DMSO处理后中国仓鼠卵巢细胞的蛋白质组变化分析

在培养基中添加二甲基亚砜(DMSO)可使基因工程中国仓鼠卵巢细胞(CHO)外源蛋白乙肝表面抗原(HBsAg)的比生产速率提高4倍以上.为了进一步研究DMSO的作用机理,采用双相凝胶电泳技术分离在培养基中添加1.5%的DMSO后CHO细胞的总蛋白,胶态考马斯亮蓝G-250染色,GS-800凝胶扫描仪获取凝胶图像,并用PDQUEST软件分析,测得每张图谱平均斑点数量为1852±123,以其中一块胶为参考胶进行4块胶间的斑点匹配,其平均匹配的点数达1326±100,平均匹配率为71.6%以上.通过分析得到18个蛋白质点在添加了DMSO后表达量有明显变化(其中12个蛋白表达量明显降低,6个蛋白表达量明显增加.用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质指纹谱图和串级质谱图,用GPS软件查询NCBI数据库进行了鉴定.鉴定结果表明,这些差异蛋白中一些是与细胞周期有关的蛋白,一些是与细胞能量代谢相关的蛋白,还有一些是与蛋白翻译后修饰有关的酶,这些结果进一步深化了对DMSO提高CHO细胞表达HBsAg的机理的理解.     

CHO-K1细胞株的建立及其在药物安全性筛选方面的应用

研究了稳定表达hERG基因的CHO-K1(中国仓鼠卵巢细胞)细胞株及其在药物研发安全性筛选方面的应用。使用Lipofectamine 2000系统将hERG基因转染入CHO-K1细胞,用Western Blot检测其表达,并进一步通过FluxORTM Thallium Assay Kits验证;同时使用FluxORTM Thallium Assay Kits检测Cisapride和Dofetilide对hERG通道的抑制性。建立了4株稳定表达hERG基因的CHO-K1细胞株,Cisapride和Dofetilide对hERG通道的IC50分别为86.7 nmol.L-1和28.1 nmol.L-1。hERG基因成功地在CHO-K1细胞株实现了稳定表达,此细胞株可用于FluxORTM Thallium Assay Kits系统,用于药物研发安全性筛选,以评估化合物潜在的心脏毒性。     

反义PARP基因真核表达重组体的构建及其HeLa转化细胞系的建立

利用DNA体外重组技术将PARP基因cDNA部分序列反向克隆到真核表达载体pMAMneo上,构建成重组质粒pMAMneo－C1．4和pMAMneo－C0．3．将重组质粒pMAM－neo－C1．4转染HeLa细胞,经G418筛选,建成细胞系HeLa－C1．4－neo,Southern杂交结果表明,外源PARP基因cDNA部分序列已稳定整合到受体细胞基因组中,该细胞系的建立为研究聚ADP核糖基化作用在细胞内的功能打下了基础．     

β－actin启动子控制的人尿激酶原基因在CHO细胞中的表达

本文将人尿激酶原（ｐｒｏ－ＵＫ）ｃＤＮＡ基因插入到含β－肌动蛋白（ａｃｔｉｎ）启动子的表达载体中，通过脂质体转化到中国仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞内，经筛选得到稳定表达ｐｒｏ－ＵＫ基因的细胞株，用ＥＬＩＳＡ检测到细胞培养液中表达量为２～３ｍｇ／Ｌ。经过抗尿激酶（ＵＫ）的免疫亲和柱初步纯化细胞培养上清后得到表达产物。同时，在培养液中加入佛波酯ＰＭＡ后，发现它对目的基因的表达有促进作用。