紫苏下胚轴为材料,研究紫苏外植体芽再生的影响因素。结果表明：苗龄、黑暗时间、激素浓度及配比对紫苏芽再生均有较大影响。取13d苗龄的下胚轴先在分化培养基（MS＋3.0mg/L BA＋0.3mg/L NAA）黑暗预培养8d后转为14h/d光照条件培养可获得较高的再生频率。诱导芽苗生根最佳培养基为1/2MS＋1.0mg/L BA＋0.3mg/L IAA。     

促进黄丝藻储能物质高效富集的氮调控策略

为了促进黄丝藻胞内储能物质的高效积累，研究了不同氮形态(NO^-₃、Urea和NH⁺₄)及初始氮浓度(1、3、6、9、18 mmol/L)对黄丝藻生长、碳水化合物和总脂积累的影响，在此基础上建立了基于氮调控促进黄丝藻生物量和储能物质同步高效积累的“低氮(初始氮浓度3 mmol/L)转高氮(初始氮浓度18 mmol/L)”两步法培养策略，并对两步法培养策略的培养时间进行优化。结果表明：与Urea和NH⁺₄比较，黄丝藻更倾向于利用NO^-₃,分别在3 mmol/L和18 mmol/L条件下获得最高生物量(3.69 g/L)和总脂含量(57.3%);在“低氮转高氮”两步法培养中，低氮培养时间6 d转高氮培养12 d可显著提高黄丝藻胞内储能物质的积累，储能物质产率最高，达到274.26 mg/(L·d),其中生物量、总脂产率和碳水化合物产率分别为6.37 g/L、152.92 mg/(L·d)和121.35 mg/(L·d)...     

Screening and characterization of bacteria that can utilize ammonium and nitrate ions simultaneously under controlled cultural conditions

Eighteen bacterial stock cultures were examined for their ability to utilize NH(4)(+) and NO(3)(-) simultaneously in a medium containing NH(4)NO(3) with shaking using a test tube capped with a cotton stopper. Pseudomonas aeruginosa NBRC 12689 utilized 1 mg/ml of NH(4)NO(3) most rapidly of the cultures tested. The bacterium could completely utilize 5 mg/ml of NH(4)NO(3) within 3 d, 6 mg/ml of NH(4)Cl within 3 d, and 20 mg/ml of NaNO(3) within 2 d under optimum conditions. The addition of Fe(2+) to the NH(4)NO(3) medium markedly promoted the utilization of the two ions. When the Pseudomonas strain utilized 5 mg/ml of NH(4)NO(3) completely, the total nitrogen in the culture including its cells decreased to 41% of that of the NH(4)NO(3) originally provided. GC-MS analysis showed that the removed nitrogen was probably denitrified. When the bacterium was incubated in the NH(4)NO(3) medium with shaking in a vial sealed with a rubber stopper, N(2) accumulated, but not N(2)O at the final phase of cultivation. On the other hand, both N(2) and N(2)O were detected in the NaNO(3) medium. We concluded that the bacterium removed NH(4)(+) from NH(4)NO(3) as a nitrogen source for its cell components, together with the denitrification of NO(3)(-) under controlled shaking conditions. In addition, NH(4)(+) promoted the cell growth of the bacterium and denitrification to N(2), preventing the accumulation of N(2)O.     

L-精氨酸高产菌株的亚硝基胍诱变选育和种子培养基的优化研究

为了筛选L-精氨酸的高产菌株,采用亚硝基胍对出发菌株A TCC 14067 （Brevibacterium flavum）进行诱变,结合抗精氨酸结构类似物D-精氨酸,S-甲基半胱氨酸平板抗性筛选高产菌株,并采用正交试验优化了种子培养基.结果显示,经过1 mg/mL的亚硝基胍诱变处理4min后,采用14 mg/mL的D-精氨酸抗性平板和8mg/mL的S-甲基半胱氨酸抗性平板筛选获得精氨酸高产菌株,由于解除精氨酸自身的反馈调节,L-精氨酸积累增大,产酸量达37.2 g/L,比野生菌株提高了128.2％,得到的高产菌株遗传性状稳定.通过对种子培养基进行正交试验优化,确定最终培养基配方为葡萄糖3.0％,玉米浆2.0％,硫酸铵2.0％,KH2PO4 0.10％,MgSO4·7H2O 0.05％,尿素0.15％,在此发酵条件下,L-精氨酸产量达37.8 g/L.     

碳素营养对剑麻蛋白酶组培诱导的研究

以LS培养基,分别添加蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和可溶性淀粉四种碳源,各1％、2％、3％和4％四种浓度,附加2,4—D 3mg/L,6—BA2.5mg/L,NAA 0.4mg/L,比较了不同种类及浓度的碳素营养对剑麻愈伤组织细胞生长和蛋白酶诱导的影响。结果表明:(1)蔗糖和葡萄糖有利于剑麻愈伤组织细胞生长和蛋白酶活力提高;(2)低浓度的碳源培养有利于愈伤组织细胞快速生长,而高浓度的碳源培养有利于剑麻蛋白酶活力提高。在4％的蔗糖培养条件下筛选出一株蛋白酶活力比外植体高34.38％的细胞株。     

酒精酵母的复合诱变与甜高梁秆汁培养基的优化

以甜高粱秆汁为基本原料,采用UV和DES复合诱变后获得酵母菌株FUD-3,再通过响应面法优化培养基中的营养因子CO(NH2)2、MgSO4、KH2PO4、CaCl2和FeCl3,提高了酒精的得率.结果表明:用驯化的方法使酒精酵母耐糖能力提高,通过UV与DES复合诱变的方式进行酵母的选育,以提高其产率.采取响应面法对发酵培养基进行优化,得到各因素的最佳质量浓度CO(NH2)2、MgSO4、KH2PO4、CaCl2和FeCl3的添加量分别为4.8318g/L、1.3734g/L、4.8114g/L、5.8571g/L0.6962g/L.训育后的酵母F-1与经过复合诱变优化后的酵母FUD-3发酵相比:残糖由26.41g/L减到9.24g/L、酒精产率由80.28%提高为93.46%,酒精的产量79.29g/L增加为100.44g/L,提高了26.67%.     

甘蔗新品种桂糖48号的组织培养技术研究

甘蔗组织培养技术是加速繁殖新品种和加快新品种大面积推广的主要手段,不同品种的离体培养中其培养基中激素配比存在差异,因此筛选合适培养基是提高品种快繁效率的关键。本文以桂糖48号为材料,以MS基本培养基加外源激素浓度梯度进行试验处理设计,对品种的愈伤组织诱导、愈伤分化、试管苗增殖和生根阶段进行培养基筛选试验,以其筛选出最合适桂糖48号的培养基配方。试验结果表明:诱导愈伤组织培养基为MS+2,4-D 3.0 mg/L;愈伤组织分化培养基为MS+BA 1.0 mg/L;初代增殖培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA 0.5 g/L;继代培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1mg/L;生根培养基为1/2 MS+NAA 12 mg/L。在该培养基下,生根最好,苗绿,比较高,长势好,对加快甘蔗新品种桂糖48号在广西大面积推广起到积极的作用。     

类球红细菌产辅酶Q_(10)发酵工艺的优化

类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)是一类高产辅酶Q10的光合细菌,该研究对R.sphaeroides EIM-8产辅酶Q10的发酵条件和培养基进行了优化。采用单因素结合响应面设计优化后的培养基组成为:葡萄糖27.8 g/L、(NH4)2SO4 4.9 g/L、谷氨酸4.7 g/L、玉米浆粉2.5 g/L、MgSO49.5 g/L、FeSO41.5 g/L,NaCl 3.5 g/L,KH2PO44.0 g/L、辅液15.0 mL/L;通过单因素试验方法确定的培养条件为:pH 6.5、温度32℃、接种量10%、装液量40mL/250 mL,此条件下辅酶Q10产量可达128.9 mg/L,比优化前提高了89.0%。