脑缺血再灌注后白质损伤研究

目的 观察大鼠脑缺血再灌注后不同时间髓鞘和轴突损伤的病理变化,明确脑缺血后白质损伤情况.方法 利用线栓法制备雄性SD大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.将大鼠随机分为假手术组和缺血2 h再灌注6 h、12 h、1 d、3 d、7 d、14 d和21 d组,每组4只.于规定时间点处死大鼠取脑,行常规HE染色观察皮层区神经元病理变化,行Luxol fast blue-periodic acid Schiff(LFB-PAS)染色法标记大脑神经髓鞘,Bielschowsky银染法标记轴突,计算缺血侧与健侧髓鞘染色的积分吸光度(integrated optical densities,IODs)比值代表白质受损程度.结果 MCAO再灌注6 h皮层区即已出现细胞间质水肿,核深染、固缩,细胞变性坏死.随再灌注时间延长损伤加重,神经元进一步减少.再灌注14 d及21 d有大量胶质细胞增生.与假手术组比较,再灌注6 h时髓鞘染色IODs比值亦开始下降(P<0.01);12 h时有空洞形成,再灌注14 d髓鞘损伤达高峰,IODs比值降到最低,髓鞘脱失明显;21 d时髓鞘IODs比值与14 d比较差异无统计学意义(P>0.05).轴突变化规律与髓鞘基本相同.结论 脑白质对缺血同样敏感,在急性脑缺血早期即已存在白质损伤,并随再灌注时间延长逐渐加重,提示脑缺血后应及早对白质损伤进行干预.     

腺苷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后VEGF的表达

目的通过观察腺苷预处理后大鼠局灶性脑缺血再灌注区脑组织的病理结构、脑梗死面积及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨腺苷预处理诱导脑缺血耐受的可能作用机制。方法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型。60只SD大鼠随机分为3组:假手术组(F组)、缺血再灌注组(IR组)、腺苷预处理组(AP组),再按缺血再灌注后不同时间把各组随机分成4个亚组(每亚组5只大鼠)。通过TTC染色观察脑梗死体积,并应用免疫组化法检测各组大鼠脑组织VEGF的表达。结果 (1)TTC染色正常脑组织呈鲜红色,梗死区脑组织呈苍白色,并且随着再灌注时间的延长可见梗死区扩大,腺苷预处理组的脑梗死体积小于缺血再灌注组。(2)F组可见少量VEGF阳性表达,IR组和AP组在脑缺血再灌注后2 h开始出现VEGF阳性表达的细胞数量增多,24 h达到高峰,72 h下降,AP组在6 h、24 h VEGF阳性表达比IR组增强(P均<0.05),在72 h时AP组VEGF阳性表达较IR组减少(P<0.05)。结论腺苷预处理能够进一步增强大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后VEGF的表达;VEGF的表达增加可能是腺苷预处理诱导脑缺血耐受和产生神经保护作用的分子机制之一。     

高血压大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞DNA损伤修复的研究

目的 从DNA损伤和修复的角度探讨局灶性脑缺血再灌注后神经元凋亡的机制.方法 运用双肾双夹法建立肾血管性高血压大鼠模型,采用四血管法制备高血压大鼠全脑缺血再灌注模型,免疫组化法检测再灌注过程中鼠脑DNA损伤修复,蛋白XRCC1、TUNEL法检测凋亡.结果 与假手术组相比,脑缺血再灌注3h在缺血区皮质和海马CA1区XRCC1表达出现显著减低,这种减低一直持续到缺血再灌注24h(P＜0.05);再灌注24h缺血区皮质和海马CA1区神经细胞发生了凋亡,神经细胞XRCC1的表达强度与凋亡呈负相关.结论 脑缺血再灌注早期神经细胞XRCC1表达的减少可能导致机体对此时出现的DNA单链断裂修复的能力下降,造成了再灌注后期发生了凋亡.     

脑缺血再灌注损伤机制研究进展

脑缺血一定时间恢复血液供应后，其功能不但未能恢复，却出现了更加严重的脑机能障碍，称之为脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury，CIR）。缺血再灌注损伤涉及极其复杂的病理生理过程，其中各个环节、各种影响因素间的相互作用尚未完全阐明。现对脑缺血再灌注损伤一些重要机制进行简述如下。     

褪黑素与脑缺血再灌注损伤

脑缺血再灌注损伤是一种全身性反应,其机制包括：氧自由基损伤、兴奋性氨基酸损伤、钙超载、炎性反应和细胞凋亡等方面。而褪黑素作为一种抗氧化剂对神经元损伤具有广泛的保护作用。本文结合脑缺血再灌注损伤的各个机制,对褪黑素的神经元保护作用作以简单的介绍。并对相关实验和研究给予系统性的回顾。     

成年中枢神经发生与脑缺血再灌注损伤

成年中枢神经发生是近十余年来神经生物学领域研究的热点。研究表明脑内成年中枢神经发生主要位于海马和侧脑室下带,这些脑组织内终生存在神经干细胞并在一定微环境下产生成年新生神经细胞。成年中枢神经发生的微环境主要包括细胞因子、激素、神经递质等。成年中枢神经发生形成的成年新生神经细胞有赖于感觉传入等因素才能存活、成熟。脑缺血再灌注不同时期及其所损伤的不同范围对成年中枢神经发生影响不同,缺血再灌注急性期（1～3d）成年中枢神经发生受抑制,此后成年中枢神经发生明显增强,参与脑重塑。成年中枢神经发生用于缺血性卒中的治疗具有一定前景。     

粘附分子在脑缺血再灌注损伤中的作用

随着对脑缺血再灌注损伤中白细胞作用的重视 ,人们从各个方面加强了对白细胞功能的研究。早期的动物试验表明 ,如能在脑卒中前使白细胞减少可改善缺血灶内的血流量。这一实验结果支持了减少缺血后白细胞粘附能阻止缺血部位的低灌注状态[1] 。1　粘附分子的分类与特性粘附分子 (ａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ ,ＡＭ )是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间粘附作用的膜表面糖蛋白。粘附分子主要分五大类 :即选择素家族 (ｓｅ ｌｅｃｔｉｎｆａｍｉｌｙ)、粘蛋白样家族 (ｍｕｃｉｎ ｌｉｋｅｆａｍｉｌｙ)、整合素家族 (ｉｎｔｅｇｒ…     

VEGF治疗脑缺血再灌注损伤的分子机制研究

目的 通过检测血管内皮生长因子（VEGF）治疗兔脑缺血再灌注损伤的有关分子表达情况,探讨其分子机制.方法 采用兔大脑中动脉阻塞（MCAO）2h再灌注72h模型,在再灌注即刻,应用微量进样器将VEGF立体定向导入梗死灶周,于再灌注72h断头取脑,应用免疫组化方法检测缺血半暗带区caspase-3和细胞外信号调节激酶1（estracellular signal-regulated kinase,ERK1）的表达情况.结果 VEGF治疗后缺血半暗带区caspase-3和ERK1表达明显减低.结论 VEGF可能通过抑制caspase-3和ERK1表达发挥治疗作用.     

脑缺血再灌注后免疫损伤分子机制研究进展

<正>随着分子生物学和分子免疫学的发展逐步深入,大量研究表明,急性炎症反应所造成的免疫损伤在继发性脑损伤中起着越来越重要的作用[1]。脑缺血再灌注后,大量免疫细胞会在损伤部位聚集,大量释放细胞分裂素和氧自由基等物质直接损伤内皮细胞,造成内皮结构和功能的受损,引发血小板聚集和免疫细胞相互作用,导致微血管阻塞,引发损伤[2]。这一过程造成神经元损伤、血脑屏障遭到破坏,脑出血和脑     

血脑屏障与脑缺血再灌注损伤

血脑屏障(b1ood-brain barrier，BBB)是存在于脑组织和血液之间的一个复杂的细胞系统。它能控制血循环中的某些物质向中枢神经组织转运，从而保证中枢神经组织内环境的稳定。血脑屏障破坏是脑缺血再灌注损伤的重要病理生理基础。     

大鼠短暂局灶性脑缺血再灌注后核转录因子-kB的表达

目的　研究核转录因子 - k B(NF- k B)在局灶性脑缺血再灌注中的动态表达规律及其作用。方法　采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。应用细胞免疫组织化学法分析 NF- k B的移位 ,采用 Western- blot法检测脑组织中核 NF- k B的表达量。结果　局灶性脑缺血再灌注后 NF- k B明显从细胞浆移位于细胞核 ,核 NF- k B的表达量显著增加 (P<0 .0 1)。结论　局灶性脑缺血再灌注能够引起 NF- k B的表达增加 ,进一步产生炎症和免疫反应 ,从而参与了脑缺血再灌注损伤的发病机制     

局灶脑缺血再灌注后成年大鼠大脑MyT1表达变化

目的 探讨脑缺血再灌注后成年大鼠大脑MyT1表达变化及其意义.方法 以线栓法制作成年SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(阻塞90min再灌注1,7,14d);用免疫荧光组织化学法检测脑缺血再灌注成年大鼠早期大脑梗死中心区、梗死周边区和缺血对侧区MyT1阳性细胞数量.结果 (1)脑缺血再灌注后各时间点梗死中心区MyT1阳性细胞数明显减少;(2)脑缺血再灌注后梗死周边区MyT1阳性细胞数从脑缺血后第1天开始增加;脑缺血后7d和14d时,各组大鼠MyT1阳性细胞增加数较之对照组大鼠有显著的差别.结论 成年SD大鼠脑缺血再灌注后梗死周边区MyT1表达显著增加,可能参与了少突胶质前体细胞的发育过程,调节髓鞘蛋白基因的转录,参与缺血性脑损伤的修复过程.     

Dynamic expression of glial cell line-derived neurotrophic factor after cerebral ischemia

The aim of this study was to understand the possible involvement of glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) in rat brain ischemic injury by examining the expression and the cellular location of GDNF with molecular biological and morphological techniques. Expression of GDNF mRNA and protein was first increased as early as 2h after ischemia-reperfusion in peri-infarct cerebral cortex and striatum; it then declined, and showed a second increase at 72 h. Double staining confirmed that the earlier peak of GDNF expression was of neuronal origin and the later peak of glial origin. Considering the neurotrophic characteristics of GDNF, our findings suggest that elevated endogenous GDNF expression may have important roles in protection of ischemic injured neuronal cells.     

大鼠脑缺血后心肌去甲肾上腺素的变化及再灌注对其的影响

目的 探讨去甲肾上腺素（NE）在脑缺血期间心肌中的表达变化和再灌注对其的影响。方法 将大鼠分成假手术组、缺血组、脑缺血再灌注组，分别测定脑缺血及脑缺血再灌注组0、6、12、24、48、72h的脑缺血面积、血清肌酸激酶同功酶（CK—MB）的浓度、心肌中NE的含量及心肌病理改变。结果 脑缺血后6h可见缺血灶，12h达到峰值；血清中CK—MB浓度逐渐升高，12h达峰值，其后逐渐下降；心肌NE于6h达到峰值，12h开始下降。脑缺血再灌注后脑坏死面积显著减少（P〈0．05）；CK-MB浓度峰值时间不变，但6、12h均较脑缺血组显著增高（P〈0．05）；心肌NE峰值不变，但至48h仍持续高水平状态。心肌病理表现为炎性细胞浸润、心内膜炎、肌纤维变性、灶性坏死．偶见大面积心肌坏死；脑缺血再灌注后纤维变性和灶状坏死的总发生率明显增加。结论 较大面积的脑缺血可使交感神经过度释放NE，导致继发心肌损伤；脑缺血再灌注可保护脑组织，但加重心肌中NE的释放。使心肌损伤加重。     

脑缺血再灌注后脑组织c—fos基因表达与东菱克栓酶的影响

本实验采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,用地高辛精标记的c—fos探针进行原位杂交。结果示缺血再灌注组栓塞侧皮层及海马c—fos基因表达显著增多,图像分析灰阶值为118.6±5.1,对侧为159.6±3.1(P<0.001),东菱克栓酶组栓塞侧皮层及海马c—fos基因表达亦增多,灰阶为131.0±4.5,对侧为164.6±4.0(P<0.001)。克栓酶组与缺血再灌注组比较,栓塞侧东菱克栓酶组c—fos基因表达显示低于缺血再灌组(P<0.05),而两组栓塞对侧比较无显著差异。本实验表明,脑缺血再灌注后脑组织的c—fos基因表达显著增多,东菱克栓酶能抑制缺血后c—fos基因的表达,这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一。     

孕酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后TASK3蛋白表达的影响

目的观察孕酮对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠脑组织TASK3蛋白表达的影响,探讨孕酮对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组(I/R组)和孕酮+I/R组,后3组按缺血再灌注后不同时间随机分为0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h和120 h 8个亚组。线栓法建立大鼠右侧MCAO模型,缺血2 h再灌注24 h进行脑损伤评估,检测各组大鼠死亡率、神经功能缺陷评分以及2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积;采用免疫印迹法检测各组大鼠脑组织缺血2 h再灌注后不同时间点TASK3蛋白的表达。结果孕酮+I/R组大鼠死亡率(18.18%)明显低于I/R组(40.66%),该组动物脑梗死体积(21.85%±3.53%)也显著低于I/R组(37.21%±3.50%)(P<0.01),且该组神经功能缺陷评分(2.00±0.74)显著低于I/R组(2.67±0.49)(P<0.05)。与正常对照组相比,假手术组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达无明显变化,而I/R组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达均显著降低(P<0.05);与I/R组相比,孕酮+I/R组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达显著升高(P<0.05)。结论孕酮对脑缺血再灌注损伤的大鼠具有脑保护作用,其机制可能与上调TASK3通道蛋白的表达有关。     

Angiopoietin-1 mRNA expression in estradiol-treated ovariectomized rats with focal cerebral ischemia after reperfusion

BACKGROUND： Epidemiologic studies have indicated that the incidence of stroke in premenopausal females is lower than in males at the same age, but it significantly rises in postmenopansal females. Estrogen is used clinically to alleviate injury caused by cerebral ischemia, it has been hypothesized that the neuroprotective role of estrogen relates to angiopoietin （Angpt）, which plays an important role in vascularization, vascular remodeling and maturation. OBJECTIVE： To observe and validate the effect of estradiol on angiopoietin-1 （Angptl） mRNA expression in ovariectomized rats with focal cerebral ischemia after reperfusion, so as to explore the molecular mechanisms of estradiol-mediated protection from cerebral ischemic damage. DESIGN, TIME AND SETTING： Randomized, controlled, molecular biology, prospective animal study. The experiment was performed at the Central Laboratory of Chongqing Medical University from September to December 2005. MATERIALS： Fifty healthy female wild type （WT） rats aged 6 months and fifty female rats aged 6 months with knockout of the estrogen-alpha receptor gene （ERKO）. METHODS： WT rats and ERKO rats were divided into estradiol and control groups （n = 25）, and injected intramuscularly with estradiol benzoate （100μg/kg per day） or corn oil （l mL/kg per day） for 7 days, 30 days after bilateral ovariectomy. Rat models of cerebral ischemia/reperfusion were established with the middle cerebral artery occlusion method. After 30 minutes of middle cerebral artery occlusion, rats from the estradiol and control groups were injected intramuscularly with estradiol benzoate or corn oil at the above dose. MAIN OUTCOME MEASURES： We used radio-immunity analysis and laser-Doppler flowmetry to measure plasma estradiol levels and changes in cerebral blood flow. We used immunohistochemical staining of CD34 epitopes to measure changes in the capillary density in brain following cerebral iscbemia/reperfusion, and quantitative RT-PCR analysis to assess mRNA expression     

局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑NG2和O4表达变化

目的:探讨脑缺血再灌注大鼠早期大脑少突胶质祖细胞及未成熟少突胶质细胞变化及意义。方法:以线栓法制作SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(阻塞90min再灌注1d、3d和7d);用免疫荧光组织化学法检测脑缺血再灌注后早期大鼠大脑梗死中心区、梗塞周边区和缺血对侧NG2和O4阳性细胞数量。结果:脑缺血再灌注后各时间点梗死中心区NG2和O4阳性细胞数明显减少;梗塞周边区NG2和O4阳性细胞数随着再灌注时间延长而逐渐增加,再灌注3d和7d增加显著;脑梗死对侧区NG2和O4阳性细胞数无明显变化。结论:成年SD大鼠脑缺血再灌注后梗塞周边区少突胶质祖细胞及未成熟少突胶质细胞增多,可能参与缺血损伤的修复过程。