ALDH1+、CD44+/CD24-重叠与乳腺癌基因亚型和临床因素相关性研究

 目的比较ALDH1⁺和CD44⁺/CD24^-做为人乳腺癌干细胞标志物时在基因亚型中的分布和与临床相关因素方面的异同,并了解两种标志物互补后在基因亚型中的分布和临床因素的相关性。方法采用免疫组织化学单染、双染技术检测203例未接受放化疗乳腺癌患者肿瘤组织中重叠表达ALDH1⁺、CD44⁺/CD24^-表型的情况。结果所有乳腺癌组织中重叠表达ALDH1⁺/CD44⁺/CD24^-表型为5.4%,主要存在于HER-2（18.2%）型和Triple negativ型（45.5%）,病理类型主要为浸润性导管癌,2年无病生存率低于其它表型（P <0.05）。结论只有很小一部分乳腺癌患者为ALDH1⁺/CD44⁺/CD24^-/low表型,主要存在于Triple negative型,病理类型主要为浸润性导管,2年无病生存率低。ALDH1⁺和CD44⁺/CD24^-可能标志不同层次的乳腺癌干细胞,未来采用免疫组织化学技术互补检测ALDH1⁺和CD44⁺/CD24^-可能预测患者预后。 结果显示,ALDH1⁺表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结状态、病理类型、ER,PR等临床相关变量分布差异无统计学意义（P >0.05）,而与临床分期有关（P <0.05）;CD44⁺/CD24^-、ALDH1⁺/CD44⁺/CD24^-表型与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、临床分期、淋巴结状态、ER,PR等临床相关因素分无明显相关性（P >0.05）,而与病理类型有关（P <0.05）,见表2。     

社会支持对乳腺癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的 分析社会支持对乳腺癌患者免疫抑制的影响以及对乳腺癌患者生存的意义。方法 收集2019年11月至2020年1月延安大学附属医院甲乳外科经手术及病理学检查证实的乳腺癌根治术患者76例作为研究组,收集同期体检的健康人群76例作为对照组。采用流式细胞术检测两组人群外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞。同时应用社会支持量表分析不同社会支持水平对乳腺癌患者免疫抑制的影响。结果 研究组外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞数量手术前后均较对照组高,术前较术后高,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组领悟社会支持量表评分较高的患者外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞较低,领悟社会支持量表评分最高组与最低组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 乳腺癌患者大多存在一定程度免疫抑制,手术治疗可提高其免疫功能,且随着社会支持越高,其免疫抑制程度越轻。     

CD44+/CD24-/low和ALDH1与浸润性乳癌分子亚型及预后的相关性

目的探讨肿瘤干细胞标志物CD44⁺/CD24^-/low和乙醛脱氢酶1（ALDH1）在浸润性乳癌组织中的表达及其与乳癌分子亚型和预后的关系。方法制备组织芯片,使用罗氏Ventana Benchmark XT autostainer仪器,采用免疫组化法检测259例乳癌手术切除标本中CD44、CD24和ALDH1的表达。结果乳癌病例中CD44⁺/CD24^-/low的阳性表达率为37.1%,其在乳癌各分子亚型中的表达差异具有统计学意义（χ²=17.84,P<0.01）,在Her-2型及三阴性乳癌（TNBC）中阳性表达率较高。乳癌病例中ALDH1的阳性表达率为22.8%,其在乳癌各分子亚型中的阳性表达率差异具有统计学意义（χ²=28.11,P<0.01）,在TNBC中阳性表达率较高。乳癌病例中CD44⁺/CD24^-/low与ALDH1+的联合表达率为5.8%,其在乳癌各分子亚型中的阳性表达率差异具有统计学意义（χ²=18.07,P<0.01）。CD44⁺/CD24^-/low与ALDH1的表达无明显相关性（r=-0.11,P>0.05）。CD44⁺/CD24^-/low阳性表达的乳癌病人5年无病生存率（DFS）为55.2%,较阴性表达病人显著降低（χ²=10.34,P<0.01）;ALDH1阳性表达的乳癌病人5年DFS为61.0%,较阴性表达病人显著降低（χ²=12.28,P<0.01）。结论乳癌干细胞标志物CD44⁺/CD24^-/low和ALDH1在乳癌组织中的表达不高,在乳癌各分子亚型中的表达有差异,联合检测这些标志物有可能预测病人预后。     

ALDH~(hi)CD44~+细胞在乳腺癌组织中的表达及其与相关细胞信号传导通路之关系研究

目的:①探讨具有干细胞标记特性的ALDHhiCD44+细胞在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况;②探讨乳腺癌MDA-MB-231细胞系中是否存在乳腺癌ALDHhiCD44+细胞亚群,并分析Wnt/β-catenin与Notch细胞信号通路中的重要基殷β-catenin和Notch1,在ALDHhiCD44+细胞亚群中的表达情况。方法:①试验组为30例乳腺癌患者的术中新鲜癌组织,另取19例癌旁2 cm组织标本作为对照;②机械-酶方法消化组织、收集细胞悬液,并行肿瘤细胞原代培养,再经流式细胞仪检测ALDH-hiCD44+细胞的含量;③流式细胞技术检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞中ALDHhiCD44+细胞的表达含量,并分选出AL-DHhiCD44+细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测ALDHhiCD44+细胞亚群和ALDHlow CD44+细胞亚群中β-catenin和Notch1的扩增情况。结果:①30例浸润性乳腺癌组织中有28例原代培养成功,19例癌旁组织中有15例能够培养出原代细胞。ALDH-hiCD44+细胞在癌组织原代培养的细胞中的含量为(3.85±2.59)%(0.86～8.00%),在癌旁组织原代细胞中含量为(0.13±0.07)%(0.05～0.19%),两值相比差异有统计学意义(P=0.035,P<0.05);②乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,ALDHhiCD44+细胞含量为(0.82±0.067)%,且与ALDHlowCD44+细胞相比,ALDHhiCD44+细胞中β-catenin和Notch1的表达量是增高的(P<0.05)。结论:通过肿瘤组织原代细胞培养、检测新途径,进一步证实ALDHhiCD44+乳腺癌干细胞的存在,且其在癌灶的表达量高于癌旁组织。结合细胞系MDA-MB-231中的ALDHhiCD44+细胞检测,其中的β-catenin和Notch1表达增高,表明ALDH-hiCD44+细胞中Wnt/β-catenin和Notch细胞信号通路处于活化状态。     

CD44+/CD24-/low/ABCG2-乳腺癌干细胞比例增高与临床治疗相关的探索性研究

目的:研究CD44 /CD24-/low/ABCG2-细胞与临床治疗及预后的相关性.方法:收集北京大学临床肿瘤学院经病理诊断为乳腺浸润性导管癌患者的手术切除石蜡标本共43例,进行免疫组织化学检测ABCG2和CD44/CIY24双染的表达情况,分析其与预后的相关性.同时收集北京大学临床肿瘤学院晚期乳腺浸润性导管癌患者共10例,分别于治疗前及化疗2周期后抽取空腹静脉血4 mL,流式细胞仪检测CD45-/CD44 /CD24-/low/ABCG2-的细胞比例,分析其与治疗的相关性,并与健康志愿者进行对照.结果:43例患者中,术后5年内复发23例,5年内无复发20例.免疫组织化学检测表明,复发组ABCG2表达高于术后无复发组,但差异无统计学意义(78.3%vs60.0%,P=0.32),且与牛存无相关性(P=0.086).CD44 /CD24-双染细胞10%者在复发组更常见,两组之间差异有统计学意义(65.2%体35.0%,P=0.048),这部分患者的无病牛存期更短,但不是独立预后因素.流式细胞检测CD45-/CD44 /CD24-/low/ABCG2-的细胞在晚期乳腺癌患者的数量为1～3 725个/105(中位数为679个/105),健康志愿者中该细胞数为0～98个/105(中位数为12个/105).该细胞数目在化疗前后出现了变化,但与治疗效果的相符性没有得出统计学意义.结论:乳腺癌组织中,CD44 /CD24-/low乳腺癌干细胞的比例与患者的预后相关,而乳腺癌患者外周血中的CD44 /CD24-/low/ABCG2-的细胞数目高于健康志愿者,其与临床疗效的相关性仍需进一步研究.     

CD19+CD24+CD27+调节性B细胞在系统性红斑狼疮患者中的临床意义

目的 探究CD19⁺CD24⁺CD27⁺调节性B细胞在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)中的作用和临床相关性。方法 收集23例SLE患者和23例健康人群的外周血以及血浆标本,使用流式细胞仪检测并比较两组人群外周血标本中的CD19⁺CD24⁺CD27⁺调节性B细胞与细胞内IL-10的表达水平,并将其细分为CD24^highCD27⁺以及CD24^midCD27⁺两个亚群,同时比较血浆中各细胞因子的浓度并分析其与Breg细胞的相关性。检测治疗后SLE患者外周血中Breg细胞的变化并与治疗前进行比较,分析其与疾病发展状态之间的关系。结果 SLE患者体内的两种Breg细胞均显著升高,分别为6.09%±2.61%和12.28%±4.90%,其细胞内IL-10表达也明显增强,且CD24^highCD27⁺型Breg细胞内IL-10水平高于CD24^midCD27⁺型亚群。患者血浆中IL-1β为(9.24±9.97) pg/mL,IL-10为(43.50±23.06) pg/mL,TNF-α为(11.26±7.48) pg/mL,IFN-γ为(12.83±7.27) pg/mL,较正常人均显著升高,且IL-10浓度与CD24^midCD27⁺型亚群细胞比例存在正相关。外周血中两种Breg细胞均与患者的疾病状态存在关联,经过临床药物治疗后,患者体内的Breg细胞显著下降。结论 SLE患者外周血中调节性B细胞显著升高,其分泌的IL-10相应增高,免疫调控作用增强。经过治疗,两者显著下降,提示其具有反映患者疾病状态的潜在价值。     

rAAV/CEA转染树突状细胞诱导特异性CTL杀伤MCF-7细胞系CD44+ CD24-/low乳腺癌干细胞

目的:携带癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)基因的重组人腺相关病毒(reconstructive human ade-no-association virus,rh-AAV)感染树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导获得抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cyto-toxic lymphocyte,CTL),体外检测其对CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞的杀伤效果。方法:分离供者外周血单个核细胞,以细胞因子白介素-4(interleukin-4,IL-4)、粒细胞-巨噬细胞克隆刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimu-lating factor,GM-CSF)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)诱导培养获得DC,细胞因子白介素-2(interleukin-2,IL-2),刺激培养获得T淋巴细胞。含CEA基因的rh-AAV感染培养DC,诱导成熟后将DC和T细胞混合培养获得CTL细胞。流式分选MCF-7和MA-MDB-231细胞系中CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞,MTT法检测CTL细胞对CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞的杀伤效果。结果:MCF-7和MDA-MB-231中CD44+/CD24-/low亚群比例分别为5.1%和76.3%。CEA基因转染DC诱导的CTL细胞对表达CEA抗原的MCF-7杀伤率为46.5%±15.0%,与未转染组相比,差异有统计学意义(P=0.009);对MCF-7细胞中分选的CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞的杀伤率为44.7%±28.2%,明显高于未转染组。对非乳腺癌干细胞杀伤率为50.6%±22.2%,与未转染组相比,差异有统计学意义(P=0.05)。在不表达CEA基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞,CEA转染诱导的CTL细胞对未分选细胞、分选的CD44+/CD24-/low亚群和非干细胞亚群的杀伤率与未转染的对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:携带CEA基因rh-AAV转染DC诱导产生的抗原特异性CTL细胞可杀伤表达CEA的乳腺癌细胞,对CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞也具有一定的杀伤活性,提示免疫治疗可能是治疗乳腺癌干细胞潜在有效的手段。     

乳腺癌患者新辅助化疗前后血浆FIB、DD水平和CD4+、CD4+/CD8+变化与预后的相关性分析

目的:探讨乳腺癌(BC)患者新辅助化疗(NAC)前后血浆纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(DD)水平、CD4⁺和CD4⁺/CD8⁺变化与预后的相关性。方法:选取140例行NAC的BC患者为研究对象,根据预后分为无进展组(n=113)和进展组(n=27)。比较两组患者NAC前后血浆FIB、DD及细胞免疫功能指标水平;Kaplan-Meier绘制两年总生存率(OS)及无进展生存期(PFS)曲线;Cox分析影响预后的因素。结果:进展组NAC前后血浆FIB、DD和CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺水平高于无进展组(P<0.05),CD4⁺/CD8⁺低于无进展组(P<0.05);血浆FIB、DD和CD4⁺/CD8⁺低水平患者中位OS和中位DFS均高于高水平患者(P<0.05);Cox分析显示,分子分型和FIB、DD、CD4⁺/CD8^+<...     

CD44~+/CD24~-细胞在乳腺癌细胞中所占比例及相关性分析

目的探讨CD44＋/CD24-细胞在乳腺癌细胞中的比例与乳腺癌远处转移之间的关系,研究其与各临床资料之间是否存在相关性。方法通过免疫组化双染技术,对60例病例的肿瘤石蜡切片进行分析,确定CD44＋/CD24-细胞在乳腺癌细胞中所占的百分率,并分析其与远处转移之间的关系及与各项临床资料间的关系。结果 CD44＋/CD24-细胞占肿瘤细胞百分比在两组中存在显著差异性,转移组中骨转移病例的CD44＋/CD24-细胞在肿瘤细胞中的比例有显著性差异。结论 CD44＋/CD24-细胞细胞在乳腺癌细胞中所占比例与乳腺癌远处转移密切相关,特别是骨转移。在临床病理类型,肿瘤大小,淋巴结转移情况,TNM分期,激素受体情况,肿瘤发生于绝经前后,Her-2情况中无明显差别。     

肿瘤干细胞标记物CD44-＋CD24-（low/-）与MMP-9在乳腺癌组织中的表

目的研究肿瘤干细胞标记物CD44＋CD24low/-以及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达与肿瘤临床病理参数之间的关系。方法采用免疫组织化学方法检测109例乳腺癌组织中的CD44、CD24及MMP-9的表达并对结果进行分析。结果（1）109例乳腺癌组织中CD44、CD24及MMP-9的表达率分别是47.7%、50.5%及40.4%,其中CD44的阳性表达率与乳腺癌病理分级密切相关（P〈0.05）;（2）109例乳腺癌组织中,CD44＋CD24low/-肿瘤干细胞标记阳性例数为32例,随乳腺癌病理分级的升高,CD44＋CD24low/-肿瘤干细胞比率也明显增加（P〈0.05）;（3）32例CD44＋CD24low/-肿瘤干细胞标记阳性乳腺癌组织中,MMP-9蛋白的表达与淋巴结转移成负相关（P〈0.05）。结论高度恶性乳腺癌组织中富于肿瘤干细胞,乳腺癌早期CD44＋CD24low/-TSC中MMP-9蛋白表达增加可能对肿瘤干细胞（TSC）生长及浸润中起着一定作用。     

CD24、CD44、PCNA与乳腺癌的相关研究进展

目前,国内外对乳腺癌的有关基因表达的大量研究表明,CD24、CD44参与了乳腺癌的浸润、转移过程,增殖细胞核抗原（PCNA）被认为是乳腺癌的重要预后因子.相关研究主要涉及CD24、CD44及PCNA的生物学特性、各自与乳腺癌的关系等,目的 在于分析三者联合检测对乳腺癌的影响,对CD24、CD44及PCNA在乳腺癌的发生和发展、增殖及转移的机制方面作更加深入的研究,以进一步研究证实三者的联合检测对乳腺癌的治疗及预后是否可提供临床参考价值等.     

CD4+CD25+调节性T细胞在类风湿关节炎患者免疫耐受失衡中的变化

目的 检测CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ 调节性T细胞（Treg）在类风湿关节炎（RA）患者外周血和关节液中的变化,探讨该细胞亚群在RA免疫耐受失衡中的作用。方法 采用流式细胞术检测活动期RA患者关节液、外周血和健康对照外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞比例;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测外周血和关节液单个核细胞FoxP3基因的表达。分析外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞比例与病情活动指标的相关性。结果 活动期RA患者关节液CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞比例（7.56%±2.89%）高于外周血（1.84%±0.97%）和健康对照外周血（2.19%±0.54%）,差异均有统计学意义（P<0.01）;RA患者抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体（ACPA）阴性组外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞水平（2.85%±0.87%）高于ACPA阳性组（1.40%±0.63%,P<0.01）。活动期RA患者关节液单个核细胞FoxP3基因表达水平高于RA患者外周血和健康对照外周血（P<0.01）;活动期RA患者外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞比例与疾病活动指标无相关性（P>0. 05）。结论 RA患者关节液CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞的变化更能反映RA炎症部位免疫耐受失衡机制。     

二烯丙基二硫对CD44+人胃癌AGS细胞生长的影响

目的分析二烯丙基二硫(DADS)对CD44⁺胃癌AGS细胞增殖与周期分布的作用,为DADS抑制胃癌作用机制研究提供进一步实验依据。方法经免疫磁珠技术富集人胃癌细胞株AGS中的CD44⁺细胞,流式细胞术检测CD44⁺细胞比率。肿瘤球形成、Transwell迁移及侵袭实验验证CD44⁺细胞的干样特性。MTT、软琼脂集落形成及流式细胞术分析DADS对干样细胞的生长、细胞周期分布的作用。结果免疫磁珠术富集了99.9% CD44⁺细胞。相较于未分选的AGS组,CD44⁺AGS组细胞生长2周后成球状态良好,且表现出更强迁移、侵袭能力(P＜0.05)。不同质量浓度DADS处理可明显抑制CD44⁺细胞增殖,且其抑制作用呈质量浓度依赖性(P＜0.05);30 mg/L和60 mg/L DADS可抑制CD44⁺细胞集落形成能力(P＜0.05),且可导致细胞周期呈现G₂/M期阻滞(P＜0.05)。结论DADS可明显削弱CD44⁺细胞的生长能力,与阻断细胞周期于G₂/M期有关。     

CD19+ CD24high CD27+调节性B细胞在儿童传染性单核细胞增多症中的表达及意义

目的 探讨调节性B细胞（Breg）在儿童传染性单核细胞增多症（IM）中的作用。方法 应用流式细胞术检测53例IM患儿外周血T淋巴细胞亚群,CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达情况。用荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA。同时用ELISA方法分析血清IL-10、TGF-β分泌水平。以50例健康儿童为对照。结果 IM急性期组与对照组比较CD3⁺ CD4⁺ T细胞明显降低（t=19.99,P<0.01）,CD3⁺ CD8⁺ T细胞明显增高（t=17.47,P<0.01）,CD4/CD8比值降低（t=16.79,P<0.01）。IM恢复期组与急性期组比较,CD3⁺ CD4⁺ T细胞明显增高（t=21.54,P<0.01）,CD3⁺ CD8⁺ T细胞明显降低（t=17.47,P<0.01）,CD4/CD8比值增高（t=16.68,P<0.01）。IM急性期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平13.4%±1.87%,与对照组比较显著降低,差异有统计学意义（t=14.61,P<0.01）。IM急性期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平与EBV-DNA病毒载量呈负相关（r=-0.52,P<0.01）。经治疗后IM恢复期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平18.3%±2.11%与IM急性期组比较显著增高,差异有统计学意义（t=12.61,P<0.01）。IM急性期组血清IL-10较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=11.50,P<0.01）。治疗后IM恢复期组IL-10较IM急性期组明显增高,差异有统计学意义（t=9.40,P<0.01）。结论 IM急性期存在明显免疫失衡,即CD3⁺ CD8⁺ T细胞增多,CD4/CD8比值降低,可能与Breg细胞表达减低导致的免疫抑制功能不足有关。     

乳腺癌干细胞分离及异质性的研究进展

乳腺癌干细胞是来源于乳腺干细胞或乳腺上皮细胞祖细胞的具有自我更新能力、致瘤性和分化能力等特性的乳腺癌细胞,其表面抗原预示了乳腺癌干细胞的异质性。同时,不同信号调节通路在乳腺癌调节作用中的研究进一步表明乳腺癌干细胞的异质性。现针对近年来乳腺癌干细胞分离研究中其表面标记分子的演化及异质性表现进行分析,从而为开展相关研究提供参考。     

免疫性血小板减少性紫癜患者CD4~＋CD25~（high）CD127~（dim）调节性T细胞检测及其意义

目的探讨调节性T细胞（Treg）在ITP患者发病中的作用机制及其与PAIgG之间的相关性。方法采用流式细胞术（FCM）分别检测ITP患者和健康体检者外周血CD 4＋CD 25highCD 127dimTreg细胞占CD 4＋T细胞比例及PAIgG的表达水平。结果 ITP组CD 4＋CD 25highCD 127dimTreg细胞比例较正常对照组明显下降（P〈0.05）;ITP组PAIgG表达水平明显高于正常对照组（P〈0.05）;Treg细胞与PAIgG之间呈负相关（r=-0.57,P〈0.05）。结论 ITP患者CD 4＋CD 25highCD 127dimTreg细胞水平显著下降,免疫抑制作用减弱,引起自身反应性T、B细胞活化增殖,T细胞亚群改变,PAIgG产生增加,并最终导致ITP发病。