低苯丙氨酸酪蛋白粉的研制

本文报道低苯丙氨酸酪蛋白粉研制的方法。先用荧光法测定酪蛋白中幕丙氨酸的含量为3.9％,然后用胃蛋白酶分别与链霉蛋白羧,羧肽酶—A对酪蛋白进行有限水解。葡聚糖G—15柱层析分离,制成胃—链水解粉和胃—羧水解粉,蛋白质含量分别为82.0％与86.0％,产率分别为60.0％与68.7％,苯丙氨酸的含量均为0.6％。     

低苯丙氨酸饮食治疗26例苯丙酮尿症的疗效观察

我院5年共收治PKU患儿41例,其中新生儿筛查发现10例。对坚持用低苯丙氨酸饮食治疗的26例进行了系统观察。生后6月以内就诊的9例中8例患儿体格及智能发育均正常;生后6月以上就诊的17例患儿中只有4例接近正常。强调新生儿筛查、早期发现、早期治疗对预防智力低下的必要性。治疗中应有充足的无苯丙氨酸奶粉及低苯丙氨酸食品,才能确保患儿的治疗效果。     

用荧光分光光度法测定血清中的苯丙氨酸及其应用

用荧光光度法测定健康成人及苯丙酮尿症（ＰＫＵ）患儿血清中游离苯丙氨酸（Ｐｈｅ）捻结果：昆明地区健康成人血清中游离Ｐｈｅ浓度为（０．１２８±０．０４）ｍｍｏｌ／Ｌ，ＰＫＵ患儿的浓度明显升高（０．８０－５．０３ｍｍｏｌ／Ｌ，结果表明，该法有助于对苯丙酮尿症患儿的诊断，此外，文章还从方法学的角度（荧光光谱、线性相关、重复及回收试验）对该法的可信度及影响荧光测定的因素作了分析和探讨。     

潍坊市新生儿疾病筛查苯丙氨酸切值的探讨

目的探讨通过检测新生儿足跟全血干血片苯丙氨酸（Phe）水平筛查新生儿苯丙酮尿症（PKU）的切值。方法采用连续流动荧光分析仪测定新生儿72 h足跟全血干血片Phe水平。结果正常新生儿Phe频数呈正偏态分布,99%分位数为42.1 mg/L,共筛查40 096例新生儿,确诊5例典型PKU,1例高苯丙氨酸血症（HPA）。结论本地区筛查PKU切值以40.0 mg/L为宜。     

高苯丙氨酸血症大鼠基因疗法的实验研究

目的 构建能表达活性苯内氨酸脱氨酶（ＰＡＬ）的重组质粒,使其在乳酸乳球菌（Ｌ．Ｌ）中表达,将苯丙氨酸（ｐｈｅ）脱氨,从而减少外周血中ｐｈｅ的水平,达到治疗苯丙酮尿症（ＰＫＵ）或大鼠高苯丙氨酸血症的目的。方法 将欧芹ＰＡＬ ｃＤＮＡ重组到质粒ｐＭＧ３６ｅ中,转化乳酸乳球菌,用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及高上色谱法（ＨＰＬＣ）等技术筛选阳性表达株,将工程菌ｐＭＧ３６ｅＰＡＬ／Ｌ．Ｌ．制成不同剂型,“治疗”     

石家庄市新生儿高苯丙氨酸血症筛查及治疗情况分析

目的：回顾分析石家庄市新生儿高苯丙氨酸血症（ hyperphenylalaninemia,HPA）筛查及治疗情况,为石家庄市新生儿疾病筛查工作的发展提供帮助。方法采用细菌抑制法和化学荧光法对石家庄市新生儿进行血苯丙氨酸（ phenylalanine,Phe）检测,筛查可疑阳性的新生儿召回采血,复查、确诊后给予治疗,定期进行智力、体格测定,总结分析筛查治疗情况。结果共筛查新生儿881204例,筛查出HPA可疑阳性患儿2306例,召回复查2169例,确诊HPA 187例,其中轻度高苯丙氨酸血症69例,苯丙酮尿症113例,四氢生物喋呤缺乏症5例。187例HPA行四氢生物喋呤负荷试验、尿喋呤分析、血红细胞二氢喋啶还原酶活性测定,156例HPA根据鉴别诊断结果分别给予不同的干预措施。随访智能发育正常者142例,智能发育落后者14例;放弃治疗31例,跟踪随访均存在不同程度的智能发育落后。结论新生儿疾病筛查可以早期发现HPA患儿,给予适当的治疗,能有效预防患儿智力低下,达到优生优育、降低出生缺陷率的目的。石家庄市HPA发病率为1/4712,高于全国平均水平,总结分析HPA筛查治疗工作中存在的问题,提出改进措施,可为进一步拓展石家庄市新生儿疾病筛查工作提供帮助。     

苯丙氨酸及其衍生物对未成熟神经元胞质游离钙的影响

目的:探讨苯丙酮尿症患者脑损伤的病理生理机制,分析苯丙氨酸和胞质游离钙有无关系.方法:用钙成像技术检测氨基酸及其衍生物对胚鼠皮层未成熟神经元胞质游离钙浓度的影响.结果:高浓度苯丙氨酸降低胞质游离钙,苯乙酸使胞质内钙浓度降低后升高最后又降低,苯乳酸使胞质内钙降低更明显.使用无钙离子无钠离子的细胞外液,苯乳酸降低胞质内钙的作用无明显影响;使用Thapsigargin阻断内质网上钙泵,苯乙酸虽仍能降低胞质内钙,但没有降低后又升高的现象.当苯丙氨酸、苯乙酸和苯乳酸相同浓度时,苯乙酸、苯乳酸较苯丙氨酸的作用更强.结论:结合我们以前的观察结果,苯丙氨酸可能激活plasma membrane Ca2 -ATPase,促进神经元胞质内钙外排,进而导致神经元胞质内钙浓度降低.     

新疆维吾尔族苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

目的 了解新疆维吾尔族苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变构成及特点.方法 采用PCR产物直接测序的方法,测定9例维吾尔族苯丙酮尿症(PKU)患者PAH基因全部外显子及其启动子区域序列.结果 在18个PAH等位基因中共检出15个不同的突变基因,检出率为83.3%(15/18),常见突变类型包括R243Q、EX6-96A＞G和R111X,其余突变类型均为散在发生.从维吾尔族中检出的PAH突变基因均系在本民族中首次报道,其中5'-Flanking-480DelACT和5'-Flanking-626 G＞C突变是世界新的PAH基因突变类型.L348V突变是国内未见报道的新突变.结论 研究结果显示维吾尔族PAH基因突变表现出多样性、复杂性和特殊性,具有显著的民族特色.     

广西地区高苯丙氨酸血症发病情况分析

目的:了解广西地区高苯丙氨酸血症(HPA)发病情况以及与国内其他省市发病率比较.方法:对2009～2011年在广西新生儿疾病筛查中心进行苯丙酮尿症筛查的424 725例新生儿以及10例确诊HPA患儿资料进行分析,并与国内其他省市报道的HPA发病率进行比较.结果:广西地区HPA发病率为1:42 472,包括经典型苯丙酮尿症、BH4反应性苯丙酮尿症以及轻度高苯丙氨酸血症,确诊患者中包括汉族、壮族人.结论:广西地区HPA发病率低于国内其他地区,不同民族HPA发病率有待总结分析.     

人苯丙氨酸羟化酶基因克隆及其原核表达质粒的构建

[目的]克隆健康人苯丙氨酸羟化酶基因全长cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pTrcHisB/PAH。[方法]采用RT-PCR方法从人肝组织中扩增PAH基因全长cDNA,T/A克隆到pMD18-T载体中,双酶切后将cDA亚克隆入pTrcHisB载体,构建pTrcHisB/PAH质粒,经限制性内切酶鉴定并测序。[结果]人PAH基因cDNA正确克隆入pTrcHisB表达载体,与Genebank中PAH基因序列一致。[结论]成功构建pTrcHisB/PAH表达质粒,为进一步进行研究PAH蛋白表达和重组蛋白活性鉴定奠定基础。     

干血片荧光法检测苯丙氨酸用于苯丙酮尿症患者的监测

苯丙酮尿症 (phenylketonuria ,PKU )是由于肝脏苯丙氨酸羟化酶缺乏所致的一种常染色体隐性遗传性疾病。由于苯丙氨酸 (phenylalanine ,Phe)在体内不能转化为酪氨酸 ,而蓄积在体液中 ,大量的Phe及其异常的代谢产物抑制脑组织的谷氨酸代谢 ,同时也使神经递质5 -羟色胺的生成量减少 ,损害脑细胞的正常生理功能 ,并对神经系统功能造成损害。自20世纪80年代以来 ,我国已将PKU列入新生儿筛查项目之一 ,筛查方法经历了由细菌抑制法向干血片荧光法的转变。目前我国PKU患者的治疗监测基本采用静脉血高效液相法或血清荧光法 ,由于上述方法检测所…     

Bio-Rad酶定量法测定苯丙氨酸筛查新生儿苯丙酮尿症

苯丙酮尿症（Phonyletonttria PKU）是一种常染色体隐性遗传氨基酸代谢病。由于患儿肝脏内苯丙氨酸羟化酶先天性缺陷或突变，导致苯丙氨酸代谢障碍，无法将食物中摄入的苯丙氨酸分解代谢为酪氨酸、黑色素、左旋多巴等被人体利用的生理活性物质，而是通过旁路代谢生成苯乙酸、苯乳酸、苯丙酮酸等。苯丙氨酸及旁路代谢产物在体内蓄积会损害脑及神经细胞，并且不可逆转。Bio—Rad苯丙氨酸测定系统使用酶定量法测定新生儿干燥血斑标本中苯丙氨酸含量，从而早期诊断，早期治疗，预防儿童智力低下。     

沈阳市新生儿苯丙酮尿症筛查苯丙氨酸切值研究

目的确定沈阳市新生儿苯丙酮尿症（PKu）筛查检测项目中苯丙氨酸（Phe）的切值。方法新生儿出生72h后采集足跟血，滴于规定滤纸上，采用荧光分析法测定新生儿足跟血Phe含量。结果测定新生儿足跟血Phe浓度标本150271例，确定沈阳市新生儿Phe切值为2．0mg／dL。结论新生儿Phe切值的确立，为沈阳市新生儿PKU筛查提供了依据。     

华北地区苯丙氨酸羟化酶基因的RFLP单体型与突变...

A study of DNA polymorphisms at the phenylalanine hydroxylase (PAH) locus was performed using 28 classical phenylketonuria (PKU) families from North China. In the families analyzed, haplotype 4 accounted for 77% of normal chromosomes and 79% of PKU gene bearing chromosomes. Two new haplotypes, haplotypes 49 and 50, were found. On the basis of haplotype analysis, only 37%-40% of PKU carriers in North China were heterozygous and therefore informative for linkage studies. Exon 3 (Arg111----stop) and exon 6 (Tyr204----Cys204) mutations of the PAH gene were studied using the polymerase chain reaction (PCR) and allele specific oligonucleotide probe hybridization in 42 PKU families from North China. These accounted for 3.6% and 9.5% of PKU mutations in North China, respectively.     

苯丙氨酸羟化酶基因内点突变的检测与分析

目的　 为了检测江苏省地区苯丙酮尿症 ( phenylketonuria,PKU)患者血苯丙氨酸羟化酶 ( phenylanine hydroxylase,PAH)基因内突变点及其对 PKU致病的相关性 ,从分子水平上提高诊断率。　 方法 :采用了 4对引物 ,外显子 4、7、11( E4、E7、E11)及 STR,应用多聚酶链反应单链构象多态 ( PCR- SSCP)银染技术检测分析了 6个 PKU家系共 2 1个成员。　 结果 :2 1例检测样品中 1个家系 4位成员测出 E4存在基因突变 ,父母为不同的点突变的携带者 ,子女为遗传复合体。　 结论 :为该家系的产前诊断提供了遗传标志     

苯丙氨酸羟化酶基因突变分析及与临床严重度相关性的研究

目的:检测苯丙酮尿症(PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变谱,探讨其突变率与临床严重度的相关性.方法:53例PKU患者根据其治疗前的血苯丙氨酸浓度进行临床分型,同时提取其基因组DNA,PCR扩增PAH基因外显子3、5、6、7、10、11和12,用单链构像多态分析、变性高效液相层析(DHPLC)和直接测序3种方法筛查PAH基因突变.用Kendall等级相关分析临床严重度和突变基因型的相关性.结果:4种突变(R176X、E280K、L367R和S349A)在中国PKU人群中未见报道,其中2种突变(L367R和S349A)为国际首次报道.基因型和临床严重度之间具有较好的相关性(r=0.696,P＜0.01).结论:新发现的PKU患者的4种基因新突变,丰富了PKU患者PAH基因突变谱.基因型和临床严重度间较好的相关性为临床上PKU的基因诊断提供了重要的理论依据.DHPLC法是一种快速、准确、经济的筛选PAH基因突变的新方法.     

串联质谱检测苯丙氨酸浓度在筛选新生儿苯丙酮尿症中的应用

探讨串联质谱法(MS/MS)在检测苯丙氨酸浓度在诊断新生儿遗传代谢性疾病——苯丙酮尿症中的临床应用价值。利用MS/MS分析了9000例新出生婴儿全血标本中苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr)的浓度,计算两者的比值。MS/MS分析的Phe的线性范围为25. 3～898. 5 mol/L,Phe的平均回收率为97. 8%,批内变异系数(CV)为3. 85%,批间变异系数CV为4. 53%; Tyr的线性范围为39. 60～260. 07 mol/L,Tyr的平均回收率为96. 5%,批内变异系数(CV)为4. 25%,批间变异系数CV为5. 83%。MS/MS法能够比较灵敏,特异的检测血中Phe和Tyr的浓度,可以满足对新生儿苯丙酮尿症的筛查及诊断的需要,具有极高的临床应用价值。     

串联质谱检测苯丙氨酸浓度在筛选新生儿苯丙酮尿症中的应用

探讨串联质谱法(MS/MS)在检测苯丙氨酸浓度在诊断新生儿遗传代谢性疾病——苯丙酮尿症中的临床应用价值。利用MS/MS分析了9000 例新出生婴儿全血标本中苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr)的浓度,计算两者的比值。MS/MS分析的Phe的线性范围为25.3~898.5 mol/L, Phe的平均回收率为97.8%, 批内变异系数(CV)为3.85%,批间变异系数CV为4.53%;Tyr的线性范围为39.60~260.07 mol/L, Tyr的平均回收率为96.5%,批内变异系数(CV)为4.25%,批间变异系数CV为5.83%。MS/MS法能够比较灵敏,特异的检测血中 Phe和Tyr的浓度,可以满足对新生儿苯丙酮尿症的筛查及诊断的需要,具有极高的临床应用价值。     

人苯丙氨酸羟化酶基因克隆及其原核表达质粒的构建

 [目的]克隆健康人苯丙氨酸羟化酶基因全长cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pTrcHisB/PAH。[方法]采用RT-PCR方法从人肝组织中扩增PAH基因全长cDNA,T/A克隆到pMD18-T载体中,双酶切后将cDA亚克隆入pTrcHisB载体,构建pTrcHisB/PAH质粒,经限制性内切酶鉴定并测序。[结果]人PAH基因cDNA正确克隆入pTrcHisB表达载体,与Genebank中PAH基因序列一致。[结论]成功构建pTrcHisB/PAH表达质粒,为进一步进行研究PAH蛋白表达和重组蛋白活性鉴定奠定基础。