PCR-DGGE实验过程中常见问题的分析与改进

对PCR—DGGE实验过程中常见问题，如条带的有无、多少、拖尾、重影、扭曲、集中等问题进行了归纳总结，并提供了详细的解决方法，如加强实验前仪器的榆查；进行时问进程实验；选择适当的扩增引物、电泳温度和电流等。     

适于分析小麦高分子量麦谷蛋白亚基的SDS─PAGE方法

参照Ｂ．Ｊ．Ｓｍｉｒｂ（１９８４）介绍的蛋白质ＳＤＳ—ＰＡＧＥ方法，调整了凝胶浓度、交联度及催化剂用量，提出了完善的样品制备程序，并研究了温度对凝胶配比及电泳时间的影响。在大量小麦整粒ＳＤＳ—ＰＡＧＥ实验的基础上，又对半粒无胚籽粒电泳进行了细致的研究，摸荣出了一套适合于小麦整粒与半粒的高分子量（ＨＭＷ）麦谷蛋白亚基ＳＤＳ—ＰＡＧＥ方法。通过对５０７１份整粒种质资源和１６００余份半粒杂交后代的分析，结果表明，该法成功率高，结果准确，具有操作简便、快速、分辨率好，制成干板不扩散易保存等优点。认为是一套适合我国仪器设备和药剂等实验条件的ＨＭＷ谷蛋白电泳方法。是品质鉴定和后代品质筛选的可靠手段。     

适于分析小麦高分子量麦谷蛋白亚基的SDS─PAGE方法

参照Ｂ．Ｊ．Ｓｍｉｒｂ（１９８４）介绍的蛋白质ＳＤＳ—ＰＡＧＥ方法，调整了凝胶浓度、交联度及催化剂用量，提出了完善的样品制备程序，并研究了温度对凝胶配比及电泳时间的影响。在大量小麦整粒ＳＤＳ—ＰＡＧＥ实验的基础上，又对半粒无胚籽粒电泳进行了细致的研究，摸荣出了一套适合于小麦整粒与半粒的高分子量（ＨＭＷ）麦谷蛋白亚基ＳＤＳ—ＰＡＧＥ方法。通过对５０７１份整粒种质资源和１６００余份半粒杂交后代的分析，结果表明，该法成功率高，结果准确，具有操作简便、快速、分辨率好，制成干板不扩散易保存等优点。认为是一套适合我国仪器设备和药剂等实验条件的ＨＭＷ谷蛋白电泳方法。是品质鉴定和后代品质筛选的可靠手段。     

电泳技术的发展和应用

1电泳技术的发展 电泳技术早在150多年前就已经发现.1809年俄国物理学家Reuss进行了世界上第一次电泳实验,这个早期实验为电泳的理论和实践的发展及其应用奠定了基础.20世纪的20年代和30年代,电泳理论和实践有了很大的发展.1937年瑞典的Tiselius建立了移动界面法,成攻的将血清蛋白分成了白蛋白和四种球蛋白.移动界面法电泳技术的应用使解决生理问题达到了一个新的水平,并且改变了许多陈旧的概念.50年代后,这种自由溶液中进行的移动界面电泳已成为历史,代之采用支持介质的区带电泳现在被广泛使用.     

种子贮藏蛋白电泳技术在棉花品种鉴定中的应用

实验采用了50个经过长期大面积种植的棉花种质材料,利用改良的种子贮藏蛋白电泳技术进行棉花品种的鉴定研究。改良后的种子蛋白提取方案,克服了棉花种子中含油脂较多影响电泳结果的问题;采用连续体系的阴极电泳,使电泳周期缩短为2.5h,简化了操作步骤,重复性好,谱带清晰,有较高的多样性。     

盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度应用中存在问题及应注意问题

盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度具有快速、准确、低廉等优点,特别是2001年列入本行业标准以后,被各检验室广泛采用。我单位于1996年开始利用盐溶蛋白电泳测定玉米种子纯度,经多年实践探索,发现实验结果存在以下问题及实验当中应该注意的一些问题。     

小麦叶片蛋白质双向电泳的改良方法

以普通小麦叶片为实验材料，在原有双向电泳基础上通过对样品制备、样品溶解、等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及染色方法等关键步骤进行改进和优化，在小麦叶片可溶性蛋白的分析中获得了满意的双向电泳图谱。     

PCR-DGGE技术用于猪场沼气池细菌群落分析的条件优化

本研究采用变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术研究猪场沼气池细菌群落,对基于16S rDNA V3区的PCR-DGGE电泳的最佳变性剂梯度范围、电泳时间、染色时间进行优化.研究结果表明,最佳变性剂梯度范围为35%～60%,电泳时间为12 h,SYBR(R)Green Fluorescent Dye染料的染色时间是30 min,优化后的PCR-DGGE确保了实验的准确性、灵敏度和可重复性.运用此优化后的PCR-DGGE技术对5个猪场沼液细菌群落进行了研究,获得了较丰富的多样性.该实验为深入研究畜禽养殖粪污治理的菌种筛选奠定了基础.     

玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定实验过程中的若干问题及注意事项

玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定实验是近年我国农业科技领域研制的新的科技成果。此项实验科技含量高．专业技术性强，目前还没有一套完整配套的理论指导实践操作，对于实验过程中出现的问题需要技术人员在操作中不断地摸索、探讨。现将本人几年来实验过程中遇到的情况、容易发生的问题及得出的经验依实验步骤总结如下：     

核酸、蛋白质电泳及其相关技术在食用真菌学上的应用(综述)

概述了脉冲电场凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶法、梯度浓度凝胶电泳法、等电聚焦电泳法及高效毛细管电泳法等核酸、蛋白质电泳技术，以及与核酸电泳有关的DNA限制性长度多态性和随机片段多态性DNA分析技术；回顾和展望上述生物技术在食用真菌学研究应用上的现状及前景。还简要介绍了高效毛细管电泳，以及近年来发展较快的双向凝胶电泳技术和凝胶成像分析。     

稻谷醇溶蛋白的电泳分析

电泳技术已在生物化学领域得到广泛地应用。本文在实验的基础上,对稻谷醇溶蛋白的电泳测定技术进行了初步地探讨。经过试验选用SDS-聚丙烯酰胺凝肢体系,初步摸索出两个能够在电泳中显示图象的稻谷醇溶蛋白的分离方式。     

DGGE技术检测中华绒螯蟹线粒体Cytb基因遗传多样性的实验条件探讨

目前,变性梯度凝胶电泳技术（DGGE）多用于微生物和临床医学检测,而用于水产动物基因片段检测的报道甚少。相关研究显示,针对不同的目的基因,其PCR条件、变性剂浓度梯度和电泳时间是DGGE检测实验成败的关键。因此,为应用DGGE技术分析中华绒螯蟹线粒体Cytb基因片段的遗传多样性,探讨了DGGE技术的关键因子,确定了PCR反应体系和循环参数、电泳时PCR产物的上样量、变性剂浓度范围和电泳的最适时间。     

不同地区藏药达乌里秦艽MEKC指纹图谱研究

在最佳的毛细管电泳条件下建立达乌里秦艽指纹图谱.实验选择胶束毛细管电泳法,测得的指纹图谱具有11个共有峰.通过共有峰的相对保留时间和峰面积,可以衡量药材的质量及其真伪.实验方法的稳定性、精密度、重现性良好,说明实验方法准确可靠,可以为达乌里秦艽质量控制研究提供方法和思路.     

中国美利奴羊羊毛角蛋白组成的研究

 本文分析研究了中国美利奴羊新疆型与军垦型羊毛的角蛋白组成。通过尿素-变性凝胶电泳、SDS-凝胶电泳和双向电泳等的实验结果表明：中国美利奴羊新疆型和军垦型羊毛的角蛋白分别有16-21个主要组分，可分为低硫蛋白、高硫蛋白和高甘氨酸/酪氨酸蛋白三族，其表观分子量为59600-8200 Dalton，通过进一步对电泳凝胶光密度扫描测得，中国美利奴羊毛的角蛋白组成含量与澳州美利奴羊毛相近，与新疆细毛羊和军垦细毛羊羊毛比较，其高硫蛋白含量有明显增加，由于遗传因素引起的蛋白质组分的差异也主要表现于高硫蛋白中。     

人低分化鼻咽癌细胞克隆亚系的分离及生长特性观察

应用有限稀释法，从人低分化鼻咽癌上皮细胞系（ＣＮＥ－２Ｚ）中分离出２５个克隆亚系。根据细胞电泳率，筛途出３个电泳率差异较大的克隆亚系（Ｈ５、Ｆ１和Ｆ７），并对其生长特性进行观察，发现细胞电泳率大的克隆亚系较电泳率小的克隆亚系生长能力强，而母系的细胞电泳率及细胞生长能力均居于中等。     

PCR-DGGE实验过程中常见问题的分析与改进

对PCR-DGGE实验过程中常见问题,如条带的有无、多少、拖尾、重影、扭曲、集中等问题进行了归纳总结,并提供了详细的解决方法,如加强实验前仪器的检查;进行时间进程实验;选择适当的扩增引物、电泳温度和电流等。     

电泳凝胶标本的干燥保存

如何长期保存好电泳后的凝胶标本,是许多实验人员面临的难题。由于聚丙烯酰胺凝胶强度低,脆性强,收缩性大,所以在电泳后,通常把凝胶标本浸于η％的醋酸溶液中保存。但这种保存法常导致标本变形、霉变或区带脱落。在长期实践中,我们研究出一种简便、快速的凝胶标本保存法,结果令人满意。材料与方法电泳:电泳在垂直板电泳槽中进行。凝     

同功酶电泳法在籼型杂交水稻种子纯度测定中的应用研究

低温下的酯酶同功酶电泳具有很好的稳定性。通过大量的实验证明：酯酶同功酶电泳可以很好地显示与区分大部分籼型杂交稻的亲本与杂种一代。不育系、恢复系和杂种一代构成典型互补谱带类型,可以用作籼型杂交水稻的室内纯度检验。     

CCD检测和图像处理在分子生物学中的应用

本文论述了用ＣＣＤ图像传感器实现核酸电泳凝胶图像的实时检测及图像处理与分析的系统。该系统不仅可以同时检出核酸的分子量和核酸的浓度等往往需要用不同的方法和多种仪器分析和计算才能得到的参数，还提高了测量的精度和实验工作效率，使传统凝胶图像的记录与分析智能化。     

大豆品种的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定研究

利用改良聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对１２个南斯拉夫大豆品种种子贮藏蛋白进行了电泳分析。结果表明，１２个品种的蛋白质电泳组成表现了较高的多态性，每１品种均可根据各自的电泳图谱加以区分。尽管少数大豆品种表现相似的电泳模式，但在一些细微组分上仍存在差异