高静水压对内皮细胞产生不对称二甲精氨酸的影响及葛根素对其作用

目的　观察高静水压培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)产生不对称二甲精氨酸 (ADMA)的情况及中药葛根素干预后的变化。方法　采用改良的Jaffe法培养原代HUVECs,取生长良好的 3～ 6代HUVECs用于实验 ,分为大气压组 (加等量DMEM培养液 )、高静水压组(2 3.9kPa)和高静水压 +葛根素组。测定上清液中ADMA、左旋精氨酸 (L -arg)、一氧化氮(NO)和内皮素 (ET)的浓度及血管紧张素转换酶 (ACE)的活性。结果　高静水压组ADMA及ET含量、细胞内钙 (Ca2 + )浓度及ACE活性增加 ,而NO含量减少。葛根素干预后 ,ADMA及ET含量减少 ,ACE活性降低 ,NO含量增加 ,而L -arg水平无明显变化。结论　高静水压通过增加ADMA导致内皮功能紊乱 ,葛根素则能通过减少ADMA减轻高压导致的内皮细胞代谢功能障碍。     

葛根素对氧自由基培养的脐静脉内皮细胞ADMA-DDAH系统的影响

目的 观察葛根素对氧自由基（oxidized free radical,OFR）培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）二甲基精氨酸-二甲基赖氨酸水解酶（dimethylarginine dimethylaminohydrolase,DDAH）活性及表达的影响,以探讨葛根素对不对称二甲精氨酸（ADMA）代谢机制的影响。方法 采用改良的Jaffe法培养原代HUVECs,取生长良好的3～6代HUVECs用于实验,分为（1）空白对照组：加DMEM培养液;（2）OFR组：加入OFR0．1mmol／L;（3）葛根素Ⅰ组：加0．1mmol／LOFR及0．5mg／ml葛根素;（4）葛根素Ⅱ组：加0．1mmol／LOFR和1．0mg／ml葛根素。共孵24h后,检测上清液中NO、NOS活性、ET、ADMA含量、L-胍氨酸（L—cit）浓度,采用Western blotting测定细胞裂解液中DDAH的蛋白表达。结果 OFR条件培养下,内皮细胞的代谢产物ADMA、ET含量均较空白对照组高,而NO及NOS的活性减少;反应DDAH酶活性的L—cit浓度显著降低,而DDAH的表达无明显变化。葛根素干预后,ADMA、ET含量较OFR组降低,NOS活性及NO增加,L-cit浓度明显升高。结论 OFR培养下,内皮损伤ADMA的增加与DDAH的活性减弱有关,而与DDAH的表达无关。葛根素通过增加DDAH活性促进ADMA代谢,使NOS活性增加,抑制OFR对内皮功能的损伤。     

心肌尔康对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的作用

目的:研究心肌尔康(XJEK)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的作用,并探讨相关的作用机制。方法:体外培养HUVECs细胞,随机分为7组,分别为空白组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))+心肌尔康不同质量浓度组(0.1,0.2,0.4,0.8,1.6 g·L~(-1)),噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVECs的活性;Griess法测定一氧化氮(NO)含量;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)的水平;钙成像仪测定细胞胞浆内游离钙离子(Ca~(2+))浓度;比色法及TBA法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,AngⅡ组内皮细胞活力,NO释放,e NOS蛋白表达及SOD活力明显降低,MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度明显升高(P0.05,P0.01);与AngⅡ组比较,心肌尔康可剂量依赖性提高内皮细胞活力,促进NO释放、增加e NOS蛋白的表达;升高SOD活力,抑制MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度的升高,各指标差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。结论:心肌尔康对AngⅡ诱导的内皮损伤具有明显的保护作用,其可能机制为抑制细胞内Ca~(2+)超载和降低氧化应激水平。     

葛根素对高糖诱导的乳大鼠心肌细胞细胞因子及钙离子的影响

目的:利用体外培养的大鼠乳鼠心肌细胞,探讨葛根素(Puerarin,Pue)对高糖(highglucose,HG)诱导的心肌细胞因子和钙离子的影响。方法:新生大鼠心肌细胞培养,除对照组外分别给予HG(25 mmol/L)、HG(25 mmol/L)+Pue(10-3mol/L)、HG(25 mmol/L)+Pue(2×10-3mol/L),检测培养心肌细胞存活率、内皮素(endothelin,ET)和一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度及细胞内钙离子的变化。结果:与对照组相比,HG会使培养心肌细胞存活率和NO浓度下降,ET水平增加,心肌细胞内钙离子浓度上升(P0.01);Pue可以抑制由于HG诱导所出现的上述情况,且2×10-3mol/L Pue组的效果更好。结论:Pue能抑制HG引起的心肌细胞因子浓度改变和钙超载,此效应可能是葛根素减少高糖诱导心肌细胞损伤发生的保护机制之一。     

银杏内酯B对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:研究银杏内酯B对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养第4～6代HUVECs,分为空白对照组、H2O2损伤模型组(300μmol/L)、银杏内酯B(1、5、10μmol/L)预处理2 h加H2O2损伤组。用MTT比色法检测HUVECs活力,试剂盒检测丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,一氧化氮合酶(NOS)活性,激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧(ROS),流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,模型组细胞活力显著降低、MDA和LDH含量显著增加、NO含量及NOS活性显著下降、细胞凋亡率显著,提示H2O2明显造成HUVECs损伤和死亡。银杏内酯B使内皮细胞增殖活力显著增加、MDA和LDH含量显著减少、NO含量及SOD、GSH、NOS活性显著增加、细胞凋亡率显著降低,提示银杏内酯B可干扰H2O2对内皮细胞的损伤作用。结论:银杏内酯B具有抗氧化作用,能抑制H2O2诱导内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,从而产生保护血管内皮细胞的作用。     

葛根素与雌激素替代疗法对老年高血压动脉粥样硬化患者血管内皮功能影响

目的 :研究老年高血压动脉硬化患者性激素水平与血管内皮功能的关系 ,用中药葛根素与雌激素替代疗法 ,对老年高血压动脉粥样硬化患者血浆内皮素、一氧化氮含量影响。方法 :将 32例女性老年高血压动脉硬化患者 (均为Ⅰ、Ⅱ期高血压患者 ) ,用放免法测定血浆内皮素 (ET) ,一氧化氮 (NO)及雌二醇含量 ,检测前 2天停用降压药物 ,以 2 8例正常健康女性老年人为对照组。观察治疗前后血压、血浆ET、NO、雌二醇含量变化。结果 :治疗前 32例老年高血压患者血浆ET含量升高 ,NO、雌二醇含量明显下降 ;治疗后高血压组血浆ET含量明显降低 ,而NO和雌二醇含量升高 ,血压明显下降。结论 :葛根素与雌激素替代疗法可能对老年高血压动脉硬化患者血管内皮有保护作用     

葛根素对大鼠应激性胃黏膜损伤的保护作用

目的:研究葛根素对大鼠应激性胃黏膜损伤的保护作用。方法:采用浸水束缚应激法建立大鼠应激性胃溃疡模型。气囊法记录胃运动,激光多普勒血流计测定胃黏膜血流量,比色法测定胃黏膜组织一氧化氮(NO)和内皮素(ET)含量,并观察胃黏膜组织病理学变化。结果:葛根素可以明显减轻浸水应激引起的胃黏膜损伤;抑制胃运动亢进,尤其是降低胃运动指数、收缩时间百分比和高强度收缩次数;增加胃黏膜血流量;同时增加胃黏膜NO含量,并降低ET含量;胃黏膜组织损害程度显著减轻。结论:葛根素对应激性胃黏膜损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能是通过舒张胃黏膜血管,升高胃黏膜NO水平,同时抑制胃运动亢进,增加局部胃黏膜血流量而产生作用。     

盐敏感高血压患者血清非对称二甲基精氨酸和一氧化氮水平的研究

目的探讨盐敏感高血压患者血清非对称二甲基精氨酸(ADMA)和一氧化氮(NO)水平的变化,分析血清ADMA和NO与盐敏感高血压的关系及其临床意义。方法盐敏感高血压患者60例作为研究组,同期体检健康人群60例作为对照组,检测2组血清ADMA和NO含量。结果研究组患者血清ADMA、NO水平均显著高于对照组(P均0.001);而且随着盐敏感高血压患者血压分级的增高,患者血清ADMA和NO水平呈上升趋势(P均0.05)。结论盐敏感高血压患者血清ADMA水平升高,抑制一氧化氮合酶及NO的合成,促进盐敏感高血压的发生发展。     

喜脑宁对大鼠全脑缺血的保护作用及机制研究

目的:探讨喜脑宁冻干粉(XNN)对全脑缺血的保护作用及其可能机制.方法:采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血/再灌注模型,观察XNN对脑缺血再灌注过程中脑电图及翻正反射恢复时间、脑含水量、脑指数、脑组织匀浆MDA和LD含量、SOD,LDH和NOS活性、海马ET含量的影响;观察XNN对ADP诱导的血小板聚集率的影响;采用Fura-2/AM负载法,观察XNN对血小板内静息[Ca~(2+)]_i;和CaCl_2诱导血小板内[Ca~(2+)]_i,浓度变化的影响.结果:在全脑缺血再灌注模型上,XNN可以缩短翻正反射恢复时间,促进脑电图的恢复;降低脑含水量、脑指数;提高脑组织SOD,LDH活性,降低LD,MDA含量和NOS活性;降低海马组织ET含量.XNN对ADP诱导的血小板聚集有一定的抑制作用,能降低血小板内静息期[Ca~(2+)]_i,并对CaCl_2诱导的血小板内[Ca~(2+)]_i的升高有抑制作用.结论:XNN对全脑缺血具有一定的保护作用.     

黄芪注射液对早期糖尿病肾病大鼠血液一氧化氮和内皮素的影响

目的探讨中药黄芪对早期糖尿病肾病的作用。方法链尿佐菌素(STZ)腹腔注射诱导建立糖尿病肾病(DN)大鼠模型,检测血清内皮素(ET)和一氧化氮(NO)的变化,观察黄芪注射液的作用。结果DN大鼠血清一氧化氮(NO)含量降低,内皮素(ET)含量明显升高。黄芪注射液能减少DN大鼠血清ET含量,增加NO含量。结论黄芪注射液具有保护肾血管内皮细胞的作用。     

芹菜素对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨芹菜素(Apigenin)对同型半胱氨酸氧化损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用。方法:体外培养内皮细胞,将细胞分为7组,即空白对照组(control)、溶剂对照组(DMSO)、Hcy氧化损伤组(Hcy)、氧化损伤加入槲皮素对照组(quercetin+Hcy)、氧化损伤加入芹菜素低、中、高浓度组(Apigenin-L+Hcy、Apigenin-M+Hcy、Apigenin-H+Hcy)。将5mmol/L Hcy作用于加入槲皮素及不同浓度芹菜素预培养6h的内皮细胞,继续培养24h,以细胞毒四唑盐(MTT)比色试验,乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-px)、丙二醛(MDA)、活性氧,NADPH酶活性、流式细胞凋亡率为检测指标。结果:芹菜素呈剂量依赖性降低同型半胱氨酸对内皮细胞活力的影响,降低MDA、LDH量,增加培养液中GSH-px活性,并显著减少活性氧、NADPH酶活性和细胞凋亡数量,各指标差异有显著性(P0.01)。结论:芹菜素可保护和修复同型半胱氨酸诱导的内皮细胞的损伤,其作用可能与抗氧化、抑制内皮细胞凋亡有关。     

不同浓度血管紧张素Ⅱ对人脐静脉血管内皮细胞衰老变化的影响

目的:观察不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)衰老及细胞存活率的变化情况。方法:体外培养HUVEC,随机分为对照组和含不同浓度AngⅡ组(10-8～10-5mmol/L)共5组,用含不同浓度AngⅡ的培养基孵育细胞48h,β-半乳糖苷酶染色法鉴定内皮细胞衰老状态;流式细胞技术分析细胞周期变化;分别用MTT法和CCK-8法检测细胞存活率变化情况。结果:AngⅡ培养细胞48h后,β-gal阳性染色率随着AngⅡ浓度的增加逐渐增多(P均<0.01);细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少;细胞存活率明显下降;与对照组相比,10-8和10-7 mmol/L AngII组无明显差异(P>0.05),10-6和10-5 mmol/LAngⅡ组有统计学差异(P<0.05)。结论:AngII诱导HUVEC衰老并呈剂量依赖性的抑制细胞增殖,提示细胞衰老程度随AngII浓度增加而加重。     

青蒿琥酯对脂多糖致血管内皮细胞活化及损伤的保护作用

目的观察中药青蒿提取物青蒿琥酯(artesunate,AR)对脂多糖(lipololysaccharide ,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)活化及损伤状态下的保护作用及相关机制．方法建立人脐静脉内皮细胞培养,细胞生长至融合状态后分别加入LPS及不同浓度的AR(0．04mg／L、0．2mg／L、1mg／L、5mg／L及20mg／L)共同孵育24h,ELISA方法检测培养上清中血管假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)含量,Western blot法检测细胞间黏附分子(ICAM—1)蛋白表达,原位杂交方法检测肿瘤坏死因子(TNFα)mRNA表达结果暴露于1ug／ml LPS后,HUVECs的vWF及ICAM1表达较对照组明显增加,加入AR后,随AR浓度增加明显下调LPS升高的vWF及ICAM—1表达,至AR为1mg／L时,其vWF与ICAM—1表达与LPS组比较差异均有显著性(P＜0．05)。AR抑制LPS升高的vWF及ICAM-1表达呈一定的浓度依赖方式．原位杂交显示在AR0．2mg／L及1mg／L时明显下调TNFα mR—NA表达,与LPS组比较差异有显著性(P＜0．05,P＜0．01)、结论青蒿琥酯对脂多糖诱导的HUVECs的活化及损伤有保护作用,可能与AR抑制TNFα mRNA表达有关。     

丹皮酚拮抗过氧亚硝基阴离子致大鼠成骨细胞凋亡的作用

目的探讨丹皮酚拮抗过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对体外培养大鼠成骨细胞凋亡的作用。方法用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,采用淬灭流动反应方法体外制备ONOO-,以1 mm o l/L终浓度加入成骨细胞培养体系,作用30 m in后弃去,继续常规培养12 h,用Hoechst33258染色法及TUNEL法检测成骨细胞的凋亡,并以0.1 mm o l/L丹皮酚消除ONOO-(1 mm o l/L)对大鼠成骨细胞凋亡的影响。结果1 mm o l/L的ONOO-可导致大鼠成骨细胞凋亡;0.1 mm o l/L丹皮酚能拮抗ONOO-(1 mm o l/L)所引起的大鼠成骨细胞凋亡。结论丹皮酚0.1 mm o l/L在体外具有拮抗ONOO-(1 mm o l/L)致大鼠成骨细胞凋亡的作用。     

荷叶水提物抑制氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1

目的:探讨荷叶水提物对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的影响。方法:(1)分别用25mg/L、50mg/L、100mg/L的Ox-LDL刺激培养的HUVECs 24h,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定MCP-1和VCAM-1的mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)法测定细胞上清中MCP-1和VCAM-1的含量;(2)预先分别用10mg/L、20mg/L、40mg/L的荷叶水提物干预HUVECs,再用50mg/L的Ox-LDL刺激,半定量RT-PCR方法测定MCP-1和VCAM-1的mRNA表达,ELISA法测定细胞上清中MCP-1和VCAM-1的含量。结果:不同浓度的Ox-LDL刺激HUVECs后,MCP-1和VCAM-1 mRNA的表达及细胞上清中的含量呈浓度依赖性上调(P<0.01),且不同浓度的Ox-LDL组间差异亦有统计学意义(P<0.01)。荷叶水提物干预后,HUVECs的MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表达及细胞上清MCP-1和VCAM-1含量呈浓度依赖性下降。结论:荷叶水提物能够抑制Ox-LDL诱导的HUVECs表达MCP-1和VCAM-1,可能通过这一机制有抗动脉粥样硬化的潜在作用。     

榄香烯对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨榄香烯对内皮细胞增殖的影响和对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用。方法:体外培养内皮细胞,将不同浓度的榄香烯(1~200μg/ml)加入到细胞培养液中,用MTT法检测榄香烯对内皮细胞增殖的影响。将1 mmol/L H2O2作用于加入不同浓度的榄香烯预培养24 h的内皮细胞,继续培养1 h,以MDA、T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px、NO为检测指标。结果:榄香烯对内皮细胞的增殖呈剂量依赖性的抑制作用,而在抗氧化损伤方面,呈剂量依赖性降低MDA量,降低H2O2对抗氧化酶活力的影响,提高细胞内NO的含量,减少细胞调亡数量。结论:榄香烯可保护内皮细胞结果和功能的完整性,提高内皮细胞抗氧化能力。     

槲皮素对人脐静脉血管内皮细胞的OGD损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨槲皮素(Quercetin,Que)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的缺糖缺氧(OGD)损伤的保护作用及机制研究。方法:当HUVECs进行培养达到密度为80%~90%时,对HUVECs进行NO处理,时间为24h,形成OGD损伤的HUVECs模型。用不同浓度的槲皮素进行处理干预,对进行实验的HUVECs分4组,分别为空白组、OGD组、Que 5μmol/L组、Que 15μmol/L组。进行6h的HUVECs正常培养,进行噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVECs活性,用于表达药物抑制率。对HUVECs的生命力强度用荧光素双醋酸酯染色(FDA)来检测。针对HUVECs内有关凋亡的基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达量,通过Western Blot法实验得出的蛋白表达量条带,进行分析,从而得出凋亡基因的表达影响。通过荧光定量PCR法检测各组HUVECs内凋亡基因的表达,对数据进行处理,从而得出HUVECs凋亡基因在不同浓度的槲皮素干预下的表达水平。结果:槲皮素可以通过调节HUVECs上的凋亡基因的表达量,改变受损HUVECs的存活率(P<0.01),槲皮素组、空白组与OGD组进行比较得出,槲皮素对凋亡基因的影响,通过上调Bcl-2基因的表达(P<0.01),下调Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的基因活性水平,从而减少HUVECs凋亡率(P<0.01)。而且槲皮素浓度的不同,对HUVECs凋亡的保护程度也是不同的。结论:槲皮素对OGD损伤的HUVECs具有保护作用其机制可能与槲皮素可上调Bcl-2,下调Bax、Caspase-3、Caspase-9基因有关。